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蛋白质实验技术模块教案一、教学内容：1、蛋白质分离纯化与分析：每2人一组，共18—19组×2,每组5d,5×9=45学时×2。
2、DNA的制备与分析：每2 人一组,共18~19组×2班,每组2d,2×9×2=36学时。
二、具体内容：cytc分离一天。
生物大分子制备的原理2学时。
PAGE,PI—PAGE,SDS—PAGE原理2学时。
Sephadex G100等层析原理2学时。
分离物的Sephadex G100纯化,1.5d。
分离,纯化过程中所获阶段样品的SDS—PAGE跟踪及分度分析,1.5d。
纯化物的进一步分析的设想,2学时。
DNA分离纯化原理及注意事项,2学时。
兔肝DNA的分离纯化,1d。
DNA的理化性质分析，7学时。
三、教学目的:1、模拟生化大分子制备的全过程开展较为系统性的训练。
2、掌握现代仪器在生化样品制备与分析中的应用及其原理。
3、掌握两类生物大分子分离纯化,理化性质分析的基本原理及注意事项。
四、cytc的分离：（一）实验方法步骤见教学讲义P21。
（二）各步骤的基本目的与要求：取材——猪心，要求新鲜，cytc未被破坏，含cytc高，材料易得。
加等量0.145mol/l TCA，使cytc从线粒体膜上解聚下来，使呈酸性可溶状态。
过滤——去杂质。
调PH至7.3——以利于（NH4）2SO4沉淀去杂蛋白，缓慢添加。
第二次加（NH4）2SO4的作用是进一步去除杂蛋白，缓慢添加。
两次添加（NH4）2SO4后，cytc仍呈可溶性。
静置过中午或至少2h，目的是解水合，使蛋白质凝聚成絮状，以利于通过离心方法去沉淀。
加入20%TCA（25mol/l上清）——沉淀cytc。
透析——去掉酸，去小分子，为上Sephadex G100作准备。
透析要求：低温，不漏，换透析液，用Ba+方法检查透析的效果。
五、离心机：1．类型：实验室用与工业用，间歇式与连续式，冷冻式与不冷冻式，地面式与桌式，普通离心机和高速离心机与超速离心机，制备式与分析式。
第三章样品制备样品制备（sample preparation）是农药残留分析方法的重要部分，它一般包括从样品中提取残留农药、浓缩提取液和去除提取液中干扰性杂质的分离净化等步骤，是将检测样品处理成适合测定的检测溶液的过程。
其目的是使样品经处理后更适合农药残留分析仪器测定的要求，以提高分析的速度、效率、准确度、灵敏度和精密度。
农药残留分析的样品种类多，其化学组成复杂，要使分析仪器能检测到痕量的残留农药，必须对样品进行细致的提取、浓缩和净化处理。
样品制备在农药残留分析中不仅最费时、费力、经济花费大，其效果好坏直接影响到方法的检测限和分析结果的准确性，而且还影响分析仪器的工作寿命。
在提取过程中要求尽量完全地将痕量的残留农药从样品中提取出来，同时又尽量少地提取出干扰性杂质；净化则要求在充分降低干扰分析的杂质的同时，最大限度地减少农药的损失。
很多情况下，当检测样品中农药残留量很低难以检出时，常常通过增大样品量和浓缩检测溶液体积来满足仪器最低检测限的要求。
3.1 样品制备的原理样品制备的原理主要是利用残留农药与样品基质的物理化学特性差异，使其从对检测系统有干扰作用的样品基质中提取分离出来。
化合物的极性和挥发性是指导样品制备最有用的理化特性。
极性主要与化合物的溶解性及两相分配有关，如在进行液液提取(liquid-liquid extraction)、固液提取(solid-liquid extraction)、液固提取(liquid-solid extraction)等操作时就是利用农药的极性这一理化特性。
而挥发性则主要与化合物的气相分布有关，如在进行吹扫捕集提取(purge-and-trap extraction)、顶空提取(headspace extraction)等操作时就是利用农药的挥发特性。
3.1.1 分子的极性和水溶性农药的极性和水溶性（polarity and water solubility）是选择提取和净化条件的重要参考依据，在残留农药的溶剂提取中常采用“相似相溶”原理，就是使用与农药极性相近的溶剂为提取剂，使残留农药在溶剂中达到最大溶解度。
