卵巢癌组织中miR—26a的表达及其临床意义

血浆miR-20a和let-7a在卵巢癌中的表达及其临床意义孟伟伟，贺付成，吕品，曲蕴慧( 450052 郑州，郑州大学第一附属医院检验科)[摘要] 目的检测microRNA-20a(miR-20a)和let-7a在卵巢癌患者血浆中的表达，探讨其临床意义。

方法选取卵巢癌患者50例为实验组，另选择同期与其年龄性别相匹配的健康体检者20例为健康对照组，采用实时定量荧光定量酶链反应（qRT-PCR）检测血浆miR-20a和let-7a表达水平，同时采用电化学发光法测定其血浆中糖类抗原125（CA125）的含量并进行统计分析。

结果卵巢癌患者血浆中miR-20a和let-7a的相对表达量分别为4.02±3.77和0.42±0.34，卵巢癌患者血浆中miR-20a和CA125的表达均高于对照组（P<0.05），let-7a表达低于对照组（P<0.05）。

临床病理分期I/Ⅱ期和Ⅲ/Ⅳ期卵巢癌患者血浆let-7a相对表达量的中位数分别为0.39和0.21，差异有均统计学意义（P<0.05），而血浆miR-20a的表达与临床病理分期无关，miR-20a和let-7a的相对表达量与年龄、淋巴结转移和组织学分类均无关,P>0.05。

miR-20a、let-7a和CA125的ROC曲线下面积为0.898（95%CI：0.802～0.957），0.876（95%CI：0.775～0.942），0.819（95%CI：0.708～0.900）。

结论卵巢癌患者血浆中miR-20a和let-7a均表达异常，提示能够成为辅助卵巢癌诊断的标志物。

[关键词]卵巢癌；miR-20a；let-7a；CA125；血浆[中图法分类号] R 737.3 [文献标志码] A卵巢癌占女性肿瘤死亡率的第四位，全世界每年发病的大约200，000例中有125,000 死于卵巢癌，由于70%患者就诊时已属晚期,常形成难治的复发及转移,而缺少早期诊断方法是其主要原因[1]。

妊娠期肝内胆汁淤积症患者中miR-26a的表达及临床意义发表时间：2016-04-29T17:08:13.600Z 来源：《心理医生》2015年13期供稿作者：谢晶谢黎明王淑芬蒋丰童文娟[导读] 南华大学附属第一医院妇产科湖南衡阳 421001）目前病因尚不清楚，妊娠期肝内胆汁淤积症可能与女性激素、遗传及环境等因素发挥重要作用有关[1]。

谢晶谢黎明王淑芬蒋丰童文娟（南华大学附属第一医院妇产科湖南衡阳 421001）【摘要】目的：研究miR-26a在妊娠期肝内胆汁淤积症患者中的表达及其在妊娠期肝内胆汁淤积症中的作用。

方法：收集妊娠期肝内胆汁淤积症51例患者外周血及同期正常妊娠妇女51例外周血RNA，qRT-PCR检测表达。

结果：miR-26a在妊娠期肝内胆汁淤积症患者中明显高于正常妊娠妇女。

血清miR-26a水平与围产儿预后相关，但是与患者的年龄、经产、孕周与否没有关系，但是。

结论：血清miR-26a在妊娠期肝内胆汁淤积症的诊断和围产儿预后预测中有一定的作用和意义。

【关键词】妊娠；miR-26a；临床意义【中图分类号】R714.25 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2015）13-0098-02 妊娠期肝内胆汁淤积症是妊娠中、晚期的肝脏疾病，一般产后预后较好。

发病最初以皮肤瘙痒，有时出现血胆汁酸、胆红素、肝酶升高为临床特点。

目前病因尚不清楚，妊娠期肝内胆汁淤积症可能与女性激素、遗传及环境等因素发挥重要作用有关[1]。

最早人们在线虫中发现了lin-4 and let-7这两个miRNA后，紧接着又有许多miRNA被研究者成功的发现。

在人类各种疾病中，miRNA表达谱能根据其特定的疾病特性从而能对不同的疾病进行分型。

miRNA这种独特的分类特性同时与多种疾病的预后也有明显关系，其包括对疾病治疗后效果、是否复发及对总体生存率的影响。

miR-26a位于人类第3号染色体上，全长有21个核苷酸组成，且在多种组织中能广泛表达。

692《癌症进展》2011年11月第9卷第6期ONCOLOGY PROGRESS，Nov2011，Vol.9，No.6*综述＊microRNA对肝癌诊断和治疗的潜在意义刘明洋综述关健审校中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院病理科，北京100730关键词：microRNA肝细胞性肝癌分子标志物基因治疗中图分类号：R735.7文献标识码：A肝细胞性肝癌是预后较差的恶性肿瘤之一，由于病人被发现时多已是中晚期，并且缺乏有效的治疗手段，因此死亡率较高。

微小RNA（microRNA，miRNA）是一族长度为19 22nt的非编码RNA，在正常细胞中调控细胞增殖发育、分化和凋亡等，与肿瘤的发生发展相关。

本文就miRNA与肝癌的关系，以及对肝癌分子诊治的潜在价值进行综述。

1肝癌肝细胞性肝癌（肝癌）是全球发病率居第五位的恶性肿瘤。

原发性肝癌中有80% 90%是肝细胞性肝癌（以下简称肝癌），其他为胆管细胞性肝癌和混合性肝癌等［1］。

肝癌侵袭力强、死亡率高［2］。

早期肝癌治疗的有效手段为手术切除、肝移植，但术后5年生存率仅为70%。

进展期肝癌治疗手段更为有限，由于已发生血行转移，多数患者丧失手术机会，而化疗作用收效不大且有药物毒性［3］，因此早期诊断是肝癌有效治疗的关键。

寻找肝癌有效的早期诊断标志尤为重要。

肝癌多由于乙型、丙型肝炎病毒感染至肝硬化，最终发展为肝癌，其他病因有酒精性肝炎、自身免疫性肝炎等［4］。

肝癌的发生伴随着基因的改变，包括p53、C－myc、CyclinD1、Wnt－β－catenin及多种激酶生长因子受体的表达异常。

近年来研究发现，微小RNA与肿瘤的发生有关，为肝癌的诊断和治疗提供新的研究方向。

2miRNAmiRNA是长度为19 22nt的非编码RNA，不编码蛋白质，曾被认为是无功能的分子，近年来成为基因分子领域的研究热点。

发现其作用在靶基因mRNA3’UTR区，以干扰mRNA翻译的方式负向调控基因的表达［5］。

不同转移能力卵巢癌细胞系的microRNA和基因表
达谱研究的开题报告
一、研究背景和意义：
卵巢癌是女性生殖系统中最常见的一种恶性肿瘤，其高度侵袭性和
易于复发的特点给治疗带来了挑战。

近年来，越来越多的研究表明，microRNA（miRNA）和基因表达谱（gene expression profile）在卵巢癌的发生和转移中发挥着关键作用。

然而，虽然已有研究报道了不同转移
能力的卵巢癌细胞系的miRNA和基因表达谱存在明显差异，但整体上还
未形成系统性、综合性的证据，因此有必要对该领域进行深入系统研究。

二、研究内容和方法：
本研究将收集两种不同程度转移能力的卵巢癌细胞系，综合运用miRNA和基因表达谱的分析技术，分别对两种卵巢癌细胞系进行分析，
并将其与正常卵巢成纤维细胞的miRNA和基因表达谱进行比较，挖掘差
异表达的miRNA和基因。

同时，结合miRNA和基因表达的分析结果，探究其在卵巢癌发生、发展和转移中的生物学功能和相互关系。

三、研究意义：
本研究将为卵巢癌的研究提供重要参考。

首先，该研究将揭示miRNA和基因表达谱在卵巢癌的发生、发展和转移中的调控机制和作用，为研究卵巢癌的病因学提供重要证据。

其次，本研究的结果将为发现新
的治疗目标和治疗策略提供一定的理论依据。

最后，本研究的整体研究
设计和研究方法对miRNA和基因表达谱在其他癌症中的应用也具有一定
的参考和借鉴作用。

mir-100在上皮性卵巢癌患者组织中的表达及临床意
义的探讨的开题报告
1. 研究背景：上皮性卵巢癌是最常见的卵巢恶性肿瘤之一，其发病
率和死亡率均居女性恶性肿瘤之首。

miRNA（microRNA）是一类重要的
非编码RNA，已被证实在癌症的发生和发展中发挥关键作用。

其中，mir-100被认为是具有抑制肿瘤作用的miRNA，在多种癌症中已有研究报道。

然而，关于mir-100在上皮性卵巢癌患者中是否具有潜在的临床意义仍缺乏深入研究。

2. 研究目的：探究mir-100在上皮性卵巢癌患者组织中的表达及其
与临床病理特征的关系，为进一步研究上皮性卵巢癌的病理生理机制提
供新思路和方法。

3. 研究方法：采集上皮性卵巢癌患者组织样本和对照组正常卵巢组
织样本，通过实时定量PCR技术检测mir-100的表达水平，并与患者的
临床资料（如年龄、病理分期、淋巴结转移等）进行比较分析。

同时，
建立上皮性卵巢癌细胞株，通过过表达或靶向抑制方法进一步探究mir-100对癌细胞增殖、转移和凋亡的影响。

4. 研究意义：mir-100可能成为上皮性卵巢癌的新的分子标志物和
治疗靶点，有望提高上皮性卵巢癌的诊断和治疗水平，为患者的生命质
量和生存期提供保障。

８６９１ 国际检验医学杂志２０１８年８月第３９卷第１６期㊀I n t J L a bM e d,A u g u s t２０１８,V o l．３９,N o．１６论著 临床研究非小细胞肺癌患者血浆中m i RＧ２６b的表达及其临床意义∗吴唐维,胡㊀绘,李晓怡,刘水逸,张天竺,陈卫群,卢忠心ә(华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院检验科,湖北武汉４３００１４)㊀㊀摘㊀要:目的㊀探讨微小R N AＧ２６b(m i RＧ２６b)在非小细胞肺癌(N S C L C)患者血浆中的表达水平及其在肺癌辅助诊断及疗效监测中的作用.方法㊀收集８０例N S C L C患者(肺癌组,其中腺癌４８例㊁鳞癌３２例,临床分期Ⅰ/Ⅱ期㊁Ⅲ期和Ⅳ期分别有３０㊁２４㊁２６例)及４５例健康人(对照组)的血浆,应用实时荧光定量P C R(F QＧP C R)检测m i RＧ２６b水平.８０例肺癌患者中有５０例收集到配对的治疗前后血浆,通过F QＧP C R检测上述５０例肺癌患者治疗前后血浆中的m i RＧ２６b水平.结果㊀对照组血浆m i RＧ２６b相对表达量为３３．０３ʃ１９．６,肺癌组为１１．５７ʃ９．４１,肺癌组血浆m i RＧ２６b显著低于对照组(t＝６．９０８,P＜０．０１).肺腺癌和肺鳞癌患者血浆m i RＧ２６b 水平分别为１１．３２ʃ８．５６㊁１２．０３ʃ９．９２,均低于对照组(t＝６．８４１㊁６．１６２,P＜０．０１);肺腺癌和肺鳞癌患者之间血浆m i RＧ２６b水平无显著差异(P＞０．０５).肺癌组中,Ⅰ/Ⅱ期㊁Ⅲ期和Ⅳ期患者血浆m i RＧ２６b相对表达量分别为１５．２６ʃ１１．１７㊁９．４７ʃ７．０４㊁９．３７ʃ６．６６,Ⅰ/Ⅱ期㊁Ⅲ期和Ⅳ期血浆m i RＧ２６b水平均低于对照组(t值分别为４．９８７㊁７．２３５㊁７．３９４,P＜０．０１);Ⅲ期和Ⅳ期患者血浆m i RＧ２６b水平低于Ⅰ/Ⅱ期患者(t值分别为２．３２㊁２．４３,P＜０．０５);Ⅲ期与Ⅳ期患者之间血浆m i RＧ２６b水平无显著差异(P＞０．０５).５０例肺癌患者治疗前后血浆m i RＧ２６b相对表达量分别为１０．６８ʃ８．１８㊁１８．６９ʃ１０．７１,治疗后血浆m i RＧ２６b水平较治疗前显著升高(t＝－４．８５５,P＜０．０１).结论㊀m i RＧ２６b在肺癌患者血浆中明显降低,并且血浆m i RＧ２６b水平与肺癌分期密切相关,血浆m i RＧ２６b在治疗后显著升高,血浆m i RＧ２６b水平有可能作为肺癌辅助诊断及疗效监测的新指标.关键词:非小细胞肺癌;㊀m i RＧ２６b;㊀诊断;㊀疗效监测D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１６７３Ｇ４１３０．２０１８．１６．００９中图法分类号:R７３４．２文章编号:１６７３Ｇ４１３０(２０１８)１６Ｇ１９６８Ｇ０４文献标识码:AT h e e x p r e s s i o na n d c l i n i c a l s i g n i f i c a n c e o f c i r c u l a t i n g m i RＧ２６b i n p a t i e n t sw i t hn o n s m a l l c e l l l u n g c a n c e r∗WU T a n g w e i,HU H u i,L IX i a o y i,L I US h u i y i,Z HA N GT i a n z h u,C H E N W e i q u n,L UZ h o n g x i nә(D e p a r t m e n t o f C l i n i c a lL a b o r a t o r y,C e n t r a lH o s p i t a l o f W u h a nA f f i l i a t e d t oT o n g j iM e d i c a lC o l l e g e o f H u a z h o n g U n i v e r s i t y o f S c i e n c e a n dT e c h n o l o g y,W u h a n,H u b e i４３００１４,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e㊀T o i n v e s t i g a t e c i r c u l a t i n g m i RＧ２６b l e v e l i nh u m a ns e r u mf o ru s e a s ab i o m a r k e r f o r s t r a t i f i c a t i o na n dm o n i t o r i n g e f f i c a c y i nN S C L C．M e t h o d s㊀T h e p l a s m a f r o m８０c a s e so fn o ns m a l l c e l l l u n g c a n c e r(N S C L C)(l u n g c a n c e r g r o u p),i n c l u d i n g４８c a s e s o f a d e n o c a r c i n o m a,３２c a s e s o f s q u a m o u s c e l l c a r c i n oＧm a,３０c a s e s i ns t a g eⅠ/Ⅱ,２４c a s e s i ns t a g eⅢa n d２６c a s e s i ns t a g eⅣ,a n d４５h e a l t h yp e o p l e(c o n t r o l g r o u p)w e r e c o l l e c t e d．Q u a n t i t a t i v eR TＧP C Rw a s p e r f o r m e d t o e v a l u a t e t h e e x p r e s s i o n o f c i r c u l a t i n g m i RＧ２６b．５０o f８０p a t i e n t sw i t h l u n g c a n c e r h a dm a t c h e d p l a s m a s a m p l e s b e f o r e a n d a f t e r t r e a t m e n t．T h e p l a s m a l e v e l s o fm i c r o a r r a yＧ２６bw e r e d e t e c t e db y F QＧP C R．R e s u l t s㊀T h e r e l a t i v e e x p r e s s i o n o fm i RＧ２６b i n t h e c o n t r o l g r o u p w a s３３．０３ʃ１９．６,w h i l e t h a t i n l u n g c a n c e r g r o u p w a s１１．５７ʃ９．４１,a n d t h e p l a s m am i RＧ２６b i n l u n g c a n c e r g r o u p w a s s i g n i f i c a n t l y l o w e r t h a n t h a t i n t h e c o n t r o l g r o u p(t＝６．９０８,P＜０．０１)．T h e l e v e l so f p l a s m am i RＧ２６b i n t h e a d e n o c a r c i n o m a g r o u p a n d t h e s q u a m o u s c e l l c a r c i n o m a g r o u p w e r e１１．３２ʃ８．５６a n d１２．０３ʃ９．９２, w h i c hw e r e l o w e r t h a n t h o s e i n t h e c o n t r o l g r o u p(t＝６．８４１,６．１６２,P＜０．０１),a n d t h e r ew a s n o s t a t i s t i c a l s i gＧn i f i c a n c e i n t h e l e v e l s o f p l a s m am i RＧ２６b i n t h e a d e n o c a r c i n o m a g r o u p a n d t h e s q u a m o u s c e l l c a r c i n o m a g r o u p (P＞０．０５)．T h er e l a t i v ee x p r e s s i o n so f c i r c u l a t i n g m i RＧ２６bl e v e l i ns t a g eⅠ/Ⅱ(１５．２６ʃ１１．１７),s t a g eⅢ(９．４７ʃ７．０４)a n d s t a g eⅣ(９．３７ʃ６．６６)w e r e l o w e r t h a n t h a t i n t h e c o n t r o l g r o u p(t＝４．９８７,７．２３５,７．３９４,∗基金项目:湖北省自然科学基金重点项目(２０１５C F A０７８);武汉市黄鹤英才计划;武汉市卫生计生委资助项目(WX１１A０３,WX１４B１０, WX１５A１２);武汉市中心医院院内青年基金项目(Y Q１４A０１,Y Q１５A０３).㊀㊀作者简介:吴唐维,女,主管技师,主要从事肿瘤发生㊁发展的分子机制研究.㊀ә㊀通信作者,EＧm a i l:l z x７１＠y a h o o．c o m.㊀㊀本文引用格式:吴唐维,胡绘,李晓怡,等．非小细胞肺癌患者血浆中m i RＧ２６b的表达及其临床意义[J]．国际检验医学杂志,２０１８,３９(１６):１９６８Ｇ１９７１．P＜０．０１)．T h e c i r c u l a t i n g m i RＧ２６b l e v e l s i ns t a g eⅢa n ds t a g e I V w e r e l o w e r t h a n t h a t i ns t a g eⅠ/Ⅱ(t＝２．３２,２．４３,P＜０．０５),a n d t h e t h e r ew a s n o s t a t i s t i c a l s i g n i f i c a n c e i n t h e l e v e l s o f p l a s m am i RＧ２６bb e t w e e n t h e p a t i e n t s i n s t a g eⅢa n d s t a g eⅣ(P＞０．０５)．F u r t h e r m o r e,t h e e x p r e s s i o n l e v e l o fm i RＧ２６b i n t h e p o s tＧo p e r aＧt i v e p l a s m a o f５０l u n g c a n c e r p a t i e n t s(１８．６９ʃ１０．７１)w a s s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e dw h e n c o m p a r e d t o t h e i r p r eＧo p e r a t i v e p l a s m a(１０．６８ʃ８．１８)(t＝－４．８５５,P＜０．０１)．C o n c l u s i o n㊀T h e c i r c u l a t i n g m i RＧ２６b l e v e lw a s s i gＧn i f i c a n t l y r e d u c e d i nN S C L C p a t i e n t s a n d c l o s e l y r e l a t e d t o t h e l u n g c a n c e r s t a g e s,t h em i RＧ２６b l e v e l s h o w e d a m a r k e d l y i n c r e a s e a f t e r t r e a t m e n t．P l a s m am i RＧ２６b l e v e lm a y b e u s e d a s an e wi n d i c a t o r f o r t h e d i a g n o s i s a n d m o n i t o r i n g o f l u n g c a n c e r．K e y w o r d s:n o n s m a l l c e l l l u n g c a n c e r;㊀m i RＧ２６b;㊀d i a g n o s i s;㊀t h e r a p e u t i c e f f i c a c y m o n i t o r i n g㊀㊀肺癌是当前世界对人类健康和生命威胁最严重的肿瘤之一.美国癌症学会最新发布的数据显示,肺癌已经成为恶性肿瘤死亡原因的首位,肺癌的五年生存率也只有不到１０％[１].肺癌中,８０％以上为非小细胞肺癌(N S C L C).目前我国肺癌的发病率以每年２６．９％的速度增长,肺癌病死率在过去３０年间上升了４６５％,成为致死率最高的恶性肿瘤.缺乏有效的早期诊断和治疗手段是造成肺癌病死率高的两大主要原因[２].因此,寻找良好的标志物,为肺癌的早发现早治疗争取时间已成为迫切需要.微小R N A(m i R N A)是近年来发现的一类长度约２２个核苷酸的非编码小分子R N A,其通过降解靶m R N A或抑制其翻译来调节靶基因的表达,广泛参与到肿瘤的发生㊁发展中[３Ｇ５].课题组前期研究发现,在肺癌细胞系中m i RＧ２６b的表达明显降低,槐尔清膏能提高肺癌细胞系中m i RＧ２６b的表达量,m i RＧ２６b通过靶向作用于Z e s t e基因增强子同源物２(E Z H２)参与到槐尔清膏的抗肿瘤作用中,m i RＧ２６b所介导的槐尔清膏抗肿瘤机制,为研究人员提供了新的中药抗肿瘤作用的研究思路,同时更为以m i RＧ２６b为靶点的肺癌的生物治疗提供了新的线索[６].因此,进一步挖掘m i RＧ２６b在肺癌发生㊁发展中的具体作用机制及N S C L C患者血浆中m i RＧ２６b与肺癌的临床关系具有深刻意义.本文在前期研究的基础上,收集肺癌患者血浆标本,并通过实时荧光定量P C R(F QＧP C R)检测循环m i RＧ２６b的相对表达量,探讨m i RＧ２６b水平在肺癌诊断及疗效监测中的潜在价值,以期从m i R N A水平为肺癌的早期诊断㊁预后判断及靶向基因治疗提供新的理论和实验依据.１㊀资料与方法１．１㊀一般资料㊀自２０１３年６月至２０１４年９月,从华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院收集临床确诊的㊁尚未进行任何治疗的８０例N S C L C患者的血浆标本(肺癌组),包括４８例腺癌和３２例鳞癌,其中Ⅰ/Ⅱ期患者３０例,Ⅲ期２４例,Ⅳ期２６例.同时收集４５例健康人的血浆标本作为对照组.８０例肺癌患者中,收集到５０例配对的治疗前后血浆标本.所有标本经１０００ˑg,４ħ离心１５m i n后,分离血浆,置－８０ħ冻存.本研究经院伦理委员会批准,所有研究对象均签署知情同意书.８０例N S C L C患者平均(５９．１８ʃ８．１)岁,其中男５５例,女２５例,４５例健康对照者平均(５６．２９ʃ７．７)岁,其中男３１例,女１４例,２组在年龄和性别组成上无显著差异(P＞０．０５).１．２㊀仪器与试剂㊀m i r V a n aP A R I S血浆m i R N A提取试剂盒购自A m b i o n公司,T a q M a nm i R N A分析试剂盒购自美国A B I公司,C F X９６实时荧光定量P C R 仪购自美国B i oＧR a d公司.１．３㊀方法㊀采用F QＧP C R检测m i RＧ２６b的表达,提取血浆R N A,用m i RＧ２６b检测试剂盒检测m i RＧ２６b 的表达水平.首先取１０n g总R N A与３μL逆转录酶混合,在１５μL反应体系中,１６ħ３０m i n,４２ħ３０m i n,８５ħ５m i n,进行逆转录;然后将逆转录产物c DＧN A进行１５０倍稀释,取２μL稀释的c D N A与２μL T a q M a n引物混合,在２０μL反应体系中,９５ħ１０m i n变性,随后９５ħ１５s,６０ħ６０s,４０个循环.采用外源性秀丽隐杆线虫c e lＧm i RＧ３９作为对照,m i RＧ２５相对表达量用２ＧΔΔC tˑ１０４来表示.１．４㊀统计学处理㊀采用S P S S１９．０软件进行统计学分析,所得计量资料用xʃs表示.以P＜０．０５为差异有统计学意义.２㊀结㊀㊀果２．１㊀对照组与肺癌组血浆m i RＧ２６b的表达㊀对照组血浆m i RＧ２６b相对表达量为３３．０３ʃ１９．６,肺癌组血浆m i RＧ２６b为１１．５７ʃ９．４１,肺癌组血浆m i RＧ２６b的表达显著低于对照组(t＝６．９０８,P＜０．０１),见图１A.４８例肺腺癌和３２例肺鳞癌患者血浆m i RＧ２６b的水平分别为１１．３２ʃ８．５６和１２．０３ʃ９．９２,均较对照组低(t＝６．８４１㊁６．１６２,P＜０．０１),肺腺癌和肺鳞癌患者之间血浆m i RＧ２６b水平无显著差异(P＞０．０５),见图１B.２．２㊀各期肺癌患者血浆m i RＧ２６b的表达㊀肺癌组中,Ⅰ/Ⅱ期㊁Ⅲ期和Ⅲ期患者血浆m i RＧ２６b相对表达量分别为１５．２６ʃ１１．１７㊁９．４７ʃ７．０４㊁９．３７ʃ６．６６,Ⅰ/Ⅱ期㊁Ⅲ期和Ⅳ期血浆m i RＧ２６b的表达均低于对照组(t值分别为４．９８７㊁７．２３５㊁７．３９４,P＜０．０１),Ⅲ期和Ⅳ期患者血浆m i RＧ２６b的表达低于Ⅰ/Ⅱ期患者(t值分别为２．３２㊁２．４３,P＜０．０５),Ⅲ期与Ⅳ期患者９６９１国际检验医学杂志２０１８年８月第３９卷第１６期㊀I n t J L a bM e d,A u g u s t２０１８,V o l．３９,N o．１６之间血浆m i R Ｇ２６b 水平无显著差异(P ＞０．０５),见图２.图１㊀㊀对照组与肺癌组血浆m i R Ｇ２６b的表达图２㊀㊀各期肺癌患者血浆m i R Ｇ２６b 的表达２．３㊀肺癌患者治疗前后血浆m i R Ｇ２６b 水平㊀F Q ＧP C R 检测５０例肺癌患者治疗前后血浆m i R Ｇ２６b 水平,见图３.患者治疗前后血浆m i R Ｇ２６b 的相对表达量分别为１０．６８ʃ８．１８㊁１８．６９ʃ１０．７１,治疗后血浆m i R Ｇ２６b 的表达较治疗前显著升高(t ＝－４．８５５,P ＜０．０１).图３㊀㊀肺癌患者治疗前后血浆m i R Ｇ２６b 水平３㊀讨㊀㊀论㊀㊀研究表明,m i R Ｇ２６b 在肿瘤的发生㊁发展中发挥着抑癌基因的作用.L I 等[７]研究发现,m i R Ｇ２６b 通过靶向作用于岩藻糖基转移酶F U T ４,抑制结直肠癌细胞的侵袭和转移.m i R Ｇ２６b 亦靶向作用于酪氨酸蛋白激酶受体E p h A ２,从而增强肝癌细胞的放疗敏感性[８].但是也有研究显示,在脑垂体瘤细胞中,抑制m i R Ｇ２６b 的表达能明显抑制肿瘤细胞的集落形成和侵袭[９].虽然m i R Ｇ２６b 到底扮演着癌基因或抑癌基因的角色存在争议,但这也说明m i R Ｇ２６b 确实与肿瘤的发生㊁发展密切相关.研究发现肿瘤患者血清中存在组织特异性m i R ＧN A ,并且高度稳定,能够抵抗血清中以及外源性R N a s e;由于血清标本易于获得且容易被患者所接受,检测患者血清中m i R N A 的表达,将成为疾病诊断㊁治疗及预后判断的有力工具[１０Ｇ１１].有报道显示,循环m i R Ｇ２５有望作为肺癌诊断的分子标志[１２],也有报道表明,循环m i R Ｇ２３b 与结直肠癌患者的分期相关,并且m i R Ｇ２３b 低表达的结直肠癌患者呈现较低的无病生存率和总的生存率[１３].循环m i R Ｇ２５在骨肉瘤患者血浆中明显增高,m i R Ｇ２５水平能很好地反映骨肉瘤患者的病情进展和预后情况[１４].陈卫群等[１５]报道了弥漫性大B 细胞淋巴瘤患者血清中m i R Ｇ２１呈高表达,且与弥漫性大B 细胞淋巴瘤临床分级分期㊁基因型和预后判断密切相关,m i R Ｇ２１有可能成为弥漫性大B细胞淋巴瘤早期诊断㊁基因分型及预后判断的新分子标志.王卉等[１６]亦通过检测乳腺癌患者血清m i R Ｇ２１的表达,发现高表达的血清m i R Ｇ２１与乳腺癌分期密切相关.H S U 等[１７]发现,在头颈部鳞状细胞癌患者中,术后循环m i R Ｇ２１和m i R Ｇ２６b 降低的患者均有较好的预后.课题组前期研究发现,肺癌细胞系中m i R Ｇ２６b 呈低表达,而提高m i R Ｇ２６b 在肺癌细胞中的表达量,能明显促进肺癌细胞凋亡,抑制肺癌细胞增殖,m i R Ｇ２６b通过靶向作用于E Z H ２参与到槐尔清膏抗肿瘤作用中[６].本文在前期研究的基础上,收集肺癌患者血浆标本,发现m i R Ｇ２６b 在肺癌患者血浆中明显降低,低表达的m i R Ｇ２６b 对肺癌的诊断及对肺癌各期的区分具有一定价值,并且肺癌患者血浆m i R Ｇ２６b 在治疗后明显升高.４㊀结㊀论㊀㊀血浆m i R Ｇ２６b 水平对肺癌及肺癌各期的鉴别诊断具有重要意义,循环m i R Ｇ２６b 作为非侵袭性的小分子,有望成为肺癌辅助诊断㊁分期和疗效监测的新的指标.课题组后续将结合大批量的肺癌患者血浆㊁组织m i R Ｇ２６b 水平进行深入分析,进一步探索m i R Ｇ２６b 在肺癌发生㊁发展中的重要作用.参考文献[１]S I E G E LRL ,M I L L E R K D ,F E D E WASA ,e t a l ．C o l o r Ｇe c t a l c a n c e r s t a t i s t i c s ,２０１７[J ]．C aC a n c e r JC l i n ,２０１７,６７(３):１０４Ｇ１１７．[２]B U R O T T O M ,T H OMA SA ,S U B R AMA N I AM D ,e t a l ．B i o m a r k e r s i ne a r l y Ｇs t a g en o n Ｇs m a l l Ｇc e l l l u n g ca n c e r :c u r Ｇr e n t c o n c e pt sa n df u t u r ed i r e c t i o n s [J ]．JT h o r a cO n c o l ,２０１４,９(１１):１６０９Ｇ１６１７．[３]V A NB E I J N UMJR ,G I O V A N N E T T I E ,P O E LD ,e t a l ．m i R N A s :m i c r o Ｇm a n a ge r s of a n t i c a n c e r c o m b i n a t i o n t h e r Ｇa p i e s [J ]．A ng i o g e n e s i s ,２０１７,２０(２):２６９Ｇ２８５．０７９１ 国际检验医学杂志２０１８年８月第３９卷第１６期㊀I n t J L a bM e d ,A u 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【文献解读】金开瑞自主研究发表Paper：SWATH-MS定量蛋白质组解密miR-26a在人类癌症中的功能题目：Label-free Quantitative Analysis of Protein Expression Alterations in miR-26a-Knockout HeLa Cells using SWATH-MS TechnologySWATH-MS定量蛋白质组学研究miR-26a敲除HeLa细胞蛋白表达谱期刊：Scientific Reports影响因子：4.122主要技术：SWATH-MS研究背景微小RNA（miRNA）能够以序列特异性方式结合靶mRNA的3'非翻译区，随后抑制基因翻译。

人类miR-26a在基因水平上的研究较多，且其众多功能已揭示，但是靶基因的蛋白质水平方面的研究尚属空白。

研究内容及结果1. 使用CRISPR-Cas9基因编辑系统构建miR-26a敲除的HeLa细胞系作者使用CRISPR-Cas9基因编辑系统构建了miR-26a敲除的HeLa细胞系。

作者首先设计了两条single-guide RNAs (sgRNAs)耗尽miR-26a（图1a），并克隆到lentiCRISPRv2载体中，通过DNA测序确认插入载体（图1b）。

转染后，通过核苷酸测序也证实了由靶位点中的28-bp缺失引起的突变（图1c）。

敲除株系中的miR-26a水平显著低于（降低76％）野生型细胞中的miR-26a水平。

图1 CRISPR-Cas9系统在HeLa细胞中产生miR-26a敲除系2. miR-26a缺陷细胞表现出明显的细胞生长和增殖作者发现，与野生型HeLa细胞相比，miR-26a缺陷细胞（敲除株系）表现出明显的细胞生长现象（图2a）。

因此，作者又比较了野生型和敲除株系的细胞增殖情况，发现在miR-26a 缺陷细胞中观察到更高百分比的细胞停留在G2期（图2b）。

Annexin V染色法和流式细胞术确定凋亡程度，发现miR-26a缺陷系中凋亡细胞的百分比显着低于野生型HeLa细胞（图2c）。

卵巢癌与非编码RNA研究进展什么是非编码RNA？一般来说，RNA大致分为两类，一类是编码RNA，也就是可以被翻译成蛋白质的RNA，另一类就是非编码RNA，它们不会翻译成蛋白质，但在细胞内发挥重要的调控作用。

根据其长度和功能，非编码RNA又可以被细分为小的和长的非编码RNA。

小的非编码RNA包括微型RNA（miRNA）和小干扰RNA（siRNA），它们的长度一般在20-30个核苷酸左右，通过靶向特定的mRNA分解或抑制其翻译来发挥调控作用。

而长的非编码RNA 则包括长链非编码RNA（lncRNA）和环状RNA（circRNA），它们的长度一般超过200个核苷酸，主要通过与蛋白质或其他RNA分子发生相互作用来调控基因表达。

在卵巢癌中，越来越多的研究表明非编码RNA在其发生和发展中起着重要作用。

miRNA 作为最为研究和应用较多的非编码RNA之一，已经被发现与卵巢癌的发生和转移密切相关。

研究发现miR-200家族miRNA在抑制卵巢癌细胞的上皮-间质转化中起着关键作用，这对于抑制卵巢癌细胞的侵袭和转移具有重要意义。

miR-21也被发现高表达于卵巢癌组织中，并且与患者的预后密切相关。

更重要的是，一些miRNA甚至可以作为潜在的诊断或预后标志物，如miR-214和miR-200a等。

除了miRNA之外，lncRNA和circRNA在卵巢癌中的作用也越来越受到重视。

研究发现，某些lncRNA的表达与卵巢癌的分化程度、临床分期以及预后密切相关，如H19、MALAT1等。

这些lncRNA通过不同的分子机制参与调控卵巢癌的增殖、凋亡、转移等生物学过程。

最新的研究发现，circRNA也参与了卵巢癌的发生和发展，如circ-ABCB10和circ-PUM1等circRNA被发现在卵巢癌组织中高表达，并且与患者的预后有关。

非编码RNA在卵巢癌中的研究进展为我们深入了解该疾病的发病机制和寻找新的治疗靶点提供了重要的信息。

miRNA—26a在良、恶性腹水鉴别诊断中的意义目的探讨miRNA-26a在良、恶性腹水鉴别诊断中的意义。

方法收集北京大学深圳医院2011年9月～2014年3月门诊及住院患者60例，包括20例肝硬化腹水患者（肝硬化腹水组），20例结核性腹水患者（结核性腹水组），20例恶性腹水患者（恶性腹水组）。

采用实时定量PCR（qRT-PCR）方法检测并比较各组血清miRNA-26a、甲胎蛋白（AFP）、糖类抗原125（CA125）的表达。

结果恶性腹水组血清CA125表达高于结核性腹水组和肝硬化腹水组，但差异无统计学意义（P > 0.05）。

AFP、miRNA-26a在结核性腹水组及肝硬化腹水组表达差异无统计学意义（P > 0.05）；AFP和miRNA-26a在恶性腹水组患者血清表达明显高于结核性腹水组和肝硬化腹水组，差异有统计学意义（P 0.05）. The differences of AFP，miRNA-26a between tuberculous ascites group and hepatic cirrhosis ascites group was not statistically significant （P > 0.05）；the AFP，miRNA-26a in malignant ascites group were all higher than those in hepatic cirrhosis ascites group and tuberculous ascites group，the differences were statistically significant （P 0.05），具有可比性。

1.2 纳入和排除标准①乙肝肝硬化腹水患者纳入和排除标准：具有慢性乙型病毒性肝炎病史，或伴有门静脉高压，肝功能减退表现；影象学检查，如CT、B超或MRI检查支持肝硬化的诊断，排除其他各种原因引起的肝硬化，如酒精性肝硬化、血吸虫性肝硬化、Wilson病、胆汁淤积性肝硬化等，排除合并其他严重的器质性疾病，如合并心功能衰竭、肾功能衰竭、呼吸功能衰竭、恶性肿瘤等。

DOI:10.19338/j.issn.1672-2019.2020.10.002·论著·miR-26a在食管癌中的表达及其对食管癌细胞增殖、侵袭能力的分析研究*陈明治，徐伟，王建，周健，林杰，冯子旺，蒋国军（江苏大学附属宜兴人民医院心胸外科，江苏宜兴214200）摘要：目的探究食管癌组织中微小RNA（miR）-26a表达水平变化及其临床意义，研究分析其对食管癌细胞（TE-1细胞和Eca109细胞）增殖、侵袭能力的影响。

方法选取2014年1月至2018年12月在江苏大学附属宜兴人民医院手术切除并经病理学检查确诊的食管癌标本45例，采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测食管癌组织及癌旁正常组织中miR-26a 水平，分析miR-26a水平与临床病理特征的关系。

选用人ESCC细胞系（TE-1、Eca109）及正常人食管鳞状上皮细胞系（HEEC）作为研究对象，分为对照组（WT组）、空载体转染组（NC组）和miR-26a组（miR-26a组）。

其中对照组不作处理；空载体转染组对细胞进行空载体转染；miR-26a组对细胞进行miR-26a质粒转染。

Cell Counting Kit-8法检测细胞活性；Annexin V-FITC PI法检测细胞凋亡情况。

标准程序用流式细胞仪检测，结果用细胞周期拟合软件分析细胞周期。

集落形成实验检测细胞集落形成。

结果食管癌组织中miR-26a水平低于癌旁组织（P<0.05）。

miR-26a水平与食管癌肿瘤大小、肿瘤细胞分化不良、肿瘤浸润及局部淋巴结转移数量相关（P<0.05），而与年龄、性别无关（P>0.05）。

转染miR-26a组TE-1细胞和Eca109细胞活力下降、集落形成减少、处于S期（DNA合成期）和G2/M期（有丝分裂期）的细胞显著减少，细胞凋亡增加。

结论食管癌组织和细胞中，miR-26a的表达显著减少；在ESCC细胞（TE-1和Eca109）中过表达miR-26a，可抑制细胞的增殖，降低细胞活性，并促进其凋亡。

卵巢癌与非编码RNA研究进展
卵巢癌是一种影响女性生殖健康的常见疾病，预后较为恶劣。

非编码RNA（non-
coding RNA，ncRNA）是一类不编码蛋白质的RNA分子，在生物过程中具有重要的调控作用。

近年来，越来越多的研究表明ncRNA在卵巢癌发生、发展及转移过程中发挥着重要作用。

本文对近年来ncRNA在卵巢癌研究中的进展进行了综述。

1. miRNA在卵巢癌中的调控作用
miRNA是长度在20~25个核苷酸之间的ncRNA，具有调控基因表达的作用。

已有研究
表明，在卵巢癌中，多种miRNA参与调控癌细胞的增殖、凋亡、侵袭和转移等生物行为。

如miR-200家族、miR-21、miR-182等miRNA在卵巢癌中表达上升，并参与细胞凋亡逃避、上皮-间质转化等过程。

相反，miR-34、miR-199a/214等miRNA在卵巢癌中表达下降，与
癌细胞的侵袭、转移等过程密切相关。

4. piRNA在卵巢癌中的调控作用
小干扰RNA相关RNA（Piwi-interacting RNA，piRNA）是一类长度为23~35个核苷酸的ncRNA，能够与Piwi蛋白结合。

已有研究表明，piRNA在卵巢癌中的水平上升，但其作
用机制尚不清楚。

报道显示piRNA-GD1873能够调控卵巢癌的生长和凋亡。

综上所述，ncRNA在卵巢癌的研究中发挥着重要的作用，有望成为卵巢癌早期诊断和
治疗的重要标志物和药物靶点。

未来的研究应进一步明确ncRNA在卵巢癌中的作用机制及
其在诊断和治疗中的应用价值。

Mir-26a在人垂体腺瘤组织及血清中表达的研究的开
题报告
研究背景：
垂体腺瘤是常见的神经内分泌肿瘤，它具有性别、年龄和种族的差异，并且通常不会引起疼痛或其他明显的症状。

Mir-26a被证明在多种肿瘤的发展过程中起着重要作用。

然而，有关Mir-26a在垂体腺瘤中的表达和作用的研究仍然非常有限。

研究目的：
该研究旨在分析Mir-26a在人垂体腺瘤组织和血清中的表达以及其
对垂体腺瘤生长和转移的影响，为垂体腺瘤的治疗和预防提供新的理论
基础。

研究方法：
通过对垂体腺瘤组织和正常垂体组织进行实时荧光定量PCR （qPCR），Western blot分析和免疫组织化学（IHC）检测，来评估Mir-26a的表达水平；通过灵敏度高的RNA测序技术获得不同血清样品的
Mir-26a表达；利用CCK8分析，Transwell侵袭实验，和扎昆达拉小鼠模型研究Mir-26a在体内和体外对垂体腺瘤生长和转移的影响。

研究预期：
通过该研究，我们预计可以确定Mir-26a在垂体腺瘤中的表达水平，并探究其在垂体腺瘤生长和转移中的作用。

这将为深入研究垂体腺瘤发
病机制，寻找有效的治疗和预防策略提供新思路。

miR-27a通过靶向KRAS抑制食管鳞状细胞癌增殖
和侵袭的开题报告
背景介绍：
食管鳞状细胞癌（ESCC）是一种高度侵袭性和恶性的癌症，目前缺
乏有效的治疗方法。

因此，了解ESCC发生和发展的分子机制具有重要的临床意义。

许多miRNA已经被证明在ESCC的发生和发展中起着重要作用，其中miR-27a在多种癌症中都被发现有上调的表达，并与肿瘤的侵
袭和转移有关。

然而，miR-27a在ESCC中的作用尚不清楚。

研究目的：
本研究的目的是探究miR-27a在ESCC中的作用，并分析其与靶向
基因KRAS之间的关系。

研究方法：
使用定量RT-PCR检测miR-27a在ESCC细胞中的表达水平，并使用Western blot分析KRAS蛋白的表达水平。

miR-27a的过表达和抑制实验被用来评估miR-27a对ESCC细胞增殖和侵袭的影响。

使用Luciferase报告基因分析miR-27a和KRAS之间的互作。

预期结果：
miR-27a的表达水平将在ESCC细胞中升高，并且miR-27a的过表
达将抑制细胞增殖和侵袭。

此外，miR-27a将与KRAS靶向并抑制其表达。

miR-27a可能通过抑制KRAS来抑制ESCC的增殖和侵袭。

结论：
miR-27a具有靶向KRAS抑制ESCC增殖和侵袭的潜力，未来可以作为ESCC治疗的一个新靶点。

卵巢癌与非编码RNA研究进展
卵巢癌是女性常见的恶性肿瘤之一，在全球女性癌症死亡中排名第五。

由于其起病隐匿，早期症状不明显，大多数患者在确诊时已经发展到晚期，治疗也相对困难，因此卵巢癌的五年生存率仅为40%。

除了传统的病理学和分子生物学等研究外，近年来越来越多的研究关注到了非编码RNA在卵巢癌中的作用。

下面将从miRNA、lncRNA和circRNA三个方面介绍卵巢癌与非编码RNA研究进展。

miRNA：miRNA是一类长度约20~25 nt的非编码RNA，能够靶向调控靶基因的表达。

miRNA在癌症中起着调节细胞增殖、细胞周期和凋亡等重要生物学过程的作用。

在卵巢癌中，miRNA的异常表达已经被证实与炎症、增殖、凋亡、迁移和侵袭等多种生物学过程相关。

例如，miRNA-183通过靶向调控WNT5A和Wnt/β-catenin通路来影响卵巢癌的发生和发展。

miRNA-182通过抑制FOXO3A、MTA1和APC靶基因的表达，对卵巢癌干细胞的增殖和迁移过程起到了影响。

另外，miRNA-200家族通过靶向调控EMT过程和肿瘤细胞的上皮/间充质转换，影响卵巢癌的转移和预后。

综上，非编码RNA在卵巢癌中的重要性越来越受到关注。

miRNA、lncRNA和circRNA 作为非编码RNA的三个主要类别，在卵巢癌的发生和发展中起着重要的作用，深入研究这些RNA的调节网络，对于卵巢癌的早期诊断、治疗和预后评估将有重要的帮助。