氯霉素含量及ph值的测定

绘制吸收曲线
用1cm吸收池，以蒸馏水为参比，在260～290nm间， 1cm吸收池，以蒸馏水为参比， 260～290nm间 吸收池 每隔5nm测量一次，在峰值附近每隔2nm测量一次吸 每隔5nm测量一次，在峰值附近每隔2nm测量一次吸 5nm测量一次 2nm 光度。以波长为横坐标， 光度。以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收 曲线，确定最大吸收波长 。 曲线，
在最大吸收波长处测定吸光度。以浓度为横坐标， 在最大吸收波长处测定吸光度。以浓度为横坐标， 吸光度为纵坐标，绘制工作曲线。 吸光度为纵坐标，绘制工作曲线。
序号 1 2 2.00 3 4.00 4 6.00 5 8.00 6 10.00
氯霉素 0.00 体积 吸光度
吸 光 度 A A 0 氯霉素体积v/ml
下列细菌通常对氯霉素耐药：铜绿假单胞菌、 下列细菌通常对氯霉素耐药：铜绿假单胞菌、不动 杆菌属、肠杆菌属、粘质沙雷菌、 杆菌属、肠杆菌属、粘质沙雷菌、吲哚阳性变形杆 菌属、甲氧西林耐药葡萄球菌和肠球菌属。 菌属、甲氧西林耐药葡萄球菌和肠球菌属。氯霉素 注射液属抑菌剂。氯霉素为脂溶性，通过弥散进入 注射液属抑菌剂。氯霉素为脂溶性， 细菌细胞内，并可逆性地结合在细菌核糖体的50S亚 细菌细胞内，并可逆性地结合在细菌核糖体的50S亚 50S 基上，使肽链增长受阻（ 基上，使肽链增长受阻（可能由于抑制了转肽酶的 作用），因此抑制肽链的形成， 作用），因此抑制肽链的形成，从而阻止蛋白质的 ），因此抑制肽链的形成 合成。 合成。
氯霉素的结构式
氯霉素注射液
氯霉素注射液
氯霉素注射液 氯霉素滴眼液
药理作用
氯霉素注射液在体外具广谱抗微生物作用， 氯霉素注射液在体外具广谱抗微生物作用，包括 广谱抗微生物作用 氧革兰阴性菌及革兰阳性菌、厌氧菌、立克次体属、 氧革兰阴性菌及革兰阳性菌、厌氧菌、立克次体属、 螺旋体和衣原体属。 螺旋体和衣原体属。 氯霉素注射液对下列细菌具杀菌作用 流感杆菌、 杀菌作用： 氯霉素注射液对下列细菌具杀菌作用：流感杆菌、 肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟菌。 肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟菌。 对以下细菌仅具抑菌作用：金黄色葡萄球菌、 对以下细菌仅具抑菌作用：金黄色葡萄球菌、化 抑菌作用 脓性链球菌、草绿色链球菌、 组溶血性链球菌、 脓性链球菌、草绿色链球菌、B组溶血性链球菌、大 肠杆菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、伤寒沙门菌、 肠杆菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、伤寒沙门菌、 副伤寒沙门菌、志贺菌属、脆弱拟杆菌等厌氧菌。 副伤寒沙门菌、志贺菌属、脆弱拟杆菌等厌氧菌。

北 方 药学 ２ ０ １ ４年第 １ １ 卷第 ５ 期
９
Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法测 凯 崔 华 钰 （ 河南省信阳市食品药品检验所 信阳 ４ ６ ４ ０ ０ ０ ）
摘要 ： 目的： 建立 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法测 定制霉菌素氯霉素栓 中氯霉素的含量 。 方法 ： 色谱柱为 Ａ ｇ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ Ｘ Ｄ Ｂ — Ｃ １ ８ （ ４ ． ６ ｍｍ ｘ ２ ５ ０ ｍｍ， ５ ｍ） ； 流动 相为０ ． Ｏ ｌ ｍ ｏ ｌ ／ Ｉ 庚 烷 磺 酸钠 缓 冲溶 液 （ ｐ Ｈ ２ ． ５ ） ： 甲醇 （ ６ ８ ： ３ ２ ） ；流 速 １ ． Ｏ ｍ ］ ・ ａｉ ｒ ｎ ；检 测 波 长 为 ２ ７ ７ ｎ ｍ。结 果 ：氯 霉 素 在 ２ ． ４ ６ ７ ～ ４ ９ ． ３ ４ ０ ￣ ｇ ・ ｍ ｌ 。 。 浓度范围 内线性 关系良好 ， ｒ ＝ Ｏ ． ９ ９ ９ ９ ， 平均回收率为 ９ ９ ． ８ ２ ％， Ｒ Ｓ Ｄ为 ０ ． ４ ％（ ｎ ＝ ９ ） 。结论 ： 此法简单可行 ， 准确 可靠 ， 可 用于制霉菌素氯霉素栓 中氯霉素的含量测定。 关键词 ： 制 霉 菌素 氯 霉 素 栓 氯 霉素 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ 中图分类号 ： Ｒ ９ ２ ７ ． ２ 文献标 识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ２ — ８ ３ ５ １ （ ２ ０ １ ４） ０ ５ — ０ ０ ０ ９ — ０ １ 制霉菌素氯霉素栓是河南省信 阳职业技 术学院附属 医院 置 ｌ Ｏ ｍ ｌ 、 ２ ５ ｍ ｌ 、 ５ Ｏ ａｌ ｒ 、 ｌ Ｏ Ｏ ｍ ｌ 、 ２ ０ ０ ｍ ｌ 量瓶 中 ， 加 流动相稀 释至 刻 的制 剂 ， 是 南制霉菌素 、 氯 霉素 、 硬脂酸 聚烃氧脂等制 成的 复 度 ， 摇匀 ， 依次进样 １ ０ ｌ ， 按上述 色谱 条件 测定 峰面积 ， 以峰 面 方制剂 ， 具有抗 真菌作用 ， 主要用 于治疗 真菌与细菌混合感染 积 为纵坐标 ， 进样浓度 （ ｇ ・ ｍ ｌ ） 为横坐标 ， 绘制 标准 曲线 ， 得 的 阴道 炎 。对 本制 剂 的 主要 成 分 氯 霉 素 的含 量 测 定 ， 原 质量 标 回 归方 程 ： Ｙ ＝ １ ９ ２ ９ ． ２ ３ ｘ ＋ ４ ７ ． ６ ７（ ｒ ＝ Ｏ ． ９ ９ ９ ９ ） ，结 果 表 明氯 霉 素 在 准采用抗生索微生物检定法 （ 管碟法 ） ， 其操作烦琐费 时 ， 影 响 ２ ． ４ ６ ７ ～ ４ ９ ． ３ ４ ０ ￣ ｇ ・ ｍｌ 。 。 浓度范 罔内线性关 系 良好 。 实验结果 的因素较多 ， 误 差较大。为有效控制本 品质量 ， 笔者 ２ ． ５精密度试验 ： 取对 照 品溶 液 ， 进样 ｌ Ｏ ｌ ｌ ， 重 复进样 ８次 ， 按 参考 了有关文献 Ｉ 建立 了高效液相 色谱法 测定氯霉素 的含 上述色谱条件测定峰面积 ， 结果 Ｒ Ｓ Ｄ ＝ Ｏ ． ３ ％ 量， 结 果表 明该方法准确 、 简便 ， 可用于控制本制剂的质量。 （ ｎ ＝ ８ ） ， 表明精密度 良好 。 １ 仪器与试药 ２ ． ６重复性试验 ： 取批号为 ２ ０ １ ３ ０ ７ ２ ０的样 品， 按“ ２ ． ２ ． ２ ” 项下制 岛津 Ｉ Ｃ 一 ２ ０ １ ０ Ｃ高效液相色谱仪 ，岛津 ｕ ｖ 一 ２ ５ ５ ０紫外分 备供试 品溶液 ７份 ， 分别 进样 １ ０ ｌ ， 依 上述色谱 条件测定 ， 氯 光光度计 ， 梅特勒电子天平 Ａ Ｅ 一 ２ ４ ０ ， 氯霉素对照 品（ 中国药 品 霉素 的平均含量为 ９ ９ ． ８ ％， 其Ｒ Ｓ Ｄ为 ０ ． ４ ％（ ｎ ＝ ７ ） 。 生物制 品检定所 ， 批号： １ ３ ０ ５ ５ ５ — ２ ０ ０ ６ ０ ２ ， 含量 ： ９ ９ ． ４ ％） ， 制霉菌 ２ ． ７稳定性试验 ：取 同一供试 品溶液 ，分别在 ０ 、 ２ 、 ４ 、 ６ 、 ８ 、 １ ２ ｈ 素 氯霉 素 栓 （ 信 阳职业 技 术学 院 附属 医院 制剂 室 ，批 号 ： 进样测定 ， 结果氯霉素峰面积 的 Ｒ Ｓ Ｄ为 Ｏ ． ７ ％（ ｎ ＝ ６ ） ， 表 明供试 ２ ０ １ ３ ０ ７ ２ ０ ， ２ ０ １ ３ ０ ９ ０ ８ ， ２ ０ １ ３ ０ ９ ２ ４ ） ， 甲醇为色 谱纯 ， 水为纯化 水 ， 品溶液在 １ ２ ｈ内稳定性 良好 。 其他试剂均为分析纯。 ２ ． ８加样回收试验 ： 取 已测知含量的制霉菌素氯霉素栓样品 ｌ ０ ２ 方法与结果 份 ，每份 ２ ｍｌ ，置 ５ ０ ｍｌ 量 瓶中 ，分别精密加入氯霉素对照 品 ２ ． １色 谱条 件 ：色 谱 柱 为 Ａ ｇ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ Ｘ Ｄ Ｂ — Ｃ ． （ ４ ． ６ ｍ ｍｘ ２ ５ ０ ｍ ｍ， ７ ｍ ｇ 、 ９ ｍ ｇ 、 １ ｌ ｍ ｇ ， 每个 浓度各 ３份 ， 加流 动相溶 解并 稀释 至刻 ５ ｍ） ； 流 动相为 ０ ． ０ １ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ庚 烷磺 酸钠缓 冲溶 液 （ ｐ Ｈ值 ２ ． ５ ） ： 度， 摇匀 ， 按上述 色谱 条件 分别进样 ， 测定氯 霉素的含量 ， 结果 甲醇 （ ６ ８ ： ３ ２ ） ；流速 １ ． Ｏ ｍ ｌ ・ ｍ ｉ ｎ 一 ；检测波长为 ２ ７ ７ ｎ ｍ；柱 温 ： 平均 回收率为 ９ ９ ． ３ ７ ％， Ｒ Ｓ Ｄ为 ０ ． ５ ％（ ｎ ＝ ｌ Ｏ ） 。 ３ ０ ￣ Ｃ； 进样量 ： １ ０ ｌ 。 ２ ． ９含 量 测 定 ：取 制 霉 菌 素 氯 霉 素 栓 样 品 ３批 （ 批号 ： ２ ． ２溶液 的制备 ２ ０ １ ３ ０ ７ ２ ０ ， ２ ０ １ ３ ０ ８ ０ ７ ， ２ ０ １ ３ ０ ９ ２ ４ ） ， 按“ ２ ． ２ － ２ ” 项下方 法制备供 试 ２ ． ２ ． １ 对照品溶液 ： 精密称取氯霉素对照 品 ２ ４ ． ８ ２ ｍ ｇ ， 置２ ５ ｍ ］ 量 品溶液 ， 按 上述色谱条 件分别进 样测定 ， 记 录色谱 图， 按标 准 瓶 中， 加 甲醇 ２ ． ５ ｍｌ （ 每 ｌ Ｏ ｍｇ 氯霉素加 甲醇 １ ｍ１ ） 使溶解 ， 再加 曲线计算氯霉素的含量 ， 结果见表 １ 。 流动相稀释至刻度 ， 摇匀 ， 作为对照品贮备液 。精 密量取对照 表 １样品含量测定结果 品贮备液 ５ ｍ ｌ ， 置５ Ｏ ａｌ ｒ 量瓶 中， 加流动相稀释至刻度 ， 摇匀 ， 即 批号 氯霉素的含量（ ％） 得质量浓度为 ０ ． ０ ９ ８ ６ ８ ｍｇ ・ ｍｌ 的对照品溶 液。 ２ ０ １ ３ ０ ７ ２ ０ ９ ９ ． ８ ％ ２ ． ２ ． ２供试 品溶 液 ：取 本 品 ５粒 ，精 密称 定 ，平 均 粒重 为 ： ２ ０１ ３ ０ ９ ０ ８ ９ ９ ． ６ ％ ｌ ７ ． ４ １ ０ ５ ｇ ／ ５ ＝ ３ ． ４ ８ ２ １ ｇ ， 切碎 ， 精密称取（ 相 当于 １ 粒 的重 量 ， 含氯 ２ ０１ ３ ０ ９ ２ ４ ｌ Ｏ ０ ． ２ ％ 霉素 ２ ５万 单 位 ） ３ ． ４ ８ ２ ５ ｇ ， 置２ ５ ０ ｍ ｌ 量瓶 中 ， 加 乙醇适量 ， ７ ０ ％ 水浴中保温 １ ５ ａｉ ｒ ｎ ， 并时时振摇使基质溶化 ， 放冷 至室温 ， 用 乙 ３ 讨 论 ． １ 测定波长 的选择 ： 取 氯霉 素对照品溶液在 ２ ０ ０ ～ ４ ０ ０ ｎ ｍ波长 醇定容至刻度 ， 摇匀 ， 置冰浴 中保 温 １ ｈ ， 过滤 ， 精密量取续滤液 ３ ７ ７ ｎ ｍ波长处有最大 吸收 ，故选 ２ ７ ７ ｎ ｍ ５ ｍｌ ， 置５ ０ ｍ ｌ 量瓶 中， 加 流动相稀 释至刻度 ， 摇匀 ， 即得质量浓 范 围内扫描 ，结果在 ２ 为测定波长。 度为 ０ ． １ ０ ０ ０ １ ｍ ｇ ・ ｍ ｌ 的供 试 品溶 液 。 ． ２溶剂的选择 ： 因为氯霉 素在 甲醇 、 乙醇 、 丙酮或丙 二醇 中易 ２ ． ２ － ３阴性样品溶 液 ：按制霉菌素氯霉素栓的处方 比例制备不 ３ 溶 ， 在水中微溶 。故氯霉 素对照品溶解时 ， 先加 甲醇（ 每 １ ０ ｍ ｇ 含氯霉素的空 白样品 ，取空 白样品按供试 品溶液 的制备方法 氯霉素加 甲醇 ｌ ｍ１ ） 使 溶解 ， 再加流动相稀释至刻 度。 样 品溶解 制 成 阴 性 样 品溶 液 。 先 加 乙醇 溶 解 、 定 容 。再 用 流 动 相 稀 释 到所 需浓 度 。 ２ ３干 扰试验 ： 分别取对 照品溶液 、 供 试 品 溶 液 和 阴 性 样 品 溶 时 ， ． ３ 该方法不受原质 量标 准中操作等诸多 因素的影响 ， 重现性 液依次进样 １ ０ ｌ ， 按上述 色谱条件测 定 ， 记录色谱 图 ， 结果 阴 ３ 好， 简单可行 ， 可适 用 于 该 制 剂 的质 量 控 制 。 性样 品无 干 扰 ， 见图。 ３ ． ４ 该制剂 为栓剂 ， 在供试 品制备时 ， 水浴温度 、 水浴 时间应严 格控制在有效 范围内。 参 考 文 献 ｆ １ ］ 国家药典委 员会冲 华人 民共和 国药典『 ｓ 】 涕 ２部 ， 北京 ： 中

实验二
氯霉素含量的测定
• 实验目的 实验目的： 掌握紫外可见分光度法的定量方法 熟练使用紫外可见分光光度计 能对测试的数据进行处理
分光光度法测定的原理
• 分光光度法是以朗伯—比尔定律为依据。 当一束平行单色光垂直照射到某一固定浓 度的溶液时，溶液对光的吸收程度与溶液 的浓度及液层的厚度的乘积成正比即：
结果记录表
序号 1 2 3 平均值
氯霉素注 射液的 PH
实验注意事项
• 清洗电极后，不要用滤纸擦拭玻璃膜，而 要用滤纸吸干。 • 电极插入溶液中，要小心轻摇烧杯 • 玻璃膜很薄，容易破裂，使用时要小心。
实验结果分析
• 查资料得氯霉素的PH值应该在5.0~7.5之间 可以与实验的结果进行比较，得出结论
A=Kcb
实验仪器及试剂
• 仪器： 722E型紫外可见分光光度计，1cm比色皿， 10ml吸量管，25ml容量瓶，100ml容量瓶 烧杯等 • 试剂： 试剂： 氯霉素注射液，标准氯霉素。
实验步骤
1、将分光光度计预热，用1cm吸收池，以蒸 、将分光光度计预热， 吸收池， 吸收池 馏水为参比，取氯霉素注射液在波长260～ 馏水为参比，取氯霉素注射液在波长 ～ 290nm间，每隔5nm测量一次，在峰值附 间 每隔 测量一次， 测量一次 近每隔2nm测量一次吸光度。以波长为横 测量一次吸光度。 近每隔 测量一次吸光度 坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收曲线， 坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收曲线，确 定最大吸收波长 。
值测量： ③PH值测量： 值测量 将洗好的电极放在被测溶液中。轻轻摇匀， 将洗好的电极放在被测溶液中。轻轻摇匀， 待读数稳定后记录数据， 待读数稳定后记录数据，即为氯霉素注射 液的PH值 重复上述操作，平行测定3次 液的 值。重复上述操作，平行测定 次， 记录显示的PH值 取平均值。 记录显示的 值，取平均值。 测定完毕，关上电源开关，取下电极， ④测定完毕，关上电源开关，取下电极，用 蒸馏水洗净电极，将玻璃泡浸在饱和氯化 蒸馏水洗净电极， 钠溶液中，收好。 钠溶液中，收好。

氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素含量测定原理：〈1〉
〈2〉再用紫外分光光度法测其含 量
氯霉素注射液PH值和含量检测
氯霉素标准溶液的配制 •准确称取氯霉素标准品0.05g,用丙二 醇溶液40%溶解至100ml,配成浓度为 500微克/ml的标准储备液. •或找到已知氯霉素含量的氯霉素注射 液作为标准液
氯 霉 素 注 射 液 PH 值 的 测 定
pH值 应为5.0～7.5 （中国药典1985年版二部附录33页）
氯霉素注射液PH值测定方案
•用PH计测定PH值
•Ph计的原理：是将一支电极与被测物质活度有 关的电极（称指示电极）和另一支电位已知且保 持恒定的电极（称参比电极）插入待测溶液中组 成一个化学电池，在零电流的条件下，通过测量 电池电动势，进而根据能斯特求出待测液ph值。
氯霉素注射液PH值和含量检测
选用0.1mol/L的乙酸和乙酸钠
可由上式得出V乙酸钠：V乙酸=1.77827 从而可以得出PH为5.5的标准缓冲溶液
同理可得
PH为6.8和7.2的缓冲溶液
氯霉素注射液PH值和含量检测
PH计的校正 1. 预热：开电源，预热30分 钟，连接电极有读数开关 开放的情况下调0。 2. 定位：由产品说明书知注 射液的PH为5.0-7.5，将电 极浸入PH为6.8的缓冲溶 液中，轻轻摇匀，待读数 稳定后，调定位旋扭使其 读数为6.8，重复2~3次
O2 N
H2NHN
H NH2 OH H OH HIO4
O2 N O
O2 N
NO2
O2N
NO2 N N H
NO2
p-nitrophenyl-2aminopropan-1,3-diol
p-nitrobenzaldchyde

4.测定完毕，关上电源开关，取下电极，用蒸馏水洗
净电极，擦干收好。
含量的测定
1称取氯霉素0.5g溶于水中，转移至容量瓶中加 水稀释到刻度。
2.分别吸取2mL,4mL,6mL,8mL,10mL于试管中， 全部补加蒸馏水至10mL。
3.在278nm处以水为参比溶液分别测量上述5种 标准液的吸光度，记录数据。
❖ 含量测定原理：采用紫外分光光度法，它是 以朗伯-比尔定律为依据。氯霉素的水溶液在 紫外光区有最大吸收，通过标准溶液的吸收 曲线确定最大吸收峰。在最大吸收波长处， 测定吸光度。采用工作曲线法，确定氯霉素 注射液中氯霉素的含量。
仪器和试剂
仪器:PHS-25型酸度计，蒸馏水, PH值为 5.5,7.2的标准缓冲溶液 ,PH试纸,电子天平， 722型紫外可见分光光度计，1cm比色皿四个, 100ml容量瓶。
4.以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘 制标准曲线。
A
吸 光 度
0
氯霉素体积v/ml
5.测量待测样品的吸光度，利用标准曲线计算出浓度。
实验记录
序号
1
2
3 平均值
PH
氯霉素 0.0mL 2.0mL 4.0mL 6.0mL 8.0mL 10.0mL 注射液
体积 吸光度
浓度 （mg/L）
查资料得氯霉素注射液含量范 围为125mg左右， 可将所测得值 与之做对比来判断样品是否达标。 若不达标分析可能原因。
氯霉素介绍
❖ 氯霉素注射液为抗生素类药。主要成分氯霉素，分子式为 C11H12Cl2N2O5，PH为5.0~7.2。有广谱抑菌作用。用于伤寒杆 菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、流感杆菌、布氏杆菌、脑膜炎球 菌、链球菌、肺炎球菌等感染，对多种厌氧菌感染有效，亦 可用于立克次体感染。有引起粒细胞缺乏症及再生障碍性贫 血的可能，有时可引起精神症状，长期应用可引起二重感染。

氯霉素是一种兽用抗生素，常用于动物养殖中。通过测定食品中的氯霉素含量，可以保障食品 安全，避免兽药残留对人类健康的危害。
监测环境污染
氯霉素在环境中难以降解，容易积累在水、土壤等环境中。通过测定环境中的氯霉素含量，可 以了解环境污染状况，评估环境治理的效果。
在环境监测中的应用
环境污染物监测
氯霉素在环境中可作为污染物存在，对其含量进行监测可以了解环境污染物的 种类和浓度，评估环境质量状况。
遵循法规要求
各国药品监管机构都规定了药品中氯霉素含量的上限。通过测定氯霉素 含量，可以确保药品符合相关法规要求，保障公众的健康和安全。
03
监测药品生产过程
氯霉素含量的测定不仅是对药品成品的检测，还可以对药品生产过程进
行监控，确保生产过程中的原料、中间体和成品的品质符合要求。
在食品检测中的应用
保障食品安全
实验步骤
5. 结果分析
根据记录的峰保留时间、峰面积或峰高， 结合标准品比对，确定氯霉素的含量。同 时进行定量和定性分析。
1. 样品处理
将待测样品用适量的色谱甲醇溶解，摇匀 后用移液管分别吸取适量置于容量瓶中， 再用色谱甲醇定容至刻度，摇匀待测。
2. 上样
将处理后的样品通过进样针头注入进样口， 根据需要设定进样量。
目录
• 氯霉素简介 • 氯霉素含量的测定方法 • 氯霉素含量的测定实验 • 氯霉素含量的测定应用 • 氯霉素含量的测定注意事项
氯霉素简介
氯霉素的化学结构
氯霉素是一种由委内瑞拉链霉菌产生的抗生素，其化学 结构是由对硝基苯基、丙二酸和二甲胺组成的。
它属于抑菌性广谱抗生素，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴 性菌均有抑制作用。
4. 检测
在紫外检测器中设置适当的波长和灵敏度， 对分离后的色谱峰进行检测，记录各个峰 的峰高或峰面积。