过氧化物酶染色Washburn法-检验科临检室作业书

过氧化物酶(POX)染色[原理]粒细胞和单核细胞脑浆内含过氧化物酶，能借助受体(联苯胺)脱氢催化过氧化氢而释放新生氧。

受体被氧化成联苯胺蓝。

再与亚硝基铁氰化钠结合成稳定的蓝色颗粒而沉淀于脑浆内。

[试剂]1．联苯胺溶液：联苯胺0．38，加36％亚硝基铁氰化钠溶液1ml，再取95％乙醇加到100ml，水浴加热助溶。

贮于棕色瓶中，可保存数月。

工作时应小心溶液污染皮肤。

2.稀双氧水：临用前将30％双氧水用蒸馏水1：80稀释。

[操作](1)新鲜干燥血片或骨髓片，加联苯胺液5—8滴，使布满整张涂片，固定1—2分钟。

(2)加等量稀双氧水，用吸球吹吸，使两液混匀，作用4—8分钟。

(3)涂片用流水冲洗。

待干后再用瑞氏染液复染，复染时间约30分钟。

[结果观察]可报告阳性程度或阳性细胞％。

阴性：无蓝色颗粒和蓝色物质。

弱阳性：蓝色颗粒量少且细小，相当于(十)。

阳性：‘蓝色颗粒量多，粗细不一。

相当于(++)。

强阳性：细胞充满粗大紧密蓝色颗粒。

相当于(+++）。

[临床意义](1)粒系统细胞除早期原粒细胞阴性外，晚期原粒细胞及以下各阶段细胞均含有不同程度的蓝色颗粒。

嗜酸性粒细胞颗粒更粗大，呈深蓝色。

嗜碱性细胞为阴性。

(2)单核细胞中，除早期原始阶段外，皆呈弱阳性反应，其颗粒细小稀疏。

(3)某些网状细胞及吞噬细胞可呈不同程度的过氧化物酶阳性反应。

(4)所有淋巴细胞过氧化物酶染色皆为阴性。

(5)该化学染色是区别急性淋巴细胞性白血病和急性非淋巴细胞性白血病的关键化学染色。

FAB分型规定前者阳性率＜3％。

编写：谢平制定日期：2011.12.1[附注](1)联苯胺溶液若明显变色发绿，应重新配制。

(2)亚硝基铁氰化钠溶液也可在临用前取0．368溶解于1ml蒸馏水中，加热助溶后应用。

(3)双氧水浓度若过高，则有抑制酶作用。

双氧水浓度太高、制片太厚、涂片冲洗不净以及粒细胞破坏过多，可造成假阳性。

涂片中粒细胞若看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即示双氧水过浓。

ISO15189-2012质量管理体系文件（作业指导书）临检室作业指导书文件编号：TJDX-3-LJ-01~50第C版编制：审核：批准：生效日期：2018年01月01日TJDX附属协和医院检验科目录修订页血红蛋白电泳检查（电泳法）1. 原理血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。

每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。

所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。

所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。

正常人血红蛋白多肽链包括α、β、δ和γ。

血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。

氨基酸不同可形成不同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同。

本实验在碱性（PH=8.60）条件下，以琼脂糖凝胶电泳的方法进行，对红细胞洗涤后造成溶血，电泳分离血红蛋白后以氨基黑染色。

多余的染色液用酸性液体洗去。

待琼脂糖凝胶板干燥后，肉眼可直接判别有无电泳条带异常。

运用光密度扫描仪检测准确定量分析电泳条带异常情况。

血红蛋白异常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。

血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。

2. 标本采集2.1 标本采集前病人准备：受检者应空腹。

2.2 标本种类：抗凝血2.3 标本要求：抗凝剂选用EDTA，柠檬酸或肝素均可，避免碘乙酸。

常规静脉采血1.8ml，加入含有109mmol/L枸橼酸钠溶液0.2ml的干燥。

清洁试管中，充分混匀。

4. 标本储存：储存于2-8℃冰箱中，5天。

5. 标本运输：储存于2-8℃状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。

6. 标本拒收标准：细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。

7. 试剂7.1 试剂名称：血红蛋白电泳检查试剂7.2 试剂生产厂家：法国Sebia公司7.3 包装规格：150tests7.4 试剂盒组成琼脂糖凝胶10块溶血素1瓶缓冲液条带10包×2条薄滤纸1×10张氨基黑（浓缩液）1瓶×100ml 点样模具滤纸10条×1盒7.5 试剂储存条件及有效期：贮存于室温（15～30℃）或冰箱（2～8℃），不能冷冻。

货号：MS1502 规格：100管/96样过氧化物酶(Peroxidase，POD)试剂盒说明书微量法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：POD（EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。

测定原理：POD催化H2O2氧化特定底物，在470nm有特征光吸收。

自备实验用品及仪器：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水试剂的组成：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体×1瓶，4℃保存；用时加入3mL试剂一充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；试剂三：液体3 mL×1瓶，4℃保存。

粗酶液提取：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。

8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至470nm，蒸馏水调零。

2、测定前将试剂一、二和三在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min以上。

470nm下30s时第1页，共3页的吸光值A1和1min30s后的吸光值A2。

计算ΔA＝A2-A1。

注意事项：1、若一次性测定样本较多，可将试剂一、二、三和蒸馏水按比例配成混合液，在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min以上，测定时加入10µL样本和240µL混合液测定。

过氧化物酶染色原理及临床意义全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：过氧化物酶染色是一种常用的组织和细胞染色技术，它是通过过氧化物酶与底物发生氧化反应，产生可见的颜色来标记目标物质或结构。

过氧化物酶是一种氧化还原酶，它可以将氢过氧化物等底物氧化成氧和水，同时还可以将某些受体氧化成可见色素。

过氧化物酶染色的原理是利用此氧化还原反应来实现对目标物质的标记和检测。

过氧化物酶染色在生物学研究和临床诊断中有着广泛的应用。

它可以被用来检测细胞和组织中的特定蛋白质、酶和其他生物分子，从而帮助科研人员和医生了解生物学过程或诊断疾病。

过氧化物酶染色的原理是利用过氧化物酶与底物的氧化还原反应。

过氧化物酶通过其活性位点与底物结合，使得底物的特定氧原子与酶分子中的氧原子结合形成活性羟基，从而将底物氧化成产生可见颜色的产物。

这种氧化还原反应通常是可逆的，并受到PH、温度和底物的影响。

在过氧化物酶染色的过程中，通常会加入底物和显色剂。

底物是过氧化物酶的底物，可以被其氧化生成可见颜色的产物。

而显色剂则是一种可以与底物产生可见颜色反应的化学剂，可以帮助直观地观察染色结果。

过氧化物酶染色在临床诊断中有着重要的应用价值。

它可以用来检测癌细胞、病毒感染、细胞凋亡等重要生物过程，从而帮助医生诊断疾病、监测治疗效果和预测患者的预后。

在肿瘤病理学中，过氧化物酶染色可以用来检测肿瘤标志物，帮助诊断和鉴别肿瘤的类型、分级和预后。

过氧化物酶染色还可以用来研究细胞生物学和分子生物学中的基本问题。

在免疫组织化学中，过氧化物酶染色可以用来检测感兴趣的蛋白质在细胞和组织中的表达情况；在蛋白质定位研究中，可以用来观察蛋白质在细胞内的位置和功能；在细胞信号转导研究中，可以用来鉴别不同信号通路的活性和功能。

过氧化物酶染色是一种简单、快速、敏感和可靠的染色技术，它在生物学研究和临床诊断中都具有广泛的应用价值。

通过此技术，科研人员和医生可以更好地理解生物学过程、诊断和治疗疾病，为医学进步和健康服务做出贡献。

南京森贝伽生物科技有限公司 网址：/第1页 仅供科研版本号：171024过氧化物酶染色液(联苯胺法)【产品组成】【保存条件】4℃,避光 ,6个月【产品概述】过氧化物酶(Peroxidase ，简称POX 或MPO)是由微生物或植物所产生的一类能催化很多反应的以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶氧化还原酶，主要存在于细胞的过氧化物酶体中，以铁卟啉为辅基，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。

过氧化物酶染色液(联苯胺法)是ICSH 推荐采用的POX 染色液，其原理是细胞内的过氧化物酶能将无色的3,3-二氨基联苯胺(DAB)的氢原子传递给过氧化氢，使前者催化成有色染料沉积在细胞质中的POX 所在部位。

该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片过氧化物酶染色,POX 活性部位呈棕黄色。

【使用方法】1、血液、骨髓或细胞涂片滴加预冷的BFA 固定液，4℃固定30～60s ，稍水洗。

2、滴加配制好的POX 孵育液，室温(20～25℃)避光孵育10～15min ，水洗2min 。

3、滴加WG 染色液，孵育30～60s 。

4、直接滴加等量WGbuffer ，染色10～15min 。

5、水洗、晾干、镜检。

【染色结果】粒细胞系除早期原粒细胞阴性外，分化好的原粒细胞以下阶段细胞随细胞成熟而阳性反应增强，衰老中性粒细胞反应程度减弱单核细胞系弱阳性，淋巴细胞系为阴性。

浆细胞及巨核细胞均为阴性。

嗜酸性粒细胞和Auer 小体呈强阳性反应。

阳性反应强度的判断：【临床意义】1、急性粒细胞白血病晚期的原粒细胞呈阳性，颗粒较少且大。

2、急性单核白血病细胞呈阴性或弱阳性，颗粒小且稀疏。

3、单核急性白血病呈阴性或弱阳性。

4、急性早幼粒白血病呈强阳性，某些早幼粒细胞呈阳性，恶性组织细胞呈阴性。

5、急性淋巴细胞白血病呈阴性。

【注意事项】1、血液或骨髓涂片应新鲜，薄厚适宜，及时固定，否则会影响酶的活性。

2、POX孵育液易失效或降低阳性强度，即配即用，不宜久置。

项目名称：碱性磷酸酶染色法检验标本：外周血涂片收费标准： 50元检验方法：细胞化学染色原理：在PH9.5时，底物被白细胞的酶水解，释出磷酸根和芳香萘胺，后者与偶氮盐偶合，形成有色沉淀。

试剂：1.固定液（保存于4℃）冰箱2. 0.05缓冲液（PH9.4~9.6）保存于4℃冰箱3.底物4.二甲基甲酰胺5.固紫B操作步骤：1.血片或髓片放置4C固定液中30秒，流水冲洗，空气晾干2.工作液：（1）用二甲基甲酰胺溶解底物后，倒入缓冲液中（2）再加入固紫B混匀3.把固定后的玻璃片放入工作液中，置37C水温箱45分钟4.流水冲洗5.苏木精复染6.流水洗，晾干7.直接油镜观片结果：酶活动处呈亮红颗粒正常参考值：积分10～100分/100个中性分叶核细胞意义：NAP活性增高见于细菌性感染、类白反应、再障、某些肿瘤、急性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病急性变等。

NAP活性减低见于慢性粒细胞白血病、急性粒细胞白血病、绿色瘤、红白血病、PNH、病毒感染等。

注意事项：1.外周血涂片标本需新鲜，收到标本后需立即用专用固定液固定。

2.试剂需防在4℃冰箱内，临用前拿出，试剂打开后需立即应用，最长不得超过30min。

项目名称：过氧化物酶染色法检验标本：骨髓涂片收费标准：50元检验方法：细胞化学染色检验原理：过氧化物酶在细胞内的颗粒从H2O2中释放出氧，氧化联苯胺，引起在过氧化酶活性处，沉积棕黑色的化合物。

试剂：1.0.3%联苯胺酒精溶液2.H2O2溶液（3%H2O2+蒸馏水5ml）操作步骤：1.骨髓涂片加0.3%联苯胺酒精溶液10-15滴2.一分钟后，加H2O2溶液10-15滴3.五分钟后，流水冲洗4.再用瑞氏染液复染5.水洗，晒干结果：酶活力处呈棕黑色。

意义：急性白血病中可借过氧化物酶染色区蓓别急淋与急非淋。

急淋POX呈阴性反应，FAB分型规定阳性率＜3%。

急非淋呈阳性反应，阳性率≥3%。

注意事项：1.骨髓涂片标本需新鲜，收到标本后需立即染色。

过氧化物酶( Peroxidase , POX ) 染色
联苯胺法
一. 原理: 粒细胞及一部分单核细胞胞浆内的颗粒含有过氧化酶.此酶能将过氧化氢中的氧释放出来,而把联苯胺氧化成氧化联苯胺,后者与亚硝基铁氰化钠结合形成蓝色颗粒,沉着于细胞质中．
二.试剂配制:
1.复方联苯胺（Washburn）染液：联苯胺0.3克，95％乙醇99ml，36％亚硝基铁氰化钠1 ml，此染液可保存10月或更久．
2.过氧化氢溶液：3％过氧化氢1滴，蒸馏水5 ml．此液用时需新鲜配制．
三．染色步骤：
1.于新鲜涂片滴加复方联苯胺染液3～8滴，使之盖满涂片．
2.1～2分钟后加入等量过氧化氢溶液．
3.8～10分钟后用水冲洗．
4.在空气中晾干后直接观察，或用瑞氏染液复染后进行观察．瑞氏染液复染时间为20分钟．
四.注意事项：
3％过氧化氢溶液需保证质量．其稀释液必须应用时新鲜配制．
联苯胺具有致癌性，染色时需加注意．
五．临床意义：
1.正常细胞反应：POX主要存在于粒系细胞中，除早期原粒细胞外，晚期原粒细胞及其后各阶段细胞均呈阳性反应，细胞越成熟，其阳性反应越强．原单细胞为阴性反应，幼稚和成熟单核细胞呈弱阳性反应．淋巴细胞系／巨核细胞系／红细胞系各阶段细胞均呈阴性反应．
2.急性白血病类型鉴别：急性粒细胞白血病时，其原幼细胞多呈阳性反应；急性单核细胞白血病时，其原幼细胞多呈弱阳性或阴性反应；急性淋巴细胞／巨核细胞性白血病时，因原幼细胞多呈阴性反应．。