柱效检测-Application 28-9372-07 AA

高效液相色谱仪（岛津LC－2010AHT）确认方案（方案编号：zl-08-2013）目录1. 确认方案审批表2.概述3.确认目的4.确认范围5.人员职责6.相关文件7.仪器、仪表校验8.确认计划与进度9. 确认步骤9.1运行确认（OQ）9.2性能确认（PQ）10.偏差处理记录11. 确认结果评定与结论12.再确认项目及检查周期13.确认人员培训14.附件1.确认方案审批起草审核批准2.概述2.1设备基本信息●设备名称：高效液相色谱仪●设备型号：LC-2010AHT●国别：日本●厂名：岛津2.2设备系统描述设备结构：LC-2010AHT是主要由4液低压梯度、自动进样器、柱温箱、UV检测部组成的一体型高效液相色谱仪，外接RID-10A型示差检测器、打印机和稳压电源，各部分的操作均可由工作站或液晶控制面板控制。

●工作原理：LC-2010AHT检测步骤主要包括流路清洗、色谱柱平衡及检测器平衡、样品处理、自动进样程序设定、自动进样、后处理及数据处理等，LC-2010AHT根据不同色谱柱对样品在色谱柱内的保留时间不同，用流动相将样品通过色谱柱洗脱，再通过适合的检测器对洗脱的样品成份进行分析。

●设备用途：低分子量肝素钙及立迈青、小牛血去蛋白提取物及睿保特、干扰素原液、肝素钠和部分原辅料等相关项目的定性、定量分析检验。

2.3设备技术参数2.3.1输液泵方式设定输液泵参数时，请参照以下参数表：[ISO.方式]：[GRAD.方式]2.3.2柱温箱和外围设备设定柱温箱和外围设备的参数时，请参照以下的一览表：2.3.3 UV-VIS检测器设定UV-VIS检测器的参数时，请参照以下的一览表：3.确认目的为确认LC-2010AHT高效液相色谱仪检测数据准确可靠，性能稳定，特制订本确认方案，对LC-2010AHT高效液相色谱仪进行确认。

4.确认范围本方案适用于LC-2010AHT高效液相色谱仪的运行和性能确认。

5.人员职责6.相关文件《中国药典》2010年版二部《中华人民共和国国家计量检定规程液相色谱仪（JJG705-2002）》《高效液相色谱法标准操作规程》《高效液相色谱仪使用维护规程》《高效液相色谱柱使用维护规程》《注射用低分子量肝素钙标准操作规程》《岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪操作说明书》《文件检查记录》见附件一7. 仪器、仪表校验验证前对验证过程中涉及到的仪器仪表等检验仪器进行确认，保证其在有效期内。

GE中低压层析柱柱效测定方法柱效测定是一项经常使用的操作，对于定量表征层析柱的工作状态是否良好，工艺的验证具有重要的意义。

但是实际工作中很多朋友都遇到不会测柱效或者测出来注销过低的状况，不知道如何解决。

所以今天我就给大家详细介绍一下柱效的正确测定方法，以及经常遇到的问题如何解决。

本方法适用于所有GE公司中低压液相色谱的预装柱及自己填装的层析柱。

介绍分为5个部分，测前准备、试剂选择、测柱效操作、测试结果积分、经常发生的问题。

1. 测前准备：⑴ÄKTA层析设备。

要求设备的型号与层析柱大小匹配，从上样阀门到紫外和电导检测器之间的体积要做到最小（管路内径尽量细，管路尽量短），这对于准确测量实验室小层析柱的柱效非常重要。

⑵测试平衡溶液及样品。

这个部分在试剂选择中单独细说。

⑶装填好的层析柱。

使用平衡缓冲液在测柱效的流速下至少平衡1.5 CV（柱体积），平衡方向与测柱效方向必须一致⑷样品环。

容积大于1%柱体积。

2. 试剂选择测柱效主要有两种测试系统：1 NaCl 测试系统；2 丙酮测试系统。

只要操作正确，两个系统测出来的结果是基本一致的。

但是要注意：各试剂的浓度不能随意改变，否则影响测试结果。

⑴NaCl测试系统对于所有种类的柱子和填料，都可以使用氯化钠系统测柱效平衡液： 0.4 M NaCl水溶液样品： 0.8 M NaCl水溶液3. 测柱效操作测柱效全程使用30 cm/h线性流速。

平衡层析柱至少1.5 CV，将1% CV的样品（NaCl或丙酮）注射进入层析柱，使用平衡液冲洗直至电导或紫外280nm出现响应峰。

4. 测试结果积分以UNICORN6版本为例演示给大家看如何操作（各UNICORN版本操作基本一致）。

以NaCl系统测柱效的所有操作针对电导曲线，以丙酮系统测柱效的所有操作针对UV 280曲线（手头没有测柱效结果，所以随便找了一个图，里面有两个峰。

大家测柱效的结果只有一个峰）1) 在Evaluation窗口中打开测柱效结果文件，在Curve窗格中点击右键，选择Customize2) 勾选复选框去掉不需要显示的曲线3)在工具栏中点击峰积分按钮，进行积分处理或者在Integrate下拉菜单中点击Peak Intergrate进行积分处理4) 选择需要积分的曲线以及积分表存储位置，基线类型默认为Calculatebaseline5) 在积分窗口中点击Peak Window，出现以下窗口，通过拖动左右两条直线可以选择需要进行积分的范围，点击OK确认6) 在积分窗口点击Reject Peaks对需要分析的色谱峰可进行高级定义，包括最小峰高、峰宽、峰面积、峰个数等，在这里最常用的是在Peakarea is less than输入需要显示的最大峰的个数，点击OK确定7) 在Column height (bed height)一栏中输入柱床高度，在柱效测定中此项必须填写8) 点击积分窗口中Save and Edit Peak Table按钮，可以对峰进行高级操作9) 点击积分窗口中的OK，查看积分结果10) 在Peak data区域点击右键，选择Customize 在Select peak table columns对话框中找到需要显示的数据， plate height（HETP）、Asymmetry 等，点击OK执行。

HoneywellAnalytics©2004 Honeywell Analytics Issue 1 12/2004 MIDAS-A-001目录1 目录 22 概述 53 产品概述 5 3.1 主机架 6 3.1.1 显示器模块 63.1.2 泵模块 7 3.1.3 传感器暗盒腔 73.2 安装托架底座 73.2.1 安装托架 73.2.2 终端模块 73.3 传感器盒 83.3.1 偏致传感器盒 83.4 机壳 84 默认配置 95 安装95.1 探测器的安装和定位 105.2 机械安装 115.3 样品和排气管道计算 125.4 在线过滤器 135.5 本地化探测器选购件 145.6 电气安装 155.7 电连接 17 5.8 改装主机架 185.9 安装传感器盒 196 探测器启动程序 197 总体操作 21 7.1 正常操作模式 217.1.1 重置报警、故障和维护故障 227.2 浏览模式 227.2.1 浏览模式菜单概述 237.3 设置、校准和测试模式概述 247.3.1 设置菜单概述 247.3.2 校准菜单概述‘CAL’ 267.3.3 测试菜单概述‘ tESt’ 278浏览、设置、校准和测试模式子菜单的导向的详细程序 288.1 浏览模式 288.1.1 复查软件‘SW’ 288.1.2 复查报警‘ ALm’ 298.1.3 复查故障‘ FLt’ 298.1.4 复查校准 ‘ CAL’ 298.1.5 复查日期和时间‘timE’ 298.1.6 复查探测器地址‘ nEt’ 308.1.7 复查事件标识‘ Hi St’ 308.2 设置、校准和测试模式 308.2.1 设置菜单‘ SEt’ 318.2.2 设置报警‘ ALm’ 318.2.3 设置故障‘ FLt’ 348.2.4 设置校准间距 ‘ CAL’ 348.2.5 设置日期和时间 ‘timE’ 558.2.6 设置地址‘ nEt’ 358.2.7 设置密码 ‘ PWd’ 368.3 校准菜单‘CAL’ 368.3.1 零点校准 ‘ 0CAL’ 368.3.2 间距校准‘ SPAn’ 378.3.3 流量校准‘ FLoW’ 388.3.4 mA 校准 ‘mA 4-20’ 388.4 测试菜单‘ tESt’ 398.4.1 颠簸测试 ‘ bUmP’ 398.4.2 报警/故障测试‘ Si m’ 398.4.3 禁止状态‘ I nH’ 409 常规维护 41 9.1 传感器盒的更换 419.1.1 传感器盒的安装/更换 419.2 泵的更换 43 9.3 重新组装探测器 469.4 过滤器的更换 4610 热解器模块选项 4710.1 安装热解器模块 4810.2 重新组装MIDAS® 探测器 4911 模拟输出模块 51 11.1 安装模拟模块 5111.2 重新组装MIDAS® 探测器 5212 找出故障并诊断 5313 REFLEX®ٛ5414 内置的网络服务器 5414.1 物理的网络组件 5414.2 网络设置 5414.3 运行网络浏览器 5415 典型安装拓扑 5615.1 常规安装 57 15.2 Modbus/TCP 安装 5715.3 通过以太网供电(POE) 的安装 5716 订购信息 58 16.1 MIDAS® 发送器 5816.2 MIDAS®热解器 5816.2 MIDAS® 热解器 5816.3 MIDAS® 模拟输出模块5816.4 MIDAS®插入式传感器盒（标准保修期） 5916.5 MIDAS®插入式传感器盒（延长保修期）6016.6 完整的MIDAS®气体探测器套件 6116.7 附件及备件 6117 一般规格 6218 校准及颠簸测试 6319 保证声明6720 软件菜单叙述图表 6920.1 高级6920.2 浏览模式7020.3 复查软件的信息、报警、故障及气体校准7120.4 复查日期/时间和网络7220.5 复查事件日志7320.6 设置模式7420.7 设置报警、故障及气体校准 7520.8 设置日期/时间和网络7620.9 设置密码7720.10 校准模式7820.11 校准气体零点及间距7920.12 校准——流量校准 8020.13 校准——4-20 mA 8120.14 测试模式8220.15 测试颠簸、报警/故障模拟 8320.16 测试禁止8421 联系详情 852 概述作为一个提取式气体取样系统，MIDAS气体探测器能在本地或从一个远程点提取一个样品到位于探测器机架内的传感器盒。

柱效测定是一项经常使用的操作，对于定量表征层析柱的工作状态是否良好，工艺的验证具有重要的意义。

但是实际工作中很多朋友都遇到不会测柱效或者测出来注销过低的状况，不知道如何解决。

所以今天我就给大家详细介绍一下柱效的正确测定方法，以及经常遇到的问题如何解决。

本方法适用于所有GE公司中低压液相色谱的预装柱及自己填装的层析柱。

介绍分为5个部分，测前准备、试剂选择、测柱效操作、测试结果积分、经常发生的问题。

1. 测前准备：⑴ÄKTA层析设备。

要求设备的型号与层析柱大小匹配，从上样阀门到紫外和电导检测器之间的体积要做到最小（管路内径尽量细，管路尽量短），这对于准确测量实验室小层析柱的柱效非常重要。

⑵测试平衡溶液及样品。

这个部分在试剂选择中单独细说。

⑶装填好的层析柱。

使用平衡缓冲液在测柱效的流速下至少平衡1.5 CV（柱体积），平衡方向与测柱效方向必须一致⑷样品环。

容积大于1%柱体积。

2. 试剂选择测柱效主要有两种测试系统：1 NaCl 测试系统；2 丙酮测试系统。

只要操作正确，两个系统测出来的结果是基本一致的。

但是要注意：各试剂的浓度不能随意改变，否则影响测试结果。

⑴NaCl测试系统对于所有种类的柱子和填料，都可以使用氯化钠系统测柱效平衡液：0.4 MNaCl水溶液样品：0.8 M NaCl水溶液⑵丙酮测试系统对于亲和、离子交换和凝胶过滤技术的层析柱和填料平衡液：水样品：1%丙酮的水溶液对于反相和疏水层析柱和填料平衡液：20%乙醇样品：1%丙酮溶于20%乙醇3. 测柱效操作测柱效全程使用30 cm/h线性流速。

平衡层析柱至少1.5 CV，将1% CV的样品（NaCl或丙酮）注射进入层析柱，使用平衡液冲洗直至电导或紫外280nm出现响应峰。

4. 测试结果积分以UNICORN6版本为例演示给大家看如何操作（各UNICORN版本操作基本一致）。

以NaCl系统测柱效的所有操作针对电导曲线，以丙酮系统测柱效的所有操作针对UV 280曲线（手头没有测柱效结果，所以随便找了一个图，里面有两个峰。

气相色谱填充柱的柱效测定一、 实验目的1． 了解气相色谱仪的基本结构和工作原理2． 学习气相色谱仪的使用3． 学习、掌握色谱柱的柱效测定方法二、 基本原理色谱柱的柱效能是色谱柱的一项重要指标，可用于考察色谱柱的制备工艺操作水平以及估计该柱对试样分离的可能性。

在一定色谱条件下，色谱柱的柱效可用有效塔板数n 有效及有效塔板高度h 有效来表示。

塔板数越多，塔板高度越小，色谱柱的分离效能越好。

有效塔板数及有效塔板高度的计算公式如下：2'221')(16)(54.5Y t Y t n R R ==有效 有效有效n L h =M R R t t t -='式中：R t 为组分的保留时间。

'Rt 为组分的调整保留时间。

M t 为空气的保留时间（死时间）。

Y 1/2为色谱峰的半峰宽度。

Y 为色谱峰的峰底宽度。

L 为色谱柱的长度。

由于不同组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，因而同一色谱柱对不同组分的柱效也不相同，所以在报告n 有效时，应注明对何种组分而言。

三、 仪器和试剂1． 气相色谱仪（热导检测器）2． 填充色谱柱（固定相：SE-30；担体：硅烷化白色担体；柱内径：3mm ；柱长：2m ）3． FJ-2000色谱工作站4． 微量进样器：50μl5． 注射器：2ml6． 载气：氮气7． 试剂：正己烷、正庚烷、正辛烷均为分析纯（体积比1:1:1）四、 实验步骤1． 开启仪器，设定实验操作条件。

按气相色谱仪器操作步骤开启仪器。

设定柱温为80℃，汽化室温度为150℃，检测器温度为110℃，载气流量为10-15ml/min 。

2． 开启色谱工作站，进入数据采集系统。

按照色谱工作站操作步骤开启计算机，进入色谱工作站，监视基线，待仪器上的电路和气路系统达到平衡，基线平直时，即可进样，同时记录数据文件名。

3． 测定试样的保留时间R t 。

用微量进样器吸取3μl试液进样，记录试样色谱图文件名。

色谱柱在HPLC中是非常关键的部件。

一台色谱仪如果没有色谱柱几乎什么工作也做不了。

色谱柱是消耗品，有一定寿命，使用中也非常容易出问题。

普通的正相反相色谱柱使用得当可用一、两年。

使用不得当用两、三个月就可能损坏。

所以使用中应该非常注意。

1.在使用一根新的色谱柱之前，一定要看柱说明书，将柱子的使用压力、pH值、温度范围和所用流动相种类都要弄清楚。

接触最多的是C18色谱柱，它对试剂应用的范围非常广，甲醇、水、乙腈、四氢呋喃、三氯甲烷、正乙烷、各种缓冲盐都适用。

但其他的色谱柱所使用的试剂就有一定的要求，有的色谱柱只能使用水，不能使用有机试剂，有的色谱柱只能使用有机试剂，而且使用指定是某一种，象GPC色谱柱。

这些事情一定搞清楚，如果流动相使用不对，柱子很快会损坏。

另外在更换柱子时不能让不能使用的流动相进入柱子。

2.柱子是有方向的，柱子上箭头的方向就是流动相流动的方向。

当换新柱子时，不要马上就接到检测器上使用。

将柱子入口处接在进样器的出口，柱子出口处（即箭头的一端）先不接检测器，按箭头方向垂直朝上，用流动相（甲醇）以1ml/min的流速冲洗1min左右。

将柱子里的小气泡全部赶走以后再接到检测器上，否则小气泡跑到检测池里，就很难赶走，检测器产生噪声信号，基线也就走不好。

3.关于压力对色谱柱的影响：常用的正反两相色谱柱一般耐压在12～20MPa之间，生产厂家不同，耐压也不同，从理论上讲耐压高的色谱柱柱效就高，但柱效高低不仅与耐压的高低有关，还有其他因素。

从使用中看，在保证柱效的同时，耐压不要太高，仪器所显示的压力是流路、混合器、自动进样器、柱压、流通池总体的压力，检查柱压力应分段检查。

压力过高不仅柱子受不了，其他的部件也会出问题，例如自动进样器。

4.色谱柱对pH值是有一定的使用范围。

以硅胶为担体的柱子一般使用范围在2～7pH。

耐碱性能不太好，流动相的pH大于8会使硅胶溶解。

有些分析条件须用碱性流动相，这时一定要选耐碱性好的色谱柱，流动相的PH值过高或过低，流动相使用纯水，使用高浓度磷酸盐缓冲溶液，使用离子对试剂等，均可能造成色谱柱填料被化学破坏，这种对色谱柱固定相及键合相的破坏通常是不可修复的。

氨基甲酸酯TW-PCD2000柱后衍生设备检测方案书介绍农残检测方法主要有液相色谱法、光谱法、气质联用等，其中柱后衍生的高效液相法方法简单、可靠、灵敏度高。

泰特仪器衍生系统引进国外先进的温度控制技术和关键的控制元器件，各项性能均能达到国外同类型仪器的指标，完全可以满足农业部相关标准的要求。

且性能价格比远优于进口产品。

柱后衍生原理背景氨基甲酸酯类农药由于高效、经济而被广泛应用于蔬菜水果种植过程，但会对生态环境造成严重污染，并引发中毒。

2004 年发布的我国农业标准NY/T 761 中，柱分离后在线水解生成的甲胺进行荧光衍生的检测方法作为蔬菜和水果中氨基甲酸酯类农药多残留检测方法被采纳。

N-氨基甲酸酯类化合物经反相色谱法分离，柱后在碱的条件下水分解生成甲胺。

生成的甲胺与一级胺的荧光衍生化试剂O-苯二甲醛（OPA）反应，进行较高灵敏度的荧光检测。

氨基甲酸酯的一般结构是N-甲基取代氨基甲酸酯，有不同的成酯基团。

结构分子式如图图中的10 种氨基甲酸酯的分离可用5μm C18 柱温恒定、以水/甲醇梯度洗脱。

其出峰顺序根据其相对的疏水性。

氨基甲酸酯（methiocarb）疏水性最强，最后被洗脱出来。

分析过程：氨基甲酸酯首先被NaOH溶液在100℃水解形成醇、碳酸盐、和甲胺。

第二次反应中甲胺与邻苯二甲醛（OPA）和亲和试剂Thiofluor TM试剂反应形成一种高荧光的衍生物。

注意：1-萘酚不需要衍生也有荧光，胺甲萘水解后衍生也生成1-萘酚，但是两者具有不同的保留时间。

这一特点可被用于故障诊断。

基本样品制备下面是对蔬菜和水样品的制备。

更多的细节请参看EPA531.2 对饮用水的检测，AOAC 对蔬菜的检测。

对蔬菜样品的检测用已睛提取氨基甲酸酯，用甲醇重新溶解，用0.45μm 滤膜过滤对水样品的检测采样标准EPA 采用标准1 加1.8mL ClorAC 缓冲液到60mL 样品瓶（井水和河水见注释）2 如果样品被氯化，每60ml 样品加入5mg 硫代硫酸钠。

PART C 酶工程实验实验十六 层析柱装填及柱效测定一、实验目的和内容目的：1. 掌握凝胶过滤层析的原理，掌握凝胶柱柱效测定方法；2. 熟悉凝胶层析的一般过程；3. 了解凝胶介质的选择原则和应用领域。

内容：1. Sephadex G-50凝胶柱的装填；2. 凝胶柱柱效测定；3．凝胶再生的方法。

二、实验仪器和试剂1. 实验仪器层析柱（1×40 cm），砝码天平，玻璃棒， 分部收集器，核酸蛋白质检测仪，记录仪，滴头吸管2. 实验材料和试剂Sephadex G-50，0.02mol/L pH8.0的PBS缓冲液，5％丙酮（PBS缓冲液作为溶剂）三、实验步骤清洗层析柱测定层析柱的内径、高度，计算所需凝胶的体积根据Sephadex G-50的膨胀体积，计算所需干凝胶的质量称取相应质量的干凝胶，加入其总吸液量10倍的0.02 mol/L PBS在100℃水浴中加热溶胀1小时以上，溶胀之后将极细的小颗粒倾泻出去用真空干燥器抽尽凝胶中空气，并将凝胶上面过多的溶液倾出关闭层析柱出水口，向柱管内加入约1/4柱容积的洗脱液（重复使用的填料，从此步开始）边搅拌，边将薄浆状的凝胶液连续倾入柱中，使其自然沉降等凝胶沉降约2-3cm后，打开柱的出口，调节合适的流速，使凝胶继续沉积待沉积的胶面上升到离柱的顶端约5cm处时停止装柱，关闭出水口通过2-3倍柱床体积的洗脱液使柱床稳定(流速0.5～1 mL/min)始终保护凝胶上端有一段液体准备好恒流泵、分部收集器、核酸蛋白检测仪及记录仪打开柱上端的螺丝帽塞子，吸出层析柱中多余液体直至与胶面相切沿管壁将5%丙酮溶液0.6 mL小心加到凝胶床面上，应避免将床面凝胶冲起 （参考完成时间11：30）打开下口夹子，使样品溶液流入柱内，同时收集流出液，当样品溶液流至与胶面相切时，夹紧下口夹子按加样操作，用1 mL洗脱液冲洗管壁2次加入3－4 mL洗脱液于凝胶上，旋紧上口螺丝帽将层析柱进水口连通恒流泵，柱出水口与核酸蛋白质检测仪比色池进液口相连，比色池出液口再与自动部分收集器相连，用两根导线将检测仪与记录仪连接起来，设置好基线的位置洗脱时，打开上、下进出口夹子，用0.02mol/L pH8.0的PBS，以0.5～1 mL/min流速洗脱，记录t(记录仪纸速设为12cm/h，电压200mv；核酸蛋白监测r仪检测波长254nm，灵敏度为0.1A)， 计算单位高度的柱效 （参考完成时间16：00）柱效计算公式：N = 5.54•［θr /( W1/2)］2其中，θr为平均洗脱时间，W1/2为半峰宽。

高效液相色谱柱柱效测定一、实验目的1．了解高效液相色谱仪的基本结构和工作原理2．学习高效液相色谱仪的使用3．学习、掌握液相色谱柱柱效测定方法二、基本原理高效液相色谱法是以液体作为流动相的一种色谱分析法，它亦是根据不同组分在流动相和固定相之间的分配系数的差异来对混合物进行分离的。

气相色谱中评价色谱柱柱效的方法及计算理论塔板数的公式同样适合于高效液相色谱，即：222/11654.5⎪⎭⎫ ⎝⎛=⎪⎪⎭⎫ ⎝⎛=Y t Y t n R R 式中：t R 为组分的保留时间Y 1/2为色谱峰的半峰宽度Y 为色谱峰的峰底宽度三、仪器和试剂1．仪器1：高效液相色谱仪（紫外检测器）2．仪器2：高效液相色谱仪（紫外检测器）3．50μl 微量进样器4．试剂：苯、萘、联苯、甲醇均为分析纯；纯水为重蒸的去离子水。

配制成含苯、萘、联苯各30μl/ml 的甲醇溶液。

四、实验条件1．色谱柱1长15cm ，内径 4.6mm ，装填10μm 的C-18烷基键合固定相2．色谱柱2长15cm ，内径 4.6mm ，装填5μm 的C-18烷基键合固定相3．流动相 甲醇:水（85:15），流量0.8ml/min4．紫外光度检测器 波长254nm ，灵敏度0.085．进样量 5μl五、实验步骤1．根据实验条件和实验录像指导，按KLC321仪器操作步骤将仪器调节至进样状态，待仪器流路及电路系统达到平衡，色谱工作站之“采样系统”基线平直时，即可进样。

2．吸取5μl 苯、萘、联苯的甲醇溶液进样，并用色谱工作站记录色谱数据，同时记录色谱数据文件名。

3．用色谱工作站之“数据处理”系统处理数据文件并记录所需数据。

4. 在仪器上测定色谱柱2的塔板数，打印色谱图并比较色谱柱柱效差异。

六、数据记录及处理1．记录实验条件。

（1）色谱柱与固定相（2）流动相及其流量、柱前压（3）检测器及其灵敏度（4）进样量2．记录色谱峰的保留时间t R 和相应色谱峰的半峰宽Y 1/2。

DB—1MS气相色谱柱法测定面包和糕点中的甜蜜素摘要：建立一种运用ＤＢ－１ＭＳ毛细管色谱柱测定面包和糕点中甜蜜素的分析方法。

甜蜜素和ＮａＮＯ２在Ｈ２ＳＯ４酸性条件下生成环己基亚硝酸酯，运用ＤＢ－１ＭＳ毛细管色谱柱进行测定。

在１．０～５０μｇ／ｍＬ线性范围内，衍生化后标准曲线的重现性较好，相关系数为０．９９９９。

当添加浓度为０．０６ｇ／ｋｇ时，方法回收率为８８．５％～１０８．３％；分流比为５∶１时，方法检出限为１０．８ｍｇ／ｋｇ。

本法灵敏度高，方便快速，具有良好的回收率和方法检出限，适用于面包、糕点中甜蜜素的检测分析。

关键词：ＤＢ－１ＭＳ毛细管色谱柱；甜蜜素；重现性甜蜜素（环己基氨基磺酸钠）是一种人工合成的非营养型食品甜味剂，广泛应用于蜜饯、酿造等各种食品。

我国对食品中甜蜜素有严格的限量标准，面包和糕点中的限量均为０．６５ｇ／ｋｇ（以环己基氨基磺酸计）［１］，美国、加拿大、欧盟和日本等国家则禁止使用甜蜜素作为食品添加剂［２］。

ＧＢ／Ｔ５００９．９７－２００３推荐糕点中甜蜜素测定采用薄层层析法进行分析。

事实上，由于薄层色谱法的繁琐、费时以及试剂有毒等因素，正逐渐被气相色谱法所取代。

目前已有不少文献相继报道了对上述国标方法的探讨和改进［３－６］。

除改进前处理方法外，气相色谱条件的优化也是研究热门之一。

在ＧＢ／Ｔ５００９．９７－２００３中，气相色谱法推荐使用的２ｍＵ型不锈钢柱，也正逐渐被高灵敏度和低流失的毛细管色谱柱代替［７，８］。

但是目前较多使用的毛细管色谱柱为弱极性，如ＨＰ－５［８，９］、ＤＢ－１７０１［４］，中等极性，如ＤＢ－３５［１０］和极性ＤＢ－ＦＦＡＰ［１１］等色谱柱，另有报道使用ＤＢ－１色谱柱对葡萄酒中的甜蜜素进行测定［１２］。

本试验采用ＤＢ－１ＭＳ非极性毛细管色谱柱对面包和糕点中甜蜜素的含量进行了分析，以期为准确定量分析甜味剂提供有效的检测方法。

１材料与方法１．１仪器与试剂气相色谱仪Ａｇｉｌｅｎｔ７８９０Ａ，ＦＩＤ检测器，离心机。

美国药典色谱柱型号对照下面是USP规定的编号所对应的色谱柱类型。

L1：十八烷基键合多孔硅胶或无机氧化物微粒固定相，简称ODS柱L2：30～50mm表面多孔薄壳型键合十八烷基固定相，简称C18柱L3：多孔硅胶微粒，即一般的硅胶柱L4：30～50mm表面多孔薄壳型硅胶柱L5：30～50mm表面多孔薄壳型氧化铝柱L6：30～50mm实心微球表面包覆磺化碳氟聚合物，强阳离子交换柱L7：全多孔硅胶微粒键合C8官能团固定相，简称C8柱L8：全多孔硅胶微粒键合非交联NH2固定相，简称NH2柱L9：强酸性阳离子交换基团键合全多孔不规则形硅胶固定相，即SCX柱L10：多孔硅胶微球键合氰基固定相（CN），简称CN柱L11：键合苯基多孔硅胶微球固定相，简称苯基柱L12：无孔微球键合季胺功能团的强阴离子交换柱L13：三乙基硅烷化学键合全多孔硅胶微球固定相（C1），简称C1柱L14：10mm硅胶化学键合强碱性季铵盐阴离子交换固定相，简称SAX柱L15：已基硅烷化学键合全多孔硅胶微球固定相，简称C6柱L16：二甲基硅烷化学键合全多孔硅胶微粒固定相 C2柱L17：氢型磺化交联苯乙烯-二乙烯基苯共聚物,强阳离子交换柱L18：3～10mm全多孔硅胶化学键合胺基（NH2）和氰基（CN）柱L19：钙型磺化交联苯乙烯－二乙烯基苯共聚物，强阳离子交换柱L20：二羟基丙烷基化学键合多孔硅胶微球固定相（Diol），简称二醇基柱L21：刚性苯乙烯－二乙烯基苯共聚物微球填料柱L22：带有磺酸基团的多孔苯乙烯阳离子交换柱L23：带有季胺基团的聚甲基丙烯酸甲酯或聚丙烯酸酯多孔离子交换柱L24：表面含有大量羟基的半刚性聚乙烯醇亲水凝胶柱L25：聚甲基丙烯酸酯树脂交联羟基醚（表面含有残余羧基功能团）树脂。

能分离分子量100～5000MW范围的水溶性中性、阳离子型及阴离子型聚合物（用聚氧乙烯测定）的固定相L26：丁基硅烷化学键合全多孔硅胶微球固定相，即C4柱L27：30～50mm的全多孔硅胶微粒L28：多功能载体，100Å的高纯硅胶加以氨基键合以及C8反相键合的官能团L29:氧化铝,反相键合,含碳量低,氧化铝基聚丁二稀小球,5mm，孔径80ÅL30:全多孔硅胶键合乙基硅烷固定相L31:季胺基改性孔径2000Å的交联苯乙烯和二乙烯基苯(55%)强阴离子交换树脂L32: L-脯氨酸铜配合物共价键合于不规则形硅胶微粒的配位体的交换手性色谱填料L33:能够分离分子量4000～40000MW范围蛋白质分子的球形硅胶固定相, pH稳定性好L34：铅型磺化交联苯乙烯－二乙烯基苯共聚物强阳离子交换树脂，9mm球形L35：锆稳定的硅胶微球键合二醇基亲水分子单层固定相，孔径150ÅL36:5mm胺丙基硅胶键合L-苯基氨基乙酸－3,5二硝基苯甲酰L37：适合分离分子量2000～40000MW的聚甲基丙烯酸酯凝胶L38：水溶性甲基丙烯酸酯基质SEC色谱柱L39：亲水全多孔聚羟基甲基丙烯酸酯色谱柱L40：Tris 3,5－二甲基苯基氨基甲酸酯纤维素涂覆多孔硅胶微球L41：球形硅胶表面固定α1酸糖蛋白固定相L42: C8和C18硅烷化学键合多孔硅胶固定相L43:硅胶微球键合五氟代苯基固定相L44:多功能固定相,60 Å高纯硅胶基质键合磺酸阳离子交换功能团和C8反相功能团L45: β-环糊精键合多孔硅胶微球L46:季胺基改性苯乙烯-二乙烯基苯聚合物微球L1 Octadecyl silane chemically bonded to porous silica or ceramic. L1 十八烷基键合硅烷化学键合于多孔硅胶或陶瓷微粒，3-10u。