RFectSP悬浮细胞(树突状细胞 siRNA转染)试剂

广东转染试剂类型
广东转染试剂类型
广东省作为全国经济重心之一，其科技实力在行业内也是一直走在前列。

转染试剂作为生物科研中不可缺少的试剂之一，在广东制造商也
有相当的生产水平和供应能力。

转染试剂，是指将外来的目的基因（DNA、RNA等）引入到靶细胞内，并使其表达的试剂。

其种类繁多，在广东也有着相应的常规类型。

1. 磷脂体基转染试剂
主要由磷脂体和质粒DNA组成，优点是容易制备和操作，适合于大规模生产。

缺点是转染率相对不高，有一定的毒性。

2. 聚乙烯酰胺转染试剂
聚乙烯酰胺（PEI）是一种化学合成剂，使用时与DNA分子组合形成
复合物，可以将DNA有效转染到细胞内。

优点是转染率高且毒性低，目前在广东科研中得到广泛应用。

3. 蛋白质/肽转染试剂
蛋白质/肽转染试剂通常是根据蛋白质或肽与DNA分子的作用机制设计制备的，可以有效地将目的分子转染到靶细胞内。

优点是转染效率高且无毒性，但缺点是价格昂贵。

4. 常规转染剂
常规转染剂是一类较为通用的转染试剂，主要包括羧甲基纤维素钠（CMC-Na）、聚乙烯醇（PVA）、去离子水等，优点是价格低廉且易于操作，但其转染效率较低，通常适用于一些较为简单的试验。

总体来说，转染试剂在广东科研中扮演着不可或缺的角色，其种类繁多，需根据实验需要选择合适的试剂。

在使用转染试剂时，需注意试剂质量和实验条件，以确保实验结果的准确性和科学性。

sirna转染原理Sirna（小体RNA）技术是一种新型的分子技术，可以靶向性地抑制某些特定基因，用于研究基因表达、调节合成物质和活性蛋白质的水平，以及治疗细胞病毒学和遗传学疾病。

Sirna转染作为许多基因治疗方法的关键技术，可以有效地将Sirna片段迅速、安全地转染到细胞内，为研究和治疗提供新的途径。

本文就Sirna转染原理及其在基因治疗中的应用进行综述。

Sirna转染原理Sirna转染的原理是利用Sirna片段在细胞中进行有效的“封锁”，封锁被封锁基因的表达，从而达到调节基因表达的目的。

Sirna片段是由特定的RNA序列组成，长度为19-25个核苷酸，能够结合到mRNA，形成mRNA-Sirna复合物。

当其复合后，mRNA的解读将受到抑制，而蛋白质的合成也将减少，从而达到调节基因表达的目的。

Sirna转染的方法Sirna转染具有多种方法，包括化学递送、化学封装和抗体介导等。

1.学递送化学递送是最常用的Sirna转染方法，典型的化学递送剂有三聚脂散（Lipofectamine）、一及二聚脂散（Lipofectin）、二乙醇胺（DEAE）等。

化学递送剂能够有效地将Sirna片段递送到细胞内，可以提供最大的转染效率。

2.学封装化学封装技术是把Sirna溶解在定制的化学封装剂中，形成脂质微粒，然后将其投放到细胞内以进行转染。

相比常规的化学方法，化学封装有更强的转染能力，可以在短短几分钟内转染细胞；但由于它的转染效率取决于封装剂的组成，所以任何实验室都可以自行封装Sirna转染剂，这会极大地缩短转染时间。

3.体介导抗体介导转染是把Sirna片段结合到特定抗体上，然后利用抗体来将Sirna片段递送到细胞内，通过细胞内抗体受体，将Sirna片段发送到细胞内，从而达到抑制特定基因表达的目的。

采用抗体介导转染技术，可以实现更高的转染效率，还能保护Sirna片段不受酶的侵扰，让转染的Sirna片段有更好的活性。

RFect siRNA淋巴细胞转染产品描述RFect siRNA转染试剂是专为将RNAi双链(siRNA)转染真核细胞而设计的新一代动物源性游离脂质转染试剂。

RFect由不同的脂质组成，在大多数细胞系中表现优异，但也存在一定的差异。

无论血清存在与否，SiRNA-RFect复合物可直接添加到培养基中的细胞中。

转染后无需去除复合物或改变/添加培养基，但复合物可在4-6小时后去除。

RFect siRNA转染试剂的优点转染效率高90%或更多的速度和明显的基因击倒效果(如。

在A549细胞中，Lamin A/C基因敲除效率达95%以上)。

最小的细胞毒性(少于10%的细胞转染后死亡率),以减少非特异性作用和细胞压力。

需要低浓度的siRNA获得高水平的可拆卸的。

广泛的转染细胞:我们可以获得理想的大多数附着细胞系转染结果。

储存、稳定、特殊处理RFect核转染试剂在室温下稳定运输和长期储存(12个月)在4°C。

RFect siRNA转染试剂仅供研究使用。

转染的重要指南转染过程中不要向培养基中添加抗生素，因为这可能导致细胞死亡。

以10nm siRNA为起始点，虽然siRNA浓度可以远低于10nm。

正向转染和反向转染协议可用于大多数细胞株。

协议:向前转染使用以下步骤将siRNA以24孔的形式转染到细胞中。

有关其他格式，请参见放大或缩小转染。

优化转染如优化转染中所述，特别是在首次转染细胞株时。

所有数量和体积均按每口井计算。

答:板细胞在转染前的一天,500μl板细胞生长介质没有抗生素,这样细胞将30 - 50%时汇合的转染。

B.准备siRNA-RFect复合物1. 稀释6 pmol siRNA 50μl没有血清的培养基。

2. 稀释2μl RFect 50μl没有血清的培养基。

轻轻搅拌，室温下孵育5分钟。

注意:在25分钟内进行第3步。

3.5分钟后孵化,结合稀释的稀释siRNA RFect(总量= 100μl)。

轻轻搅拌，室温下孵育20分钟。

RFect SP 悬浮细胞小核酸转染货 号：BIOG-11024: 0.5mlBIOG-11025: 1.0ml 储存条件：-20℃BIOG-11026: 1.5ml产品特点产品介绍RFect SP 悬浮细胞小核酸转染试剂是我公司研发团队在RFect PM 原代细胞小核酸转染试剂的基础上加以改进研发成功的专门用于悬浮细胞小核酸转染的试剂。

RFect SP 可用来转染siRNA 、antisense RNA 、microRNA 等200bp 以内的小分子RNA 和DNA ，可转染绝大多数悬浮细胞。

目前，无论国外还是国内，悬浮细胞的核酸转染都是个热点难题，市场还缺乏真正有效的商品化的悬浮细胞小核酸转染试剂。

RFect SP 能够高效转染绝大多数悬浮细胞，获得比较理想的基因敲除效果。

对于大多数悬浮细胞，RFect SP 的细胞转染阳性率都在75%以上，而转染细胞死亡率不到10%。

RFect SP 的使用也极其简便，先将sRNA 与RFect SP 室温混合，再将siRNA-RFect SP 混合物直接加入含培养基的细胞，血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。

操作步骤：本说明书适用于24孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。

A. 细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔 500 μl 培养基（不可加抗生素），使细胞在转染时密度在30-40% 。

B. siRNA-RFect SP混合物准备：1. 6pmol siRNA 用50μl 无血清培养基稀释。

2. 2μl RFect SP 用50μl 无血清培养基稀释。

轻轻混匀，室温孵育5min 。

注意：确保在25 min 内执行第三步操作，不要过于延迟。

3. 孵育5min 后，将siRNA 稀释液与RFect MN 稀释液混合（总体积100μl ）。

轻轻混匀，室温孵育20 min 。

C. 将混合物加到培养的细胞内（完全培养基培养）：转染实验优化: 为了提高转染效率，最好对转染条件进行优化，特别是首次使用。

RFect SP 悬浮细胞小核酸转染试剂说明货 号：BIOG-11024: 0.5mlBIOG-11025: 1.0ml 储存条件：-20℃BIOG-11026: 1.5ml 产品特点产品介绍RFect SP 悬浮细胞小核酸转染试剂是我公司研发团队在RFect PM 原代细胞小核酸转染试剂的基础上加以改进研发成功的专门用于悬浮细胞小核酸转染的试剂。

RFect SP 可用来转染siRNA 、antisense RNA 、microRNA 等200bp 以内的小分子RNA 和DNA ，可转染绝大多数悬浮细胞。

目前，无论国外还是国内，悬浮细胞的核酸转染都是个热点难题，市场还缺乏真正有效的商品化的悬浮细胞小核酸转染试剂。

RFect SP 能够高效转染绝大多数悬浮细胞，获得比较理想的基因敲除效果。

对于大多数悬浮细胞，RFect SP 的细胞转染阳性率都在75%以上，而转染细胞死亡率不到10%。

RFect SP 的使用也极其简便，先将sRNA 与RFect SP 室温混合，再将siRNA-RFect SP 混合物直接加入含培养基的细胞，血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。

有关RFect SP 悬浮细胞小核酸转染试剂的材料合成和试剂配制我们已申请了国际专利，并通过PCT 覆盖国际上多个国家和地区。

操作步骤：本说明书适用于24孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。

A. 细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔 500 μl 培养基（不可加抗生素），使细胞在转染时密度在30-40% 。

B. siRNA-RFect SP混合物准备：1. 6pmol siRNA 用50μl 无血清培养基稀释。

2. 2μl RFect SP 用50μl 无血清培养基稀释。

轻轻混匀，室温孵育5min 。

注意：确保在25 min 内执行第三步操作，不要过于延迟。

3. 孵育5min 后，将siRNA 稀释液与RFect MN 稀释液混合（总体积100μl ）。

转染试剂的作用原理一、转染试剂的基本概念转染试剂是一种用于将外源基因或其他生物分子转移到目标细胞中的化学物质。

转染试剂可以通过物理或化学方法改变细胞的通透性，使外源物质能够进入细胞内，并达到转染的目的。

转染试剂在基因治疗、基因表达研究和细胞工程等领域广泛应用。

二、转染试剂的分类转染试剂按照机理和性质的不同可分为多种类型，常见的转染试剂包括：1.脂质体（Liposome）：脂质体是由磷脂双分子层构成的微小囊泡，可与细胞膜融合，将目标物质转移到细胞中。

2.内源蛋白介导的转染：通过利用特定的蛋白质，如病毒衣壳蛋白或细胞内运输蛋白，将目标物质转移到目标细胞中。

3.阳离子聚合物：阳离子聚合物具有正电荷，能够与负电荷的DNA或RNA结合形成复合物，进而转染入细胞。

4.高分子基质：高分子材料如凝胶、纤维或微球等可用于载体，将目标物质与细胞接触，实现转染。

5.电穿孔：利用电场或离子流导致细胞膜破裂，使目标物质通过细胞膜进入细胞质。

三、脂质体转染试剂的作用原理脂质体是一种常用的转染试剂，其作用原理主要包括以下几个步骤：1.与DNA结合：脂质体通过与目标DNA相互作用，形成脂质体-DNA复合物。

脂质体由于其亲油性能与DNA中的疏水部分相互作用，同时脂质体表面带有正电荷，可以与DNA的负电荷相吸引。

2.细胞摄取：脂质体-DNA复合物与细胞膜结合后，脂质体会在细胞膜上形成微囊泡。

随后，微囊泡与细胞膜融合，释放出脂质体-DNA复合物进入细胞质。

3.脱脂质体：脂质体在细胞质中逐渐失去其亲油性，释放出DNA。

由于脂质体-DNA复合物在细胞膜上的微囊泡中形成的电位差，使得DNA被吸引到细胞核附近。

4.核入：DNA由细胞质进入细胞核，最终与染色体结合或进入细胞核内的胞浆，实现转基因。

四、脂质体转染试剂的优缺点脂质体转染试剂具有一些优点和缺点，需要根据实际应用情况选择使用：优点：1.安全性：脂质体转染试剂大多采用合成非病毒载体，通常比病毒载体更安全，不会引起病毒感染及遗传毒性。

sirna转染常见问题解答siRNA转染常见问题解答SiRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。

选择时应该依据实验条件考虑以下因素：细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。

其中，化学转染技术是目前最为常用的方法，由于电转的方法对细胞损伤比较大，一般不建议选择电转。

针对最常见的化学转染技术，有几种常见的问题以及解决方法。

一、哪种转染试剂效果好？在选择转染试剂时，一般要考虑的是结合特定的细胞株，而不是被导入细胞中的物质。

选择细胞毒性小，转染效率高的转染试剂。

脂质体试剂的毒性较大，建议选择非脂质体的转染试剂，如BIODAI的RFect系列纳米材料转染试剂。

二、转染后出现细胞死亡是什么原因？如何优化转染条件？转染后细胞死亡，原因也是多样的，如脂质体毒性，转染浓度过高，转染前的细胞状态不佳等都可能导致转染后细胞死亡的情况发生，这种情况下就需要适当优化转染条件；在优化转染条件时需要考虑以下因素：转染试剂和细胞特有的自身条件。

例如：siRNA与转染试剂的比例、转染时间、细胞传代数和细胞密度等。

一般说，转染试剂毒性小，转染时所需的细胞密度就小，如RFect系列siRNA转染试剂一般要求30-50%细胞密度，而lipo2000转染时所需的细胞密度一般在70%左右。

如果经优化后细胞死亡仍很多，应及时考虑更换转染试剂。

三、如何优化siRNA与转染试剂的比例？SiRNA的量与转染试剂的比例需要进行优化，一般选择24孔板进行优化，比较节省各种试剂。

可以在10-100nM之间设定几个siRNA的浓度水平，如30nM，50nM，80nM，100nM。

转染试剂根据说明书推荐的剂量上下浮动各3个浓度。

之后siRNA的量与转染试剂的量进行两两组合，从中选择转染效率最高的组合用于接下来的实验。

如果通过荧光显微镜观察荧光判断转染效率的话，siRNA的最低终浓度不要低于10nM，一般推荐的siRNA终浓度多在50-100nM。

软骨细胞 siRNA转染原理及转染试剂的选择RNA干扰（RNA interference，RNAi）是近年来生命科学领域最为重大的发现之一。

它是指小分子双链RNA可以特异性地降解同源mRNA,从而抑制或关闭特定基因表达的现象。

人们只要知道了某种疾病的致病基因，就可以设计出针对该基因mRNA的小分子干扰RNA（Small interfering RNA，siRNA），抑制或封闭该致病基因的表达，从而达到治疗疾病的目的。

siRNA是目前最为热门的生命科学研究领域，也是未来最有发展前途的新药开发领域。

除此之外，siRNA技术还可以广泛应用于农业、林业、畜牧业和渔业等多种领域，进行良种培育、良种筛选和疾病治疗等。

siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。

其中，化学转染技术是目前最为常用的方法，由于电转的方法对细胞损伤比较大，一般不建议选择电转。

化学转染能否成功的关键在于转染试剂的选择，目前常用的转染试剂有RFect系列转染试剂、Lipo2000、RNAiMAX等。

如何选择合适的转染试剂，一般可从以下几个方面考虑：一、对siRNA有较高的转染效率。

转染效率的确定，常用的是使用荧光定量PCR、荧光显微镜和流式细胞仪检测的方法。

金标准无疑是检测目标基因的mRNA 水平，因为转染试剂不仅要把siRNA转染进入细胞，还应及时把转入细胞的siRNA 释放出来，发挥抑制基因表达的作用。

通过荧光显微镜判断转染效率至少存在两方面的问题：1、荧光显微镜看到的荧光点可能是非特异吸附的结果；2、有些转染试剂能够将siRNA转染入细胞，但不能充分释放，导致基因抑制效率并不高。

因而，判断转染试剂转染效率的金标准应该是荧光定量检测mRNA水平，仅靠观察荧光显微镜判断转染效率、选择转染试剂往往会导致误判，影响实验的进展。

目前国内应用最广的转染试剂有RFect系列转染试剂、Lipo2000、RNAiMAX等，其中，Lipo2000、RNAiMAX为国外知名品牌，RFect转染试剂虽在国内生产，但实际上是在美国研发成功，拥有国际发明专利。

siRNA小干扰RNA 转染程序将制备好的siRNA和其表达载体转导至真核细胞中的方法主要有以下几种：磷酸钙共沉淀、电穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、机械法（显微注射和基因枪）、阳离子脂质体试剂，其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染方法。

目录一、转染方法哺乳动物转染的常见方法有：磷酸钙共沉淀、电穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、机械法（例如，和基因枪）、阳离子脂质体试剂，其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染方法。

二、脂质体型转染(一)注意事项1.转染试剂的用量2.si（小干扰）的用量3.转染时的细胞密度4.转染时的操作顺序5.细胞与转染试剂/si（小干扰）复合物的温浴的时间(二)SiMi转染试剂选择最适合的转染试剂和转染条件，往往取决于不同的哺乳动物细胞类型和不同的核酸分子.SiMiTransfectionReagents适用于核酸的体内和体外操作，可应用于DNA、、反义寡核苷酸、si（小干扰）的转染，也可应用于DNA/si（小干扰）的共转染操作；是一种新型的高效si 转染试剂。

(三)SiMi应用领域1.原代培养细胞和细胞株的基因转染2.si（小干扰）高通量转染试验3.DNA转染；DNA和si（小干扰）的共转染4.核酸（si、DNA、）的体内导入试验5.贴壁细胞和悬浮细胞转染(四)SiMi特点1.不必更换培养基，操作简便易行，可在半小时内完成操作2.在含血清培养基中也能表现高转染效率3.细胞毒性低；适用细胞广泛4.即用型试剂，可在含有抗生素的完全培养基中转染5.基于脂质的转染试剂，确保没有se活性6.可介导si（小干扰）高转染细胞及体内si（小干扰）的高效导入三、适用细胞类型SiMiTransfectionReagents转染试剂可广泛应用于多种细胞系的DNA和si（小干扰）转染如：HeLa(人颈部癌细胞)、MCF-7(人乳房癌细胞)、Hep3B(人肝细胞癌细胞)、COS-7(猴肾细胞)、Neuro-2a(鼠神经母细胞瘤细胞)、NIKS(人角质化细胞)、B16(鼠黑素瘤细胞)、DLD-1(人结肠癌细胞)、NIH/3T3(鼠胚胎成纤维细胞)、HT-29(人结肠腺癌细胞)、A549(人肺癌细胞)、CHO-k1(仓鼠卵巢细胞)和293(腺病毒5DNA的人胚胎肾细胞)，SVRbag4细胞等。

转染试剂⾃1978年William Linton 先⽣在美国威斯康⾟州麦迪逊市（就是《廊桥遗梦》那⾥哦）创⽴Promega以来，今年已经是第26个年头了，也是Promega进驻中国的20周年――这个⼏乎可以说是国内⽣物技术最早的启蒙者之⼀的品牌⾮常了解国内科研经费来之不易，在进⼝品牌中以价格算可亲⽽⼴受欢迎。

Promega的转染试剂产品由于市场定位较准确，获得的业内评价不错，尤其是在其价格经济实惠前提下，产品质量并没有因此打折扣（就是性价⽐⾼咯）。

1. siRNA转染试剂CodeBreaker? siRNA转染试剂是Promega的专利配⽅产品，专门为有效转染siRNA⽽优化设计。

这⼀试剂能有效促进siRNA 转染哺乳动物细胞，促进基因沉默，⽽且毒性⼩，细胞死亡率低，⽐如转染CHO与HeLa细胞，使⽤CodeBreaker基因沉默率达到80%或更多，⽐起同类产品毒性⼩50%以上。

这⼀产品操作简便，买来后即可使⽤，不⽤溶解。

将CodeBreaker转染试剂与合适的siRNA⼆聚物混合后孵育⼏分钟，然后加到培养细胞即可。

⽽且转染可在完全⽣长培养基中进⾏，不需要更换培养基或再加⾎清，简化了操纵步骤（见下）。

CodeBreaker试剂适⽤的细胞有HeLa、HEK293、293T、CHO 和 3T3细胞等。

价格1800/0.4ml，以24孔板为例，按照推荐剂量可以可以做200次，6孔板⼤约可⽤40次左右。

Day One：细胞铺板 (in complete growth medium).Day Two1. 将CodeBreaker? Reagent加到⽆⾎清培养基中，混合均匀，室温孵育15—20分钟。

2. 制成复合物：加⼊siRNA到第⼆步中，轻微混合。

室温孵育15—20分钟。

3. 然后与细胞混合，37°C培育24—72⼩时，OK，检测吧。

2. DNA转染试剂Transfast? 是⼀种特殊的脂质体转染试剂，由阳离⼦脂类（+）-N,N[bis(2-hydroxyethyl)]-N-methyl-N-[2,3-di(tetradecanoyloxy)propyl]和中性脂类DOPE（⽤于加强转染能⼒）组成。

siRNA转染实验是一种常用的基因沉默技术，其基本原理是通过将小干扰RNA（siRNA）引入细胞，从而在翻译水平上抑制特定基因的表达。

以下是siRNA转染的实验原理、所需试剂和耗材、实验仪器、准备工作、实验方法、注意事项、常见问题及解决方法。

一、实验原理siRNA是一种21-23个核苷酸长的双链RNA，它与靶基因的mRNA 序列互补，通过碱基配对原则与mRNA结合，抑制基因表达。

siRNA 转染实验是通过将siRNA转入细胞内，利用细胞内自然存在的RNA 干扰机制，在转录后水平抑制基因表达。

这种技术具有高效性、特异性和可逆性等特点，被广泛应用于基因功能研究、药物筛选和疾病治疗等领域。

二、所需试剂和耗材1.试剂：o siRNA：针对特定基因的siRNA分子。

o转染试剂：如Lipofectamine、JetPrime等，用于将siRNA转入细胞。

o培养基：如DMEM、F12等，用于细胞培养。

o血清：如胎牛血清，提供细胞生长所需的营养物质。

o抗生素：如青霉素、链霉素等，用于防止细胞污染。

2.耗材：o细胞培养瓶、板：用于细胞培养。

o离心管：用于离心和分离细胞。

o移液器及枪头：用于精确加样。

o过滤器：用于过滤溶液中的杂质。

o无菌水：用于稀释和配制溶液。

三、实验仪器1.实验室搅拌器：用于混合溶液。

2.高速冷冻离心机：用于离心和分离细胞。

3.水浴锅：用于加热溶液。

4.无菌工作台或超净工作台：用于进行无菌操作。

5.分光光度计：用于测量细胞生长状况和转染效率。

6.荧光显微镜：用于观察细胞转染后荧光蛋白的表达情况。

7.CO2培养箱：提供细胞培养所需的气体环境。

8.显微镜：观察细胞的生长状态和siRNA转染后的细胞变化。

9.细胞计数板或细胞计数仪：用于细胞计数，确定细胞的密度和生长状态。

10.酶标仪或多功能读板仪：用于检测细胞因子的浓度。

四、实验准备工作1.确认细胞系和siRNA：实验前要明确所使用的细胞系以及针对的目标基因。

RFect 小核酸转染试剂货 号：11011: 0.5ml11012: 1.0ml 储存条件：-20℃11013: 1.5ml产品特点 应 用产品介绍RFect 小核酸转染试剂是国际知名科学家崔坤元博士领导我公司研发团队在美国西雅图实验室研发成功的一种新型的小核酸转染试剂。

RFect 可用来转染siRNA 、antisense RNA 、microRNA 等200bp 以内的小分子RNA 和DNA ，转染细胞包括绝大多数贴壁生长的细胞，如一般细胞株、肿瘤细胞株等。

目前，无论国外还是国内，转染试剂的主要成分均为脂质体或聚乙烯亚胺(Polyethylenimine, PEI)，这两种成分都具有很大的细胞毒性，并且转染效果不好。

RFect 采用新型的动物源性的纳米材料，毒性很低并且拥有非常卓越的转染性能。

与其它品牌的小核酸转染试剂相比，RFect 的细胞转染阳性率一般在90%以上，Lamin A/C 基因抑制效率在95%以上，而其它品牌转染试剂的细胞转染阳性率一般不超过70%，Lamin A/C 基因抑制效率不超过75%。

RFect 细胞毒性很低，转染细胞死亡率不到10%，而其它品牌试剂的转染细胞死亡率一般在30%以上。

血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。

有关RFect 小核酸转染试剂的材料合成和试剂配制我们已申请了国际专利，并通过PCT 覆盖国际上多个国家和地区。

操作步骤：本说明书适用于24孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。

A. 细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔 500 μl 培养基（不可加抗生素），使细胞在转染时密度在30-50% 。

B. siRNA-RFect 混合物准备：1. 6pmol siRNA 用50μl 无血清培养基稀释。

2. 2μl RFect 用50μl 无血清培养基稀释。

轻轻混匀，室温孵育5min 。

注意：确保在25 min 内执行第三步操作，不要过于延迟。

悬浮细胞培养及siRNA转染1.悬浮细胞培养用T25的培养瓶，一般密度较少时培养基最多5ml2.换液，动作缓慢的将培养瓶拿出，将上面无细胞的培养基弃去2ml加入新鲜培养基置于37℃，5%CO2培养箱中培养3.传代培养，将细胞吹匀，计数后，将细胞放入离心管内进行离心，1000rpm，5min后，弃去上清，用新鲜培养基重悬后放入T25中进行传代置于37℃，5%CO2培养箱中培养4. siRNA转染24孔板中以2x105细胞/孔密度进行接种后（6孔板或96孔板接种密度进行相应调整）准备进行siRNA转染，实验每组设置3个复孔，siRNA以Nuclease-Free Water稀释至储存液浓度，通常为20 μM。

（实验组一般设置：阴性对照，阳性对照，空白对照，siRNA 实验组，其他siRNA荧光标签组（要避光保存））。

5.根据siRNA终浓度进行溶液配制（以下溶液配制以50 nM为siRNA 最终浓度，24孔板中终液体体积为500 μl为例），溶液1配制：每孔1.25 μl siRNA储存液以无血清无双抗培养基稀释至25 μl，按此比例依照孔数进行扩大，将最终液体进行充分混匀；溶液2配制：每孔2 μl Lipo 2000转染试剂（可用其他替代，用量参照说明书推荐或自行优化）以无血清无双抗培养基稀释到25 μl，按此比例依照孔数进行扩大，将最终液体进行充分混匀；上述2种溶液混匀后分别室温静置5min；6.将溶液1滴加至溶液2中并进行充分混合（每孔为50 μl），室温静置20-30 min；静置完成后，将上述混合液滴加进去24孔板中，每孔50 μl，注意滴加不要过快，以防冲起细胞，滴加完成后每孔加入450 μl无血清无双抗培养基，充分混匀，将板放入37℃，5%CO2培养箱中培养7.6h后，将板取出放入cytation5中看荧光显色，siRNA是否转染成功8.在细胞操做台上，将24孔中每孔细胞液移入1mlEP管内进行离心，6000 rpm离心5min，弃去上清，加入有10%FBS无双抗的培养基进行重悬后加入24孔板进行培养。

RFect SP悬浮细胞质粒DNA转染试剂盒
一．产品简介
RFect SP Plasmid DNA Transfection Reagent是我公司研发团队在RFect Plasmid DNA Transfection Reagent的基础上进一步优化研发成功的专门用于悬浮细胞质粒DNA转染的转染试剂。

RFect SP Plasmid具有非常卓越的转染性能，可高效转染多种悬浮细胞，转染效率高达70%以上（EGFP质粒）。

RFect SP Plasmid不仅可转染较大分子的质粒DNA，还可转染RNA和小分子DNA。

与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同，RFect SP Plasmid采用生物可降解材料配制，对细胞的毒性很低，转染后细胞死亡率不到10%。

RFect SP Plasmid使用也非常方便，先将转染试剂与质粒DNA混合，再将转染试剂-DNA复合物直接加入培养细胞中，血清不影响其转染效果，不必刻意添加或更换培养液，操作十分简便。

二．产品特点
∙卓越的细胞转染性能：可高效转染多种悬浮细胞，转染效率高达70%以上；
∙极低的细胞毒性：使用可降解生物材料，细胞毒性低，转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响，实验结果更为客观；
∙操作简便，可用于含血清培养基培养细胞的转染，转染前后不需要更换培养液。

三、产品性能
图.用RFect SP Plasmid10ul转染5ug目标基因质粒
到THP-1细胞，72h后收细胞提蛋白用Western Blot
方法检测标签蛋白表达，结果表明标签蛋白高表达。

热销产品：polyplus转染试剂INTERFERin®polyplus转染试剂INTERFERin®在1nM siRNA下已经提供了非常高的沉默效率，并且可以用于多种粘附细胞和悬浮细胞。

使用低浓度的siRNA可以避免脱靶效应，其温和的作用模式确保了更可靠的数据和优异的细胞活力。

由于与血清和抗生素的兼容性，INTERFERin®易于使用，也非常适合转染miRNA和其他寡核苷酸，如pre-miRNA、mimic miRNA等。

产品优势：一、更少的siRNA，更少的脱靶效应一些出版物表明，转染低浓度的siRNA可以避免脱靶效应。

事实上，当以高浓度转染siRNA时，可以观察到这些不想要的非特异性副作用。

因此，可以通过使用尽可能少的siRNA来提高实验数据的可靠性。

这就是为什么INTERFERin®被专门设计为使用低siRNA浓度提供高沉默效率的原因。

INTERFERin®介导的1 nM特异性siRNA的递送显示出对基因表达的选择性和高效敲低，而竞争对手（L2K）至少需要10 nM siRNA才能达到50%的沉默效率（图1）。

图1:INTERFERin®只需要1 nM siRNA即可实现有效的基因沉默。

根据制造商的建议，使用INTERFERin®或竞争对手L2K用抗-Luc siRNA转染稳定表达萤火虫萤光素酶的3LL细胞。

48小时后使用常规测定法测量萤光素酶的表达。

对照siRNA未观察到抑制作用。

令人惊讶的是，在10pM的siRNA下仍然实现了50%的沉默（图2）。

图2：即使在极低的siRNA浓度下，INTERFERin®也是高效的。

A549-GL3Luc细胞在血清存在下使用INTERFERin®转染，并降低抗-Luc siRNA的浓度。

48小时后使用常规测定法测量萤光素酶的表达。

对照siRNA未观察到抑制作用。

RFectsiRNA转染试剂产品简介RFect siRNA转染试剂是一种采用新型的动物源性的纳米材料，毒性很低并且拥有非常卓越转染性能的一种小核酸转染试剂。

RFect可用来转染siRNA、antisense RNA、microRNA等200bp以内的小分子RNA和DNA。

RFect使用极其简便，先将siRNA与RFect室温混合，再将siRNA-RFect 混合物直接加入含培养基的细胞，血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。

有关RFect siRNA转染试剂的材料合成和试剂配制我们已申请了国际专利，并通过PCT覆盖国际上多个国家和地区。

产品特点·卓越的细胞转染性能：细胞转染阳性率高达90%以上，基因敲除效果明显，A549细胞 LaminA/C基因敲除效率在95%以上；·极低的细胞毒性使实验结果更为客观：转染细胞死亡率不到10%；·低浓度siRNA转染获得高基因抑制水平；·转染细胞范围非常广，绝大多数贴壁细胞株都能获得比较理想的转染结果（如一般细胞株、肿瘤细胞株等）。

Fig.1. RFect siRNA transfection reagent offers the highest transfection efficiency. HeLa cells were transfected with Alexa 546-dye labeled siRNA at final concentration of 10nM using RFect. After 24 hrs, the cells were stained with Hoechst 33342 (nuclear staining dye) and then were viewed by fluorescence microscopy. beled siRNA (in red)beled siRNA (in red) overlaid with fluorescence from Hoechst 33342 nuclear staining (in blue).Fig..2.RFect siRNA transfection reagent offers the highest level of gene knockdown on a variety of cell types. Different cell lines were transfected with scrambled or Lamin A/C siRNA (final concentration: 10nM) using RFect In this and all thefollowing figures, all the cells are harvested 48 hours after transfection and Lamin A/C knockdown was measured by qRT-PCR.Fig..3.RFect siRNA transfection reagent offers high level of gene knockdown with low toxicity. A549 cell lines were transfected with Lamin A/C siRNA (final concentration: 10nM) using RFect siRNA transfection reagent. RFect concentrations added to the cells exceeding transfection concentration of 20 times, the cells still do not produce significant toxicity, which makes these product suitable to optimization. Lamin A/C knockdown was measured by qRT-PCR.Fig.4.RFect siRNA transfection reagent offers consistent high level of gene knockdown despite differences in cell density.A549 cells at different cell density were transfected with Lamin siRNA (final concentration: 10nM) using RFect.。