血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤

输血科疑难交叉配血试验标准操作规程1.目的为规范疑难交叉配血试验操作，保证临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7(2)条款的要求制定本规程。

2.适用范围适用于医疗机构输血科对临床疑难交叉配血受血者，主要是对红细胞ABO血型鉴定困难、红细胞不规则抗体筛选阳性及自身免疫性溶血性贫血(AlHA)患者的交叉配血试验。

3.职责医疗机构输血科技术人员负责疑难交叉配血试验。

4.原理本规程中疑难交叉配血是指受血者ABO血型鉴定困难、红细胞不规则抗体筛选阳性或受血者是自身免疫性溶血性贫血患者等情况下的交叉配血试验。

配血前需确定受血者的ABO血型或红细胞不规则抗体的特异性,选择ABO血型相容的红细胞或红细胞不规则抗体对应抗原阴性的红细胞进行交叉配血试验。

5.所需设备和试剂普通离心机，血型血清学专用离心机，水浴震荡仪，普通显微镜等。

6.检测环境条件室温应控制在18-27°C,湿度应保持30%-70%°7.步骤与方法7.1交叉配血前受血者ABO血型鉴定不确定者执行《ABO疑难血型鉴定标准操作规程》，确定ABO血型后，再选择ABO血型相同或相容的献血者血液进行交叉配血试验。

7.2红细胞不规则抗体筛选阳性时7.2.1随机与库存血中多袋血液进行交叉配血试验，选择交叉配血相合的血液输注。

7.2.2我院库存血中无相合的血液时，应立即联系临床医生说明情况：①上述实际情况；②应送市血液中心进行“疑难配血”，会产生费用，存在配血不成功的可能：③详细告知家属，决定是否送市血液中心。

7.2.3家属同意后，由医生填写“免疫学申请单”，并抽取血样EDTA抗凝血5-10ml,送输血科。

7.2.4输血科联系血液中心，并送血样。

7.3冷型自身抗体或冷型AIHA患者交叉配血试验：执行7.2.2-7.2.4程序8.交叉配血结果判定主侧、次侧交叉配血均无溶血、无凝集，表示配血相合。

对于AlHA患者，已经排除同种抗体的存在，而所有交叉配血又都不相和时，可选择凝集强度弱于自身凝集的血液输注。

稀有血型、不规则抗体阳性及配血不相符等情况的报告程序
为保证临床安全用血、合理用血，制定稀有血型、不规则抗体阳性及配血不相符等情况的报告程序，输血科人员在进行交叉配血实验时，如发生此类情况，应按照以下程序报告。

一、输血科人员在进行交叉配合实验时，应严格按照操作规程，认真完成配血实验，在多人值班时，应由另一人进行复核，确保无误后，方可签字发出血液。

二、对稀有血型的输血，输血科应立即通知用血临床科室，在血液无充足储备情况下，应暂停手术。

输血科人员应上报输血科主任，立刻与市中心血站取得联系，保证血液的供应，对紧急的稀有血型输血，输血科人员应立即上报输血科主任，输血科主任应立即与血站联系，确保急症抢救用血并上报医务科。

三、对不规则抗体阳性及配血不相合等情况，输血科人员应重新做不规则抗体及交叉配合实验并复查血型，必要时更换试剂，重做试验。

如仍然不相符，应上报输血科主任，输血科主任应上报医务科和主管院长。

上述工作制服规范了不规则抗体阳性及配血不相合等情况的报告程序，输血科人员应认真学习掌握，确保临床安全、有效、合理用血。

血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤一.1. 血型鉴定排管并标记患者红细胞悬液管、患者血浆管、患者ABO正定型试管、患者ABO反定型试管、患者RhD定型试管。

2.标本准备分离患者的血浆，取一滴压积红细胞，三次洗涤，制备患者 2%-5%红细胞悬液。

3.加样ABO正定型： 1 滴（ 50ul ）抗 A、抗 B 试剂加 1 滴（ 50ul ）患者红细胞悬液。

ABO反定型： 1 滴（ 50ul ）患者血清加 1 滴（ 50ul ）反定型试剂红细胞。

RhD定型： 1 滴（ 50ul ）抗 D 血清加 1 滴（ 50ul ）患者红细胞悬液。

4.二. 结果判断离心（ 2 档）：轻摇试管，肉眼观察有无凝集，记录ABO、RhD血型结果。

不规则抗体筛查（生理盐水法+凝聚胺法）1.排管标记 01、 02、 03 及自身对照管2. 加样各试管分别加入相应的患者血清 2 滴（ 100ul ）及筛选细胞 1 滴（ 50ul ）。

3.结果观察离心（ 2 档），观察结果先看上清液有无溶血，轻轻混匀，肉眼观察有无凝集，结果判断并记录。

各试管分别加入低离子介质，轻轻混匀（参照试剂说明书）各试管再分别加凝聚胺溶液 2 滴（ 100ul ）混匀，离心先观察上清液有无溶血弃去上清液，留约，轻轻混匀肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）各试管分别加入重悬液 2 滴（ 100ul ），轻轻混匀肉眼观察凝集是否在1min 内消失显微镜检查三. 交叉配血试验（生理盐水法+凝聚胺法）1.标本准备分离供血者血浆与红细胞三次洗涤，制备供血者 2%-5%红细胞悬液2.排管标记排管，主侧、次侧及自身对照管3.加样各试管分别加入相应的备检血清 2 滴（ 100ul ）及 2%-5%备检红细胞悬液 1 滴（ 50ul ）4.结果观察离心（ 2 档），观察结果先看上清液有无溶血轻轻混匀，肉眼观察有无凝集结果判断并记录各试管分别加入低离子介质，轻轻混匀（参照试剂说明书）各试管再分别加凝聚胺溶液 2 滴（ 100ul ）混匀，离心先观察上清液有无溶血弃去上清液，留，轻轻混匀肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）各试管分别加入重悬液 2 滴（ 100ul ），轻轻混匀肉眼观察凝集是否在1min 内消失肉眼观察阴性者，显微镜检查记录交叉配血结果A、 B、O试验红细胞悬液的制备1.分别采取已知A、 B、O 三种血型的红细胞，经盐水洗涤 3 次，以压紧红细胞配成不同浓度的红细胞悬液（见表格）红细胞悬液的配置悬液浓度（ %）压实红细胞（滴）盐水（滴）2 1 （ 40）5 1 （ 16）10 1 （ 8）20 1 （ 4）2.为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取 3 个以上健康成人血液，按A、B、O 型分别混合后，按上法制备。

⾎型鉴定、交叉配⾎操作规程ABO、Rh-D⾎型鉴定操作规程1.⽬的：规范ABO、Rh-D检测的操作过程2. 标本采集：静脉采⾎2ml抗凝⾎,避免溶⾎试剂3. 试剂：长春博讯⽣物技术有限责任公司4.⽅法原理【原理】:标准⾎清中的完全抗体(lgM)抗A、抗B、和抗D能和红细胞表⾯相应的抗原在盐⽔介质中发⽣特异性的凝集反应。

根据红细胞凝聚类型可鉴别出A、B、O、AB四型和RHD阴性或阳性。

5. 操作:⼀、玻⽚法(⼀般只能做正定型)【正定型】:1、取⼀张玻⽚,⽤蜡笔或记号笔将其分为三等份,从左到右每⼀等份左上⾓标明A、B、D,2、对应加⼊抗A和抗B抗D标准⾎清⼀滴;3、分别加PC(患者10—15%红细胞悬液);4、⽤洁净⽵签将试剂和红细胞充分混匀,混合物约2cm2⼤⼩;5、轻轻地连续倾斜转动玻⽚2—5分钟,观察并记录; 【解释】:A端凝集为A型⾎;B端凝集为B型⾎;A、B 端均凝集则为AB型;A、B端均不凝集则为O型;D端凝集则为RH阳性者,⽆凝集则为RH阴性。

备注:玻⽚法可作为ABO⾎型初筛或复检;不适⽤于抗体鉴定和交叉配⾎;不适合检测ABO亚型。

⼆、试管法(盐⽔介质)【原理】:标准的A型和B型红细胞能和受检者⾎清(⾎浆)中相应的抗体发⽣特异性结合,形成⾁眼可见的凝集反应,从⽽可推断出受检者的⾎型。

【材料】:1、标准A型和B型红细胞悬液(浓度4%,商品有售,亦可⾃⾏新鲜配制);2、受试者⾎清或⾎清;3、洁净康⽒试管。

【正定型】:1、取⼆⽀洁净试管分别记上抗A和抗B;2、对应加⼊抗A和抗B⾎清1滴;3、分别加⼊病⼈红细胞悬液1滴(浓度为2%-5%);4、混匀,室温放置5分钟,1000rpm离⼼1分钟,取出观察结果【解释】:轻摇试管,检查是否凝集,抗A、抗B管均凝集,受试者为AB型⾎;抗A、抗B管均不凝集,则为O 型⾎;抗A管凝集则为A型⾎;抗B管凝集则为B型⾎。

【反定型】:1、取⼆⽀试管分别记上AC和BC;2、分别加⼊病⼈⾎清;3、对应加⼊A和B型试剂红细胞;4、混匀室温放置5分钟,1000rpm离⼼1分钟,取出观察结果;【解释】:⾸先检查上清液有⽆溶⾎,然后轻摇试管,检查是否凝集,A、B管均凝集受试者为O型⾎;A、B管均不凝集则为AB型⾎;A管凝集则为B型⾎;B管凝集则为A型⾎。

输血科检验项目详解输血科作为医院中负责血液安全与管理的重要科室，承担着血型鉴定、交叉配血、抗体筛查以及输血相关疾病的检测等多项任务。

随着医学的不断发展，输血科检验项目也日益丰富和完善，为确保临床输血的安全性和有效性提供了有力保障。

本文将详细介绍输血科的主要检验项目及其在临床上的意义。

一、血型鉴定血型鉴定是输血科最基础也是最关键的检验项目之一。

它主要包括ABO血型和Rh 血型鉴定。

1.ABO血型鉴定ABO血型系统是人类最重要的血型系统，根据红细胞表面抗原的不同，将血液分为A型、B型、AB型和O型。

ABO血型鉴定主要采用凝集法，通过检测红细胞与相应抗体的反应来确定血型。

正确的ABO血型鉴定是安全输血的前提。

2.Rh血型鉴定Rh血型系统是继ABO血型系统之后发现的一个重要血型系统。

Rh阳性表示红细胞表面存在Rh抗原，而Rh阴性则表示不存在。

Rh血型不合的输血可能导致严重的输血反应，因此Rh血型鉴定同样具有重要意义。

二、交叉配血交叉配血是在输血前必须进行的检验项目，其目的是确保供血者的血液与受血者的血液相容，避免输血反应的发生。

交叉配血主要包括主侧配血和次侧配血两个步骤。

主侧配血是将供血者的红细胞与受血者的血清进行混合，观察是否发生凝集反应；次侧配血则是将受血者的红细胞与供血者的血清进行混合，同样观察凝集反应。

只有当主侧和次侧配血均不出现凝集反应时，方可进行输血。

三、抗体筛查与鉴定抗体筛查与鉴定是输血科另一项重要的检验项目，主要用于检测血液中是否存在不规则抗体。

不规则抗体是指除ABO血型系统以外的其他血型系统所产生的抗体。

这些抗体的存在可能导致输血反应或溶血性疾病的发生。

通过抗体筛查与鉴定，可以及时发现并处理这些潜在的风险。

四、输血相关疾病检测为确保输血安全，输血科还承担着一系列与输血相关疾病的检测任务。

这些疾病包括乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病、梅毒等传染病，以及血红蛋白病、红细胞酶缺陷等遗传性疾病。

通过这些检测，可以筛选出健康的供血者，降低输血传播疾病的风险。

疑难血型检测及混合配血处理流程血型检测是检测一个人的血液所属血型的过程。

在正常情况下，人类血液可分为ABO血型系统和Rh血型系统。

疑难血型检测是指那些不能明确确定血型的血样，或在一些特殊情况下，涉及到了其他血型系统的血样。

1.血样采集：采集患者的静脉全血样本，注意遵守无菌操作，防止外界污染。

2.ABO血型鉴定：使用特定的抗血清或抗血型抗体来检测血样中存在的A、B抗原和相应的抗体。

3.Rh血型鉴定：使用特定的抗血清来检测血样中的Rh抗原。

4. 常见血型抗原鉴定：除了ABO和Rh血型，还需进行其他常见血型抗原（如Kell抗原、Duffy抗原等）的鉴定。

5.血型交叉试验：将供体血样与受者血样进行交叉配血试验，通过观察混合后的凝集反应和溶解反应来判断血型的相容性。

6.疑惑血型抗原鉴定：对于无法确定血型的情况，需使用特殊试剂来检测特定的血型抗原。

在进行混合配血处理时1.确定血型相容性：根据受者的血型及抗体情况，与供者的血型进行配对，确保不会发生严重的血型不相容反应。

2.交叉配血试验：将受者的血样与供者的血样进行交叉配血试验，观察凝集和溶解反应，确认供者血样与受者血样的相容性。

3.没有完全相容性的情况处理：若受者有多种抗体，导致没有完全相容性的情况，需要根据抗体特异性和滴度来选择相对相容性较好的供者血样。

4.选择最佳供者：根据受者的血型与抗体情况，选择合适的供者血样。

在选择供者时，还需考虑与受者的血数量、组织相容性等因素。

5.监测治疗效果：完成配血后，需要监测受者的治疗效果，包括血红蛋白水平、血小板计数等指标，确保配血的有效性和安全性。

总结起来，疑难血型检测及混合配血处理流程包括血样采集、血型鉴定、交叉配血试验、选择最佳供者和监测治疗效果等步骤。

在进行这些步骤时，需严格遵守操作规范，防止交叉感染和误配等危险。

同时，根据不同的疑难血型情况，可能需要使用特殊试剂和技术来进行鉴定和处理。

血型检测和配血处理的准确性和安全性对于患者的生命和健康至关重要，因此必须由经验丰富的专业人员进行操作。

交叉配血试验（凝聚胺法）标准操作程序【项目名称】交叉配血试验【实验用途】辅助用于交叉配血【实验原理】红细胞表面带有大量的负电荷，以避免其产生自发性聚集，当红细胞悬浮在电解质时，阳离子会被红细胞的负电荷所吸引。

此时红细胞则被扩散的双层离子云所围绕，而形成Zeta电位，Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。

凝聚胺技术首先利用低离子介质溶液，降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体结合。

其后，加入凝聚胺试剂，它是一种高价阳离子多聚物，是肝素中和剂，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性的聚集。

最后，加入重悬液，重悬液具有中和凝聚胺的作用，使正常的红细胞非特异性聚集散开，试验结果为阴性。

【标本种类】被检验者的血液，ABO正反血型Rh（D）血型抽3毫升不抗凝静脉血，交叉配血及不规则抗体抽5毫升不抗凝静脉全血。

血清标本：取静脉血沿管壁慢慢注入干燥试管内，待血液凝固后离心分离血清。

红细胞悬液的配制：用于一般实验，以血型鉴定，配血等的红细胞至少要用大量生理盐水洗一遍，通过洗涤可以去除红细胞表面的下述物质：1、少量血浆蛋白，如纤维蛋白原、抗球蛋白抗体，会干扰特异凝集和中和加入的抗体；2、已溶解红细胞的基质，有竞争抗体的作用；3、可容性的抑制物，如A、B、Chido、lewis等物质；4、抗凝剂，有抗非体作用，如第1次洗后有溶血现象，则要洗第2次，如第2次洗后上清液仍不完全清澈，这种红细胞不亦使用，应弃去。

红细胞悬液常用浓度有2％、5％和10％，配制时应将最后一次洗涤的红细胞水平离心机3000转/分离心，30分钟压积，在不除去上层盐水的情况下，吸取一定量的压积红细胞按体积百分比配成所需浓度的悬液。

实际工作中，可用一般洗涤压积的红细胞1滴加8滴生理盐水，配成的悬液约为10％，按此比例配成其他所需浓度的悬液2％的悬液一般用于滴定抗体效价，5％的悬液常用于血型鉴定或间接抗球蛋白试验，10%的悬液则用于测定抗体的亲合力。

不规则抗体筛查标准操作规程(一)检验目的检测受血者、孕妇等血清中是否存在抗A、抗B以外的不规则抗体，为交叉配血、ABO血型正确定型(不规则抗体干扰反定型)以及新生儿溶血病产前、产后诊断提供参考依据。

(二)检验原理1.盐水介质法IgM类不规则抗体可以在室温盐水介质中发生凝集反应，使用手工试管法就可以判断受检者血液中是否存在IgM类不规则抗体。

2.凝聚胺法利用多聚季胺盐类——凝聚胺携带很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，引起正常红细胞可逆性凝集。

无抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，当加入中和液后，则凝集消散，而被不规则抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，则不能消散，以此来判断受检者血液中是否存在不规则抗体。

3.微柱凝胶法微柱凝胶卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗人球蛋白试剂，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶上端，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。

4.玻璃珠微柱法微柱卡的每一个微管中装填有直径均一的玻璃微珠和抗人球蛋白试剂(抗-IgG和抗补体C3)，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，而未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。

(三)适用范围适用于手工凝聚胺法、手工微柱凝胶法、手工玻璃珠微柱法、全自动微柱凝胶法、全自动玻璃珠微柱法不规则抗体筛查及鉴定试验。

(四)设备性能参数各种用于不规则抗体筛查试验的检测系统性能指标参见相应说明书。

(五)器材与试剂1.器材KA-2200血清学专用离心机、B600-A型低速离心机、WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro Au-toVuelnnova全自动血型配血系统、阅片灯箱、卡式专用离心机、孵育器、塑料软试管、塑料硬质试管(75m m×l2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液器、一次性移液枪头。