胡萝卜粉中类胡萝卜素含量的快速测定

水果、蔬菜汁类胡萝卜素含量的测定1 主题内容与适用范围本标准规定了水果、蔬菜汁中类胡萝卜素的分离提取方法及提取物中类胡萝卜素总量的测定方法。

本标准适用于水果、蔬菜汁中类胡萝卜素总量的测定。

2 原理果蔬滤液通过溶剂萃取,分离提取类胡萝卜素,在特定波长下用分光光度法测其吸光度。

该吸光度与类胡萝卜素含量成线性关系,通过换算即可得知类胡萝卜素之含量。

3 试剂和溶液本标准所用试剂除特殊规定外,均使用符合国家标准的分析纯试剂,均采用蒸馏水。

3.1 石英砂(Q/HG 22--467)；3.2 萃取剂,2/1(v/v)氯仿(GB 682)-甲醇(GB 683)混合。

4 仪器设备4.1 抽滤器；4.2 无灰分滤纸；4.3 分液漏斗：250mL；4.4 容量瓶,100mL；4.5 移液管,20mL；4.6 烧杯,50mL；4.7 分光光度计,使用的测量波长为440±10nm。

5 分析步骤注：由于类胡萝卜素本身性状的不稳定性,即见光易氧化分解,建议所有操作应避光进行。

5.1 试样的制备5.1.1 液体样品：混合均匀后取样。

5.1.2 固体样品：捣碎机捣碎后,纱布挤汁。

5.2 用移液管吸取20mL样液置50mL烧杯中。

5.3 过滤：在烧杯(5.2)中加入3g石英砂,摇动后用布氏漏斗过滤(布氏漏斗预先铺有无灰滤纸,纸上铺有2g石英砂),然后再用5mL水冲洗滤渣3次。

5.4 萃取：在250mL的分液漏斗中倒入滤液(5.3),再加入20mL萃取剂(3.2),振摇后静置,收集下部分有机相,再用20mL萃取剂提取两次,将三次萃取所得有机相合并,用萃取剂定容为100mL。

注：对果胶含量大的果蔬,萃取时,将三次合并的有机相重新倒回原分液漏斗,继续用20mL萃取洗涤一次,然后用萃取剂定容至100mL。

5.5 测定：在440±10nm波长下测定提取液的最大吸光度A。

6 结果的计算和表示类胡萝卜素总量用mg/L表示,按下式计算：类胡萝卜素(mg/L)＝A×20式中：A——测定的最大吸光度；20——换算系数。

β-胡萝卜素和番茄红素的提取、分离与测定［摘要］β—胡萝卜素是一种抗氧化剂，具有解毒作用，是维护人体健康不可缺少的营养素。

番茄红素（Lycopene）是类胡萝卜素的一种，对防治癌症、提高免疫力、延缓衰老有特效，有植物黄金之称，被誉为“21世纪保健品的新宠”。

因此，提取、分离、鉴定这些活性成分成为研究和开发这些天然生物资源的重要环节。

本实验用常规天然有机化合物的提取方法获得β-胡萝卜素和番茄红素样品，再用柱色谱法将其分离，用薄层色谱检测分离效果，最后用分光光度法分别对其鉴定。

［关键词］β-胡萝卜素、番茄红素、提取、分离、测定实验基本原理β-胡萝卜素和番茄红素分子中的碳骨架是由8个异戊二烯单位连接而成的，它们是四萜类化合物。

它们的分子中都有一个较长的π-π共轭体系，能吸收不同波长的可见光，因而，它们都呈现一定的绿色，β-胡萝卜素是黄色物质，番茄红素是红色物质，所以，又把它们叫做多烯色素。

β-胡萝卜素和番茄红素的结构式分别如下:（番茄红素）（β-胡萝卜素）胡萝卜素是最早发现的一种多烯色素。

后来，又发现了许多在结构上与胡萝卜素类似的色素，于是就把这类物质叫做胡萝卜素类化合物，或者叫做类胡萝卜素。

这类化合物大都难溶于水，易溶于弱极性或非极性的有机溶剂，因此又把这类化合物叫做脂溶性色素。

胡萝卜素广泛存在于植物的叶、花、果实中，尤以胡萝卜中含量最高。

胡萝卜素有α、β、γ三种异构体，在生物体中以β-异构体含量最多，生理活性最强。

在动物体中，胡萝卜素在酶的作用下可转化为维生素A，因此，胡萝卜素又被叫做维生素A原。

胡萝卜素在人和高等动物体内就有重要的生理功能，是人和高等动物生存不可缺少的营养物质。

番茄红素是胡萝卜素的开链异构体。

番茄红素在成熟的红色植物果实如番茄、西瓜、胡萝卜、草莓、柑橘等中含量丰富，其中含量最高的是番茄。

由于番茄红素不具有维生素A原活性，因此长期以来不被人们所重视。

但近年来研究表明，番茄红素是一种优越的天然色素和生物抗氧化剂，具有极强的清除自由基的能力，它可以预防前列腺癌、乳腺癌和消化道（结肠、直肠与胃）癌的发生，在预防心血管疾病、动脉硬化等各种与衰老有关的疾病及增强机体免疫力方面具有重要作用。

CC ICS 65.020.01CCS B 20DB33饲料中β-胡萝卜素的测定高效液相色谱法Determination of β-carotene in feeds — High performance liquid chromatography浙江省市场监督管理局 发布DB33/T 2333—2021前言本标准按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本标准的某些内容可能涉及专利。

本标准的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由浙江省农业农村厅提出。

本标准由浙江省畜牧兽医和饲料标准化技术委员会（ZJQS/TC33）归口。

本标准起草单位：浙江省动物疫病预防控制中心（浙江省兽药饲料监察所）。

本标准主要起草人：施杏芬、吕伟军、阮鑫、张志健、裘丞军、吴望君、商小金。

IIDB33/T 2333—2021饲料中β-胡萝卜素的测定高效液相色谱法1 范围本标准规定了饲料中β-胡萝卜素的高效液相色谱测定方法。

本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料中β-胡萝卜素的测定。

本标准配合饲料、浓缩饲料、精料补充料的定量限为 1 mg/kg，添加剂预混合饲料定量限为 2 mg/kg。

2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。

其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 20195 动物饲料试样的制备3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。

4 原理试样中β-胡萝卜素经碱溶液超声皂化，生成全反式β-胡萝卜素，经石油醚萃取，减压浓缩后，用高效液相色谱法测定，外标法定量。

5 试剂或材料5.1除非另有规定，仅使用分析纯试剂。

5.2水：GB/T 6682-2008，一级。

高效液相色谱定量分析新鲜加工过的水果中主要类胡萝卜素的含量概念一、类胡萝卜素（carotenoid）不溶于水而溶于有机溶剂。

叶绿体中的类胡萝卜素含有两种色素，即胡萝卜素（carotene）和叶黄素（lutein），前者呈橙黄色，后者呈黄色。

功能为吸收和传递光能，保护叶绿素。

类胡萝卜素是一类重要的天然色素的总称，属于化合物。

普遍存在于动物、高等植物、真菌、藻类和细菌中的黄色、橙红色或红色的色素。

二、番茄红素(lycopene)番茄中的红色素，是胡萝卜素的母体化合物。

番茄红素是成熟番茄的主要色素,是一种不含氧的类胡萝卜素。

番茄红素是植物中所含的一种天然色素。

主要存在于茄科植物西红柿的成熟果实中。

它是目前自然界中被发现的最强抗氧化剂。

番茄红素清除自由基的功效远胜于其他类胡萝卜素和维生素E，它可以有效的防治因衰老，免疫力下降引起的各种疾病。

三、β-胡萝卜素(β-carotene)β-胡萝卜素是类胡萝卜素之一，也是橘黄色脂溶性化合物，它是自然界中最普遍存在也是最稳定的天然色素。

许多天然食物中如绿色蔬菜、甘薯、胡萝卜、菠菜、木瓜、芒果等，皆存有丰富的β—胡萝卜素。

β-胡萝卜素是一种抗氧化剂，具有解毒作用，是维护人体健康不可缺少的营养素。

β-胡萝卜素在进入人体后可以转变为维生素A，不会有因过量摄食而造成维生素A累积中毒现象。

另外，在促进动物的生育与成长也具有较好的功效。

四、毛细管柱色谱法(capillary column chromatography)开管柱气相色谱(open tubular gas chromatography)，又称高分辨气相色谱(high resolution gas chromatography)，是气相色谱的重要分支。

用内壁上涂附有固定液的空心的毛细管柱进行组分分离的色谱法。

与填充柱色谱法相比，其分离效率高、分析速度快、样品用量少。

HPLC法定量分析芒果和木瓜中类胡萝卜素的含量摘要：采用高效液相色谱法定量分析芒果、木瓜样品及一些加工产品的主要类胡萝卜素,使用外标法和标准加入校准技术。

新鲜蔬菜中β-胡萝卜素的提取、分离和测定
班级：临五一班（2小班）姓名：任依梦学号：5117119051
【实验目的】
●掌握从新鲜胡萝卜中提取、分离β-胡萝卜素的方法
●掌握应用紫外-可见吸收光谱法测定β-胡萝卜素的紫外光谱图
●了解共轭多烯化合物π→π*跃迁吸收波长的计算方法及共轭多烯化合物的紫
外吸收光谱特征
【实验原理】
简介胡萝卜素是维生素A的前体，具有类似维生素A的活性，有α、β、γ异构体，其中以β-胡萝卜素生理活性最强。

β-胡萝卜素的结构如下：
β-胡萝卜素是长链多烯化合物，它的π-π*跃迁吸收带处于可见光区，因此纯β-胡萝卜素是橘红色晶体。

提取胡萝卜素不溶于水，可溶于有机溶剂，故可用有机溶剂来提取。

分离采用柱层析法将提取液中β-胡萝卜素分离出来。

测定经分离提纯的β-胡萝卜素含量可以直接用紫外-可见分光光度法测定。

【实验步骤】
1.β-胡萝卜素的提取
20g新鲜胡萝卜+40mL1：1丙酮-石油醚混合溶剂研磨5min（研钵）萃取（分液漏斗）
2.柱层析
在层析柱中加入少许浸有石油醚的脱脂棉→加入一半层析柱高的石油醚→加入20g中性氧化铝→在氧化铝上面加一圆形滤纸→加入β-胡萝卜素提取液→用9:1（体积比）石油醚-丙酮溶液洗脱，进行层析
3.β-胡萝卜素的紫外-可见吸收光谱的测定
将层析分离得到的橙黄色试样稀释后加到1cm的比色皿中，以石油醚作空白试剂，用分光光度计测定400~600nm范围内的吸收
【实验结果】
β-胡萝卜素的吸收曲线。

食品安全国家标准食品中β-胡萝卜素的测定1范围本标准规定了食品中β-胡萝卜素的测定方法。

本标准适用于食品中β-胡萝卜素的测定。

2原理试样经皂化后，使β-胡萝卜素完全变为游离态。

用石油醚萃取后，反相色谱法分离，外标法定量。

3试剂和材料注：除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。

3.1试剂3.1.1α-淀粉酶：酶活力≥1.5 U/mg。

3.1.2氢氧化钾（KOH）。

3.1.3无水硫酸钠（Na2SO4）。

3.1.4抗坏血酸(C6H8O6)。

3.1.5石油醚：沸程30 ℃～60 ℃。

3.1.6甲醇(CH4O)：色谱纯。

3.1.7乙腈(C2H3N)：色谱纯。

3.1.8三氯甲烷(CHCl3)：色谱纯。

3.1.9正己烷(C6H14)：色谱纯。

3.1.10甲基叔丁基醚[CH3OC(CH3)3]：色谱纯。

3.1.11乙醇：体积分数为95 %。

3.2试剂配制3.2.1氢氧化钾溶液：称固体氢氧化钾250 g，加入200 mL 水溶解。

临用前配制。

3.3标准品3.3.1β-胡萝卜素标准品，CAS：7235-40-7。

3.3.2α-胡萝卜素标准品，CAS：7488-99-5。

3.4标准溶液的配制3.4.1β-胡萝卜素标准储备液（500 g/mL）：准确称取β-胡萝卜素标准品50 mg（精确到0.1mg），用正己烷定容至100 mL 棕色容量瓶中。

注：β-胡萝卜素标准储备液需要-10 ℃以下避光储存，使用期限不超过3个月。

标准储备液用前需校正，具体操作见附录A。

3.4.2β-胡萝卜素标准中间液（100 μg/mL）：从β-胡萝卜素标准储备液中准确移取10.0 mL 溶液于50 mL 棕色容量瓶中，用正己烷定容至刻度。

3.4.3β-胡萝卜素标准工作液：从β-胡萝卜素标准中间液中分别准确移取0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL 溶液至5 个100 mL 棕色容量瓶。

植物呈现出绚丽多姿的色彩，有的是为了光合同化作用，有的则是作为吸引信号或者植物防御信号，从而有利于它们的生存、授粉或种子传播，以便将自己的基因长久的遗传下去。

这些色彩是由植物体内卟啉类、类胡萝卜素类、类黄酮类和甜菜素类四种物质而引起的。

其中类胡萝卜素使高等植物呈现出黄色、橙红色或红色。

类黄酮可分为黄酮、黄酮醇和花青素3类，前两者大多呈浅黄色，花青素则会根据PH 值的不同，使高等植物呈现出红色到蓝色。

1.类胡萝卜素类胡萝卜素是一类呈黄色、橙红色或红色的多烯类物质, 一般由8个类异戊二烯单位组成，其具有抗氧化、防癌症、预防夜盲症等功能。

自然界中发现的类胡萝卜素种类繁多, 大约有700多种。

近10年来，每年大约有3000多篇类胡萝卜素相关的文献产出。

（1）类胡萝卜素在高等植物中的分布类胡萝卜素作为光合色素的辅助色素，广泛存在于高等植物中，主要是以光合色素-蛋白质复合体的形式存在于高等植物的叶绿体中，几乎所有有叶绿素的地方就有类胡萝卜素。

如许多黄色或橙色的高等植物花瓣和果实的颜色均源于存在于其组织细胞之中的类胡萝卜素化合物，如番茄、柑橘、辣椒、胡萝卜、玉米等。

（2）类胡萝卜素的分析检测方法类胡萝卜素的分离、定性、定量分析是从事类胡萝卜素研究工作的基本方法。

类胡萝卜素的共轭双键对热、光、氧和酸都是比较敏感的，所以在分析操作过程中要尽量减少氧的破坏、较大可能的避免光和热引起的变化。

分析试剂不要含过氧化物、酸和游离氧。

色谱质谱技术和光谱技术是类胡萝卜素研究工作中重要的分析方法，在定性、定量分析和分离、制备方面起着重要的作用。

（3）类胡萝卜素的功能类胡萝卜素在叶绿体光合作用中扮演着重要角色，一方面可帮助叶绿素接收光能，另一方面高温、强光下可通过叶黄素循环，耗散多余能量，此外类胡萝卜素还是ABA的前体。

高等植物的叶、花、果及根因富含类胡萝卜素，而呈现出黄色、橙红色或红色，因此胡萝卜素是决定园艺植物观赏价值的重要指标。

对Β-胡萝卜素测定方法的认识姓名：***班级：应用化学122班学院：化学工程学院学校：新疆农业大学对β-胡萝卜素测定方法的认识摘要：食品中的β-胡萝卜素可以用纸上层析法、薄层色谱法、分光光度法及高效液相色谱法等方法测定。

本文简述了这些方法的原理条件及优缺点，并谈了谈自己的认识。

Β-胡萝卜素作为维生素A的前体，是人体重要营养素，也能够影响蛋白质的合成和利用，促进体内软组织的生长发育。

同时，β-胡萝卜素还有一定的防癌作用。

因此，对β-胡萝卜素的研究倍受广注。

β-胡萝卜素分子中存在多个共轭双键结构，对许多物理、化学、生物等因素都不稳定，例如光辐射、高温、酸、碱、游离卤素、水分等，但氧是影响胡萝卜素稳定的主要因素。

它不溶于水、丙二醇、甘油、酸和碱，溶于二硫化碳、苯、氯仿、己烷及植物油等，几乎不溶于甲醇和乙醇。

1 测定方法1·1 天然β-胡萝卜素的提取取切碎混匀的菜样30g，加入适量水(一般约l：0.5—2)，于捣碎机中捣碎，使匀浆呈稠糊状。

因β-胡萝卜素对弱碱比较稳定，所以选用氨水：乙醇（5:35）作为稳定剂。

稳定剂可以加快沉淀且使沉淀完全，从而减少β-胡萝卜素损失，提高提取率。

加入2%的CaCl2·2H2O其沉淀量最大，且β-胡萝卜素的含量最高。

因β-胡萝卜素是脂溶性物质，可以溶解在有机试剂中，根据相似相溶规律和β-胡萝卜素的理化性质，我们选用亲脂性较强的有机溶剂。

为避免β-胡萝卜素的不必要损失，在除去溶剂时应避免高温，故应优先选择低沸点的溶剂。

同时，根据β-胡萝卜素在不同溶剂中的溶解度；可以得出石油醚可以作为很好的β-胡萝卜素的溶剂。

因为蔬菜糊中含有大量的水分，直接选用石油醚很难从其中萃取β-胡萝卜素，选用水溶性的丙酮和石油醚的混合液萃取，这样丙酮会有效地使渣干燥因而在随后的萃取中，色素可以高效地进入萃取液，提高了萃取率。

故在萃取过程中，为了提高萃取率，应加入氨水：乙醇（5:35）作为稳定剂，2%的CaCl2·2H2O作为沉淀剂；用石油醚和丙酮混合物作为提取剂。

β—胡萝卜素和番茄红素提取分离与测定摘要：本文综述了从新鲜胡萝卜中提取分离β-胡萝卜素和番茄红素的原理及方法，并且介绍了β-胡萝卜素和番茄红素的理化性质、化学结构以及生理功能。

同时就该实验做了一定的分析。

关键词：番茄红素，β—胡萝卜素，提取，分离，测定一．文献综述多种研究表明：摄入富含类胡萝卜素的果蔬能降低人群某些癌症的发病率。

番茄红素是人类血浆和组织中重要的类胡萝卜素，是类胡萝卜素中最有效的单线态氧淬灭剂，在体内具有抗氧化、防备和抑制癌症、抑制诱变、保护心血管、防治白内障、调理机体免疫力等功能。

番茄红素的抗氧化作用包括猝灭单线态氧、消除自由基以及与其它氧化剂协同抗氧化作用等。

其猝灭单线态氧的能力最强，是目前抗氧化剂β-胡萝卜素的2～3倍，维生素E的100倍，番茄红素可以通过猝灭单线态氧预防脂类过氧化反应，保护细胞免受自由基的损伤。

1、番茄红素的国内外研究历史1873年，Hartsen最早从Tamus communis L.中分离得到深红色的番茄红素结晶。

1875年，Millardat从番茄中获得一种含有番茄红素的粗提物，当时命名为Solanorubin。

1913年，Dugger根据它对生长条件的影响，又把它命名为lycoperison。

而Schunck（1930年）的“lycopene”名称（中文即番茄红素）一直沿用至今。

1.1国外对番茄红素的研究现状1989年，Masic发现番茄红素在所有类胡萝卜素中对单线态氧的猝灭速度最高；1991年，Campbell发现肝癌患者的肝脏中番茄红素含量较低；1994年，Franceschi发现消化道癌的发生与番茄红素的摄入有关。

随后，对番茄红素的功能的研究成为一大热点。

1995年～2003年与番茄红素有关的报道达800多篇，内容涉及番茄红素的吸收、运输及新陈代谢的动力学；番茄红素与癌症、心脏病及其他多种疾病的关系；番茄红素的提取、测定及番茄产品的开发研究等。

高效液相色谱法测定保健食品中β-胡萝卜素蔡伟江;黄康惠【摘要】建立保健食品中β-胡萝卜素含量的测定方法。

采用高效液相色谱法，色谱柱：岛津Inertsil C18（4.0 mm ×75 mm，3μm），以甲醇∶乙腈=90∶10为流动相，流速1.0 mL/min。

结果：β-胡萝卜素的浓度与峰面积线性关系良好（R2=0.99981），平均回收率为99.4%，RSD=0.4%（n=9）。

因此，高效液相色谱法可靠、灵敏、快速，可用于保健食品中β-胡萝卜素含量测定。

%To establish a method for determination ofβ-carotene in health foods. Methods:high performance liquid chromatography (HPLC), column:using Shimadzu Inertsil C18column (4.0 mm ×75 mm, 3 μm),Methanol∶Acetonitrile=90∶10 as the mobile phase, flow rate:1.0 mL/min. The linear relatio nship betweenβ-carotene concentration and peak area are good (R2=0.999 81), the average recovery was99.3%,RSD=0.4%(n=9).Conclusion:The method is reliable, sensitive, rapid and can be used for determination ofβ-carotene in health foods.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2016(037)004【总页数】3页(P161-163)【关键词】β-胡萝卜素;保健食品;高效液相色谱;含量测定【作者】蔡伟江;黄康惠【作者单位】汤臣倍健股份有限公司，广东珠海519040;汤臣倍健股份有限公司，广东珠海519040【正文语种】中文β-胡萝卜素是类胡萝卜素之一，是橘黄色脂溶性化合物，它是自然界中最普遍存在也是最稳定的天然色素。

食品安全国家标准《食品中β-胡萝卜素的测定》编制说明一、标准起草的基本情况1 任务来源受国家卫生和计划生育委员会食品安全标准与监测评估司和食品安全国家标准审评委员会的委托，编制组承担了2014-2015年食品安全国家标准整合项目中《食品中β-胡萝卜素的测定》国家标准的整合工作。

2 本标准主要起草单位本标准主要起草单位：中国疾病预防控制中心营养与健康所, 黑龙江省乳品工业技术开发中心（国家乳制品质量监督检验中心）3 本标准主要起草人：王竹、张雪松、王晓婧、王国栋、鄂来明、张婷婷。

4简要起草过程整合标准为GB/T 5009.83-2003 《食品中胡萝卜素的测定》（高效液相色谱法、纸层析法）、GB 5413.35-2010 《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中β-胡萝卜素的测定》（高效液相色谱法）、NY/T 82.15-1998 《果汁测定方法β-胡萝卜素的测定》（分光光度计法）。

在整合标准的基础上优化了天然含有胡萝卜素的食品的前处理条件和β-胡萝卜素的色谱检测条件，完成了相应的方法学验证。

于2015年5月完成了标准文本和编制说明的撰写工作。

二、标准的重要内容及主要修改情况1. 标准方法的选择本标准整合主要采用GB 5413.35-2010 《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中β-胡萝卜素的测定》（高效液相色谱法），删除了GB/T 5009.83-2003 《食品中胡萝卜素的测定》（高效液相色谱法、纸层析法）和NY/T 82.15-1998 《果汁测定方法β-胡萝卜素的测定》（分光光度计法）。

原因如下：1.1GB/T 5009.83-2003 《食品中胡萝卜素的测定》，第一法高效液相色谱法在试样提取的过程中未进行皂化，无法排除其他大分子物质的影响，导致检测结果偏低，第二法纸层析法无法分离α-胡萝卜素和β-胡萝卜素，导致结果不准确。

1.2NY/T 82.15-1998 《果汁测定方法β-胡萝卜素的测定》（分光光度计法）未进行皂化，也无法有效的分离α-胡萝卜素和β-胡萝卜素，导致检测结果不准确。