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免疫共沉淀洗脱的蛋白储存方法随着生物技术的发展，免疫共沉淀技术在蛋白质相互作用研究以及免疫印迹等领域得到了广泛的应用。
然而，在进行免疫共沉淀实验后，如何储存和保存所得到的蛋白成为了一个重要的问题。
正确的储存方法不仅可以延长蛋白的保质期，还可以保持蛋白的活性和稳定性，为后续的实验提供可靠的蛋白样本。
本文将介绍免疫共沉淀洗脱的蛋白储存方法，希望对相关领域的研究人员提供一定的参考价值。
一、原理简介免疫共沉淀是利用抗原与抗体的专一性结合来富集并鉴定蛋白质相互作用的一种技术。
在进行免疫共沉淀实验后所得到的蛋白，通常需要进行洗脱和储存。
洗脱后的蛋白需要储存在适当的条件下，以保持其稳定性和活性。
二、常见的蛋白储存条件1. 低温储存：通常情况下，洗脱得到的蛋白需要在-20℃或更低的温度下储存。
这样可以减缓蛋白的降解和变性过程，延长蛋白的保质期。
2. 无菌条件：在储存过程中，需要注意防止蛋白样本受到细菌或真菌的污染。
最好在进行免疫共沉淀实验时就使用无菌条件。
3. 避光储存：对于一些易受光照影响的蛋白，需要避免直接阳光照射，可以用铝箔或黑色袋子覆盖储存。
三、常见的蛋白储存方法1. 冻存液储存：洗脱得到的蛋白可以使用冻存液进行储存，常用的冻存液包括甘油、DMSO等。
这些冻存液可以降低冷冻过程对蛋白样本的损伤，提高冷冻后的蛋白保持活性的能力。
2. 液氮储存：对于一些特别容易降解的蛋白，可以选择使用液氮进行储存。
液氮温度极低，可以最大程度地减缓蛋白的降解速度，保持其活性。
3. 冷冻干燥：冷冻干燥是一种将蛋白样本在低温下加压脱水的方法，将蛋白转变为固态，并在低温下保存。
这种方法可以保持蛋白的天然构象和活性，适用于一些活性敏感的蛋白。
四、蛋白储存注意事项1. 防止多次冻融：避免多次冻融对蛋白造成不可逆的损伤，每次使用前需要将其快速解冻并避免长时间保存在室温下。
2. 样本标签：对于不同储存条件的蛋白样本，需要在样本管或容器上标明详细的信息，如储存温度、储存时间和蛋白名称等。
蛋白保存方法详解生物大分子的贮藏保存可分为干态和液态贮藏两种。
蛋白质失活受多种理化因素的影响，主要有空气、温度、水分、光线、酸碱度、样品状态、微生物活动、保存时间和容器等。
这些因素可单独起作用，但更多情况是协同作用。
总的来说，蛋白质的保存主要考虑其构型稳定、活性中心的保护、避免辅助因子丧失等，以防止其变性、解聚或降解。
由于温度和水分对蛋白质的稳定性影响很大，故蛋白质最好是低温、冷冻或冷冻干燥后低温干燥保存。
1. 液态保存（1）．在低温下保存蛋白质对热敏感，温度越高，稳定性越差。
因此，低温保存蛋白质溶液在绝大多数情况下是有利的。
一般蛋白质越纯，其稳定性越差。
特别是纯酶溶液，对热很不稳定(少数酶例外，如核糖酸酶能短期煮沸，胰蛋白酶能在稀HCl中耐90℃，及某些高温细菌产生的耐热性酶等)，多数在35℃一40℃以上就会失活，难以长期保存，在普通冰箱中通常也只能保存一周左右。
因此，液态蛋白质样品常常在—5℃～—10℃以至—20℃以下冰冻保存比较理想，有时经数月或数年仍保留大部分活性。
但是，各种蛋白质的耐热性不同，并非温度越低．稳定性越好。
羧肽酶、脂蛋白和某些抗体经冰冻再融解，即完全变性破坏。
但某些酶经冻融后，活性反而增加，这可能是由于酶颗粒结构松散，表面积增大，暴露出更多活性基团的缘故。
反复冰冻和融化一船会导致蛋白质变性．应尽量避免。
为了防止冻融损伤，冰冻保存要求样品浓度大、体积小、表面积大、含盐低、冻结迅速、—70℃以下保存、用时迅速融化等。
(2)．在稳定PH下保存多数蛋白质只有在很狭窄的pH范围内才稳定．超出此范围即迅速变性。
如鲸肌红蛋白在等电点PH6.8附近时稳定，卵类粘蛋白在中、酸性条件下对热稳定。
蛋白质稳定存在的PH一般是等电点。
因此，酸性、中性和碱性蛋白酶酌稳定pH 分别为PH2～PH6、PH6～PH9和PH5～PH10.5。
但也有例外，如血浆蛋白质的等电点PH4.6，而其稳定pH为6.8，稳定PH与其等电点并不相同。
各种生物活性物质的保存Experience 2021-08-16 16:34:36 阅读336 评论0 字号：大中小订阅DNA、RNA、蛋白质、抗体和探针的保存方法：〔网上搜索，仅供参考^_^〕1.DNA短期保存，两年之内吧，无菌水和TE缓冲液是ok的。
如果是长期保存，比方10年20年的话，我推荐你刚提取好的DNA直接保存到乙醇里，放－20°，放10年没问题。
需要用的时候，再离心后，弃去乙醇，加水或TE溶解即可。
长期保存用TE，DNA本来就是酸性，所以需要弱碱性环境保存，如果用中性或者酸性环境保存容易降解。
保存两年应该会降解的！还是不要超过两年，再一年内都有降解的可能，所以还是要尽快的利用了。
做成干粉不太可能，哪里有那么多的量！还是在－80度以下保存吧，也要防止反复冻融。
如果DNA很纯的话，应该影响不是很大啊，有文献报道高纯DNA的最正确保存条件是4度，你也可以应证一下你的DNA有没有降解啊，跑个电泳看看啊，如果出现smear，就不要用了啊！提纯的DNA放在4度一段时间〔数周-数月〕都没问题。
但是长期保存建议-20度，并且浓度不要稀释的太低，否那么容易降解。
2.RNARNA假设要长期保存,需沉淀下来后置于无水乙醇冻在-70度,用的时候再离心下来除去无水乙醇,用DEPC水溶解。
保存RNA应该尽量低温。
为了防止痕量RNase的污染，从富含RNase的样品〔如胰脏、肝脏〕中别离到的RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的RNA，对于长期贮存更是如此。
从大鼠肝脏中提取的RNA，在水中贮存一个星期就根本降解了，而从大鼠脾脏中提取的RNA，在水中保存3年仍保持稳定。
另外，长度大于4kb的转录本对于痕量RNase的降解比小转录本更敏感。
为了增加贮存RNA样品的稳定性，可以将RNA溶解在去离子的甲酰胺中，存于-70℃。
用于保存RNA的甲酰胺一定不能含有降解RNA的杂物。
来源于胰脏的RNA至少可以在甲酰胺中保存一年。
蛋白质保存(2011-02-19 13:05:48)转载▼标签：杂谈分类：专业蛋白质有什么比较实用的保存方法?1、冻成干粉，低温保存；2、甘油+防腐剂，低温保存，甘油浓度5%~50%，防腐剂一般选择NaN3，终浓度0.05%，但对于氧化酶类的蛋白，不能使用NaN3，推荐不加防腐剂，或者改加PMSF至终浓度1mM NaN3其剧毒性会不会影响蛋白活性?PMSF这种蛋白质水解酶抑制剂作用机理是怎么样的？NaN3防腐靠的就是它的毒性，它的生理毒性并不是通过非特异的影响蛋白活性来实现的。
提到毒性不要先想到摧毁一切，毒杀一切，人喜欢，人爱吃的东西，同样菌也爱吃，靠它们是不能抑菌的。
对蛋白活性的影响，我已经提醒了，就是氧化酶类的蛋白不能用NaN3；另外，大多数的蛋白、RNA酶抑制剂都是致癌或潜在致癌的，因为它有可能阻碍体内蛋白、RNA的正常更替。
PMSF通过与蛋白质的serine残基结合而达到抑制serine蛋白酶的作用。
例如trypsin chymotrypsin thrombin和papain等。
检测用的粗蛋白，全蛋白当然可以分装低温保存，制备级的呢？需要经常使用的蛋白纯品呢？当然最好是冻干，-80度存放，但经常使用的（比如抗血清、纯化的酶）最好采取公司商品化酶类的保存方法，就是50%甘油+低温，即保证了低温，甘油又保证了整个体系不会结晶，避免了反复冻融，而且甘油有稳定蛋白活性的作用。
问：纯化后的蛋白质4度保存约15天，怎么分子量发生了变化？答：蛋白质样品如果是溶液状态的，在4度下顶多保存一个礼拜。
15天太长了。
估计分降解成很多小蛋白。
电泳时出现很多条带。
在-20度也就是保存一个月。
最好的保存办法还是将蛋白样品冻干成粉末。
保存，这样保存的时间会很长。
如果条件不具备，-70度也可以。
蛋白样品最忌讳反复冻融。
答：蛋白保存应根据对活性的要求及蛋白的种类而定：抗体:除非一些公司特别要求-20℃冻存，一般4℃可稳定一年（无菌，如加叠氮钠），因为抗体是一种具有非常稳定结构的蛋白；要求具有活性的蛋白,最好根据需要小量保存4℃(一周）、-20℃(一个月)、-80℃(六个月)、液氮（基本无限期），反复冻融会导致诸多不良后果，如聚集、修饰、降解、污染等（取决于蛋白浓度、缓冲液成分及蛋白本身的特点）；冻干是一种很好的长期保存法（如条件具备），在大多数情况下可以很好地保存蛋白的活性，但不适于某些蛋白（因有些蛋白对冻干重溶时必然产生的盐离子浓度的急剧变化反应不佳，其活性会永久丧失（应具体对待，尚无规律可循）。
蛋白保存方法蛋白保存应根据对活性的要求及蛋白的种类而定：抗体:除非一些公司特别要求-20℃冻存，一般4℃可稳定一年（无菌，如加叠氮钠），因为抗体是一种具有非常稳定结构的蛋白；要求具有活性的蛋白,最好根据需要小量保存4℃(一周）、-20℃(一个月)、-80℃(六个月)、液氮（基本无限期），反复冻融会导致诸多不良后果，如聚集、修饰、降解、污染等（取决于蛋白浓度、缓冲液成分及蛋白本身的特点）；冻干是一种很好的长期保存法（如条件具备），在大多数情况下可以很好地保存蛋白的活性，但不适于某些蛋白（因有些蛋白对冻干重溶时必然产生的盐离子浓度的急剧变化反应不佳，其活性会永久丧失（应具体对待，尚无规律可循）。
另：蛋白聚集与二硫键形成是两个概念，巯基乙醇只负责维持-SH的游离状态，形成二硫键是一化学反应，产生纯净物，聚集一般只通过一些离子键、范德华力、疏水力形成，可以用物理方法分开。
较长时间的保存最好用DTT。
在加入缓冲液中24小时内，巯基乙醇被氧化，其后可加速蛋白的失活，而DTT不危及蛋白质的巯基。
因此，最好是在制备蛋白质样品的时候用大约12mmol/L巯基乙醇，而长期储存则使用1-5mmol/L的DTT。
（见《蛋白质技术手册》）另外，我有印象看产品目录的时候，看到有一种用于western的试剂盒，提供的试剂可以在还原二硫键之后在巯基上烷基化，这样就防止了二硫键的再次生成。
抗体储存容器应由不吸附蛋白质的材料制成，常用的有聚丙烯，聚碳酸酯和硼硅酸玻璃。
如储存的抗体中蛋白浓度很低（10-100Mg/L），就应另加隔离蛋白以减少容器对抗体蛋白的吸附，隔离蛋白常用0.1%-1.0%的牛血清白蛋白。
绝大多数已稀释的抗体应存在4℃-8℃条件下，以免冻融对抗体蛋白产生有害效应。
抗体原液和已分离的免疫球蛋白组分应保存于-20℃条件下，并避免反复冻融。
冷冻的抗体溶液应置于室温中缓慢地解冻，应绝对避免用高温快速解冻。
被细菌污染的抗体常会出现假阳性结果，应将污染的抗体溶液及其他试剂弃之。
纯化蛋白保存方法
纯化蛋白是一个关键的步骤，确保其保存和储存的方法能够保持其稳定性和功能活性。
以下是一些常见的纯化蛋白保存方法：
冷冻保存：将纯化蛋白溶液分装到冻存管中，然后快速冷冻至-80°C或更低的温度。
冷冻保存可以有效地减缓蛋白质的降解和失活。
在冷冻过程中，可以添加保护剂如甘油或DMSO来保护蛋白质。
液氮保存：如果需要长期保存，可以将冷冻的纯化蛋白质样品转移到液氮中保存。
液氮的极低温度可以防止蛋白质的降解和失活。
真空干燥保存：将纯化蛋白溶液通过真空干燥的方法去除水分，制备成蛋白质粉末。
蛋白质粉末可以更长时间地保存，但需要在无水环境中密封存放。
避光保存：有些蛋白质对光敏感，因此在保存过程中应避免暴露在强光下。
可以使用琥珀色冻存管或避光袋来保护蛋白质。
防止冻融循环：频繁的冻融循环可能会对蛋白质造成损伤。
因此，为了保持蛋白质的稳定性和活性，尽量避免多次冷冻和解冻。
分装保存：将纯化蛋白质分装成小份，每个冻存管中只放置适量的蛋白质。
这样可以避免频繁解冻整个样品，减少蛋白质的损失。
无论采用哪种保存方法，都应注意在保存过程中避免污染和交叉污染。
使用无菌操作和无菌容器，并确保保存容器的密封性和完整性。
需要注意的是，不同的蛋白质可能对保存条件有特定的要求，因此在实际操作中，最好参考特定蛋白质的文献或向相关领域的专家咨询，以确定最适合的保存方法。
人血白蛋白保存方法人血白蛋白是一种重要的生物制剂，广泛应用于临床医学和医疗护理中。
正确的保存方法对于保持人血白蛋白的稳定性和活性非常重要。
在本文中，我们将介绍人血白蛋白的保存方法，并提供一些建议，以确保其长期使用的有效性和安全性。
1. 冷藏保存人血白蛋白应该在2C至8C的温度下冷藏保存。
这个温度范围可以有效地保持蛋白的稳定性和活性。
在冷藏过程中，人们应该尽量避免温度的波动和震荡，因为这些因素可能会导致蛋白的降解和变性。
同时，建议将人血白蛋白储存在原始包装中，避免接触光线和湿气。
2. 防止冻结人血白蛋白在低温下容易冻结，因此必须采取措施防止其冻结。
冷冻过程中的结冰会导致蛋白的结构破坏，从而影响其功能和稳定性。
为了避免冻结，可以往冷藏的白蛋白溶液中添加一些抗冻剂，如甘油或葡萄糖。
这些添加剂能够降低冻点，从而延缓冰晶的形成。
3. 注意细菌污染人血白蛋白是一种生物制剂，容易受到细菌的污染。
为了避免细菌污染，保存人血白蛋白的容器和设备必须保持清洁和无菌。
存储白蛋白的容器应该是无菌的，并经过消毒处理。
在打开容器和使用白蛋白之前，手部和工作场所必须进行彻底的清洁，以防止细菌的传播。
4. 定期监测为了确保保存的人血白蛋白的质量和活性，建议定期监测其相关参数。
这包括检查保存温度、细菌污染、pH值和纯度等。
通过定期检测，可以及时发现和处理潜在的问题，并采取必要的措施来保持人血白蛋白的稳定性。
5. 合理利用人血白蛋白是一种宝贵的资源，应该合理利用。
在使用人血白蛋白之前，必须评估其需要的数量，并避免浪费。
剩余的人血白蛋白应该储存在适当的条件下，并及时使用，以免过期和失效。
6. 错误保存方法如果人血白蛋白保存不当，可能会导致其质量和活性的损失。
以下是一些常见的错误保存方法，需要避免使用：- 将人血白蛋白暴露在高温环境下，如直接放在阳光下。
- 将人血白蛋白存放在冷冻温度以下，导致冻结和解冻过程。
- 使用已过期的人血白蛋白。
各种生物活性物质的保存Experience 2009-08-16 16:34:36 阅读336 评论0 字号：大中小订阅DNA、RNA、蛋白质、抗体和探针的保存方法：（网上搜索，仅供参考^_^）1.DNA短期保存，两年之内吧，无菌水和TE缓冲液是ok的。
如果是长期保存，比如10年20年的话，我推荐你刚提取好的DNA直接保存到乙醇里，放－20°，放10年没问题。
需要用的时候，再离心后，弃去乙醇，加水或TE溶解即可。
长期保存用TE，DNA本来就是酸性，所以需要弱碱性环境保存，如果用中性或者酸性环境保存容易降解。
保存两年应该会降解的！还是不要超过两年，再一年内都有降解的可能，所以还是要尽快的利用了。
做成干粉不太可能，哪里有那么多的量！还是在－80度以下保存吧，也要避免反复冻融。
如果DNA很纯的话，应该影响不是很大啊，有文献报道高纯DNA的最佳保存条件是4度，你也可以应证一下你的DNA有没有降解啊，跑个电泳看看啊，如果出现smear，就不要用了啊！提纯的DNA放在4度一段时间（数周-数月）都没问题。
但是长期保存建议-20度，并且浓度不要稀释的太低，否则容易降解。
2.RNARNA若要长期保存,需沉淀下来后置于无水乙醇冻在-70度,用的时候再离心下来除去无水乙醇,用DEPC水溶解。
保存RNA应该尽量低温。
为了防止痕量RNase的污染，从富含RNase的样品（如胰脏、肝脏）中分离到的RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的RNA，对于长期贮存更是如此。
从大鼠肝脏中提取的RNA，在水中贮存一个星期就基本降解了，而从大鼠脾脏中提取的RNA，在水中保存3年仍保持稳定。
另外，长度大于4kb的转录本对于痕量RNase的降解比小转录本更敏感。
为了增加贮存RNA样品的稳定性，可以将RNA溶解在去离子的甲酰胺中，存于-70℃。
用于保存RNA的甲酰胺一定不能含有降解RNA的杂物。
来源于胰脏的RNA至少可以在甲酰胺中保存一年。
蛋白质保存方法大全文章来源：原创作者：genecreate 发布时间：2018-01-25 15:31蛋白质的保存是一个比较棘手的问题，分子生物学实验室的童鞋们或多或少都会碰到。
有没有遇到过，不同批次纯化的蛋白，采用同样的测试方法，活性却不太一样？有没有遇到过新纯化的蛋白，从冰箱拿出融化后，居然沉淀了？蛋白质纯化后，保存方式都有哪些呢？一、谨记蛋白质的保存原则低温、分装、浓缩、速冻／速融、添加剂二、保存方法你知多少蛋白质的的保存方法的选择完全取决于蛋白质的稳定性以及保存后什么时候再次使用你的蛋白。
1、如即提即用的话，可将浓缩蛋白质储存在单一溶液（如PBS），置于聚丙烯管或干净的玻璃容器中，放在4°C冰箱保存。
优点：蛋白容易获得，可以快速进行实验，且同一管样品可重复取样，这样避免了因经常解冻而加速蛋白的降解。
缺点：可能会面临微生物污染，蛋白质失活和氧化，可能对实验数据的均一性造成影响。
要避免这种情况，可以把蛋白质分成小份储存，并加入蛋白酶抑制剂、抗菌剂和还原剂等。
但也要根据自己蛋白的情况，如果你的蛋白是完整的膜蛋白或分泌蛋白,很可能分子内存在二硫键，为保证其完整性，应该存储在氧化环境中。
另外，储存时间超过一个月的蛋白可以考虑扔掉。
2、透析到合适的缓冲液中可以冻干，放4°保存；也可加高浓度的硫酸铵（你的蛋白不沉淀的话），4°保存。
注意：你要注意加入硫酸铵后pH会下降一些，你的缓冲液可不能太接近蛋白的等电点啊，蛋白在等电点附近沉淀很多时候是不可复溶，即使复溶活性也不能保证。
3、纯化后的蛋白测浓度后，加入50%甘油，确认混匀后分装，液氮速冻，放入-20度或-80度保存，尤其适用于酶类。
优点：在低温下，蛋白质对微生物污染，蛋白酶降解和氧化反应更有抵抗力，容易保证其活性。
用甘油或乙二醇稀释使蛋白处于溶液中，可以方便取样。
此外，这种方式储存的蛋白质可以保存长达一年，对于抗体轭合物是一个好的选择。
蛋白实验中保存及使用的常见问题说明1、蛋白为什么要冻干？冻干对蛋白的影响有哪些？答：蛋白质对热敏感，冻干能使绝大部分蛋白质的活性保留下来，提高蛋白的稳定性并延长保存时间，同时降低运费。
冻干有可能会造成蛋白的活性部分损失，聚集和其它变性问题。
但可以通过添加保护剂（稳定剂，添加剂，辅料）和控制冻干的各种条件来尽可能降低这些负面的影响。
温馨提示：武汉华美提供的蛋白产品一般为冻干粉，它们在室温条件下非常稳定(至少1个月)。
尽管如此，我们还是建议您在收到我们的产品后保存于-20℃，以确保蛋白100%的活性。
2、冻干前为什么向蛋白溶液中加保护剂？一般冻干保护剂有哪几种？你们的产品通常加的保护剂是什么？答：保护剂是用来在冻干和储存过程中保护蛋白的。
常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。
我们通常加8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。
海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集；甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂，可以降低某些蛋白的冻干后聚集情况。
温馨提示：对于大多数蛋白，重悬后在4℃仅能短期保存(约1周)。
如想长期保存，请先配制成稀释液(其中必须含有载体蛋白，如0.1% BSA，5%HSA，或10% FBS)，然后分装冻存于-20℃或-80℃。
一定要避免反复冻融，因每次冻融均会引起蛋白的部分失活。
3、为什么我的管内几乎看不见蛋白产品？答：武汉华美的蛋白产品中不含载体蛋白或其它添加物(如牛血清白蛋白(BSA)，人血清白蛋白(HSA)和蔗糖等，并以最低含盐量的溶液进行冻干时，常常不能形成白色网架结构，而是微量的蛋白在冻干过程中沉积在管内，形成很薄或肉眼不可见的透明蛋白层。
温馨提示：在打开管盖前，我们建议您在小离心机中快速离心20-30秒，使附着在管盖或管壁上的蛋白聚集于管底。
我们的质控步骤保证每管中所含的蛋白量准确无误，虽然有时您无法看到蛋白粉末，但管中的蛋白含量仍是非常精确的。
TECHNICAL RESOURCEIntroductionProteins comprise an extremely heterogeneous class of biological macromolecules. They are often unstable when not in their native environments, which can vary considerably among cell compartments and extracellular fluids. If certain bufferconditions are not maintained, extracted proteins may not function properly or remain soluble. Proteins can lose activity as a of the protein and the storage conditions used. Optimal conditions for storage are distinctive to each protein; nevertheless, it is possible to suggest some general guidelines for protein storage and stability.Common conditions for protein storage are summarized and compared in Table 1. Generally, there are tradeoffs associated with each method. For example, proteins stored in solution at 4°C can be dispensed conveniently as needed but require more diligence to prevent microbial or proteolytic degradation; such proteins may not be stable for more than a few days or weeks. By contrast, lyophilization allows for long-term storage of protein with very little threat of degradation, but the protein must be reconstituted before use and may be damaged by the lyophilization process. Table 1. Comparison of Protein Storage ConditionsCharacteristic Solution at 4°CSolution in 25-50% glycerol or ethylene Frozen at -20° to -80°C or in liquid nitrogenLyophilized (usually also frozen)Typical shelf life1 month1 yearYearsYearsRequires sterile conditions or addition ofantibacterial agent Yes Usually No NoNumber of times a sample may be removed for use Many Many Once; repeated freeze-thaw cycles generallydegrade proteinsimpractical to lyophilize a sample multiple timesProtein stability and storagel t Ow.d oc u -t r a c k.cC i c ko b u yN wwom冻干法Temperature:Generally, proteins are best stored at ≤ 4°C in clean, autoclaved glassware or polypropylene tubes. Storage at roomtemperature often leads to protein degradation and/or inactivity, commonly as a result of microbial growth. For short term storage (1 day to a few weeks), many proteins may be stored in simple buffers at 4°C. Protein Stabilizing Cocktail (Product No. 89806) is a 4X solution that helps to extend the shelf-life of most proteins for storage at 4° C or -20°C compared to storage in simple phosphate or Tris buffers.For long term storage for 1 month to 1 year, some researchers choose to bead single-use aliquots of the protein in liquid nitrogen for storage in clean plastic containers under liquid nitrogen. This method involves adding the protein solution drop-wise (about 100 µl each) into a pool of liquid nitrogen, then collecting the drop-sized frozen beads and storing them in cryovials under liquid nitrogen.Frozen at -20°C or -80°C is the more common form of cold protein storage. Because freeze-thaw cycles decrease protein solution will not have to be refrozen. Alternatively, addition of 50% glycerol or ethylene glycol (see Additives section below) will prevent solutions from freezing at -20°C, enabling repeated use from a single stock without warming (i.e., thawing).Protein Concentration:Dilute protein solutions (< 1 mg/ml) are more prone to inactivation and loss as a result of low-level binding to the storage vessel. Therefore, it is common practice to add “carrier” or “filler” protein, such as purified bovine serum albumin (BSA) to 1-5 mg/ml (0.1-0.5%), to dilute protein solutions to protect against such degradation and loss.Additives:Many compounds may be added to protein solutions to lengthen shelf life: •Protein Stabilizing Cocktail (Product No. 89806) is a 4X solution that helps to extend the shelf-life of most proteins for storage at 4°C or -20°C.• Cryoprotectants such as glycerol or ethylene glycol to a final concentration of 25-50% help to stabilize proteins by preventing the formation of ice crystals at -20°C that destroy protein structure. • Protease inhibitors prevent proteolytic cleavage of proteins (Table 2).• Anti-microbial agents such as sodium azide (NaN 3) at a final concentration of 0.02-0.05% (w/v) or thimerosal at a final concentration of 0.01 % (w/v) inhibit microbial growth.• Metal chelators such as EDTA at a final concentration of 1-5 mM avoid metal-induced oxidation of –SH groups and helps to maintain the protein in a reduced state.• Reducing agents such a dithiothreitol (DTT) and 2-mercaptoethanol (2-ME) at final concentrations of 1-5 mM also help to maintain the protein in the reduced state by preventing oxidation of cysteines.Table 2. Common Protease Inhibitors Protease Inhibitor Target Protease Working Concentration Benzamidine Serine proteases 1 mM Pepstatin A Acid proteases 1 µg/ml Leupeptin Thiol proteases 1 µg/ml Aprotinin Serine proteases 5 µg/ml Antipain Thiol proteases 1 µg/ml EDTA and EGTA Metalloproteases 0.1-1 mM热压处理过的玻璃器皿反复冻融稀释的Antibody stock solutions (e.g., 1 mg/ml) often may be stored at 4°C for days to weeks without significant loss in activity. For increased stability, glycerol or ethylene glycol may be added to a final concentration of 50% and the antibody stored at -20°C. Alternatively, the antibody solution may be stored in small working aliquots at -20°Generally, antibody conjugates are best stored at -20°C with glycerol or ethylene glycol added at a final concentration of 50%. Although some enzyme conjugates may be stored at -20°C without cryoprotectant, frozen stocks must be as single use aliquots to prevent repeated freeze-thaw cycles; alkaline phosphatase conjugates are particularly sensitive to freezing. Conjugates typically maintain good activity for 1-2 years if stored at -20°C with glycerol or ethylene glycol. However, contaminants in cryoprotectants may affect enzyme activity, and few researchers take steps to ensure the purity of the cryoprotectant used. Pierce offers Ethylene Glycol (Product No. 29810) that is suitable for enzyme storage because impurities have been removed during the manufacturing process. Ethylene glycol does not support microbial growth, making it preferable to glycerol.Pierce also offers SuperFreeze™ (Product No. 31503) and Guardian™ (Product No. 37548) Products, which are multi-component cryoprotectants that provide buffered anti-freeze conditions for the storage of horseradish peroxidase (HRP) conjugates. SuperFreeze™ Peroxidase Conjugate Stabilizer allows freezer storage of peroxidase conjugates, substituting for glycerol or ethylene glycol and ensuring stable liquid storage at -20°C. Guardian™ Peroxidase Conjugate Stabilizer/Diluent allows room temperature or 4°C storage of peroxidase conjugates in diluted form (as low as 10 ng/ml). Working dilutions for ELISA or Western blotting be prepared and stored up to 18 months at 4°C.Related Pierce Products89806 Protein Stabilizing Cocktail (4X), 10 ml29810 Ethylene Glycol (50% aqueous solution), 200 ml31503 SuperFreeze™ Peroxidase Conjugate Stabilizer, 25 ml37548 Guardian Peroxidase Conjugate Stabilizer/Diluent, 200 ml37552 Guardian Peroxidase Conjugate Stabilizer/Diluent, 1 liter78410 Halt™ Protease Inhibitor Cocktail kit with EDTA, 2 ml78415 Halt™ Protease Inhibitor Cocktail EDTA free, 1 ml5 mgfluoride),36978 PMSF(Phenylmethylsulfonyl©Pierce Biotechnology, Inc., 9/2005. Printed in the USA.。
