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药理学简答题&论述题（哈医大考研初试&复试）第一章药理学总论—绪言1.新药的研究过程可分为几个阶段？1）临床前研究2）临床研究3）上市后的药物监测2.临床前研究包括什么？（2011年考过）（2016复试）1）药物化学：（1）制备工艺路线（2）理化性质（3）质量控制标准2）药理学：（1）药效学（研究对象为实验动物）（2）药代动力学（3）毒理学3.新药的临床研究可分为几期每期内容是什么？（2009年考过）（2016面试）内容受试者数量要求Ⅰ初步的药理学及安全性评价试验健康志愿者 20-30Ⅱ随机双盲对照试验病人≥100Ⅲ上市前，试生产期，扩大的多中心临床试验病人≥300Ⅳ新药上市后监测病人≥2000第二章药物代谢动力学4.药物通过细胞膜的方式？（2014年考过）（复试）1）滤过（水溶性扩散）2）简单扩散（脂溶性扩散）3）载体转运：（1）主动转运（2）异化扩散5.载体转运特点？1）选择性2）饱和性3）竞争性6.药物主动转运和被动转运的特点：（2009年考过）主动转运：需要载体和能量逆浓度梯度，有饱和性，有竞争性抑制。
被动转运：不耗能，顺浓度梯度扩散，无饱和性，无竞争性抑制。
7.影响药物通透细胞膜的因素？（以简单扩散为例）（2011年考过）（复试）1）膜面积2）药物的解离度3）体液的PH 4）膜两侧的浓度差5）药物分子的通透系数6）细胞膜的厚度7）载体蛋白的量和功能通透量（单位时间分子数）=（C1- C2）╳（面积╳通透系数/厚度）8.药物的给药途径有哪些？1）口服 2）吸入 3）局部用药 4）舌下给药 5）注射给药9.影响药物在体内分布的因素？（2016复试）1）药物的脂溶度 2）毛细血管通透性 3）器官和组织的血流量 4）与血浆蛋白和组织蛋白结合能力 5）药物的pk a和局部的PH值 6）药物转运载体的数量和功能的状态 7）特殊组织的屏障作用10.体内屏障包括？1）血脑屏障 2）胎盘屏障 3）血眼屏障第三章药物效应动力学11.药物代谢涉及的反应？各个反应包括？（2014年考过）1）Ⅰ相反应：通过引入或脱去功能基团（-OH,-NH2，-SH）使原形药生成极性增高的代谢产物，其多为无活性的，不再产生药理作用，氧化，还原，水解均为Ⅰ相反应。
维拉帕米作用机制
维拉帕米作为一种抗炎剂，主要通过抑制细胞因子的产生来产生抗炎作用。
它通过抑制多种细胞因子的产生，如白介素-2（IL-2），白介素-6（IL-6），肿瘤坏死因子α（TNF-α），白介素-1β（IL-1β），白介素-12（IL-12）和促炎细胞因子（PGE2）等，因此可以抑制炎症反应，减轻慢性炎症状态。
此外，维拉帕米还可以抑制细胞凋亡和抗氧化，从而改善和预防慢性疾病。
此外，维拉帕米还可以改善免疫系统功能，增强机体对病原体的抵抗力，减少患者感染，降低患者出院后死亡率。
此外，维拉帕米具有抗过敏作用，可以抑制致敏物质的活性和细胞因子的释放，降低过敏反应的几率。
ATO（三氧化二砷）的联合用药及新剂型开发一、联合用药（一）协同与增敏作用1.与传统化疗药物的联合1.1硼替佐米（Bor，用于多发性骨髓瘤治疗）王清等ATO联合Bor处理多发性骨髓瘤KM3细胞实验发现，联合用药通过激活caspase-3-8-9机制诱导细胞凋亡，具有协同效应。
葛群芳等用Bor和ATO联合处理多发性骨髓瘤KM3细胞实验发现，在体外ATO可增强Bor对KM3细胞增殖的抑制，增加KM3细胞的凋亡，并且可能通过抑制Bcl-xLmRNA 表达，诱导Caspase-3和BIMmRNA表达的途径增强凋亡作用。
扶云碧等用Bor和ATO联合处理急性髓性白血病HL60细胞发现，联合用药在体内外对HL60细胞增殖抑制与诱导凋亡作用均增强，其机制可能与共同抑制Bcl-2表达及Caspase 信号途径的活化有关，且骨髓抑制作用较轻，毒副作用无明显相加效应。
牛超等用ATO与Bor联合处理多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞发现，Bor可以增加细胞对ATO诱导凋亡的敏感性，可能与Bcl-2表达下调及caspase-3-8-9和PARP蛋白的表达上调有关。
1.2顺铂（CDP，用于多种实体瘤治疗）高洪泉等CDP与ATO联合对体外培养卵巢癌细胞株HO8910细胞实验发现，二者联合能抑制卵巢癌细胞增殖并诱导卵巢癌细胞凋亡。
何景利等ATO联合CDP对人结肠癌细胞株colon26的实验发现，两者联合对colon26细胞增殖的抑制作用和诱导凋亡能力均有增强。
其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达有关。
曹海武等ATO联合ICE方案(异环磷酰胺、CDP、依托泊苷)治疗复发难治非霍奇金淋巴瘤(NHL)的实验发现ATO通过下调细胞周期的重要驱动基因CyclinE和CDK2的表达、上调CDK抑制因子P21基因的表达，阻滞细胞周期于G1期，从而诱导淋巴瘤细胞凋亡。
王志刚等发现ATO联合CDP（CDDP）联合能抑制C6神经胶质瘤细胞体内外的生长，与抑制细胞增殖，调控凋亡及免疫活性有关。
维拉帕米和利血平对A549和H460肺癌侧群细胞的阻断差异机制及意义曹宝山1,贾 军2,任 军2,马 博2,鲁智豪2,邸立军2,宋国红2,方 健2,马力文1T he m echanism and significance of the difference bet w een verapam il and reser p ine to eli m ina te the side popula tion of A549and H460lung cancer cellsC AO Bao-shan1,J I A Jun2,RE N Jun2,MA Bo2,LU Zhi-hao2,D IL i-jun2,S ONG Guo-hong2,F ANGJ ian2,MA L i-wen1 1D epart m ent of O ncology,Peking U niversity Third Hospital,B eijing100083,China;2Internal D epart m ent of O ncology,B eijing CancerHospital,Peking U niversity School of O ncology,B eijing100036,China.【Abstract】 O bjecti ve:T o evaluate the effects of verapa m il or reser p ine on side populati on(SP)fr om A549andH460and exp l ore its mechanis m s.M ean while t o evaluate whether CD133is regarded as a ste m cell marker of lungcancer.M ethods:Side populati on(SP)and non-side populati on(non-SP)cells fr om lung cancer cell lines ofA549and H460were separated by fluorescence-activated cell s orting(F ACS).Verapa m il or reser p ine was used t oinhibit efflux of Hoechst33342by SP cells.Reverse transcri p ti on-poly merase chain reacti on(RT-PCR)was em2p l oyed t o analyze the exp ressi on of ABCG2,MDR1,CD133and G AP DH of SP or non-SP subset fr om A549andH460.Results:Reser p ine was more effective than verapa m il in inhibiting efflux of Hoechst33342by SP cells.A t l owerconcentrati on,the inhibit ors were more effective thr ough p reinhibiti on than coinhibiti on;ABCG2,MDR1and CD133were overexp ressive in SP cells of both A549and H460compared with non-SP cells.Conclusi on:The inhibit ors oftargeting the functi on of ABCG2would be effective t o overcome resistance t o current che motherapeutic drugs.CD133may be a ne w cancer stem cell surface marker of lung cancer.【Key words】side populati on;ATP-binding cassette(ABC)trans porter;C D133;reser p ine;verapa m ilModern Oncol ogy2009,17(01):0008-0012【摘要】 目的:探讨维拉帕米和利血平对肺癌细胞株A549和H460侧群细胞(side populati on,SP)的阻断差异机制及意义,探讨CD133作为肺癌干细胞表面分子标志的可行性。
研究报告Research Report白藜芦醇诱导肺癌A549细胞凋亡刘盛楠邵淑丽*隋文静张伟伟赵彬陈微微齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,齐齐哈尔,161006*通讯作者,shshl32@摘要本实验以人肺腺癌A549细胞为实验对象，白藜芦醇(Res)诱导细胞凋亡的效应及其机制进行了研究。
用不同浓度Res 处理A549细胞48h 后，癌细胞的形态和生物学反应发生了明显的变化。
为了确证这些变化是特征性的细胞凋亡现象，采用MTT 法检验了细胞存活率；光学和荧光显微镜观察了细胞形态结构；流式细胞术分别检测了细胞凋亡率、细胞周期和线粒体膜电位(ΔΨm)；Real Time RT-PCR 和Western blot 测定了Bcl -2/Bax 表达水平。
结果显示，白藜芦醇能够抑制A549细胞生长，并呈剂量依赖性关系，经Res 处理后的A549细胞48h 的最佳药物浓度是30μmol/L ，增殖抑制率为(60.85±0.84)%，显微镜下观察细胞呈明显凋亡现象，细胞凋亡率为(17.44±0.28)%，ΔΨm 显著下降(p <0.01)，使细胞阻滞于G 2期和S 期；下调Bcl -2，使Bax 的表达明显增加，从而导致Bcl -2/Bax 比值显著降低(p <0.01)。
这些结果表明白藜芦醇可能通过调节Bcl -2/Bax 基因的途径，诱导人肺腺癌A549细胞凋亡，并抑制癌细胞的进一步增殖。
关键词凋亡,白藜芦醇,A549细胞,Bcl -2/BaxResveratrol Induces the Apoptosis of Human Lung Cancer A549CellsLiu Shengnan Shao Shuli *Sui Wenjing Zhang Weiwei Zhao Bin Chen WeiweiCollege of Life Sciences and Agriculture and Forestry,Qiqihar University,Qiqihar,161006*Corresponding author,shshl32@ DOI:10.13417/j.gab.034.000685Abstract In order to explore the molecular mechanism for the apoptosis trigged by resveratrol on human lung cancer A549cells,the effects of resveratrol were studied by MTT,light microscope,fluorescence microscope,flow cytometry,Real Time RT-PCR and Western blot.After the A549cells treated with various cencentrations of Res for 48hours,the the mophology of the cells changed clearly.To characterize the changes related to apoptosis,the survive rate of the cell was determined by MTT;the cell structures were observed by light microscope and fluorescence microscope;the apoptotic rate,the cell cycle and the potential (ΔΨm)of mitochondrial membrane were investigated by flow cytometry;the expression levels of Bcl -2/Bax gene were explored by real-time qPCR and western blot.The results showed that the growth of the A549cells was inhibited by Res,and correlated with the dossage.The concentration for the treatment was optimized to 30μmol/L in this study.The inhibition rate was up to (60.85±0.84)%for the proliferation.The apoptotic rate was reached to (17.44±0.28)%under the microscope.The potential of mitochondrial membrane (ΔΨm)decreased heavely,a significant S arrest ocurred with the cell loss of G 1and G 2-M phase.Importantly,the expression levels of Bcl -2decreased and the expression level Bax gene increased,so that the ratio of Bcl -2/Bax declined significantly.These results suggest that resveratrol could induce the apoptosis of cancer cells and inhibit their proliferation on A549cell line by regulating the gene expression of Bcl -2and Bax .Keywords Apoptosis,Resveratrol,A549cells,Bcl -2/Bax基金项目：本研究由黑龙江省教育厅科学技术项目(批准号:11511447、12511611)和黑龙江省自然科学基金(批准号:C200624、C201241)共同资助基因组学与应用生物学，2015年，第34卷，第4期，第685-691页Genomics and Applied Biology,2015,Vol.34,No.4,685-691白藜芦醇(resveratrol,RES)是一种非黄酮类多酚化合物，广泛存在于葡萄属植物中，目前已在70多种植物中被发现。
维拉帕米介导食管癌细胞多药耐药及细胞凋亡的实验研究翁呈韬;张腾跃;刘亚贝;樊高飞;吴旸;范平生【期刊名称】《实用临床医药杂志》【年(卷),期】2017(021)024【摘要】目的探讨维拉帕米提高食管癌化疗药物敏感性及促进细胞凋亡的影响.方法采用CCK-8法检测紫杉醇、顺铂、5-氟尿嘧啶对于4种食管癌细胞系(EC109、EC9706、KYSE-450、TE-1)的IC50值(IC501);用维拉帕米(4.91 μg/mL)联合上述化疗药物处理每种细胞,CCK8法检测维拉帕米联合上述化疗药物针对上述4种食管癌细胞株(EC109,EC9706,KYSE-450和TE-1)IC50值(IC502);以前期实验得出的VER逆转化疗耐药能力差异最为显著的一对食管癌细胞为研究对象,Annexin V-PI 双染法检测食管癌细胞凋亡.结果紫杉醇在KYSE-450和EC9706的IC50值明显大于EC109和TE-1,顺铂在TE-1细胞中IC50值明显小于其他3种细胞,5-氟尿嘧啶在EC109中IC50值明显高于在其他3种细胞.加用维拉帕米后,4种食管癌细胞系(EC109,EC9706,KYSE-450和TE-1)针对紫杉醇、顺铂、5-氟尿嘧啶的IC50值均不同程度下降,提示维拉帕米均不同程度提高了上述3种化疗药物的敏感性.其中,顺铂组未加入维拉帕米前,EC109,EC9706,KYSE-450与TE-1相比,均存在不同程度耐药性,加入维拉帕米后,针对EC9706 IC50值变化倍数较大(15.2倍),提示逆转敏感;针对EC109IC50值变化倍数较小(1.6倍),提示逆转耐受.结论维拉帕米逆转EC9706的阿霉素效率指数最高(15.2倍),与EC109细胞相比有显著性差异(1.6倍).提示EC9706 (DDP)对维拉帕米的逆转敏感,而EC109 (DDP)对维拉帕米的逆转耐受.维拉帕米有可能通过促进细胞调亡途径提高其逆转化疗耐受的能力,从而增强化疗药物敏感性.【总页数】5页(P1-5)【作者】翁呈韬;张腾跃;刘亚贝;樊高飞;吴旸;范平生【作者单位】安徽省肿瘤医院肿瘤内科,安徽合肥,230031;安徽省肿瘤医院肿瘤内科,安徽合肥,230031;安徽省肿瘤医院肿瘤内科,安徽合肥,230031;安徽省肿瘤医院肿瘤内科,安徽合肥,230031;安徽省肿瘤医院肿瘤内科,安徽合肥,230031;安徽省肿瘤医院肿瘤内科,安徽合肥,230031【正文语种】中文【中图分类】R735.1【相关文献】1.三氧化二砷诱导多药耐药肝癌细胞凋亡的实验研究 [J], 王宁;李玉;刘洁;张海波2.膀胱癌细胞凋亡与多药耐药的实验研究 [J], 杨丽红;杨策尧;曹宁生;陈屹3.肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合低剂量顺铂诱导多药耐药人卵巢癌细胞凋亡的实验研究 [J], 张薏;王英红;潘晓琳;赵霞;李洪安;张祖娟;陈继明4.MiR-34a介导mTOR/4E-BPmir信号通路对食管癌细胞凋亡作用机制研究 [J], 程齐尧; 蒋磊; 耿亚迪5.低氧条件下食管癌细胞中PRRX1通过p53介导线粒体通路诱导细胞凋亡的研究[J], 王珍;章恒;张建庆;古丽娜尔·吐尔地因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
维拉帕米和利血平对A549和H460肺癌侧群细胞的阻断差异机制及意义曹宝山1,贾 军2,任 军2,马 博2,鲁智豪2,邸立军2,宋国红2,方 健2,马力文1T h e m e c h a n i s m a n d s i g n i f i c a n c e o f t h e d i f f e r e n c e b e t w e e n v e r a p a m i l a n d r e s e r p i n e t o e l i m i n a t e t h e s i d e p o p u l a t i o n o f A549a n d H460l u n g c a n c e r c e l l sC A O B a o-s h a n1,J I A J u n2,R E N J u n2,M A B o2,L U Z h i-h a o2,D I L i-j u n2,S O N G G u o-h o n g2,F A N G J i a n2,M A L i-w e n1 1D e p a r t m e n t o f O n c o l o g y,P e k i n gU n i v e r s i t yT h i r dH o s p i t a l,B e i j i n g100083,C h i n a;2I n t e r n a l D e p a r t m e n t o f O n c o l o g y,B e i j i n gC a n c e r H o s p i t a l,P e k i n g U n i v e r s i t y S c h o o l o f O n c o l o g y,B e i j i n g100036,C h i n a.【A b s t r a c t】 O b j e c t i v e:T oe v a l u a t et h e e f f e c t s o f v e r a p a m i l o r r e s e r p i n e o ns i d ep o p u l a t i o n(S P)f r o m A549a n dH460a n de x p l o r e i t s m e c h a n i s m s.M e a n w h i l et oe v a l u a t e w h e t h e r C D133i s r e g a r d e da s as t e m c e l l m a r k e r o f l u n gc a n c e r.Me t h od s:S i de p o p u l a t i o n(S P)a n dn o n-s i d e p o p u l a t i o n(n o n-S P)c e l l sf r o m l u ng c a n c e r c e l l l i n e so fA549a n d H460w e r e s e p a r a t e d b y f l u o r e s c e n c e-a c t i v a t e d c e l l s o r t i n g(F A C S).V e r a p a m i l o r r e s e r p i n e w a s u s e dt oi n h i b i t e f f l u x o f H o e c h s t33342b y S Pc e l l s.R e v e r s e t r a n s c r i p t i o n-p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n(R T-P C R)w a s e m-p l o y e d t o a n a l y z e t h e e x p r e s s i o no f A B C G2,M D R1,C D133a n dG A P D H o f S Po r n o n-S Ps u b s e t f r o m A549a n dH460.R e s u l t s:R e s e r p i n e w a s m o r e e f f e c t i v e t h a n v e r a p a m i l i n i n h i b i t i n g e f f l u x o f H o e c h s t33342b y S Pc e l l s.A t l o w e rc o n c e n t r a t i o n,t h ei n h i b i t o r s w e r em o r ee f f e c t i v et h r o u g hp r e i n h i b i t i o nt h a nc o i n h i b i t i o n;A B C G2,M D R1a n dC D133w e r e o v e r e x p r e s s i v e i n S Pc e l l s o f b o t hA549a n dH460c o m p a r e dw i t hn o n-S Pc e l l s.C o n c l u s i o n:T h e i n h i b i t o r s o ft a r g e t i n g t h ef u n c t i o no f A B C G2w o u l db e e f f e c t i v e t o o v e r c o m e r e s i s t a n c et o c u r r e n t c h e m o t h e r a p e u t i c d r u g s.C D133m a y b e a n e wc a n c e r s t e mc e l l s u r f a c e m a r k e r o f l u n g c a n c e r.【K e y w o r d s】s i d e p o p u l a t i o n;A T P-b i n d i n g c a s s e t t e(A B C)t r a n s p o r t e r;C D133;r e s e r p i n e;v e r a p a m i lM o d e r n O n c o l o g y2009,17(01):0008-0012【摘要】 目的:探讨维拉帕米和利血平对肺癌细胞株A549和H460侧群细胞(s i d e p o p u l a t i o n,S P)的阻断差异机制及意义,探讨C D133作为肺癌干细胞表面分子标志的可行性。
方法:应用荧光激活细胞分选方法检测和分选A549和H460中的S P和非S P细胞。
分别应用维拉帕米、利血平作为S P细胞的阻断剂。
应用逆转录聚合酶链反应(R T-P C R)方法检测S P和非S P细胞内A B C G2、M D R-1、C D133的表达情况。
结果:在阻断A549和H460的S P细胞对H o e c h s t33342的外排方面,利血平的阻断效果更好。
阻断剂在低浓度加入并提前给药效果较好。
A549和H460的S P细胞中A B C G2、M D R-1均高表达。
C D133在A549和H460肺癌细胞株的S P内过表达。
结论:针对A B C G2编码蛋白的阻断剂或许可以更好的克服肺癌因A B C转运蛋白产生的S P细胞耐药。
C D133可能被用来作为肺癌干细胞的分子表面标志。
【关键词】侧群细胞;A B C转运蛋白;C D133;利血平;维拉帕米【中图分类号】R730.23;R734.2 【文献标识码】A 【文章编号】1672-4992-(2009)01-0008-05 肿瘤中存在少量具有自我更新和分化潜能的细胞,其在体内更容易导致肿瘤形成,这群细胞即为肿瘤干细胞[1]。
自从1996年G o o d e l l应用S P方法成功分离出造血干细胞以来[2],人们应用S P方法在多种肿瘤中分离出肿瘤干细胞[3]。
【收稿日期】 2008-05-09【修回日期】 2008-11-05【作者单位】 1北京大学第三医院肿瘤治疗中心化疗科,北京 1000832北京大学临床肿瘤学院内科,北京 100036【作者简介】 曹宝山(1976-),男,河北人,主治医师,博士研究生,主要从事肺癌的临床治疗与相关基础研究。
【通讯作者】 任军(1966-),男,内蒙古自治区人,教授,主任医师,博士生导师,主要从事转移复发乳腺癌、肺癌等实体瘤化疗;肝癌生物免疫治疗;干细胞移植以及肿瘤干细胞的基础与临床研究。
该群细胞高表达多种A T P结合盒(A T P-b i n d i n gc a s s e t t e, A B C)转运蛋白,从而导致肿瘤干细胞天然耐药[4]。
近期M a r i a等人应用S P方法,成功的从肺癌细胞株和肺癌组织中分离出S P细胞,并证实其富集了肺癌干细胞[5],其表达多种A B C转运蛋白,导致S P细胞对化疗药物更为抵抗,因此克服肺癌S P细胞耐药成为了肺癌治疗的一个重要问题。
钙离子阻断剂可以阻断S P细胞A B C转运蛋白的功能,因此成为解决肿瘤耐药的主要研究对象。
维拉帕米和利血平是S P分选方法最常用阻断剂。
其对S P细胞的阻断功能受S P细胞A B C转运蛋白表达的影响。
本实验通过应用流式细胞技术,检测A549和H460细胞的S P细胞比例,并分析了维拉帕米和利血平的阻断差异,进一步应用R T-P C R方法检测了常见A B C转运蛋白A B C G2和M D R-1的表达情况,探讨二者逆转肺癌耐药的可行性,并检测了S P细胞中C D133的表达,明确C D133作为肺癌干细胞分子标志的可行性。
·8·M O D E R NO N C O L O G Y,J a n.2009,V O I.17,N O.11 材料和方法1.1 试剂H o e c h s t 33342、碘化吡啶(P I )、利血平、维拉帕米、H E P E S 均为S i g m a -A l d r i c h 公司制剂。
0.5%T r y p s i n -E D T A(G i b c o10×)、T R I z o l 试剂、S u p e r S c r i p t T M I I 逆转录酶H B S S 缓冲盐均为I n v i t r o g e n -l i f e T e c h n o l o g y 公司制剂。
