从低温乙醇法FIV组份中分离人血白蛋白的研究

专利名称：一种利用低温乙醇法去除人血白蛋白热原质的方法专利类型：发明专利
发明人：刘利华,石清东,莫丽影
申请号：CN201510985715.1
申请日：20151225
公开号：CN106008698A
公开日：
20161012
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种利用低温乙醇法去除人血白蛋白热原质的方法。

热原系指能引起恒温动物体温异常升高的致热物质，注入人体的注射剂中含有热原量达1μg/kg就可引起不良反应，危及生命。

本发明在原有制备人血白蛋白的之前，加入步骤：将热原超标的人血白蛋白制品，用0℃生理盐水稀释至30g/L，按每100Kg白蛋白加入FIV沉淀20～50Kg，搅拌溶解，完毕后用pH4.0醋酸缓冲液调整溶液pH值至5.80±0.05；开启冷媒系统降温溶液至0℃±0.05℃，加入温度低于-15℃的
95%（V/V）乙醇至乙醇最终浓度为40%（V/V）,加乙醇速度≤70L/h，控制溶液pH值为6.40～6.50，边加乙醇边降温，使溶液最终温度控制在-5.0℃±0.5℃。

通过此步骤可以有效去除注射液中的热原。

申请人：北海开元生物科技有限公司
地址：536000 广西壮族自治区北海市海城区北海大道126号804
国籍：CN
代理机构：北海市佳旺专利代理事务所(普通合伙)
代理人：黄建中
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低温乙醇法分离血浆蛋白过程中灭活和清除hiv的论
证
低温乙醇法分离血浆蛋白是一种常见的方法，可以有效地从血浆中分
离出各种蛋白质成分。

在这个过程中，也可以通过灭活和清除HIV来
保证血浆的安全性。

首先，我们需要了解HIV是什么。

HIV是人类免疫缺陷病毒的简称，
它会攻击人体免疫系统中的CD4+ T细胞，并导致艾滋病。

由于HIV
是一种RNA病毒，因此它具有高度变异性和适应性，在治疗和预防方面都带来了巨大挑战。

在低温乙醇法分离血浆蛋白的过程中，我们通常会使用低温（通常为-30°C至-40°C）和高浓度（通常为60%至70%）的乙醇来沉淀蛋白质。

这个过程中，乙醇会使得细胞膜受损并导致细胞死亡，从而灭活其中
可能存在的HIV。

此外，在分离出蛋白质之后，我们还可以采取其他措施来清除其中可
能存在的HIV。

例如，我们可以使用聚乙二醇（PEG）或其他抗体来
净化蛋白质溶液。

这些方法可以通过特异性地结合HIV来清除其中的
病毒颗粒，从而保证血浆的安全性。

总之，低温乙醇法分离血浆蛋白是一种有效的方法，可以同时灭活和清除HIV。

在实际应用中，我们还需要注意其他可能存在的病原体，并采取相应的措施来确保血浆的安全性。

低温乙醇蛋白分离实现自控后对人血白蛋白质量的影响【摘要】目的低温乙醇血浆蛋白分离工艺实现自控后被分离的人血白蛋白各项质量指标和收获率进行评价。

方法按照《中华人民共和国药典》2005年版三部有关规定的方法和标准对低温乙醇分离的人血白蛋白样品各项指标进行测定，并将测定的结果与自控前的制品进行比较。

结果连续测定血浆蛋白分离实现自控后42批人血白蛋白样品，与该工艺实现自控前连续35批成品检定结果进行比较，发现其人血白蛋白的纯度、收获率均有明显的提高；多聚体有明显的下降，其它指标（离子含量、吸光度等）均无明显改变，且制品质量稳定，符合《中国药典》2005年版三部有关要求。

结论通过人血白蛋白各项质量指标、收获率的比较，低温乙醇蛋白分离过程实现自控后，进一步提高了人血浆蛋白的内在质量，同时，还全面提升了该工艺的分离水平，使得血浆蛋白分离过程中的温度、乙醇浓度、离子强度和蛋白含量等因素变得更加容易控制，使得制品各项质量指标更加稳定，批间差异缩小，更加符合GMP管理的要求。

【关键词】血浆蛋白分离;自动控制;纯度;多聚体人血白蛋白（HAS）具有维持血管内胶体渗透压，结合并转运体内各种脂肪酸、激素、离子以及多种药物的重要生物学功能［1］，已广泛应用各种低白蛋白血症或创伤性休克。

自从1946年Cohn和他的同事们发表了低温乙醇（Cohn 6法）分离白蛋白以来［2］，相隔十年Nitschmann和Kistler于1954年又提出了另一种改变的低温乙醇分离血浆蛋白方法［3］，该改良方法简化了操作，缩短了生产周期，提高了血浆白蛋白的回收率（当时的最大收率为2.5g/100ml血浆），降低了乙醇的消耗，是目前国际上普遍使用的方法之一。

低温乙醇法的最大优点是适应工业化、自动化的生产要求，为了充分发挥该工艺的潜能，适应GMP管理的要求，不断提高血浆蛋白制品的内在质量，增加收获量，在不改变原来基本工艺路线的前提下，我们于2004年末实现了低温乙醇血浆蛋白分离工艺系统的自控（包括温度控制、加液控制、自动清洗等）。

(10)申请公布号 CN 102311497 A(43)申请公布日 2012.01.11C N 102311497 A*CN102311497A*(21)申请号 201110240072.X(22)申请日 2011.08.22C07K 14/765(2006.01)C07K 1/36(2006.01)C07K 1/34(2006.01)C07K 1/30(2006.01)(71)申请人西安回天血液制品有限责任公司地址710075 陕西省西安市高新技术开发区光德路9号(72)发明人张华平 张卫柱 张林 张云郭军峰(74)专利代理机构西安新思维专利商标事务所有限公司 61114代理人李罡(54)发明名称一种用低温乙醇法从组份Ⅳ沉淀中回收白蛋白的方法(57)摘要本发明涉及一种用低温乙醇法从组份Ⅳ沉淀中提起回收白蛋白的方法。

现有技术回收率不高。

本发明采用的技术方案至少包含以下步骤：（1）Ⅳ沉淀热处理，（2）F Ⅲ沉淀的制备，（3）F Ⅲ上清液的制备，（4）Ⅴ沉淀的制备（5）除杂（6）白蛋白制品的制备。

本发明有效提高了白蛋白的总收得率，降低了生产成本，提高了企业利润；在分离过程中按各组份分步沉淀，并采用离子交换层析进行纯化，生产工艺更加精细，提高了制品的质量。

(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页 说明书 5 页1.一种用低温乙醇法从组份Ⅳ沉淀回收白蛋白的方法，其特征在于：至少包含以下步骤：（1）Ⅳ沉淀热处理从冷库中取出组份Ⅳ沉淀，称重后置于洁净的不锈钢反应罐中，向反应罐中注入4～6倍体积的5℃以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液温度在0～5℃搅拌待其完全溶解后，加入磷酸二氢钠至0.01mol/L，然后用氢氧化钠调节pH值至6.9±0.1，搅拌5～6小时，加入辛酸钠至0.025mol/L，继续搅拌至少2小时，之后将溶液加温至68.0±0.5℃，保温1～1.5小时后迅速降温至0～15℃；（2）FⅢ沉淀的制备将加温后的制品打入反应罐，用0.2 mol/L的盐酸调节pH值至4.5±0.05，缓慢加入95%（v/v）的乙醇，令反应液中乙醇体积浓度升至5～8%，将制品加压过滤，得FⅢ沉淀和滤液，将滤液用注射用水超滤去除有机溶剂并浓缩至蛋白浓度≥18%；（3）FⅢ上清液的制备所得FⅢ沉淀用800～1000升温度在5℃以下的注射用水溶解，搅拌令其完全溶解后加入氯化钠至8～9g/L和枸橼酸钠2～3g/L，将溶解液与上述滤液混合，添加氯化钠至7±0.5g/L，枸橼酸钠4±0.5g/L；用氢氧化钠调节pH5.25±0.05，缓慢添加体积分数为95%的乙醇至体积浓度20%，同时降温至-4.5±0.5℃，压滤去除FⅢ沉淀，得FⅢ上清液；（5）Ⅴ沉淀的制备用0.2 mol/L的氢氧化钠调节FⅢ上清至pH6.3±0.1，保持温度在-4.5±0.5℃，缓慢添加乙醇至乙醇体积浓度38%；压滤后得FⅢ-1上清滤液，调节pH为5.75±0.05，降温至-5.5±0.5℃，并添加乙醇至浓度40%；将FⅢ-1上清滤液压滤后得FⅢ-2上清滤液，调节pH至4.80±0.05，继续降温至-8.0±0.1℃，压滤后获得组份Ⅴ沉淀；（6）除杂将组份Ⅴ沉淀用6～7倍体积的注射用水溶解，调pH至4.6±0.1，保持温度在-3～-2℃，缓慢添加乙醇至乙醇体积浓度12～14%，将溶液经深层过滤去除杂质，再调节滤过液pH值至5.20±0.05，经离子交换层析去除溶液中的杂蛋白，流出液用1mol/L的碳酸氢钠调节pH7.1±0.1，添加氯化钠至9±0.1g/L；（8）白蛋白制品的制备将蛋白质溶液进行超滤至蛋白质浓度≥18%，获得白蛋白制品溶液，经病毒灭活和除菌分装后获得白蛋白制品。

专利名称：低温乙醇提取人血白蛋白的方法
专利类型：发明专利
发明人：安康,张宝献,张其昌,王猛,滕世超,郭心怡申请号：CN201310710743.3
申请日：20131220
公开号：CN103709245A
公开日：
20140409
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种低温乙醇提取人血白蛋白的方法，以人血浆为原料依次分离出F Ⅰ、
FⅡ+Ⅲ、FⅣ、得FⅤ沉淀，溶解FⅤ沉淀，调节溶液的蛋白质含量至20～60g/L，pH值至4.50～4.70，乙醇浓度至体积百分比9.0～13.0%，经3～5级过滤，将溶液超滤透析并浓缩至所需浓度后，加入辛酸钠，使溶液中的辛酸钠含量为0.140～0.180mmol/g蛋白质，加入氯化钠，使溶液的渗透压为210～400mOsmol/kg，再调节溶液pH值至6.40～7.40，并稀释至规定分装浓度。

本发明提高了FⅤ沉淀的提取率，大幅度提高了人血白蛋白的收率。

申请人：华兰生物工程重庆有限公司
地址：408102 重庆市涪陵区鹤凤大道66号(李渡工业园区内)
国籍：CN
代理机构：重庆华科专利事务所
代理人：夏洪
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除去人血白蛋白中热原质方法的探讨（低温乙醇法）
时凯;魏舒
【期刊名称】《军队医药》
【年(卷),期】2000(010)001
【摘要】根据热原质的性质，在热原质污染的人血白蛋白制品中加入新鲜冰冻血浆，用低温乙醇法工艺，经两步纯化可有效地去除制品中的热原质，制品回收率达90％以上，制品质量符合部颁标准。

【总页数】3页(P45-47)
【作者】时凯;魏舒
【作者单位】济南军区生物制品药物研究所，驻马店463000;济南军区生物制品药物研究所，驻马店463000
【正文语种】中文
【中图分类】R392－33
【相关文献】
1.去除人血白蛋白中热原质方法的探讨 [J], 王文灵;王聘胜
2.低温乙醇法中提高人血白蛋白收率的探索 [J], 吴佳君;杨宇;兰学渊;卢奎林;黄捷
3.两种滤板在低温乙醇提取人血白蛋白FV工艺中的比较 [J], 鲍锦库;安伟通;唐斌;孙承远;付松林;兰序强
4.鲎试剂凝胶法用于人血白蛋白半成品热原质的监测 [J], 江波;赵虹;王玉光;耿玉霞;尹红志
5.细菌内毒素检查法用于人血白蛋白大规模生产中热原质的监控 [J], 陈小凤;温淇宁;方松
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人血白蛋白低温乙醇法制造及检定规程本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的血浆或血清经低温乙醇法分离提取，经60℃10小时加温灭活病毒后制成。

白蛋白含量96%以上，含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素，专供静脉输注。

主要用于治疗创伤性、出血性休克、严重烧伤以及低蛋白血症等。

1 制造1.1 制造要求1.1.1 新鲜分离的液体血浆、过期血分离的血浆、半成品、成品检定剩余血浆、轻度溶血或脂肪血浆、去除其他血浆蛋白的组分，均可用于制备。

所用之血浆或血清的来源应符合《原料血浆采集（单采血浆术）规程》。

1.1.2 血浆或血清应尽可能保持无菌，否则应及时投料制造或低温冰冻保存。

低温冰冻保存血浆量长保存期不应超过2年。

1.1.3制造工作室应符合工艺流程。

冷库及各种生产用具必须专用，严禁与其他异种蛋白质混用。

制造工作室的建筑应便于清洁、消毒、防霉。

在制造过程中为防止制品污染热原质，应采取各种有效措施，如降低操作室温度，注意无菌操作等。

各种直．接接触制品的用具，用后应立即洗净，用前须经除热原质或灭菌处理。

1.1.4 生产用水应符合饮用水标准，直接用于制品的水应符合注射用水标准。

所用各种化学药品应符合《中国生物制品主要原材料试行标准》规定，未纳入试行标准者应不低于化学纯。

1.2 制造工艺1.2.1 采用低温乙醇法。

应含适量的稳定剂（每g蛋白质用0.16mmol辛酸钠或0.08mmol辛酸钠和0.08mmol乙酰色氨酸钠）。

1.2.2 热处理每批制品必须经60±0.5℃加温10小时处理。

热处理可在除菌过滤前或分装后24小时内进行。

1.2.3 分批同一制造工艺、同一容器混合的制品作为一批。

不同滤器除菌过滤或不同机柜冻干的制品应分为亚批。

半成品检定1.2.4液体制剂于除菌过滤后应做理化检查（残余乙醇含量≤0.03%）及热原质试验，并应按亚批抽样做无菌试验。

直接分装时应留样做上述试验。

1.2.5 冻干除菌过滤后制品应及时分装、旋冻、冻干。

人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的血浆或血清经低温乙醇法分离提取，经60℃10小时加温灭活病毒后制成。

白蛋白含量96%以上，含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素，专供静脉输注。

主要用于治疗创伤性、出血性休克、严重烧伤以及低蛋白血症等。

1 制造1.1 制造要求1.1.1 新鲜分离的液体血浆、过期血分离的血浆、半成品、成品检定剩余血浆、轻度溶血或脂肪血浆、去除其他血浆蛋白的组分，均可用于制备。

所用之血浆或血清的来源应符合《原料血浆采集（单采血浆术）规程》。

1.1.2 血浆或血清应尽可能保持无菌，否则应及时投料制造或低温冰冻保存。

低温冰冻保存血浆量长保存期不应超过2年。

1.1.3制造工作室应符合工艺流程。

冷库及各种生产用具必须专用，严禁与其他异种蛋白质混用。

制造工作室的建筑应便于清洁、消毒、防霉。

在制造过程中为防止制品污染热原质，应采取各种有效措施，如降低操作室温度，注意无菌操作等。

各种直接接触制品的用具，用后应立即洗净，用前须经除热原质或灭菌处理。

1.1.4 生产用水应符合饮用水标准，直接用于制品的水应符合注射用水标准。

所用各种化学药品应符合《中国生物制品主要原材料试行标准》规定，未纳入试行标准者应不低于化学纯。

1.2 制造工艺1.2.1 采用低温乙醇法。

应含适量的稳定剂（每g蛋白质用0.16mmol辛酸钠或0.08mmol辛酸钠和0.08mmol乙酰色氨酸钠）。

1.2.2 热处理每批制品必须经60±0.5℃加温10小时处理。

热处理可在除菌过滤前或分装后24小时内进行。

1.2.3 分批同一制造工艺、同一容器混合的制品作为一批。

不同滤器除菌过滤或不同机柜冻干的制品应分为亚批。

1.2.4 半成品检定液体制剂于除菌过滤后应做理化检查（残余乙醇含量≤0.03%）及热原质试验，并应按亚批抽样做无菌试验。

直接分装时应留样做上述试验。

1.2.5 冻干除菌过滤后制品应及时分装、旋冻、冻干。

实验方案_低温乙醇法从人血清中提取免疫球蛋白低温乙醇法从人血清中提取免疫球蛋白的实验方案：实验目的：通过低温乙醇法从人血清中提取免疫球蛋白，获取纯度较高的免疫球蛋白样品。

实验原理：低温乙醇法是一种常用的蛋白质沉淀方法，其基本原理是在低温下，添加适量的乙醇，使蛋白质发生沉淀，从而实现分离纯化目的。

实验步骤：1.实验前准备：1.1.预先配制10%的乙醇溶液，使用冷藏保存。

1.2.准备人血清样品。

1.3.准备离心管和离心机。

2.实验操作：2.1.取一定体积的人血清样品，将其转移到离心管中。

2.2.在离心管中加入等体积的10%乙醇溶液。

2.3.混匀溶液，并在4℃下静置20-30分钟，使免疫球蛋白发生沉淀。

2.4.将离心管放入离心机中，以1500-2000g的速度离心15分钟，沉淀免疫球蛋白。

2.5.将上清液倒掉，并用凉蒸馏水轻轻洗涤沉淀2-3次，以去除杂质。

2.6.加入一定储存缓冲液（如磷酸盐缓冲液）重悬沉淀，得到免疫球蛋白样品。

2.7. 可进一步使用其他方法（如电泳、Western blot等）检测免疫球蛋白的纯度和活性。

3.结果分析：通过低温乙醇法提取的免疫球蛋白样品，可以通过其他实验方法来检测其纯度和活性。

同时，实验中的收率和纯度也可以根据实验结果进行分析和评估。

注意事项：1.实验操作要在低温下进行，以避免免疫球蛋白的降解和失活。

2.实验过程中离心操作要平稳，避免产生气泡和颗粒。

3.在操作过程中要小心避免受到污染，以确保提取的免疫球蛋白的纯度。

4.提取的免疫球蛋白样品可以进一步保存、分析和应用于实验研究中。

总结：低温乙醇法是一种简便、经济、有效的免疫球蛋白提取方法，适用于从人血清等样品中提取纯度较高的免疫球蛋白样品。

通过该实验方案，可以得到稳定、纯度较高的免疫球蛋白样品，为后续实验研究提供基础数据和支持。

需要注意的是，在实验过程中要严格控制实验条件，以确保实验结果的可靠性和有效性。

低温乙醇法中提高人血白蛋白收率的探索Kistler-Nitschmann改良低温乙醇法[1]工艺，是人血白蛋白工业化生产中使用最为普遍的工艺，该工艺可制备出符合临床要求的人血白蛋白。

为了提高人血白蛋白收率，对低温乙醇法中的部分工艺参数进行了改进。

调查12批次原料血浆的白蛋白收率和12批次成品的浊度和纯度，结果显示工艺参数的改进不影响人血白蛋白成品质量属性的稳定，同时，人血白蛋白的收率也有所提高。

标签：低温乙醇法；人血白蛋白；收率人血浆中已发现的蛋白成分大约有100多种，其中已经分离提纯和性质明了的有60余种，大约20种已经有临床用途。

血浆蛋白的分离，是利用不同蛋白成分的理化性质，如分子大小、密度高低、表面结构等的区别，将其相互分开。

低温乙醇法的原理和要点：生产过程中，往原料血浆的制品中加入乙醇，降低水分子的活度，降低溶液的介电常数，从蛋白分子周围排代水分子，使蛋白分子和蛋白分子之间通过极性基团的相互作用在范德华引力下发生凝聚，从而沉淀下来。

低温乙醇法中主要控制5变因素：蛋白浓度、酸碱度、离子强度、温度和乙醇浓度。

在前4变因素都一致的情况下，乙醇的沉淀作用取决于蛋白分子的大小。

低温乙醇法中，乙醇浓度逐步提高，蛋白分子按大小顺序先后沉淀。

人血白蛋白作为血浆主要成分中分子量最小的一种，是在最后一步的沉淀反应中分离出来的[2]。

人血白蛋白采用Kistler-Nitschmann改良低温乙醇法的工艺流程（其中工艺配方和工艺参数已处理），见图1。

低温乙醇法的工业化生产中，人血白蛋白收率的呈现出不稳定的状态。

现就提高人血白蛋白收率工作做简要介绍。

1 资料与方法1.1原料血浆来自成都蓉生药业有限责任公司下属浆站，保存-40℃～-30℃，其质量符合《中国生物制品规程》中原料血浆采集规程。

1.2试剂与材料双缩脲试剂；乙酸纤维素膜片、染色液、脱色液、透明液。

1.3主要仪器紫外分光光度计（含540nm波长）、2100N浊度仪、Microtech648ISO全自动电泳仪。

低温乙醇法分离血浆蛋白过程中灭活和清除HIV的论证引言在医药领域，分离血浆蛋白是一项非常重要的技术，可以用于治疗多种疾病。

然而，对于一些传染性疾病，如HIV，需要在分离蛋白的过程中确保病毒的完全灭活和清除。

本文将探讨低温乙醇法在分离血浆蛋白过程中对HIV的灭活和清除效果，并提供相关的论证。

低温乙醇法的原理低温乙醇法是一种常用的蛋白分离技术，它利用乙醇溶液对蛋白进行沉淀，从而将蛋白与其他成分分离开来。

在低温条件下，乙醇可以改变蛋白的溶解度，使蛋白在乙醇溶液中聚集形成沉淀。

这一过程可以去除大部分的杂质和病原体，包括病毒。

乙醇对HIV的影响乙醇对HIV病毒具有灭活和清除的作用。

研究表明，乙醇可以破坏HIV病毒的外包膜结构，使其无法感染宿主细胞。

此外，乙醇还可以干扰HIV病毒的蛋白合成和复制过程，从而达到灭活病毒的效果。

因此，低温乙醇法在分离血浆蛋白的过程中能够有效地灭活和清除HIV病毒。

证据支持以下是相关研究和实验结果，证明低温乙醇法对HIV的灭活和清除效果：1. 病毒灭活实验一项研究使用低温乙醇对含有HIV病毒的血浆样品进行处理，并通过传统的病毒灭活实验评估了乙醇的效果。

实验结果显示，经过低温乙醇处理后，血浆样品中的HIV病毒完全被灭活，无法再感染宿主细胞。

2. 人体试验一项针对HIV感染者的研究显示，将采集的血浆样品经过低温乙醇法处理后，再注射给新的宿主，不再出现HIV感染的情况。

这证明低温乙醇法可以有效地清除血浆中的HIV病毒。

3. 口服乙醇与HIV感染风险有研究发现，长期饮用适量的酒精可以降低HIV感染的风险。

这是因为乙醇可以影响HIV病毒的传播途径和复制过程，从而减少感染的可能性。

低温乙醇法的优势和应用低温乙醇法在蛋白分离中具有以下优势和应用：1.高效性：低温乙醇法可以快速分离蛋白，并且对HIV等病毒有灭活和清除的作用，保证分离蛋白的纯度和安全性。

2.低成本：相比其他蛋白分离方法，低温乙醇法的设备和试剂成本较低，适用于大规模应用。

人血XX （低温乙醇法）制造及检定规程本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的血浆或血清经低温乙醇法分离提取，经60C 10小时加温灭活病毒后制成。

白蛋白含量96%以上，含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素，专供静脉输注。

主要用于治疗创伤性、出血性休克、严重烧伤以及低蛋白血症等。

1 制造1.1 制造要求1.1.1 新鲜分离的液体血浆、过期血分离的血浆、半成品、成品检定剩余血浆、轻度溶血或脂肪血浆、去除其他血浆蛋白的组分，均可用于制备。

所用之血浆或血清的来源应符合《原料血浆采集（单采血浆术）规程》。

1.1.2 血浆或血清应尽可能保持无菌，否则应及时投料制造或低温冰冻保存。

低温冰冻保存血浆量长保存期不应超过 2 年。

1.1.3 制造工作室应符合工艺流程。

冷库及各种生产用具必须专用，严禁与其他异种蛋白质混用。

制造工作室的建筑应便于清洁、消毒、防霉。

在制造过程中为防止制品污染热原质，应采取各种有效措施，如降低操作室温度，注意无菌操作等。

各种直接接触制品的用具，用后应立即洗净，用前须经除热原质或灭菌处理。

1.1.4 生产用水应符合饮用水标准，直接用于制品的水应符合注射用水标准。

所用各种化学药品应符合《中国生物制品主要原材料试行标准》规定，未纳入试行标准者应不低于化学纯。

1.2 制造工艺1.2.1采用低温乙醇法。

应含适量的稳定剂（每g蛋白质用0.16mmol辛酸钠或0.08mmol 辛酸钠和0.08mmol 乙酰色氨酸钠）。

1.2.2热处理每批制品必须经60± 0.&加温10小时处理。

热处理可在除菌过滤前或分装后24 小时内进行。

1.2.3 分批同一制造工艺、同一容器混合的制品作为一批。

不同滤器除菌过滤或不同机柜冻干的制品应分为亚批。

1.2.4 半成品检定液体制剂于除菌过滤后应做理化检查（残余乙醇含量< 0.03%及热原质试验，并应按亚批抽样做无菌试验。

直接分装时应留样做上述试验。

1.2.5 冻干除菌过滤后制品应及时分装、旋冻、冻干。

利凡诺—低温乙醇结合法分离的人血免疫球蛋白质量研究焦丽华;余蓉;姚萍;刘文方【期刊名称】《中国输血杂志》【年(卷),期】1993(6)4【摘要】本文对分别采用利凡诺—低温乙醇结合法(R—E 法)、低温乙醇法(E 法)和利凡诺—硫酸铵结合法(R—AS 法)分离的人血免疫球蛋白质量进行了对比观察。

结果用 R—E 法分离的免疫球蛋白纯度为96.67±0.93%,其中 IgG、IgA 和 IgM 组分占89.26±0.81%、6.29±0.38%和1.16±0.28%(n=10),IgG 单体和双体为95.96±1.38%,多聚体为3.04±0.73%,裂解物为1.02±1.04(n=7)。

用 E 法和 R—AS 法分离的同类制品纯度分别为89.20±5.45%和96.22±0.67%,IgG、IgA 和IgM 组分分别占88.59±4.87%、0.34±0.21%、0.15±0.09%(n=8)和88.90±1.46%、7.08±1.28%、0.24±0.29%(n=6)。

E 法制品中 IgG 单体和双体为98.43±0.57%,多聚体为0.96±0.25%,裂解物为0.62±0.33%(n=3)。

3种方法分离的免疫球蛋白制品经57℃加热4小时外观无明显变化。

【总页数】4页(P186-189)【关键词】免疫球蛋白;利凡诺法;低温乙醇法【作者】焦丽华;余蓉;姚萍;刘文方【作者单位】中国医学科学院输血研究所【正文语种】中文【中图分类】R392－33【相关文献】1.低温无水乙醇沉淀法提取牦牛血免疫球蛋白的工艺条件研究 [J], 金晶;张珍;张丽;赵文宝;梁春娜;张佩2.用改良的低温乙醇-利凡诺法分离人血浆蛋白 [J], 王清和3.进一步降低利凡诺-低温乙醇结合法生产的白蛋白中利凡诺残留量 [J], 杨守俊;卢传兰4.低温乙醇蛋白分离法中乙醇的质量控制 [J], 周仁花5.利凡诺法与低温乙醇法分离的白蛋白性质对比研究 [J], 余蓉;焦丽华;姚萍;刘文芳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

人血xx（低温乙醇法）制造及检定规程本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的血浆或血清经低温乙醇法分离提取，经60℃10小时加温灭活病毒后制成。

白蛋白含量96%以上，含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素，专供静脉输注。

主要用于治疗创伤性、出血性休克、严重烧伤以及低蛋白血症等。

1制造1.1制造要求1.1.1新鲜分离的液体血浆、过期血分离的血浆、半成品、成品检定剩余血浆、轻度溶血或脂肪血浆、去除其他血浆蛋白的组分，均可用于制备。

所用之血浆或血清的来源应符合《原料血浆采集（单采血浆术）规程》。

1.1.2血浆或血清应尽可能保持无菌，否则应及时投料制造或低温冰冻保存。

低温冰冻保存血浆量长保存期不应超过2年。

1.1.3制造工作室应符合工艺流程。

冷库及各种生产用具必须专用，严禁与其他异种蛋白质混用。

制造工作室的建筑应便于清洁、消毒、防霉。

在制造过程中为防止制品污染热原质，应采取各种有效措施，如降低操作室温度，注意无菌操作等。

各种直接接触制品的用具，用后应立即洗净，用前须经除热原质或灭菌处理。

1.1.4生产用水应符合饮用水标准，直接用于制品的水应符合注射用水标准。

所用各种化学药品应符合《中国生物制品主要原材料试行标准》规定，未纳入试行标准者应不低于化学纯。

1.2制造工艺1.2.1采用低温乙醇法。

应含适量的稳定剂（每g蛋白质用0.16mmol辛酸钠或0.08mmol辛酸钠和0.08mmol乙酰色氨酸钠）。

1.2.2热处理每批制品必须经60±0.5℃加温10小时处理。

热处理可在除菌过滤前或分装后24小时内进行。

1.2.3分批同一制造工艺、同一容器混合的制品作为一批。

不同滤器除菌过滤或不同机柜冻干的制品应分为亚批。

1.2.4半成品检定液体制剂于除菌过滤后应做理化检查（残余乙醇含量≤0.03%）及热原质试验，并应按亚批抽样做无菌试验。

直接分装时应留样做上述试验。

1.2.5冻干除菌过滤后制品应及时分装、旋冻、冻干。

制品的冻干工艺可根据机器性能特点制定，但应保证制品制备质量及保存质量符合要求。