高效液相色谱法测定活血通脉片中丹参酮ⅡA的含量

高效液相法测定保心片中丹参酮ⅡA的含量摘要】目的建立保心片的质量控制方法。

方法采用HP-Agilent 1100高效液相色谱仪,流动相为甲醇：水=85：15，检测波长为270nm，流速：1.0ml/min，柱温30℃。

结果其主要成分丹参酮ⅡA浓度在0.018—0.08mg/ml(r=0.9975)范围内与峰面积呈良好线性关系。

平均加样回收率为100.2%，RSD值为1.57%（n=5）。

结论此条件下采用高效液相色谱法进行含量测定灵敏度好，精确率高。

【关键词】保心片质量研究高效液相色谱法丹参酮ⅡA【中图分类号】R927.2 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2013）13-0323-01保心片是一种中成药制剂，由三七、丹参、川芎、山楂、制何首乌、何首乌六味中药精制而成，具有活血化瘀、滋补肝肾之功效。

该制剂为本校制药工程实验室自制制剂。

目前市售的抗心绞痛中成药较多，大多数也都具有较完善的质量控制体系,但对保心片尚无完备的质量控制体系。

笔者利用高效液相色谱法对其所含丹参酮ⅡA进行了含量测定，并以此作为质量控制指标。

1 仪器与试药HP-Agilent 1100高效液相色谱仪；KQ-600DB型数控超声波清洗器；除高效液相色谱检测所用试剂为色谱纯，其它试剂均为分析纯；二次蒸馏水；丹参酮ⅡA对照品由中国生物制品检定所提供（批号0766 – 200703）。

2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：Kromasil C18（5m，4.6mm×250mm）,流动相为甲醇：水=85：15，检测波长为270nm，柱温30℃，流速：1.0ml/min，进样量:20μl[1,2]。

理论塔板按丹参酮ⅡA计算，应不低于2000。

2.2 溶液制备2.2.1 保心片（样品）溶液的制备取100片保心片碾粹后装入250ml圆底烧瓶中，加入工业乙醇，用电热套加热回流提取两小时，提取三次，合并提取液，过滤，将滤液在旋转蒸发仪上浓缩至粘稠状，干燥，加少量甲醇溶解，转移至50ml锥形瓶中并定容至刻度。

高效液相色谱法测定丹参片中丹参酮ⅡA 含量的方法褚晶晶【摘要】　目的　观察采用高效液相色谱法对丹参片中的丹参酮ⅡA 的含量进行测定的效果。

方法　本研究检测供试品溶液以超声波提取法对丹参片进行制备, 对照品采用丹参酮ⅡA, 测定方法采用高效液相色谱法, 选择合适的色谱柱、流动相以及检测波长, 并控制适宜的流速以及进样量, 测定温度选择为室温。

结果　在0.5126~4.8700 μg/ml 范围内丹参酮ⅡA 与峰面积具有良好的线性关系, 求的回归方程为Y =1425.3X +28.75, r =0.9996, n=5；平均回收率为99.63%, RSD 值为1.46%(n=9)。

结论　采用高效液相色谱法对丹参片中的丹参酮ⅡA 的含量进行测定具有操作方法简便, 测定结果稳定的优势, 适用于丹参片中的丹参酮ⅡA 的含量控制, 值得推广。

【关键词】　高效液相色谱法；丹参片；丹参酮ⅡA ；含量测定DOI ：10.14164/11-5581/r.2017.12.112作者单位：123000　阜新市药品检验所业务办公室丹参片在2015年版《中国药典》中质量标准只有丹酚酸B 的含量测定, 本文采用高效液相色谱法对丹参片中丹参酮ⅡA 的含量测定方法进行了研究。

1　仪器与材料本研究采用的高效液相色谱仪为美国waters E2695高效液相色谱仪。

丹参片(批号分别为161011, 161012, 161013), 丹参酮ⅡA 对照品(中国药品生物制品检定所, 批号为0766-200201)。

本研究所用甲醇均为色谱纯, 所用水为纯化水。

2　方法与结果2. 1　色谱条件　选择规格为(4.6 mm×250 mm, 5 μm)的waters symmetry C18色谱柱, 以甲醇-水(80∶20)为流动相, 控制流速为1.0 ml/min, 选取270 nm 为检测波长, 并控制适宜的冲柱比例以及进样量。

2. 2　溶液的制备　①对照品溶液：称取20 mg 丹参酮ⅡA 对照品, 将其放于100 ml 棕色量瓶中, 采用甲醇溶解后稀释至刻度。

应用高效液相色谱法测定丹参中丹参酮IIA的含量目的：分析高效液相色谱法在中药丹参不同部位中丹参酮IIA含量测定中的应用价值。

方法：建立反相高效液相色谱测定模式，选用Hypers110DS（C18）色谱柱，以75甲醇/25水为相液流动相比例，分别检测丹参不同部位有效成分丹参酮IIA的含量，并通过实验验证这一方法的有效性、稳定性等。

结果：丹参酮IIA面积和浓度呈线性相关，在1.25-21.45yg/ml浓度范围内线性最佳；加样溶液丹参酮IIA回收率平均为99.52%，相对标准偏差值为2.02%；丹参茎、叶未含丹参酮IIA。

结论：反相高效液相色谱法，可在短时间内精准获知丹参不同部位丹参酮IIA的含量，为丹参品质鉴定、药用价值和剂量研究工作提供可靠参考资料。

标签：高效液相；丹参；丹参酮IIA；色谱柱丹参是药用价值极高的草本植物，其根部内含丹参酮，常被入药调经疏络、活血祛瘀、消肿镇痛，其中丹参酮IIA是丹参脂溶性成分的代表物质，被广泛用于冠心病防治。

但是，丹参入药采购、运输、选品等各个环节均存在危险因素，如部分不法分子试图用伪劣品以假乱真牟取利益，制药工作人员专业水平不达标不能准确鉴别真伪、优劣，严重影响了中医药学的发展。

鉴于此，本院开展了丹参不同部位丹参酮IIA含量测定研究，旨在证实高效液相色谱法的应用价值并为丹参药用研究提供参考资料。

1 材料和设备1.1 实验材料本实验研究材料包括由中国药品生物制品检定所提供的丹参酮IIA标准品，江阴祥辉化工有限公司提供的色谱纯甲醇，广州致信中药饮片有限公司提供的干燥丹参根（6个月龄）、茎和叶子，实验用超纯水。

1.2 实验设备本实验研究设备包括高效液相色谱仪（杭州汉泽仪器有限公司，型号为LC-2010HT），紫外检测器（Genesys系列）、色谱柱（Hypersi10DSC18，长度为250mm，内径为4.6mm，填料颗粒直径为Sμm）、电子分析天平（瑞士梅特勒一托利多AB-S系列）、精密可程式干燥箱（上海博迅医疗生物仪器股份有限公司，BXH-130S）、电热恒温水槽（上海精密仪器仪表有限公司，CU系列）、实验室色谱超生仪（必能信超声上海有限公司，SB2200）。

丹参药材中丹参酮ⅡA含量测定方法改进 【编者按】医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果的论说性文章。

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 丹参药材中丹参酮ⅡA含量测定方法改进 【摘要】目的对丹参药材中丹参酮ⅡA含量测定方法(药典方法和改进方法)进行对比研究分析，确定改进方法的可行性和优越性。

方法在原高效液相色谱( HPLC)法的基础上，通过改变流动相的配比关系，对原药典测定方法作出改进，并将测定结果与药典方法测定结果进行比较。

结果①采用改进后的测定方法，色谱峰峰形好，丹参酮ⅡA主峰和其它峰分离度及拖尾因子符合要求;②同一批次丹参的丹参酮ⅡA含量测定结果表明两种测定方法无显著性差异(P 0.05);同时，改进的测定方法可以将测定时间大大缩短，节约流动相。

结论改进后的方法重现性好，测定结果准确可靠，节约检测时间和流动相，降低检验成本，是值得推荐的一种替代方法。

 【关键词】复方丹参片; 丹参酮ⅡA; 测定方法; 改进 丹参是临床上广泛使用的祛瘀止痛，活血通经，清心除烦的药材，《中国药典》2005年版Ⅰ部采用高效液相色谱法测定丹参酮ⅡA含量。

在实际检测工作中发现采药典方法中的以甲醇-水(73∶27)流动相，流速1 ml min-1时，丹参酮ⅡA保留时间在21 min 左右，出峰时间较晚，浪费流动相和检测时间。

为此，我们对丹参中丹参酮ⅡA含量测定方法的流动相进行了改进。

 1 仪器与试药 Agilent 1200高效液相色谱仪，Agilent DAD检测器，Agilent Chemstation工作站(美国安捷伦科技公司)。

照品：丹参酮ⅡA(中国药品生物制品检定所，批号：110766 -200416);丹参药材(市场采购);甲醇为色谱纯(天津市科密欧化学试剂开发中心);水为重蒸馏水;其余试剂均为分析纯。

 2 方法和结果 2.1 药典测定方法[1]色谱柱为Phenomenex Prodigy ODS3-C18色谱柱(4.60 mm 250 mm，5 流动相为甲醇-水(73∶27);检测波长270 nm，流速1.0 ml min-1，柱温为室温。

68第16卷 第6期 2014 年 6 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 16 No. 6 Jun .，2014通络活血胶囊是由某中医院根据多年的临床经验研制而成，由丹参、红花、川芎等8味中药材组成的中药复方制剂，具有活血化瘀、温经通络之功效，临床上用于治疗脑血栓引起的精神呆滞、舌质发硬、活动疼痛、冠心病心绞痛等症，方中的主药丹参具有活血祛瘀、调节心肝的作用[1]，对丹参主要成分丹参酮ⅡA 进行含量测定，能够有效的对通络活血胶囊进行质量控制。

本文采用HPLC 法对方中丹参的有效成分丹参酮ⅡA 进行了含量测定，为制定产品的质量标准提供了实验依据。

1仪器与试药LC-2010系列（岛津）全自动高校液相色谱仪；Hypersil（大连依力特有限公司提供）5 μm，4.6 mm ×250 mm；JAC-500型数控超声波清洗机（山东省济宁市奥波超声电气有限公司）；METTLER TOLEDO 电子天平（梅特勒公司）；丹参酮ⅡA 对照品（供含量测定用，批号：110766-200619）购自中国食品药品检定研究院；乙腈为色谱纯（天津市科密欧化学试剂有限公司）；其它试剂均为分析纯；通络活血胶囊及阴性样品均为烟台天正药业有限公司制备（规格0.41 g/粒）（批号：130201、130203、130205）。

2方法与结果2.1 色谱条件及系统适用性以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（75∶25）[2]为流动相；检测波长为270 nm [2-3]。

理论板数按丹参酮ⅡA 峰计算应不低于2 000。

2.2 对照品溶液的制备精密称取丹参酮ⅡA 对照品12.00 mg，置50 mL 棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取2 mL，置25 mL 棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每毫升中含丹参酮ⅡA 19.2 μg）。

2.3 供试品溶液的制备取装量差异项下的本品，混匀，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

高效液相色谱测定丹参酮ⅡA含量【原理】利用各组分在两相中的分配系数的不同而获得分离。

【仪器与试剂】1.仪器：液相色谱仪；微量注射器；C18反相色谱柱；棕色瓶（25ml，50ml）；吸量管（2ml）；超神提取器。

2.试剂：甲醇（色谱纯）；蒸馏水。

3.试药：丹参酮ⅡA对照品，单身药材。

【实验内容】色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（73：27）为流动相；检测波长为270 nm，理论塔板数按丹参酮ⅡA峰计算应不低于2000.对照品溶液的制备取丹参酮ⅡA对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含16.25ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品20片，精密称定，研细，精密称定，置具塞棕色瓶中，精密加入甲醇100 ml，密塞，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。

【实验数据及处理】运用外标法定量分析，分别精密量取一定量的对照品和试样，分别进样相同体积的对照品溶液和试样溶液，在完全相同的色谱条件下进行色谱分析，测的峰面积，用下式可以计算出供试品的浓度。

C供/C对=A供/A对 => C供=（A供/A对）*C对20片总重量：0.6025gC对=16.25μg/mlA供=2999.47（mv/sec）A对=1088.09（mv/sec）C供=（A供/A对）*C对=（2999.47/1088.09）*16.25=44.80μg/mlW（%）=（M丹参酮ⅡA/M药材）×100%=（44.80×10-6g/0.6025g）×100%=0.744%20片复方丹参片中含丹参酮ⅡA量：4.48mg。

每片含丹参酮ⅡA量：0.224mg。

丹参酮ⅡA磺酸钠含量测定【摘要】目的建立丹参酮ⅡA磺酸钠原料药含量测定方法。

方法采用高效液相色谱法,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以0.2%磷酸二氢钾溶液(用1.5 mol/L磷酸调节pH值至3.0)-甲醇(80∶20)为流动相;检测波长为271 nm;流速为1.0 ml/min;柱温为室温。

结果丹参酮ⅡA磺酸钠浓度在25.68～205.4μg/ml时,方法线性关系良好(r=0.999 9,n=5),进样精密度RSD为0.13%(n=5)。

结论此法简单,结果准确可靠,可用于丹参酮ⅡA磺酸钠原料药的质量控制。

【Abstract】Objective To determine sulfotanshinone sodium in bulk drug.Methods HPLC was adopted,The column was Cl8,the detection wavelength was 271 nm and the flow rate was 1 ml/min.The chromatography was conducted at room temperature. Results There was a good linear relationship within25.68-205.4 μg/ml (r=0.9999 n=5).The RSD was 0.13%(n=5).Conclusion The method proposed for content determination of sulfotanshinone sodium andby HPLC is simple,accurate and can be used in quality control of sulfotanshinone sodium.【Key words】Sulfotanshinone sodium;HPLC;Content determination1 丹参酮ⅡA磺酸钠含量测定丹参酮ⅡA磺酸钠是从丹参中分离的丹参酮ⅡA经磺化而得[1]。

高效液相色谱法测定二甲散结胶囊中丹参酮ⅡA含量唐道生【摘要】目的：建立测定二甲散结胶囊中丹参酮ⅡA含量的高效液相色谱( HPLC )法。

方法采用Shim－pack VP－ODS C18柱(150 mm ×4.6 mm，5μm )，甲醇－水（75：25）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为270 nm。

结果丹参酮ⅡA质量浓度在2.472~49.44μg/mL范围内与峰面积积分值线性关系良好（ r=0.9997），平均回收率为98.15%，RSD=1.34%（ n=6）。

结论该方法准确、简便，重复性和稳定性良好，适用于二甲散结胶囊的含量测定。

%Objective To establish an HPLC method for the determination of Tanshinone ⅡA in Erjiasanjie Capsules. Methods The chromatographic system consisted of Shim-pack VP-ODS C18 column(150 mm × 4. 6 mm,5 μm),using methano l-water(75 :25) as mobile phase. The content was detected at a wavelength of 270 nm,the flow rate was 1. 0mL/min. Results The Tanshinone ⅡA have a good tincar rolatim in the range of 2. 472-49. 44 μg/mL( r=0. 999 7),the average recovery was 98. 15% and RSD=1. 34%( n=6). Conclusion The established method is accuracy,sensitive and simple. It can be used for quality control of erjiasanjie capsules.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2015(000)022【总页数】2页(P119-120)【关键词】丹参酮ⅡA;二甲散结胶囊;高效液相色谱法;含量测定【作者】唐道生【作者单位】河南省商丘市药品不良反应监测中心，河南商丘 476000【正文语种】中文【中图分类】R285.6;R286.0二甲散结胶囊（豫药制字Z04140061）是由丹参、鳖甲、穿山甲、鸡内金和木香加工制成的医院制剂，具有软坚散结、祛瘀止痛的功效，用于瘕积聚引起的胸脘胀痛、不思饮食诸症。