中国药典-高效液相色谱讲义

2020年我国药典是一部权威的药品标准，其中包含了大量的药品、原料药和药用辅料的规范。

药品的质量和安全性对于人们的生命健康至关重要，而药典中的含量测定方法是评价药品质量的重要手段之一。

而高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）作为一种快速、准确的分析方法，在药典中得到了广泛的应用。

本文主要介绍了2020年我国药典中运用高效液相色谱法测定含量的品种。

一、什么是高效液相色谱法高效液相色谱法是一种利用溶液在固定相载体上进行分配平衡的色谱分析方法。

它利用流动相的不同速度使样品中的成分在固定相上分离出来，再通过检测器对各个成分进行检测和定量。

该方法具有分离效率高、灵敏度高、准确性高、重现性好等优点，因此被广泛应用于药品质量控制领域。

二、2020年我国药典中运用高效液相色谱法测定含量的品种1.对乙酰氨基酚片对乙酰氨基酚片是一种用于退烧和镇痛的常用药品，其含量测定需要高效液相色谱法进行。

根据2020年我国药典，对乙酰氨基酚片中对乙酰氨基酚的含量可以采用高效液相色谱法进行测定，并以此作为评价药物质量的重要指标。

2.阿莫西林胶囊阿莫西林是一种广谱抗生素，常用于治疗呼吸道、泌尿生殖系统和消化道感染等疾病。

2020年我国药典规定，阿莫西林胶囊中阿莫西林的含量可以采用高效液相色谱法进行测定，以确保药品的质量。

3.复方甘草酸苷片复方甘草酸苷片是一种常用的抗炎、抗过敏药品，其含量测定也需要采用高效液相色谱法进行。

2020年我国药典规定，复方甘草酸苷片中甘草酸二钾的含量可以采用高效液相色谱法进行测定，并以此作为评价药物质量的重要指标。

4.硫酸链霉素滴眼液硫酸链霉素滴眼液是一种用于治疗眼部感染的药品，其含量测定也需要采用高效液相色谱法进行。

2020年我国药典规定，硫酸链霉素滴眼液中链霉素的含量可以采用高效液相色谱法进行测定，以确保药品的质量。

5.丙溴定胶囊丙溴定是一种中枢神经系统调节药，常用于治疗癫痫等疾病。

中国药典2020 高效液相色谱高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种分离、检测、定量化合物的分析技术。

它通过样品在固相填充柱（也称为色谱柱）中与流动相相互作用，达到物质的分离和检测的目的。

高效液相色谱的主要设备包括进样器、泵、检测器和色谱柱。

进样器负责将样品注入到色谱柱中，泵则负责向色谱柱内注入流动相，检测器则负责检测和记录某特定物质的浓度，并把数据传回计算机。

色谱柱则是样品分离的关键部分，它由一种或多种材料组成，使样品能够在流动相中以一定速率流过。

高效液相色谱通常用在检测复杂样品中的化合物，如食品、药品、生物样品等。

它的主要特点是高分离能力、高灵敏度、高准确性和高重现性。

它能够检测到微量量级以下的化合物，并且很容易从复杂矩阵中提取所需的物质。

高效液相色谱的工作原理是基于化学物质的亲性性质。

样品经过某种预处理后，以一定的注入速度进入色谱柱中。

在色谱柱中，样品物质会和填充柱内固定的某种材料作用，根据化合物的特性不同，有些化合物会与某些色谱柱材料形成亲和作用，有些则会与其他材料发生反应，并根据这些作用发生时的瞬间不同时刻，生成不同的荧光信号。

高效液相色谱的流动相包括两种，一种叫极性流动相，即水相。

另一种叫做非极性流动相，即有机溶剂。

在高效液相色谱的运用过程中，这两种流动相经常会互相使用，互相搭配，以达到更好的分离效果。

总结来说，高效液相色谱是一种分离、检测和定量化合物的重要技术，其优点包括高分离能力、高灵敏度、高准确性和高重现性等。

在现代科学和工业生产中，高效液相色谱不仅在药品、食品、生物样品分析方面得到广泛应用，而且还在环保、冶金、化工等其他关键领域起到了巨大的作用，使科技更加先进，生产更为精准。

《中药色谱分析》实验讲义实验一高效液相色谱操作及其参数的测定一、目的要求：1．熟悉高效液相色谱仪的原理和基本方法2．熟悉使用高效液相色谱仪基本操作方法二、实验提要：以高压液体为流动相的液相色谱分析法称高效液相色谱法（HPLC）。

其基本方法是用高压泵将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂泵入装有填充剂的色谱柱，经进样阀注入的样品被流动相带入色谱柱内进行分离后依次进入检测器，由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色信号或进行数据处理而得到分析结果。

由于高效液相色谱法具有分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用范围广（样品不需气化，只需制成溶液即可）、色谱柱可反复使用的特点，在《中国药典》中有50种中成药的定量分析采用该法，已成为中药制剂含量测定最常用的分析方法。

高效液相色谱法按固定相不同可分为液-液色谱法和液-固色谱法；按色谱原理不同可分为分配色谱法（液-液色谱）和吸附色谱法（液-固色谱）等。

目前，化学键合相色谱应用最为广泛，它是在液－液色谱法的基础上发展起来的。

将固定液的官能团键合在载体上，形成的固定相称为化学键合相，不易流失是其特点，一般认为有分配与吸附两种功能，常以分配作用为主。

C18（ODS）为最常使用的化学键合相。

根据固定相与流动相极性的不同，液-液色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法，当流动相的极性小于固定相的极性时称正相色谱法，主要用于极性物质的分离分析；当流动相的极性大于固定相的极性时称反相色谱法，主要用于非极性物质或中等极性物质的分离分析。

在中药制剂分析中，大多采用反相键合相色谱法。

三、实验内容1.高效液相色谱系统组成：（一）高压输液系统由贮液罐、脱气装置、高压输液泵、过滤器、梯度洗脱装置等组成。

1.贮液罐由玻璃、不锈钢或氟塑料等耐腐蚀材料制成。

贮液罐的放置位置要高于泵体，以保持输液静压差，使用过程应密闭，以防止因蒸发引起流动相组成改变，还可防止气体进入。

2.流动相流动相常用甲醇-水或乙腈－水为底剂的溶剂系统。

高效液相色谱（HPLC）基础知识我国药典收载高效液相色谱法项目和数量比较表：方法项目数量1985年版1990年版1995年版2000年版HPLC法鉴别9 34 150 检查12 40 160 含量测定7 60 117 387鉴于HPLC应用在药品分析中越来越多，因此每一个药品分析人员应该掌握并应用HPLC。

I．概论一、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。

又称为色层法、层析法。

色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。

后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。

液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。

高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。

它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。

又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。

也称现代液相色谱。

二、HPLC的特点和优点HPLC有以下特点：高压——压力可达150~300 Kg/cm2。

色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。

高速——流速为0.1~10.0 ml/min。

中国药典2020 高效液相色谱一、引言高效液相色谱（HPLC）是一种高分辨、高灵敏度、高重现性的分析方法，已经成为药物研究、食品安全、环境监测和化学分析的重要工具。

本文将介绍HPLC的原理、仪器构成、样品制备、色谱柱选择和方法验证等内容。

二、原理HPLC的原理是基于样品在液相载流动相中的分配与分离，通过不同的相互作用力使不同成分在色谱柱中发生分离。

其分离的基本原理是固相与液相之间的作用力和样品分子与固相之间的相互作用力。

HPLC色谱柱内充填有高度均质的吸附剂，如疏水性柱填料C18、氢氧化铝柱填料、离子交换柱填料等。

通过溶解在流动相中的样品在与填料表面相互作用的力使成分发生吸附和解吸，从而实现分离。

三、仪器构成HPLC主要由溶液送样器、流动相系统、流动相再生器、色谱柱、椭圆电泳二极管阵列检测器和数据采集分析系统等组成。

溶液送样器用于将样品注入到色谱柱中，流动相系统用于将样品溶液进行均质输送，色谱柱用于分离样品成分，检测器用于检测样品分子，数据采集分析系统用于处理检测后的数据。

四、样品制备样品制备是HPLC分析的重要环节，样品制备的好坏直接影响到后续的分析结果。

样品制备主要包括样品的提取、纯化和浓缩等处理步骤。

在制备样品的过程中，需要注意避免可能影响HPLC分析结果的因素，如溶剂残留、色谱柱污染等。

五、色谱柱选择色谱柱的选择对HPLC分析结果具有重要影响。

根据需要分离的样品成分的特性选择不同的色谱柱，如疏水性柱填料C18适用于疏水性物质的分离，氢氧化铝柱填料适用于金属离子的分离等。

此外，色谱柱的尺寸、填料粒径和填体厚度也会影响分离效果。

六、方法验证HPLC方法验证是验证HPLC方法的可靠性、准确性和重现性的手段。

包括系统适应性试验、选择性试验、线性试验、精密度试验和准确度试验等。

通过方法验证，可以评估HPLC方法在特定条件下对样品的分析能力，以保证HPLC分析结果的准确性和可靠性。

结论HPLC作为一种高效的分析方法，已经在医药、食品、环境和化学等领域得到广泛应用。

中国药典2020 高效液相色谱第一部分：高效液相色谱的概述高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种分离和分析化合物的重要技术。

它通过液相色谱柱将混合物中的化合物分离出来，然后利用不同化合物在柱中的分配和吸附作用，采用不同的流动相来实现化合物的分离和分析。

HPLC已成为分析化学中不可或缺的技术手段，广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。

第二部分：高效液相色谱的原理高效液相色谱的分离原理是基于样品与固定相的相互作用来实现的。

样品经过柱子时，不同的成分会在固定相和流动相的作用下以不同的速率迁移，从而实现分离。

常用的固定相有反相、离子交换、凝胶等。

流动相通常是有机溶剂和水的混合物，也可以根据样品的性质来选择适当的流动相。

在分离过程中，通过调节柱温、流速、流动相和检测器参数等因素，可实现对目标物的选择性提取和分离。

第三部分：高效液相色谱的仪器设备高效液相色谱仪主要包括进样器、色谱柱、泵、检测器和数据处理系统等组成。

进样器用于将样品引入色谱柱，色谱柱是色谱分离的关键部分，泵用于推动流动相，检测器用于监测样品的出峰情况并进行定量分析，数据处理系统用于处理和分析所得的色谱数据。

现代高效液相色谱仪通常还配备有自动进样和自动数据处理功能，提高了分析效率和准确性。

第四部分：高效液相色谱的应用HPLC技术在药物分析中有着广泛的应用，可以用于药物的纯度检测、含量测定、稳定性研究等。

它还可以用于分析环境中的有机污染物和重金属离子、食品中的添加剂和残留物、植物中的活性成分等。

此外，HPLC还可以用于生物分析，如蛋白质和肽类的纯度和组成分析、核酸和小分子的分析等。

第五部分：高效液相色谱的发展趋势随着科学技术的不断进步，高效液相色谱仪的性能和分析能力不断提升，包括色谱柱材料的改进、检测器的灵敏度和分辨率的提高、数据处理系统的智能化等。

同时，绿色分析、微型化、高通量分析等也成为研究热点。

中国药典2020 高效液相色谱第一部分：引言中国药典2020作为一部权威的药品标准参考书，对药品的质量、效能等方面提出了严格的要求。

其中，高效液相色谱技术作为一种重要的分析方法，在药品质量评价、成分分析和研究等方面发挥着重要作用。

本文将围绕中国药典2020对高效液相色谱的相关标准和要求展开讨论，以期对该领域的研究和实践提供一定的参考。

第二部分：高效液相色谱的基本原理和技术特点高效液相色谱是一种基于液相色谱原理的分析技术，其基本原理是将混合物通过溶剂在固定填充物（色谱柱）中进行分离，通过不同成分分配系数的差异实现物质的分离和检测。

与传统液相色谱相比，高效液相色谱具有分辨率高、分离速度快、灵敏度高等特点，因此得名。

在药品分析领域，高效液相色谱技术已经成为不可或缺的手段之一。

第三部分：中国药典2020对高效液相色谱的相关要求中国药典2020对高效液相色谱的要求主要包括了色谱柱、流动相、检测条件、系统适应性验证等方面。

其中，色谱柱的选择和使用是非常关键的环节，中国药典明确了不同药品应选用何种色谱柱进行分析，并对色谱柱的质量要求做出了明确的规定。

同时，在流动相的选择、检测条件的设定和系统验证等方面，中国药典也提出了具体的要求和标准。

第四部分：高效液相色谱在药品分析中的应用高效液相色谱在药品分析中具有广泛的应用，主要包括药品质量评价、成分含量分析、掺假鉴定等方面。

通过高效液相色谱技术，可以对药品中的主要成分和杂质进行准确、快速的检测，保证药品质量的可靠性。

同时，高效液相色谱还可以用来对药品进行掺假鉴定，保障患者用药的安全性和有效性。

第五部分：高效液相色谱在新药研发中的应用高效液相色谱在新药研发中也发挥着重要作用，其在药代动力学、药物代谢及药效学等方面的应用越来越广泛。

通过高效液相色谱技术，可以对新药在体内的代谢过程进行快速、准确的分析，为新药的研发提供了有力的支持。

第六部分：展望随着科学技术的不断发展，高效液相色谱技术必将迎来新的发展和突破。

高效液相色谱法原理
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种常用的分离和分析方法，其原理基于样品中的
化合物在液相流动载体中与固定在填料上的固定相相互作用，并因此在色谱柱上发生不同程度的分配和保留。

在高压下，样品通过色谱柱，各组分依据其与移动相和固定相的相互作用的不同，在柱中以不同速率进行分离。

高效液相色谱法的主要组成部分包括进样器、色谱柱和检测器。

样品首先通过进样器注入到移动相中，然后进入色谱柱。

色谱柱是由一种固定相填充而成的管状结构，固定相表面有一定数目的固定相基团，用于化合物的分离。

移动相则是一种液态溶剂，可以根据需要选用不同的组合，并通过高压泵以一定流速通过色谱柱。

化合物在色谱柱中与固定相发生相互作用，有选择性地被保留或分离。

不同的化合物在色谱柱中的相互作用程度不同，因此它们以不同的速率通过色谱柱。

通过控制柱温、移动相成分、流速和色谱柱填料等条件，可以调节分离效果。

最后，分离的化合物进入检测器进行检测和信号记录。

高效液相色谱法广泛应用于许多领域，包括药物分析、环境监测、食品安全等。

其优点在于对大多数化合物具有良好的分离选择性、灵敏度高、分析速度快、操作简便。

同时，该方法还可以与其他分离技术（如质谱联用）进行联用，以提高分析的灵敏度和准确性。

高效液相色谱法高效液相色谱法（《中国药典》2010年版二部附录V D）系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。

注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

1 对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪，由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成，仪器应按现行国家技术监督局“液相色谱仪检定规程”定期鉴定并符合有关规定。

1.1 色谱柱最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。

反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷等）也有使用。

正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。

离子交换色谱系统使用离子交换填充剂；分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。

填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。

孔径在15nm（1nm=10Å）以下的填料适于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。

除另有规定外，分析柱的填充剂一般在3~10μm之间。

粒径更小（约2μm）的填充剂常用于填装微径柱（内径约2mm）。

使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当的调整。

当对其测定结果产生争议时，应以品种正文规定的色谱条件的测定结果为准。

以硅胶为载体的键合固定相的使用温度不超过40℃，为改善分离效果可适当提高色谱柱的使用温度，但不宜超过60℃。

流动相的pH指应控制在2~8之间。

当pH指大于8时，可使载体硅胶溶解；当pH指小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。