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苯巴比妥人工免疫原合成及抗体特性研究摘要：将苯巴比妥(PB)经硝化和还原两步化学修饰后，在其苯环上引入活性基团氨基，合成具有半抗原结构特征的对氨基苯巴比妥(pAPB)；用重氮化法将pAPB 偶联于载体蛋白BSA和OV A上，合成人工免疫原BSA-pAPB和包被抗原OV A-pAPB，用红外(IR)、紫外(UV)、SDS-PAGE进行鉴定，推算分子结合比；用BSA-pAPB免疫新西兰白兔和SPF雏鸡，间接ELISA测定多克隆抗体(pAb)效价，阻断ELISA鉴定其敏感性，WestGold层析试验和交叉反应试验鉴定其特异性。
结果表明，BSA-pAPB偶联成功，分子结合比为1∶19；获得了高价、敏感、特异的pAb，为PB残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。
关键词：苯巴比妥；半抗原；人工免疫原；抗体；鉴定Study on Synthesis of Artificial Immunogen and Characteristics of Polyclonal Antibody of PhenobarbitalAbstract：The active group amido was introduced into phenyl of PB and formed p-amidophenobarbital(pAPB) which had hapten structure by chemical modification of nitration and deoxidization. Diazotization was used to conjugate pAPB to carrier protein BSA and obtained artificial immunogen BSA-pAPB，the coating antigen OV A-pAPB was obtained in the same way. IR，UV and SDS-PAGE were used to identify PB artificial immunogen. New Zealand white rabbits and SPF chickens were immunized with BSA-pAPB，the titre of polyclonal antibody(pAb) was measured by indirect ELISA，the sensitivity of the pAb was identified by blocking ELISA and the specificity of pAb was identified by experiments of WestGold immuno chromatography and cross-reaction. The results showed that PB artificial immunogen was synthesized successfully and its conjugation ratio of pAPB to BSA was about 19∶1，the high-titer，sensitive and specific PB pAb were produced in sera of Balb/C mice immunized with BSA-pAPB，which made it possible to establish immunoassay of PB residues in animal food.Key words：phenobarbital；hapten；artificial immunogen；antibody；identification苯巴比妥(Phenobarbital，PB)又名鲁米那(Luminal)、迦地那(Gardenal)，主要成分为5-乙基-5-苯基-2，4，6-(1H，3H，5H)嘧啶三酮，是5位被乙基和苯基双取代的丙二酰脲衍生物。
苯巴比妥及其制剂的分析巴比妥类药物是巴比妥酸的衍生物，具有丙二酰脲的基本结构：常用巴比妥类药物多为巴比妥酸的5，5-二取代物，亦有少数为1，5，5-三取代物或C2位为硫取代的硫代巴比妥酸的5，5-二取代物。
本类的代表性药物有苯巴比妥、司可巴比妥钠及硫喷妥钠。
其结构式为：一、苯巴比妥的分析苯巴比妥在乙醇或乙醚中溶解，在水中极微溶解，在氢氧化钠或碳酸钠溶液中易溶。
本品具有丙二酰脲母核和苯环结构，可发生丙二酰脲的一般反应和苯环的特征反应。
(一)鉴别1．与亚硝酸钠-硫酸的反应苯巴比妥在硫酸存在下与亚硝酸钠作用生成橙黄色产物，随即转为橙红色。
可用于区别苯巴比妥与其他不含苯环的巴比妥类药物。
方法：取供试品约10mg，加硫酸2滴与亚硝酸钠约5mg，混合，即显橙黄色，随即转橙红色。
2．与甲醛-硫酸的反应苯巴比妥在硫酸存在下与甲醛反应生成玫瑰红色产物，可用于区别苯巴比妥与其他巴比妥类药物。
方法：取供试品约50mg，置试管中，加甲醛试液1ml，加热煮沸，冷却，沿管壁缓缓加硫酸0.5ml，使成两液层，置水浴中加热，接界面显玫瑰红色。
3．红外光谱法苯巴比妥具有羰基、酰胺和苯环结构，有特征红外光谱，可用于鉴别。
《中国药典》规定，本品的红外吸收图谱应与对照的图谱一致。
4．丙二酰脲类的鉴别反应巴比妥类药物含有丙二酰脲结构，在碱性条件下，可与某些重金属离子反应，生成沉淀或有色物质。
这一特性可用于本类药物的鉴别。
(1)银盐反应取供试品约0.1g，加碳酸钠试液1ml与水10ml，振摇2分钟，滤过，滤液中逐滴加入硝酸银试液，即生成白色沉淀，振摇，沉淀即溶解；继续滴加过量的硝酸银试液，沉淀不再溶解。
反应式如下：巴比妥类药物的一银盐可溶于水，而二银盐不溶。
反应中第一次出现的白色沉淀是由于硝酸银局部过浓，产生少量巴比妥二银盐，振摇后，转换为可溶性的一银盐，继续滴加硝酸银至过量，则完全生成白色二银盐沉淀。
(2)铜盐反应取供试品约50mg，加吡啶溶液(1→10)5ml，溶解后，加铜吡啶试液1ml，即显紫色或生成紫色沉淀。
