氯霉素含量及ph值的测定

适应症状
1．伤寒和其他沙门菌属感染：为敏感菌株所致伤寒、副伤寒的选用 药物，由沙门菌属感染的胃肠炎一般不宜应用本品，如病情严重，有 合并败血症可能时仍可选用。
2．耐氨苄西林的B型流感嗜血杆菌脑膜炎或对青霉素过敏患者的肺炎 链球菌、脑膜炎奈瑟菌脑膜炎、敏感的革兰阴性杆菌脑膜炎，本品可 作为选用药物之一。 脑脓肿
试剂：pH标准缓冲溶液（pH=4.00，pH=6.86和pH=9.18），氯霉素 注射液，标准氯霉素
实验步骤
1、PHS-2C型酸度计的组装 1）开机准备 将电源线插入电源插座。按下电源开关，电源接通后，
将仪器预热20~30 min。 2）仪器组装 PHS-2C型酸度计由机体、电极夹、输入端短路插头、
用法用量
稀释后静脉滴注。 成人一日2～3g，分2次给予； 小儿按体重一日25～50mg/kg，分3～4次给予； 新生儿一日不超过25mg/kg，分4次给予。
孕妇及哺乳期妇女用药
由于氯霉素可透过胎盘屏障，对早产儿和足月产新生儿均可能引起毒性反应，发生 “灰婴综合征”，因此在妊娠期，尤其是妊娠末期或分娩期不宜应用本品。
紫外可见分光光度法的定量分析基础是朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律。即物质在一定 浓度 的吸光度与它的吸收介质的厚度呈正比
仪器与试剂
仪器：PHS-2C型（或其他型号）酸度计及配套复合电极，塑料烧杯 50ml 3只 752型紫外光分光光度计（或其他型号）1cm比色皿 10ml的吸量管 25ml容量瓶 100ml容量瓶
氯霉素注射液PH值与含量分析方案
组员：王正 汤友祥 朱勇 郑晓峰 徐娇艳
指导老师：陈芬
项目背景
氯霉素 化学名称：D-苏式-(-)-N-[a-(羟基甲 基)-b-羟基-对硝基苯乙基]-2，2-二氯乙酰胺。

绘制吸收曲线
用1cm吸收池，以蒸馏水为参比，在260～290nm间， 1cm吸收池，以蒸馏水为参比， 260～290nm间 吸收池 每隔5nm测量一次，在峰值附近每隔2nm测量一次吸 每隔5nm测量一次，在峰值附近每隔2nm测量一次吸 5nm测量一次 2nm 光度。以波长为横坐标， 光度。以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收 曲线，确定最大吸收波长 。 曲线，
在最大吸收波长处测定吸光度。以浓度为横坐标， 在最大吸收波长处测定吸光度。以浓度为横坐标， 吸光度为纵坐标，绘制工作曲线。 吸光度为纵坐标，绘制工作曲线。
序号 1 2 2.00 3 4.00 4 6.00 5 8.00 6 10.00
氯霉素 0.00 体积 吸光度
吸 光 度 A A 0 氯霉素体积v/ml
下列细菌通常对氯霉素耐药：铜绿假单胞菌、 下列细菌通常对氯霉素耐药：铜绿假单胞菌、不动 杆菌属、肠杆菌属、粘质沙雷菌、 杆菌属、肠杆菌属、粘质沙雷菌、吲哚阳性变形杆 菌属、甲氧西林耐药葡萄球菌和肠球菌属。 菌属、甲氧西林耐药葡萄球菌和肠球菌属。氯霉素 注射液属抑菌剂。氯霉素为脂溶性，通过弥散进入 注射液属抑菌剂。氯霉素为脂溶性， 细菌细胞内，并可逆性地结合在细菌核糖体的50S亚 细菌细胞内，并可逆性地结合在细菌核糖体的50S亚 50S 基上，使肽链增长受阻（ 基上，使肽链增长受阻（可能由于抑制了转肽酶的 作用），因此抑制肽链的形成， 作用），因此抑制肽链的形成，从而阻止蛋白质的 ），因此抑制肽链的形成 合成。 合成。
氯霉素的结构式
氯霉素注射液
氯霉素注射液
氯霉素注射液 氯霉素滴眼液
药理作用
氯霉素注射液在体外具广谱抗微生物作用， 氯霉素注射液在体外具广谱抗微生物作用，包括 广谱抗微生物作用 氧革兰阴性菌及革兰阳性菌、厌氧菌、立克次体属、 氧革兰阴性菌及革兰阳性菌、厌氧菌、立克次体属、 螺旋体和衣原体属。 螺旋体和衣原体属。 氯霉素注射液对下列细菌具杀菌作用 流感杆菌、 杀菌作用： 氯霉素注射液对下列细菌具杀菌作用：流感杆菌、 肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟菌。 肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟菌。 对以下细菌仅具抑菌作用：金黄色葡萄球菌、 对以下细菌仅具抑菌作用：金黄色葡萄球菌、化 抑菌作用 脓性链球菌、草绿色链球菌、 组溶血性链球菌、 脓性链球菌、草绿色链球菌、B组溶血性链球菌、大 肠杆菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、伤寒沙门菌、 肠杆菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、伤寒沙门菌、 副伤寒沙门菌、志贺菌属、脆弱拟杆菌等厌氧菌。 副伤寒沙门菌、志贺菌属、脆弱拟杆菌等厌氧菌。

北 方 药学 ２ ０ １ ４年第 １ １ 卷第 ５ 期
９
Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法测 凯 崔 华 钰 （ 河南省信阳市食品药品检验所 信阳 ４ ６ ４ ０ ０ ０ ）
摘要 ： 目的： 建立 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法测 定制霉菌素氯霉素栓 中氯霉素的含量 。 方法 ： 色谱柱为 Ａ ｇ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ Ｘ Ｄ Ｂ — Ｃ １ ８ （ ４ ． ６ ｍｍ ｘ ２ ５ ０ ｍｍ， ５ ｍ） ； 流动 相为０ ． Ｏ ｌ ｍ ｏ ｌ ／ Ｉ 庚 烷 磺 酸钠 缓 冲溶 液 （ ｐ Ｈ ２ ． ５ ） ： 甲醇 （ ６ ８ ： ３ ２ ） ；流 速 １ ． Ｏ ｍ ］ ・ ａｉ ｒ ｎ ；检 测 波 长 为 ２ ７ ７ ｎ ｍ。结 果 ：氯 霉 素 在 ２ ． ４ ６ ７ ～ ４ ９ ． ３ ４ ０ ￣ ｇ ・ ｍ ｌ 。 。 浓度范围 内线性 关系良好 ， ｒ ＝ Ｏ ． ９ ９ ９ ９ ， 平均回收率为 ９ ９ ． ８ ２ ％， Ｒ Ｓ Ｄ为 ０ ． ４ ％（ ｎ ＝ ９ ） 。结论 ： 此法简单可行 ， 准确 可靠 ， 可 用于制霉菌素氯霉素栓 中氯霉素的含量测定。 关键词 ： 制 霉 菌素 氯 霉 素 栓 氯 霉素 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ 中图分类号 ： Ｒ ９ ２ ７ ． ２ 文献标 识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ２ — ８ ３ ５ １ （ ２ ０ １ ４） ０ ５ — ０ ０ ０ ９ — ０ １ 制霉菌素氯霉素栓是河南省信 阳职业技 术学院附属 医院 置 ｌ Ｏ ｍ ｌ 、 ２ ５ ｍ ｌ 、 ５ Ｏ ａｌ ｒ 、 ｌ Ｏ Ｏ ｍ ｌ 、 ２ ０ ０ ｍ ｌ 量瓶 中 ， 加 流动相稀 释至 刻 的制 剂 ， 是 南制霉菌素 、 氯 霉素 、 硬脂酸 聚烃氧脂等制 成的 复 度 ， 摇匀 ， 依次进样 １ ０ ｌ ， 按上述 色谱 条件 测定 峰面积 ， 以峰 面 方制剂 ， 具有抗 真菌作用 ， 主要用 于治疗 真菌与细菌混合感染 积 为纵坐标 ， 进样浓度 （ ｇ ・ ｍ ｌ ） 为横坐标 ， 绘制 标准 曲线 ， 得 的 阴道 炎 。对 本制 剂 的 主要 成 分 氯 霉 素 的含 量 测 定 ， 原 质量 标 回 归方 程 ： Ｙ ＝ １ ９ ２ ９ ． ２ ３ ｘ ＋ ４ ７ ． ６ ７（ ｒ ＝ Ｏ ． ９ ９ ９ ９ ） ，结 果 表 明氯 霉 素 在 准采用抗生索微生物检定法 （ 管碟法 ） ， 其操作烦琐费 时 ， 影 响 ２ ． ４ ６ ７ ～ ４ ９ ． ３ ４ ０ ￣ ｇ ・ ｍｌ 。 。 浓度范 罔内线性关 系 良好 。 实验结果 的因素较多 ， 误 差较大。为有效控制本 品质量 ， 笔者 ２ ． ５精密度试验 ： 取对 照 品溶 液 ， 进样 ｌ Ｏ ｌ ｌ ， 重 复进样 ８次 ， 按 参考 了有关文献 Ｉ 建立 了高效液相 色谱法 测定氯霉素 的含 上述色谱条件测定峰面积 ， 结果 Ｒ Ｓ Ｄ ＝ Ｏ ． ３ ％ 量， 结 果表 明该方法准确 、 简便 ， 可用于控制本制剂的质量。 （ ｎ ＝ ８ ） ， 表明精密度 良好 。 １ 仪器与试药 ２ ． ６重复性试验 ： 取批号为 ２ ０ １ ３ ０ ７ ２ ０的样 品， 按“ ２ ． ２ ． ２ ” 项下制 岛津 Ｉ Ｃ 一 ２ ０ １ ０ Ｃ高效液相色谱仪 ，岛津 ｕ ｖ 一 ２ ５ ５ ０紫外分 备供试 品溶液 ７份 ， 分别 进样 １ ０ ｌ ， 依 上述色谱 条件测定 ， 氯 光光度计 ， 梅特勒电子天平 Ａ Ｅ 一 ２ ４ ０ ， 氯霉素对照 品（ 中国药 品 霉素 的平均含量为 ９ ９ ． ８ ％， 其Ｒ Ｓ Ｄ为 ０ ． ４ ％（ ｎ ＝ ７ ） 。 生物制 品检定所 ， 批号： １ ３ ０ ５ ５ ５ — ２ ０ ０ ６ ０ ２ ， 含量 ： ９ ９ ． ４ ％） ， 制霉菌 ２ ． ７稳定性试验 ：取 同一供试 品溶液 ，分别在 ０ 、 ２ 、 ４ 、 ６ 、 ８ 、 １ ２ ｈ 素 氯霉 素 栓 （ 信 阳职业 技 术学 院 附属 医院 制剂 室 ，批 号 ： 进样测定 ， 结果氯霉素峰面积 的 Ｒ Ｓ Ｄ为 Ｏ ． ７ ％（ ｎ ＝ ６ ） ， 表 明供试 ２ ０ １ ３ ０ ７ ２ ０ ， ２ ０ １ ３ ０ ９ ０ ８ ， ２ ０ １ ３ ０ ９ ２ ４ ） ， 甲醇为色 谱纯 ， 水为纯化 水 ， 品溶液在 １ ２ ｈ内稳定性 良好 。 其他试剂均为分析纯。 ２ ． ８加样回收试验 ： 取 已测知含量的制霉菌素氯霉素栓样品 ｌ ０ ２ 方法与结果 份 ，每份 ２ ｍｌ ，置 ５ ０ ｍｌ 量 瓶中 ，分别精密加入氯霉素对照 品 ２ ． １色 谱条 件 ：色 谱 柱 为 Ａ ｇ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ Ｘ Ｄ Ｂ — Ｃ ． （ ４ ． ６ ｍ ｍｘ ２ ５ ０ ｍ ｍ， ７ ｍ ｇ 、 ９ ｍ ｇ 、 １ ｌ ｍ ｇ ， 每个 浓度各 ３份 ， 加流 动相溶 解并 稀释 至刻 ５ ｍ） ； 流 动相为 ０ ． ０ １ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ庚 烷磺 酸钠缓 冲溶 液 （ ｐ Ｈ值 ２ ． ５ ） ： 度， 摇匀 ， 按上述 色谱 条件 分别进样 ， 测定氯 霉素的含量 ， 结果 甲醇 （ ６ ８ ： ３ ２ ） ；流速 １ ． Ｏ ｍ ｌ ・ ｍ ｉ ｎ 一 ；检测波长为 ２ ７ ７ ｎ ｍ；柱 温 ： 平均 回收率为 ９ ９ ． ３ ７ ％， Ｒ Ｓ Ｄ为 ０ ． ５ ％（ ｎ ＝ ｌ Ｏ ） 。 ３ ０ ￣ Ｃ； 进样量 ： １ ０ ｌ 。 ２ ． ９含 量 测 定 ：取 制 霉 菌 素 氯 霉 素 栓 样 品 ３批 （ 批号 ： ２ ． ２溶液 的制备 ２ ０ １ ３ ０ ７ ２ ０ ， ２ ０ １ ３ ０ ８ ０ ７ ， ２ ０ １ ３ ０ ９ ２ ４ ） ， 按“ ２ ． ２ － ２ ” 项下方 法制备供 试 ２ ． ２ ． １ 对照品溶液 ： 精密称取氯霉素对照 品 ２ ４ ． ８ ２ ｍ ｇ ， 置２ ５ ｍ ］ 量 品溶液 ， 按 上述色谱条 件分别进 样测定 ， 记 录色谱 图， 按标 准 瓶 中， 加 甲醇 ２ ． ５ ｍｌ （ 每 ｌ Ｏ ｍｇ 氯霉素加 甲醇 １ ｍ１ ） 使溶解 ， 再加 曲线计算氯霉素的含量 ， 结果见表 １ 。 流动相稀释至刻度 ， 摇匀 ， 作为对照品贮备液 。精 密量取对照 表 １样品含量测定结果 品贮备液 ５ ｍ ｌ ， 置５ Ｏ ａｌ ｒ 量瓶 中， 加流动相稀释至刻度 ， 摇匀 ， 即 批号 氯霉素的含量（ ％） 得质量浓度为 ０ ． ０ ９ ８ ６ ８ ｍｇ ・ ｍｌ 的对照品溶 液。 ２ ０ １ ３ ０ ７ ２ ０ ９ ９ ． ８ ％ ２ ． ２ ． ２供试 品溶 液 ：取 本 品 ５粒 ，精 密称 定 ，平 均 粒重 为 ： ２ ０１ ３ ０ ９ ０ ８ ９ ９ ． ６ ％ ｌ ７ ． ４ １ ０ ５ ｇ ／ ５ ＝ ３ ． ４ ８ ２ １ ｇ ， 切碎 ， 精密称取（ 相 当于 １ 粒 的重 量 ， 含氯 ２ ０１ ３ ０ ９ ２ ４ ｌ Ｏ ０ ． ２ ％ 霉素 ２ ５万 单 位 ） ３ ． ４ ８ ２ ５ ｇ ， 置２ ５ ０ ｍ ｌ 量瓶 中 ， 加 乙醇适量 ， ７ ０ ％ 水浴中保温 １ ５ ａｉ ｒ ｎ ， 并时时振摇使基质溶化 ， 放冷 至室温 ， 用 乙 ３ 讨 论 ． １ 测定波长 的选择 ： 取 氯霉 素对照品溶液在 ２ ０ ０ ～ ４ ０ ０ ｎ ｍ波长 醇定容至刻度 ， 摇匀 ， 置冰浴 中保 温 １ ｈ ， 过滤 ， 精密量取续滤液 ３ ７ ７ ｎ ｍ波长处有最大 吸收 ，故选 ２ ７ ７ ｎ ｍ ５ ｍｌ ， 置５ ０ ｍ ｌ 量瓶 中， 加 流动相稀 释至刻度 ， 摇匀 ， 即得质量浓 范 围内扫描 ，结果在 ２ 为测定波长。 度为 ０ ． １ ０ ０ ０ １ ｍ ｇ ・ ｍ ｌ 的供 试 品溶 液 。 ． ２溶剂的选择 ： 因为氯霉 素在 甲醇 、 乙醇 、 丙酮或丙 二醇 中易 ２ ． ２ － ３阴性样品溶 液 ：按制霉菌素氯霉素栓的处方 比例制备不 ３ 溶 ， 在水中微溶 。故氯霉 素对照品溶解时 ， 先加 甲醇（ 每 １ ０ ｍ ｇ 含氯霉素的空 白样品 ，取空 白样品按供试 品溶液 的制备方法 氯霉素加 甲醇 ｌ ｍ１ ） 使 溶解 ， 再加流动相稀释至刻 度。 样 品溶解 制 成 阴 性 样 品溶 液 。 先 加 乙醇 溶 解 、 定 容 。再 用 流 动 相 稀 释 到所 需浓 度 。 ２ ３干 扰试验 ： 分别取对 照品溶液 、 供 试 品 溶 液 和 阴 性 样 品 溶 时 ， ． ３ 该方法不受原质 量标 准中操作等诸多 因素的影响 ， 重现性 液依次进样 １ ０ ｌ ， 按上述 色谱条件测 定 ， 记录色谱 图 ， 结果 阴 ３ 好， 简单可行 ， 可适 用 于 该 制 剂 的质 量 控 制 。 性样 品无 干 扰 ， 见图。 ３ ． ４ 该制剂 为栓剂 ， 在供试 品制备时 ， 水浴温度 、 水浴 时间应严 格控制在有效 范围内。 参 考 文 献 ｆ １ ］ 国家药典委 员会冲 华人 民共和 国药典『 ｓ 】 涕 ２部 ， 北京 ： 中

实验二
氯霉素含量的测定
• 实验目的 实验目的： 掌握紫外可见分光度法的定量方法 熟练使用紫外可见分光光度计 能对测试的数据进行处理
分光光度法测定的原理
• 分光光度法是以朗伯—比尔定律为依据。 当一束平行单色光垂直照射到某一固定浓 度的溶液时，溶液对光的吸收程度与溶液 的浓度及液层的厚度的乘积成正比即：
结果记录表
序号 1 2 3 平均值
氯霉素注 射液的 PH
实验注意事项
• 清洗电极后，不要用滤纸擦拭玻璃膜，而 要用滤纸吸干。 • 电极插入溶液中，要小心轻摇烧杯 • 玻璃膜很薄，容易破裂，使用时要小心。
实验结果分析
• 查资料得氯霉素的PH值应该在5.0~7.5之间 可以与实验的结果进行比较，得出结论
A=Kcb
实验仪器及试剂
• 仪器： 722E型紫外可见分光光度计，1cm比色皿， 10ml吸量管，25ml容量瓶，100ml容量瓶 烧杯等 • 试剂： 试剂： 氯霉素注射液，标准氯霉素。
实验步骤
1、将分光光度计预热，用1cm吸收池，以蒸 、将分光光度计预热， 吸收池， 吸收池 馏水为参比，取氯霉素注射液在波长260～ 馏水为参比，取氯霉素注射液在波长 ～ 290nm间，每隔5nm测量一次，在峰值附 间 每隔 测量一次， 测量一次 近每隔2nm测量一次吸光度。以波长为横 测量一次吸光度。 近每隔 测量一次吸光度 坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收曲线， 坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收曲线，确 定最大吸收波长 。
值测量： ③PH值测量： 值测量 将洗好的电极放在被测溶液中。轻轻摇匀， 将洗好的电极放在被测溶液中。轻轻摇匀， 待读数稳定后记录数据， 待读数稳定后记录数据，即为氯霉素注射 液的PH值 重复上述操作，平行测定3次 液的 值。重复上述操作，平行测定 次， 记录显示的PH值 取平均值。 记录显示的 值，取平均值。 测定完毕，关上电源开关，取下电极， ④测定完毕，关上电源开关，取下电极，用 蒸馏水洗净电极，将玻璃泡浸在饱和氯化 蒸馏水洗净电极， 钠溶液中，收好。 钠溶液中，收好。

4.测定完毕，关上电源开关，取下电极，用蒸馏水洗
净电极，擦干收好。
含量的测定
1称取氯霉素0.5g溶于水中，转移至容量瓶中加 水稀释到刻度。
2.分别吸取2mL,4mL,6mL,8mL,10mL于试管中， 全部补加蒸馏水至10mL。
3.在278nm处以水为参比溶液分别测量上述5种 标准液的吸光度，记录数据。
❖ 含量测定原理：采用紫外分光光度法，它是 以朗伯-比尔定律为依据。氯霉素的水溶液在 紫外光区有最大吸收，通过标准溶液的吸收 曲线确定最大吸收峰。在最大吸收波长处， 测定吸光度。采用工作曲线法，确定氯霉素 注射液中氯霉素的含量。
仪器和试剂
仪器:PHS-25型酸度计，蒸馏水, PH值为 5.5,7.2的标准缓冲溶液 ,PH试纸,电子天平， 722型紫外可见分光光度计，1cm比色皿四个, 100ml容量瓶。
4.以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘 制标准曲线。
A
吸 光 度
0
氯霉素体积v/ml
5.测量待测样品的吸光度，利用标准曲线计算出浓度。
实验记录
序号
1
2
3 平均值
PH
氯霉素 0.0mL 2.0mL 4.0mL 6.0mL 8.0mL 10.0mL 注射液
体积 吸光度
浓度 （mg/L）
查资料得氯霉素注射液含量范 围为125mg左右， 可将所测得值 与之做对比来判断样品是否达标。 若不达标分析可能原因。
氯霉素介绍
❖ 氯霉素注射液为抗生素类药。主要成分氯霉素，分子式为 C11H12Cl2N2O5，PH为5.0~7.2。有广谱抑菌作用。用于伤寒杆 菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、流感杆菌、布氏杆菌、脑膜炎球 菌、链球菌、肺炎球菌等感染，对多种厌氧菌感染有效，亦 可用于立克次体感染。有引起粒细胞缺乏症及再生障碍性贫 血的可能，有时可引起精神症状，长期应用可引起二重感染。

500.00 400.00 300.00 200.00 100.00
0.00 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 Minutes
2.643 6.726
[实验结果]
名称
氯霉素二 醇物 氯霉素 羟苯乙酯
含量测定结 果，%
[样品分析实例]
[空白样品的测定结果]
120.00 100.00
80.00 60.00 40.00 20.00
0.00 -20.00
0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 Minutes
mAU
4.622
mAU
[氯霉素滴眼液的测定结果]
50.00 0.00 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 Minutes
[色谱条件]
色 谱 柱：Hitachi LaChromUltraⅡC18（1.9 µm）3.0mmI.D.×100 mm 流 动 相：A-甲醇；B-0.01 mol/L 庚烷磺酸钠缓冲液（pH 2.5） 梯度方法：0-2.9 min, 32% A; 2.9-4.8 min, 32-45% A; 4.8-7.6 min, 45-75% A;7.6-7.7 min, 75-32%
注意事项：
本实验流动相中含庚烷磺酸钠离子对试剂，对色谱柱伤害较大，实验结束后应及
时、正确清洗色谱柱以免影响寿命。 本资料所示数据仅为测定例用数据而非可保证仪器性能的数据。 本仪器只是研究用仪器，而不是诊断、治疗或预防人或动物疾病的医疗仪器。

序号 1 2 3 4 5 6
氯霉 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.0
素体
0积吸光 度样 Nhomakorabea的检测根据工作曲线测出氯霉素注射液 中氯霉素含量。氯霉素含量 0.125mg/ml，有效范围规定含量 90%-110%.
注意事项
1、PH值测量中，由于试样的PH值 场伴随着空气中的CO2等因素的改 变而改变，所以要分析及时。
A
绘制工作曲线
取7只25ml容量瓶，用吸量管分别准确移入容量瓶标准 氯霉 素溶液0.00ml、2.00ml、4.00ml、6.00ml、 8.00ml、10.00ml及5ml样品溶液，最后用水稀释至刻度。 用紫外可见分光光度计在最大吸收波长处测定吸光度。 以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制工作曲线。
3、测定完毕，观赏电源开关，取下 电极，用蒸馏水洗净电极，擦干收好。
含量的测定
氯霉素标准溶液的配制 称取10mg标准氯霉素，用
1ml蒸馏水溶解后转移至100ml容 量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度， 摇匀。然后吸取此溶液2.5ml、 5.0ml、7.5ml、10.0ml、12.5ml， 分别置于25毫升容量瓶中，用水 稀释至刻度。
氯霉素PH值及含量检测
背景知识
氯霉素是由委内瑞拉链丝菌产生 的抗生素。
氯霉素注射液为氯霉素的灭菌溶 液，含氯霉素(C11H12Cl2N2O5) 应为标示量的90%—110%,也就 是浓度为0.125g/ml.PH值为4.57.5。氯霉素注射液为无色或微带 黄绿色的液体。
药理作用
氯霉素注射液在体外具广谱抗微生物作用， 包括氧格兰阴性菌及格兰阳性菌、厌氧菌、 立克次体属，螺旋体和衣原体属。
2、快速测样，快速清洗！ 3、测样时电极不能碰到容器壁 。 4、可见-紫外分光光度法使用的吸

能够利用所学知识来设计并独立完成实验法案。
*
实验原理
测定溶液的pH值，通常用玻璃电极做指示电极，饱和甘汞电极做参比电极（SCE），与待测溶液组成原电池，在一定的实验条件下，原电池的电动势与溶液的电动势的pH之间的关系符合能斯特方程式，即： E=K’+0.0592pH（t=25。C） 本实验采用比较法来测定氯霉素注射液的pH值。 紫外分光光度法测定氯霉素含量的原理是朗伯比尔定律，即： A=kcb 即物质在一定波长处的吸光度与它的浓度呈线性关系。且同一物质的吸收曲线相似，最大吸收波长相等，浓度越大，吸收强度越大，不同物质吸收曲线不
将上述配制好的不同浓度的标准氯霉素溶液，各吸取5ml,和供试液5ml,用紫外分光光度计于Xmax处测定吸光度并记录数据，绘制工作曲线。
数据记录与处理
附图表如右侧
用1cm比色皿，以蒸馏水为参比，在260-290nm间，每隔5nm测量一次吸光度，在峰值附近每隔2nm测量一次。以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准吸收曲线，确定最大吸收波长为Xmax.
*
数据处理
绘制出标准工作曲线，并校正工作曲线，得到一个A-C的关系式，即可求出供试品的浓度，并求出含量。
*
Company LOGO
根据质量标准，供试品氯霉素注射液的pH值是否符合标准？
根据质量标准，供试品氯霉素注射液的含量是否符合标准？
含量检测
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Thank You!
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实验仪器与器材
复合电极
紫外分光光度计
Description of the contents
Description of the contents
*
比色皿，吸量管
容量瓶（25，100ml）
分析天平

1.K3[Fe(CN)6]·6H2O( 内标物 )；2. 氯霉素片样品； 3. 内标物 + 氯霉素片样品
图 1 内标物、样品、样品加内标物的红外光谱图 Fig.1 FT-IR of potassium ferricyanide, chloramphenicol samples
and samples added with internal reference
由图 1 可知，样品加内标物混合物的红外谱图， 除多了一内标物的特征峰以外，出峰的位置、峰形与 单一样品的完全一致，内标物特征峰出现的位置与 单一内标物特征峰出现的位置也完全一致。且谱图 峰形好，各峰之间无干扰，谱图稳定性好 , 故本试验 选 K3[Fe(CN)6]·6H2O 为内标物。 2.2 测量峰和内标峰的选择
1.2 实验方法
红外光谱内标法是通过比较红外光谱，各选取
取适当质量的氯霉素样品粉末、内标物（K3[Fe(CN)6]
作者简介：彭梦侠（1964-），女，硕士，化学教授，主要从事化学教学和科研工作。 E-mail：pmxia@ 收稿日期：2013-09-12
第 10 期
彭梦侠等：红外光谱内标法测定氯霉素片中氯霉素的含量
[1] 迟玉明，赵瑛，迟玉成，等 . 蜂王浆中抗生素残留物 氯霉素含量的测定 [J]. 天然产物研究与开发，2006(18)： 464-466.
[2] 中华人民共和国药典委员会 . 中华人民共和国药典二部 [M]. 北京：化学工业出版社，2000.
[3] 中华人民共和国药典委员会 . 中华人民共和国药典二部 [M]. 北京：化学工业出版社，2005.
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化工技术与开发
第 42 卷
表 1 标准工作曲线的绘制数据
Tab.1 Data of standard working curve

氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素含量测定原理：〈1〉
〈2〉再用紫外分光光度法测其含 量
氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素标准溶液的配制 •准确称取氯霉素标准品0.05g,用丙二 醇溶液40%溶解至100ml,配成浓度为 500微克/ml的标准储备液. •或找到已知氯霉素含量的氯霉素注射 液作为标准液
氯 霉 素 注 射 液 PH 值 的 测 定
pH值 应为5.0～7.5 （中国药典1985年版二部附录33页）
氯霉素注射液PH值测定方案
•用PH计测定PH值
•Ph计的原理：是将一支电极与被测物质活度有 关的电极（称指示电极）和另一支电位已知且保 持恒定的电极（称参比电极）插入待测溶液中组 成一个化学电池，在零电流的条件下，通过测量 电池电动势，进而根据能斯特求出待测液ph值。
氯霉素注射液PH值和含量检测
选用0.1mol/L的乙酸和乙酸钠
可由上式得出V乙酸钠：V乙酸=1.77827 从而可以得出PH为5.5的标准缓冲溶液
同理可得
PH为6.8和7.2的缓冲溶液
氯霉素注射液PH值和含量检测
PH计的校正 1. 预热：开电源，预热30分 钟，连接电极有读数开关 开放的情况下调0。 2. 定位：由产品说明书知注 射液的PH为5.0-7.5，将电 极浸入PH为6.8的缓冲溶 液中，轻轻摇匀，待读数 稳定后，调定位旋扭使其 读数为6.8，重复2~3次
O2 N
H2NHN
H NH2 OH H OH HIO4
O2 N O
O2 N
NO2
O2N
NO2 N N H
NO2
p-nitrophenyl-2aminopropan-1,3-diol
p-nitrobenzaldchyde

4.紫外吸收 本类抗生素分子内具苯环含有共轭双键 系统，在紫外光区有吸收。在277nm波长处 有最大吸收。 5.氧化性 氯霉素含有对硝基苯基，其中硝基具 有氧化性，可以将其还原成胺基。
二 鉴别试验
1.色谱法
ChP采用高效液相色谱法鉴别氯霉 素，在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液的主峰 的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
• 照含量测定项下的色谱条件，取杂质对照 品溶液10µl注入液相色谱仪，调节检测灵敏 度，使氯霉素二醇物峰的峰高约为满量程 的25%；精密量取供试品溶液与杂质对照品 溶液各10µl，分别注入液相色谱仪，记录色 谱图，按外标法以峰面积计算，含氯霉素 二醇物不得过1.0%，含对硝基苯甲醛不得 过0.5%。
● 本品分子中的硝基经锌粉还原成羟胺衍生物，在乙酸钠存在下
与苯甲酰氯进行苯甲酰化，再在弱酸性溶液中与高铁离子生成 紫红色的络合物。
例：ChP(2010) 取本品10mg,加稀乙醇1ml溶解后加1%氯化钙溶液 3ml与锌粉50mg置水浴上加热10分钟，倾取上清液，加苯甲酰
●
取氯霉素1ml，加氢氧化钠的乙醇溶液2ml， 再加硝酸2ml，加硝酸银3滴，生成白色沉 淀，沉淀加氨试液溶解，再加硝酸银5滴， 沉淀复生（氯离子的鉴别）。
四 含量测定
氯霉素的含量测定主要 用的是HPLC，除此之外还可 以用UV、TLC、LC/MS等方法
高效液相色谱
• 色谱条件 填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶 流动相：0.01mol/L庚烷磺酸钠缓冲溶液（磷酸 二氢钾6.8g 0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液溶解并稀 释，加三乙胺5ml，磷酸调节pH值至2.5） 检测波长：277nm 对照品：氯霉素
• 照残留溶剂测定法（附录Ⅷ P第二法）测定，以 6%清丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（或极性相近） 为固定液的毛细管柱为色谱柱，起始温度为40℃， 维持10分钟，再以每分钟10 ℃的速率升至200 ℃， 维持4分钟；进样口温度为250 ℃；检测器温度为 300 ℃；顶空平衡温度为85 ℃，平衡时间为45分 钟。取系统适用性试验溶液顶空进样，洗脱顺序 依次为：乙醇、氯苯，各色谱峰之间的分离度应 符合要求，取对照品溶液顶空进样，计算数次连 续进样结果，相对标准偏差不得过5.0%。取供试 品溶液与对照溶液分别顶空进样，记录色谱图， 用标准加入法以峰面积计算，均应符合规定。

氯霉素是一种兽用抗生素，常用于动物养殖中。通过测定食品中的氯霉素含量，可以保障食品 安全，避免兽药残留对人类健康的危害。
监测环境污染
氯霉素在环境中难以降解，容易积累在水、土壤等环境中。通过测定环境中的氯霉素含量，可 以了解环境污染状况，评估环境治理的效果。
在环境监测中的应用
环境污染物监测
氯霉素在环境中可作为污染物存在，对其含量进行监测可以了解环境污染物的 种类和浓度，评估环境质量状况。
遵循法规要求
各国药品监管机构都规定了药品中氯霉素含量的上限。通过测定氯霉素 含量，可以确保药品符合相关法规要求，保障公众的健康和安全。
03
监测药品生产过程
氯霉素含量的测定不仅是对药品成品的检测，还可以对药品生产过程进
行监控，确保生产过程中的原料、中间体和成品的品质符合要求。
在食品检测中的应用
保障食品安全
实验步骤
5. 结果分析
根据记录的峰保留时间、峰面积或峰高， 结合标准品比对，确定氯霉素的含量。同 时进行定量和定性分析。
1. 样品处理
将待测样品用适量的色谱甲醇溶解，摇匀 后用移液管分别吸取适量置于容量瓶中， 再用色谱甲醇定容至刻度，摇匀待测。
2. 上样
将处理后的样品通过进样针头注入进样口， 根据需要设定进样量。
目录
• 氯霉素简介 • 氯霉素含量的测定方法 • 氯霉素含量的测定实验 • 氯霉素含量的测定应用 • 氯霉素含量的测定注意事项
氯霉素简介
氯霉素的化学结构
氯霉素是一种由委内瑞拉链霉菌产生的抗生素，其化学 结构是由对硝基苯基、丙二酸和二甲胺组成的。
它属于抑菌性广谱抗生素，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴 性菌均有抑制作用。
4. 检测
在紫外检测器中设置适当的波长和灵敏度， 对分离后的色谱峰进行检测，记录各个峰 的峰高或峰面积。