耐药性检测

第二节病原体耐药性检测抗菌药物是目前临床使用最为广泛的药物，它的发现、研制和临床应用是现代医学史上的重要里程碑，使绝大多数微生物感染，尤其是细菌感染成为可治性疾病。

但抗微生物药物的广泛使用所造成的“抗生素压力”（antibiotic pressure）也使原来占优势的敏感菌株被抑制和杀灭，原来是少数劣势的固有耐药菌株或诱导出的获得耐药菌株则繁衍成抗菌药物主要使用环境（如医院、诊所内）的优势菌株，使临床医学在感染控制上面临严重的挑战。

了解耐药发生机制和耐药性监测，熟悉常见耐药菌株的耐药特点，是临床医学生的一个重要任务。

一、耐药性及其发生机制（一）耐药病原体目前临床感染的病原微生物以革兰阴性菌居多（约占六成），主要是铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、克雷伯菌和肠杆菌属细菌等，主要耐药类型有以β一内酰胺酶介导的耐β一内酰胺类抗生素的革兰阴性杆菌；质粒介导的产超广谱β一内酰胺酶（extra-spectrum beta lactamase，ESBL）的肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌等；染色体编码产生Ⅰ类β一内酰胺酶的阴沟肠杆菌和产气肠杆菌等；另外多重耐药的铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌和不动杆菌属细菌等都已成为临床上感染性疾病治疗的棘手问题。

革兰阳性菌引起的感染约占三成，以葡萄球菌（金黄色葡萄球菌和血浆凝固酶阴性的葡萄球菌）和肠球菌为主，重要的耐药菌株有耐甲氧西林葡萄球菌（methecillin resistant staphyloccus，MRS）、耐青霉素肺炎链球菌（penicillin resistant streptococcus pneumonia，PRSP）、耐万古霉素肠球菌（vacomycin resistant enterococcus，VRE）和高耐氨基糖苷类抗生素的肠球菌等。

不仅细菌可产生耐药，病毒也出现了耐药病毒株，导致抗病毒治疗逃逸现象发生。

如HBV发生突变，对核苷类似物药物（如lamivudine拉米夫定和famciclovir华美可维等）产生耐药。

细菌耐药性检测方法 Prepared on 22 November 2020细菌耐药性检测方法1、细菌耐药表型检测：判断细菌对抗菌药物的耐药性可根据NCCLS标准，通过测量纸片扩散法、肉汤稀释法和E试验的抑菌圈直径、MIC值和IC值获得。

也可通过以下方法进行检测：（1）耐药筛选试验：以单一药物的单一浓度检测细菌的耐药性被称为耐药筛选试验，临床上常用于筛选耐甲氧西林葡萄球菌、万古霉素中介的葡萄球菌、耐万古霉素肠球菌及氨基糖苷类高水平耐药的肠球菌等。

（2）折点敏感试验：仅用特定的抗菌药物浓度（敏感、中介或耐药折点MIC），而不使用测定MIC时所用的系列对倍稀释抗生素浓度测试细菌对抗菌药物的敏感性，称为折点敏感试验。

（3）双纸片协同试验：双纸片协同试验是主要用于筛选产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）革兰阴性杆菌的纸片琼脂扩散试验。

若指示药敏纸片在朝向阿莫西林/克拉维酸方向有抑菌圈扩大现象（协同），说明测试菌产生超广谱β-内酰胺酶（4）药敏试验的仪器化和自动化：全自动细菌鉴定及药敏分析仪如：Vitek-2、BD-Pheonix、Microscan等运用折点敏感试验的原理可半定量测定抗菌药物的MIC值。

2．β-内酰胺酶检测：主要有碘淀粉测定法（iodometric test）和头孢硝噻吩纸片法（nitrocefin test）。

临床常用头孢硝噻吩纸片法，β-内酰胺酶试验可快速检测流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、卡他莫拉菌和肠球菌对青霉素的耐药性。

如β-内酰胺酶阳性，表示上述细菌对青霉素、氨苄西林、阿莫西林耐药；表示葡萄球菌和肠球菌对青霉素（包括氨基、羧基和脲基青霉素）耐药。

3．耐药基因检测：临床可检测的耐药基因主要有：葡萄球菌与甲氧西林耐药有关的MecA基因,大肠埃希菌与β-内酰胺类耐药有关的blaTEM、blaSHV、blaOXA基因，肠球菌与万古霉素耐药有关的vanA、vanB、vanC、vanD基因。

检测抗菌药物耐药基因的方法主要有：PCR扩增、PCR-RFLP分析、PCR-SSCP 分析、PCR-线性探针分析、生物芯片技术、自动DNA 测序4．特殊耐药菌检测（1）耐甲氧西林葡萄球菌检测：对 1цg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤10㎜，或其MIC≥4цg/ml 的金黄色葡萄球菌和对1цg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤17㎜，或MIC≥цg/ml的凝固酶阴性葡萄球菌被称为耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）。

cas耐药基因检测参考标准
CAS耐药基因检测参考标准主要是用于指导临床实验室进行细菌耐药性的检测。

这些标准通常包括以下几个方面：
1. 检测方法：包括PCR（聚合酶链反应）、DNA测序、基因芯片等方法。

2. 检测目标：通常包括一些常见的耐药基因，如广谱β-内酰胺酶基因（如ESBLs）、氟喹诺酮耐药基因（如qnr）、氨基糖苷耐药基因（如aac（6')-Ib-cr）等。

3. 检测结果的判断：根据基因的序列变异、表达水平等来判断细菌是否对特定的抗生素产生耐药。

4. 参考范围：设定阳性判断的阈值，如CLSI（国际临床实验室标准委员会）推荐的PCR阳性判断阈值为1拷贝/反应。

5. 质量控制：包括样本的收集和处理、试剂的选用、实验的操作流程等。

这些参考标准是由国际和国内的权威机构制定的，旨在保证耐药基因检测的准确性和可靠性。

细菌耐药性检测方法传统检测方法主要包括药敏试验和漏斗法。

药敏试验通过将不同的抗生素与待检细菌进行共培养，观察细菌的生长情况，可以确定细菌对不同抗生素的敏感性。

漏斗法又称为浓度梯度法，将一系列不同浓度的抗生素加入含有细菌的琼脂平板培养基中，观察细菌生长的情况，通过最小抑菌浓度（MIC）来确定细菌的耐药性。

然而，传统的检测方法有一些不足之处，包括需要较长的检测时间、操作复杂、耗时耗力、存在人为误差等。

因此，近年来，分子检测方法逐渐应用于细菌耐药性的检测。

分子检测方法主要包括PCR技术、基因芯片技术和下一代测序技术。

PCR技术（聚合酶链式反应）是一种快速、高效、敏感的检测技术，通过扩增特定基因片段来判定细菌的耐药性。

该技术可以快速检测出是否存在耐药基因，并可通过测序等方法进一步确定具体基因型。

基因芯片技术则可以同时检测多个耐药相关基因，具有高通量、快速、精确度高的优点。

而下一代测序技术则可以对细菌的基因组进行全面分析，包括基因序列、变异信息等，对于耐药性的研究提供了更多的信息。

传统检测方法和分子检测方法在细菌耐药性检测中都具有一定的适用性，可以根据具体的实验要求和资源情况选择合适的方法。

对于临床应用而言，传统检测方法的优势在于成熟、经济、稳定，但无法提供细菌的详细基因型信息；而分子检测方法则具有高通量、高灵敏度、高特异性的优势，但需要较复杂的实验设备和操作技术。

细菌耐药性的检测方法在临床、食品安全、环境监测等领域具有重要的应用价值。

通过检测细菌的耐药性，可以指导临床合理使用抗生素，减少抗生素滥用，避免耐药细菌的产生和传播；在食品安全领域，可以掌握食品中耐药细菌的情况，保障食品的质量安全；在环境监测领域，可以及时发现环境中的耐药菌，为环境卫生管理提供参考依据。

综上所述，细菌耐药性的检测方法既有传统的药敏试验和漏斗法，也有分子检测的PCR技术、基因芯片技术和下一代测序技术。

各种方法各有优缺点，可以根据具体实验需求和资源条件选择合适的方法。

病原微生物耐药性实验报告一、实验目的本实验旨在探究病原微生物的耐药性，并分析耐药性产生的原因，为临床合理使用抗生素提供参考。

二、实验设备与试剂1. 试验设备：培养皿、显微镜、离心机、恒温培养箱、移液管等。

2. 试剂：复方盐酸红（MRSA筛选培养基）、亚洲疟原虫PLDH试剂、乙酸丹试剂、DNA提取试剂盒等。

三、实验步骤1. 样本采集：采集来自患者的分泌物、血液或尿液样本，并遵循严格的无菌操作。

2. 细菌培养：将样本接种于MRSA筛选培养基上，并在恒温培养箱中培养18-24小时。

3. 菌落观察：观察菌落的生长情况，记录菌落形态和特征。

4. 选择敏感菌株：挑选感染性较强的菌落，进行继续培养。

5. 耐药性测试：将挑选的菌株分别接种于含有不同抗生素的琼脂平板上，观察菌落的生长情况和抗生素对于菌株的抑制效果。

6. 细菌形态观察：将不同菌株进行染色，并使用显微镜观察菌株形态特征，如大小、形状等。

7. 耐药基因检测：使用DNA提取试剂盒提取菌株的基因样本，并进行耐药性基因的PCR扩增与检测。

8. 耐药性机制分析：对不同菌株中检测到的耐药性基因进行比对，分析耐药性产生的机制。

四、实验结果与分析1. 菌落观察：观察到样本中产生的菌落数量较多，其中挑选出了数个不同形态的菌株。

2. 耐药性测试：结果显示，部分菌株对某些抗生素表现出耐药性，而对其他抗生素则较敏感。

3. 细菌形态观察：通过染色和显微镜观察，发现不同菌株的形态特征存在差异，有的为球状，有的呈链状等。

4. 耐药基因检测：在PCR扩增与检测中，发现某些菌株中存在耐药性基因，如β-lactamase基因等。

5. 耐药性机制分析：通过对不同菌株的耐药性基因比对，发现耐药性基因的差异可能导致不同耐药性的产生。

五、实验结论1. 实验结果表明，病原微生物样本中存在一定比例的耐药菌株。

2. 耐药性的形成可能与菌株自身基因变异、外源性耐药基因的获取等多种因素有关。

3. 进一步研究病原微生物的耐药性机制对于改善临床抗生素治疗的有效性具有重要意义。

检验科细菌耐药性监测SOP文件一、耐甲氧西林葡萄球菌（Methicillin-Resistant Staphylococci,MRS）MRS是引起临床感染的常见病原菌，同时也是引起医院感染的重要病原菌之一，其耐药特点是耐受甲氧西林的同时，还对临床广泛应用的多种抗生素呈现多重耐药，因而该菌所致感染已成为临床治疗的一大难题。

（一）MRS测定方法1、纸片扩散法接种物：直接悬液法从非选择琼脂平皿上挑取少许单个菌落至无菌生理盐水调至浓度0.5 McFarland,具体操作同常规纸片法药敏试验。

苯唑西林纸片，1R g/片，检测MRS平板应置于35℃ （而不是37℃）孵育24h （而不是16〜18h）。

结果判断：金黄色葡萄球菌：S：三13mm；I：11〜12mm；R:W10mm。

凝固酶阴性葡萄球菌：S：三18mm；R W17mm。

对于苯唑西林纸片周围的抑菌圈内有任何小菌落或稀薄“菌膜”生长都应列为MRS。

2、琼脂筛选法：如果纸片试验结果中介时，可做琼脂筛选法，培养基为MH琼脂+6R g/ml苯唑西林+4%NaCl,调整菌液浓度0.5McFarland,于35℃孵育24h,凡有任何生长即使一个菌落均报MRS。

（二）MRS监测意义对于MRS,应报告对所有头抱菌素类和其他B -内酰胺酶类耐药，喹喏酮类药物，除氟哌酸外，环丙氟哌酸，氟嗪酸有较好抗菌活性（耐药率10〜23%之间），利福平敏感率在90%以上，未见耐万古霉素菌株，但已有万古霉素中介金黄色葡萄球菌。

二、高水平耐药的肠球菌（HLAR）及耐万古霉素的肠球菌（VRE）（一）药敏测定方法1、常规测定方法：采用K-B纸片扩散法，头抱菌素不用做（均为耐药），氨苄，庆大霉素，替考拉宁，万古霉素一定要做。

2、高水平氨基糖甙类耐药性测定：⑴高含量纸片扩散法：通常测定庆大霉素和链霉素的高度耐药性，具体操作如常规纸片法药敏试验。

药敏纸片：庆大霉素：120R g/片；链霉素300p g/片结果判断：R：W6mm；I：7~9mm；S：三10mm⑵含单一高浓度抗生素琼脂平皿法：稀释法：庆大霉素：R：三500R g/ml；链霉素：R：2000p g/ml3、万古霉素耐药性测定：纸片扩散法，具体操作如常规纸片法药敏试验，万古霉素纸片为：30p g/片，检测平皿置35℃24h （而不是16〜18h）,并注意抑菌圈内有无小菌落或薄膜生长。

临床微生物学检测与耐药性监测临床微生物学检测与耐药性监测在现代医学中发挥着重要的作用。

微生物学检测可以迅速准确地确定患者体内的病原微生物类型，帮助医生制定相应的治疗方案。

同时，耐药性监测能够提供关于微生物对抗生素的敏感性信息，为临床选择最合适的抗生素药物提供指导。

本文将重点探讨临床微生物学检测与耐药性监测的意义、方法和应用。

一、临床微生物学检测的意义临床微生物学检测的主要目的是为了确定病原微生物的存在与数量。

这一步骤对于感染性疾病的治疗至关重要。

通过检测，可以确定感染的病原体种类，从而选择出对应的抗生素，提高治疗的准确性和有效性。

临床微生物学检测可以通过多种方法实现，例如细菌培养、快速培养方法、分子生物学检测等。

细菌培养是一种传统的方法，通过将患者样本在培养基上培养，使细菌增殖并形成可见的菌落。

快速培养方法则是通过利用特殊培养基或荧光染色，来加速菌落的形成并缩短检测时间。

分子生物学检测则可以通过检测微生物的DNA或RNA来确定种类和数量。

二、耐药性监测的意义抗微生物药物的广泛应用导致了微生物耐药性的产生和传播。

耐药性监测能够为临床提供宝贵的信息，帮助医生选择最合适的抗生素来治疗感染。

耐药性监测的方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光染色法、纸片扩散法等。

其中，纸片扩散法是一种常用且简便的方法。

通过将不同抗生素覆盖在纸片上，然后将纸片放置在培养的细菌表面，观察形成的抑菌圈直径来判断细菌对抗生素的敏感性。

耐药性监测的结果可以提供给医生关于抗生素使用的建议，以避免不必要的耐药性发展和修订治疗方案。

此外，耐药性监测还可以为公共卫生部门提供数据，帮助制定政策和策略以控制和预防抗药性的蔓延。

三、临床微生物学检测与耐药性监测的应用临床微生物学检测与耐药性监测的应用范围广泛。

在临床实践中，这两项技术可用于以下领域：1. 感染性疾病的诊断：临床微生物学检测可以帮助医生确定感染性疾病的病原体，并及时采取相应的治疗措施。

医院细菌耐药监测与预警制度随着医疗技术的不断发展，抗生素在治疗感染性疾病中发挥了巨大的作用。

然而，近年来，细菌耐药问题日益严重，已成为全球公共卫生领域面临的重大挑战。

为了有效应对细菌耐药问题，保障患者用药安全，提高医疗质量，医院应建立健全细菌耐药监测与预警制度。

一、细菌耐药监测的目的和意义细菌耐药监测是指对临床分离的细菌进行耐药性检测，了解细菌耐药现状、趋势及变迁规律，为临床合理使用抗生素提供科学依据。

细菌耐药监测具有重要意义：1. 促进抗生素的合理使用，降低耐药菌株的产生。

2. 提高临床治疗效果，降低患者治疗费用。

3. 预防感染传播，保障公共卫生安全。

4. 为国家细菌耐药管理政策制定提供数据支持。

二、细菌耐药监测与预警制度的主要内容1. 组织架构成立细菌耐药监测与预警组织，由医院领导、临床科室、微生物室等相关人员组成。

明确各成员职责，确保监测工作的顺利进行。

2. 监测范围与对象监测范围包括全院各临床科室，监测对象为临床分离的各类细菌。

3. 监测方法与流程（1）临床微生物室负责收集各科室送检的细菌标本，并进行细菌分离、鉴定。

（2）对分离出的细菌进行耐药性检测，包括纸片扩散法、微量稀释法等。

（3）将耐药性检测结果进行统计分析，定期发布细菌耐药监测报告。

4. 预警机制（1）设立细菌耐药预警指标，如耐药率、多重耐药率等。

（2）当细菌耐药率超过预警指标时，及时向临床科室发出预警通知。

（3）临床科室根据预警信息，调整抗生素使用策略，减少耐药菌株的产生。

5. 培训与宣传（1）组织细菌耐药监测相关培训，提高医务人员对细菌耐药的认识。

（2）开展细菌耐药宣传活动，提高患者及公众的抗菌意识。

6. 质量控制（1）建立细菌耐药监测质量控制体系，确保监测数据的准确性。

（2）定期对微生物室进行质控检查，确保实验方法、设备、试剂等符合要求。

三、细菌耐药监测与预警制度的实施与评价1. 制定详细的实施计划，明确监测周期、报告时间等。

耐药的评估标准
耐药性的评估标准主要有以下两个方面：
1. 临床评估：如果病人在使用药物一周或以上后，体温仍未下降、异常症状无改善，如咳嗽、咳痰、腹泻等，这可能表明出现了耐药性。

对于慢性病毒，如乙肝病毒或艾滋病病毒等，在使用抗病毒药物如拉米夫定胶囊等治疗3-6个月后，如果病毒复制未见减少反而增高，则可能出现了耐药性。

2. 实验室评估：病原体培养加药敏检查是评估耐药性的重要手段。

对于细菌感染者，在按照疗程用药后症状仍无改善，需要考虑重新做病原体培养和药敏检查。

根据药敏结果可观察出机体对该药物的敏感性和耐药情况。

同时，根据WHO制定的标准，主要统计、评价指标如下：
1. H、R、Z、E、S、O任何一药的初始耐药率、获得性耐药率、总耐药率。

2. 耐多药的初始耐药率、获得性耐药率、总耐药率。

3. 其它抗结核药不同组合（三药、四药)的初始耐药率、获得性耐药率、总
耐药率。

并对不同年龄、性别初治病人的耐药率进行分析。

以上内容仅供参考，建议查阅专业书籍或咨询专业医师获取更全面和准确的信息。