血清蛋白电泳PPT课件

肾病综合征
肾病综合征时，主要是α2 区的α2巨球蛋白增加，β1 区的ApoB增加所致。
遗传基因突变；或服用β内酰胺类抗生素等导致药物与 白蛋白结合。
低丙球蛋白血症
常见于先天性缺陷或继发性因素（如免疫抑制剂治疗）
高免疫球蛋白血症
高免疫球蛋白(多克隆)，常见于自身免疫性疾病、慢性 感染等
M蛋白
γ区单克隆免疫球蛋白升高，可见于多发性骨髓瘤、淋 巴瘤等疾病
β区M蛋白
因IgA位于β区后部或β和γ区之间，所以单克隆IgA 升高常出现这样图形，主要见于IgA型骨髓瘤 。
M蛋白
M蛋白
即单克隆蛋白monoclonal protein ，是浆细胞或B淋巴细胞 单克隆恶性增殖所产生的一种大量异常免疫球蛋白，其本 质是一种（无功能的）免疫球蛋白或免疫球蛋白片段（重 链，轻链等）。
--毛细管电泳
血清电泳原理
➢ 蛋白质等电点
由于蛋白质含有羧基 “-COOH”和氨基 “-NH2”可 解离成带电荷基团，所以在溶液中有两性电离现象。
当蛋白质溶液处于某一pH时，该蛋白质极性基团解 离正负离子数相等，净电荷为0，此时该溶液的pH值就 是该蛋白质的等电点pI值。
每种蛋白质pI大小是特定的，只与该蛋白质结构有关。
➢ 从正极起依次为白蛋白、a1、a2、b（ b1， b2）、g。 ➢ 区带经丽春红等染料染色后，由光密度扫描仪检测
并自动画出吸光度积分曲线。
血清蛋白电泳正常图谱
Albumin α1 α2 β
γ
正常血清蛋白电泳图谱
白蛋白
a1: a1酸性糖蛋白, a1抗胰蛋白酶，甲胎蛋白等 a2: 结合珠蛋白, a2 巨球蛋白, a脂蛋白, 铜蓝蛋白等 b : 转铁蛋白, b脂蛋白,纤维蛋白原,补体,b2微球蛋白等 g : 免疫球蛋白

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简介：
7～9β7～1110～13γ9～1817～22白蛋白： 54％--65％；α1球蛋白：1．4％--3．3 ％α2白蛋白：7．3％～12．0％β球蛋白： 8．2％～13．8％γ球蛋白：10．5％-23.5％。
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医学检验·各论 血清蛋白电泳（SPE）
内容课件模板
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简介：
血清蛋白电泳即用电泳方法测定血清 中各类蛋白占总蛋白的百分比。对于肝、 肾疾病和多发性骨髓瘤的诊断有意义。
血清含有各种蛋白质，其等电点均在 pH7.5以下，若置于pH8以上的缓冲液电泳 时均游离成负离子，再向正极移动。由于 其等电点，分子量和分子形状各不相同， 其电泳速度就不同。故
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简介：
可将血清中蛋白质区分开来。分子量小， 带电荷多者，泳动速度最快。按其游动速 度顺序把血清蛋白粗略分为清蛋白，α1、 α2、β及γ球蛋白。正常值见表，临床 上血清白蛋白减少与γ球蛋白增高为肝病 患者血清蛋白电泳所共有的现象，其减少 与增加的程度和肝炎的损伤的范围相并行。 急性肝炎早期无变化，发病
正常值： 。
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相关检查： 溶解酶、血小板凝集试验（PAgT）、尿微 量清蛋白（mA1B）、土拉伦斯杆菌凝集试 验。
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相关症状： 膨胀性肝脏搏动、肝星状细胞增生、肝区 摩擦音、血清丙肝病毒RNA(HCV-RNA)阳性、 血吸虫导致的肝硬化、肝被膜血肿破裂。

➢ 电场强度的影响 ➢ 溶液的pH值 ➢ 溶液的离子强度 ➢ 电渗 ➢ 温度、分子大小、吸附作用等
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电渗
液体对固体支持物的相对移动，由 缓冲液的水分子和支持介质的表面之间产 生的一种相关电荷所引起。如果电渗与电 泳方向相同，V变大；反之变小。
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血清蛋白醋酸 纤维素薄膜电泳
❖按支持介质的不同：纸电泳、醋酸纤维薄膜 电泳、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电 泳
❖按支持介质形状不同：薄层电泳、板电泳和 柱电泳
❖按用途不同：分析电泳、制备电泳、定量免 疫电泳和连续制备电泳。
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影响电泳的因素
在电泳中,电场,带电粒子和促使带电粒子移 动的介质是产生电泳的三大要素.因而,影 响电泳的主要因素有：
5.9*10-5
α1-球蛋白 5.06
20万
5.1*10-5
α2-球蛋白 5.06
30万
4.1*10-5
β-球蛋白 5.12
9万～15万 2.8*10-5
γ-球蛋白 6.86～7.30 15.6万～30万 1.0*10-5
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电泳结果示意图
γ
β α2 α1 清蛋白
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染色时染料与蛋白质特异结合而不与醋纤膜结 合，染色深浅与蛋白质的量成正比
❖1959年，Raymond和Weintraub创建聚丙 烯酰胺凝胶电泳
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电泳和电泳技术
电泳是指带电粒子在电场的作用下，向 着与其电性相反的电极移动的现象。
电泳技术指利用电泳现象对混合物进行 分离分析的技术。
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应用

蛋白质组学研究
蛋白质电泳分析在蛋白质组学研 究中具有重要作用，可用于分离 和鉴定蛋白质，揭示蛋白质的表
达模式和功能。
生物标志物发现
通过蛋白质电泳分析，可以发现 与疾病相关的生物标志物，有助
于疾病的早期诊用于药物靶点 的筛选和验证，以及药物作用机
制的研究，有助于新药研发。
绝对定量
通过灰度扫描电泳图谱中蛋白质条带， 可以计算出各蛋白质条带的相对含量。
通过标准品或已知浓度的蛋白质样品， 可以建立标准曲线，从而对未知浓度 的蛋白质样品进行绝对定量分析。
相对定量
通过比较不同样品中蛋白质条带的灰 度值或亮度，可以计算出各蛋白质的 相对表达量。
04
蛋白质电泳分析的优缺点
优点
03
蛋白质电泳分析结果解读
电泳图谱的解读
01
02
03
蛋白质分子量标准
电泳图谱中通常会有一条 蛋白质分子量标准，用于 参考和标定蛋白质的分子 量。
蛋白质条带位置
通过观察电泳图谱中蛋白 质条带的位置，可以判断 蛋白质的迁移率和分子量 大小。
蛋白质表达量
通过比较不同样品中蛋白 质条带的亮度或密度，可 以判断蛋白质的表达量。
在食品安全和检测领域的应用前景
食品成分分析
蛋白质电泳分析可用于食品中蛋白质的鉴定和含 量测定，确保食品质量和安全。
污染物检测
蛋白质电泳分析可以检测食品中的有害物质和污 染物，如农药残留、重金属等。
转基因食品检测
通过蛋白质电泳分析，可以检测转基因食品中的 外源蛋白质，保障消费者权益。
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蛋白质电泳分析PPT 课件
目录
• 蛋白质电泳分析概述 • 蛋白质电泳分析实验操作 • 蛋白质电泳分析结果解读 • 蛋白质电泳分析的优缺点 • 蛋白质电泳分析展望

缓冲液液面要保证一定高度 标本：血清应新鲜，不得溶血 染料：对蛋白质的各组分亲和力相同，
水溶性好，稳定，吸光度敏感，形成的 染料蛋白质复合物稳定且易洗脱比色
.
注意事项
电泳后区带拖尾、各区带分开不明显原因： 点样过多 点样不均匀、不整齐 样品触及薄膜边缘；薄膜过湿，样品扩散； 薄膜未完全浸透或温度过高导致干燥或水分
.
临床意义
肝病型：
➢ Alb降低 ➢ β和γ-球蛋白增高 ➢ 出现β和γ难以分离，出现 “β-γ桥”，此
现象往往是由于IgA增高所致， IgA与肝 纤维化有关。见于急慢性肝炎和肝硬化。
.
临床意义
M蛋白血症型 ➢ Alb轻度降低 ➢ 单克隆γ球蛋白（M蛋白）增高 ➢ 在β与γ-球蛋白区或γ-球蛋白区出现一条致密
.
电泳结果示意图
γ
β α2 α1 清蛋白
.
染色时染料与蛋白质特异结合而不与醋纤膜结 合，染色深浅与蛋白质的量成正比
染色一段时间后脱色，将各蛋白区带剪下，经 脱色、比色即可计算出各蛋白质组分的相对百 分数。
如同时测定出总蛋白浓度，还可计算出各蛋白 组分的绝对浓度
.
正常血清电泳扫描图谱
.
试剂
用520nm比色，以空白管调零，读各管吸光度
.
计算
设各部吸光度分别为AA、Aa1、Aa2、 Aβ、Aγ。吸光度总和（AT）为：
AT= AA+Aa1+Aa2+Aβ+Aγ ❖ 白蛋白（%）＝（AA *2 AT）*100% ❖ a1-球蛋白（%） = （Aa1 AT）*100% ❖ ……
.
注意事项
通电时，不得接触槽内缓冲液或CAM， 以防触电
占总蛋白的百分数(%) 57～68 1.0～5.7 4.9～11.2 7.0～13.0 9.8～18.2

1948年Wieland和Fischer重新发展了以滤纸作为支持 介质的电泳方法，对氨基酸的分离进行过研究。
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50年代起，出现了利用各种固体物质（如各种滤 纸、醋酸纤维素薄膜、琼脂凝胶、淀粉凝胶等） 作为支持介质的区带电泳方法。
1959年Raymond和Weintraub利用人工合成的凝胶 作为支持介质，创建了聚丙烯酰胺凝胶电泳，
CH2=CH—C
O
—CH2—CH—[CH2—CH]x—CH2—
C=O
CONH2
CH2 NH
C=O
CONH2
—CH2—CH—[CH2—CH]x—CH2—
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2.3.2.2 聚合方式 化学聚合：制小孔胶。
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溶液酸碱度影响蛋白质带电的性能。
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PPT课件ຫໍສະໝຸດ 迁移率(mobility)的定义： 带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度.
m

v

d t
dl
E V Vt
l
m:迁移率，cm2/V˙s ν:泳动速度，cm/s E:电场强度 ,V/cm d:泳动距离,cm t:电泳时间,s V:电压 常压(100—500v) l:支持场的长度 (有效长度)
以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶为支持物，采 用电泳基质的不连续体系（即凝胶层、缓冲液离子成 分、PH、电位梯度均不连续），使样品在不连续的两 层凝胶之间积聚浓缩成很窄的样品区带（厚度为0.1 毫米），然后再进行分离，从而提高了分辨率。
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2.2.1不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳的 三种物理效应
压：2-10V/cm 溶液性质:电极溶液和蛋白质样品溶液pH、离子强度、

实验三 血清蛋白电泳
电泳基本原理：
电泳：带电粒子在电场的作用下，向着与其电性 相反的电极移动。
电泳技术指利用电泳现象对混合物进行分离分析 的技术。
蛋白质N端游离氨基，C端游离羧基以及侧链 上一些基团在一定pH条件带电荷， 因此可以 用电泳技术分离和鉴定。
COO╱ + H+ Pr ←————→ ╲ + OH-
电极缓冲液通常为pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液，样品及浓缩胶中为pH6.7 Tris-HCL缓冲液。 甘氨酸的电离小，有效迁移率小，称为慢离子。 浓缩胶中的氯离子完全电离，有效迁移率大，称为快离子。 蛋白质在浓缩胶中介于二者之间。电泳开始后，蛋白质被压缩。 1cm厚样品层可以压缩0.25μm的厚度。
注意： （1）加入胶时避免气泡； （2）注水时用滴管或移液器，尽量轻，避免胶表面发生震动与扩散； （3）长针头易堵塞，不要用于注水； （4）滤纸不能接触胶表面。
2. 上样和电泳： 将凝胶管插入电泳槽槽底橡胶塞孔中，加入电极缓冲液
与下电泳槽，随后放入凝胶管及上槽，除气泡, 加样品液 50μl至浓缩胶面。加电解液直至装满上电泳槽。
聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白
聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺作为 支持介质的一种电泳技术。
聚丙烯酰胺凝胶的优点
聚丙烯酰胺是人工合成的凝胶。机械强度好、弹 性大、透明，化学稳定性高，分辨率高。仅需小 量样品即可进行。
聚丙烯酰胺凝胶电泳分类
按凝胶装置分为盘状电泳及板状电泳。
盘状电泳通常是不连续系统，利用缓冲液离子成分、 pH、凝胶孔径进行电泳，带电颗粒电泳时具有电荷 效应、分子筛效应、 浓缩效应。
电泳约1.5hr。 上层浓缩胶 电流1mA/管。 下层分离胶 电流5mA/管。 电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处，即停止电泳。

2. 点样：毛面向上，用点样器，在距膜一端约1.5 cm 处，点加3-5 μL待分离血清。注意取样适量、均匀； 血清线位置适当，粗细均匀，不能有明显扩散现象。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳 1.5cm
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3. 搭桥：首先将双层纱布铺好，分别放置于电泳槽两端， 其下端要浸入缓冲液中。然后，将点好样的薄膜光面 向上平直地贴于电泳槽的支架上。注意桥的方向，点 样的一端位于负极，点样线不能搭在滤纸上。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
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影响带电粒子电泳速率的因素： 1. 带电量 F=qE 2. 分子量 3. 形状
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
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2.电泳分离蛋白质的原理
蛋白质的两性解离：
pH小于pI
pI
+OH-
+H-
pH大于pI
+OH+H-
等电点 —— 即 pI ( isoelectric point）
当pH距离pI越远时，所带电量越多。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
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血清蛋白质的等电点为4.8~7.5，均低于8.6，因此 电泳时常采用pH8.6的缓冲液。此时，蛋白质解离带 负电荷，在电场中向正极移动。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
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3.醋酸纤膜薄膜电泳分离血清蛋支持物的一种电泳 技术。
1.定性观察：染色后的薄膜上可显现清楚的五条区带。
2.定量测定：光密度仪扫描法，洗脱比色法
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
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六、临床意义
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳在临床上常用于分析 血、尿等样品中的蛋白质，供临床上诊断肝、肾等疾病 参考。
1．肝硬化时清蛋白明显降底，α2和β-球蛋白无显 著变化，而γ球蛋白可显著增加。正常生理情况，清蛋 白与球蛋白之比约为1.5~2.5∶1，而肝硬化时有可能出 现清∶球＜1的情况，常称为清、球比例倒置，说明肝 功能严重受损。

指南：



电泳仪由电泳槽和稳压电源两部分组成，，两者之间有专门的连 线连接。稳压电源用于调节电压和通电时间。当电泳槽和稳压电 源连接好后，将点好样的醋酸纤维薄膜搭在滤纸桥上，盖上盖子， 通电，调整好电压，进行电泳。注意电泳槽的电极方向，负极应 与醋酸纤维薄膜上的点样原点在同一侧。目前，该电泳仪已改进 为数显式的DYY-6C型。 浸泡：将2×8 cm醋酸纤维薄膜迎着光辨别光泽面和无光泽面。 在无光泽面距短边一端1.5 cm处用铅笔轻轻画一条点样线，将之 置于盛有缓冲液的平皿中，浸泡30 min方可用于点样。 点样：用镊子取出浸透的薄膜，夹在两层粗滤纸内吸干多余的缓 冲液，然后平铺在玻璃板上（无光泽面朝上）。在另一 载玻片 上滴一滴血清，点样器（用盖玻片的一边）在血清上蘸一下（可 来回移动一次），再将点样器轻印在加样线上，使血清渗透到薄 膜内，形成均匀的直线。
4. 经醋酸纤维素薄膜电泳可将血清蛋白按电泳速度分为5条区带， 从正极端依次为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白及γ 球蛋白，经染色可计算出各蛋白质的百分含量。
三、实验器材
1. DYY-6C型 双稳定时电泳仪和 DYY-Ⅲ型电泳槽，均为北京市六 一仪器厂生产 2. 醋酸纤维薄膜（2 cm×8cm） 3. 培养皿：一排桌子公用5套，包括 平衡、染色各用一套，漂洗用3套。 4. 点样器 5. 滤纸 6. 载玻片 7. 镊子 8. 玻棒
5.染色：
电泳完毕后将薄膜取下, 放在含氨基黑10B染色液的培养 皿中浸泡5 min
6.漂洗：
将薄膜从染色液中取出后移置漂洗液中漂洗数次，直至背 景蓝色脱尽，条带清晰为止，可得到色带清晰的电泳图 谱 。
7.记录和分析实验结果
漂洗完毕后将薄膜取出, 放在滤纸上。将薄膜上的5条色带根据其颜 色深浅、形状、大小及相对位置进行描述、记录在预习本上，并判断 分析其结果。

γ 球蛋白
0.09~0.18(9%~18%)
哪些病多克隆（Gamma）增高？
多克隆典型电泳图
哪些病M带增高？
单珠峰电泳图（M带）
2球蛋白：肾上腺不 足、肾上腺皮质类固 醇治疗、糖尿病 、肾 病综合征 球蛋白： 转铁蛋白(Tf) C-反应蛋白 营养不良
球蛋白： 体C3、C4 IgG、A、M、D、E
深蓝色柱为典型肾病电泳图，方块内文字是与肾病相关电泳增高的意义
• 预报： • 下期公布关于【免疫蛋白电泳】相关知识。
肾上腺不足肾上腺皮质类固足肾上腺皮质类固醇治疗糖尿病醇治疗糖尿病肾病综合征病综合征肾上腺不肾?球蛋白
典型血清蛋白电泳图片
蒋莹辉

[参考值范围]
醋酸纤维素膜法:
清蛋白
α1球蛋白
0.62~0.71(62%~71%)
0.03~0.04(3%~4%)
α2球蛋白
β 球蛋白
0.06~0.10(6%~10%)
0.07~0.11(7%~11%)

盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳 分离血清蛋白质
一、实验目的 1．学习盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理。 2．掌握(zhǎngwò)盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳
的操作技术。 3．比较醋酸纤维素薄膜电泳与聚丙烯酰胺凝
胶 电泳分离血清蛋白质的效果。
第一页，共16页。
二、实验原理
聚丙烯酰胺凝胶是由单体(dān tǐ)(monomer)丙烯酰胺(acrylamide， 简称Acr)和交联剂(crosslbisacrylamide， 简称Bis)在加速剂和催化剂的作用 下聚合交联成三维网状结构的凝胶。 由于这种凝胶具有分子筛的性质， 所以对样品的分离作用不仅决定于
第六页，共16页。
不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶 所组成，它们在直立的玻璃管中(或2层玻璃板中) 排列顺序依次(yīcì)为上层浓缩胶(大孔胶)、下层 分离胶(小孔胶) 。浓缩胶是核黄素催化聚合而成 的大孔胶，分离胶是由AP催化聚而成的小孔胶， T=7．O％～7．5％，C=2.5％。凝胶缓冲液为 pH8.9 Tris—HCl，大部分血清中各种蛋白质在 此 pH条件下，按各自负电荷量及相对分子质量 泳动，此胶主要起分子筛作用。
维网状结构。催化剂和加速剂的种类
很多，目前常用(chánɡ yònɡ)的有2
种催化体系。
第四页，共16页。
2．核黄素一TEMED 光聚合作用
TEMED可加速凝胶的聚合，但不加也可聚合。 光聚合作用通常需要痕量氧原子存在才能发生， 因为核黄素在TEMED及光照条件下，还原成无 色核黄素，后者被氧再氧化形成自由基，从而引 发聚合作用。但过量氧会阻止链长的增加，因此 应避免过量氧的存在。
❖当电场通过(tōngguò)垂直的凝胶柱时，样品成分就根据它所带的电荷、分子的大小、形状，以特定的泳动率迁移分离成带(盘状)。

3
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第一节 肝胆疾病的实验室检查
（一）蛋白质代谢功能检测
大部分蛋白质均在肝脏合成，白蛋白是正常人 体血清中的主要蛋白质组分，球蛋白大部分在肝细 胞外生成，由机体免疫器官产生的，与机体免疫功 能与血浆粘度密切相关。因此血清总蛋白和白蛋白 含量是反映肝脏合成功能的重要指标。
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第一节 肝胆疾病的实验室检查
手工法和血液凝固仪法参考值：11～13s。
在急性缺血性肝损伤及毒性肝损伤PT延长>3s，而在 急性病毒性或酒精性肝炎PT延长极少超过3s；慢 性肝炎患者PT一般均在正常范围内，但在进展为 肝硬化后，PT则延长。 19
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第一节 肝胆疾病的实验室检查
（1）凝血酶原时间（prothrombin time，PT） 测定 PT延长是肝硬化失代偿期的特征，也是诊断胆 汁淤积、肝脏合成维生素K依赖因子是否减少的重 要实验室检查。在暴发性肝炎时，如PT延长、纤 维蛋白原及血小板都降低，则可诊断为DIC。
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第一节 肝胆疾病的实验室检查
（3）尿中尿胆原测定 从肠道重吸收的尿胆原，大部分经肝脏转化为
结合胆红素再排入肠腔，仅有微量尿胆原经尿液 排出。尿中或血中尿胆原增高是较尿胆红素检测 更敏感地反应肝细胞损害的指标，是早期发现肝 炎简单有效的方法。 【参考值】 定性：阴性或弱阳性； 34 定量：0.84～4.2μmol/L/24h。
【参考值】 血清总蛋白及白蛋白含量与性别无关，与年龄相关 ，新生儿、婴幼儿及60岁以上老人稍低。 正常成人血清总蛋白60～80g/L，白蛋白40～55 g/L，球蛋白20～30g/L，A/G为（1.5～2.5）：1。
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第一节 肝胆疾病的实验室检查
【临床意义】

2.点样
1）用镊子取出浸透的薄膜，夹在两层粗滤纸内吸 干多余的缓冲液，然后平铺在桌子上（毛面朝 上）。
2）在一次性手套上滴一滴血清（3-5μl），用点样 器在血清上蘸一下，再将点样器轻印在CAM膜的 点样线上，待血清完全渗透到薄膜内后移开。
3.电泳
1）将加样后的薄膜，毛面向下，垂直架于电泳槽的游杆两 端，点样端置于负极，纱布将膜的两端与缓冲液连通 2）将电泳槽的正极和负极分别与电泳仪的正极、负极连接， 打开电源，低压，平衡5min。调节电压至90-150V (110V),稳压电泳45min。 3）待电泳区带展开约25-35mm后，关闭电源。
2.M蛋白血症 单克隆γ球蛋白（M蛋白）血症，主要见于多发性骨
髓瘤、巨球蛋白血症、重链病以及一些良性M蛋白增多症。在β和 γ球蛋白后区段的各部分出现一条致密浓集的M蛋白带。
3.蛋白缺乏症 主要包括a1抗胰蛋白酶缺乏症、γ球蛋白缺乏症等。
临床上较少见，电泳图表现为a1或γ球蛋白缺乏或显著降低。
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