高效制备感受态

高效感受态细胞制备试剂盒产品编号：SK9305/SK9306包装规格：40支/200支试剂盒组成组分 SK9305，40支 SK9306，200支BT Buffer F 10 ml 5 × 10 mlBT Buffer E 4 ml 5 × 4 ml2个 10个BT Media(1 Capsules for 50 mL)操作手册1份1份保存方法及注意事项BT Media以胶囊的形式提供，请于室温密封干燥保存。

BT Buffer F和BT Buffer E可于常温运输，收到后请于4°C保存，长期保存请置-20°C。

产品介绍生工BT高效感受态制备试剂盒采用了一种简单而可靠的方法制备感受态细胞，由该试剂盒制备的感受态细胞在进行转化时无需经过热激步骤，对于Ampicillin抗性质粒而言，甚至连活化步骤都可以省略，感受态细胞和DNA混合后即可直接涂布，极大地简化了转化过程，提高了实验效率。

用该试剂盒制备的大肠杆菌DH5α细胞使用pUC19质粒DNA转化，转化率可以达到107~109 cfu/µg DNA，对其他常用的工程菌株和质粒也同样适用。

产品特色1. 感受态制备流程快速简单。

2. 转化过程无需热激。

3. 转化效率高达107~109 cfu/µg DNA。

4. 使用感受态专用培养基，最大化感受态效率。

5. 适合大量制备。

高效感受态细胞制备流程自备材料：目标菌种、LB培养基及平板、离心机、50 ml离心管、冰等。

BT Media培养基准备：将一只胶囊投入50 mL蒸馏水中，高压灭菌即可。

准备工作：将BT Buffer F和BT Buffer E放冰上预冷，预冷低温离心机至4°C。

1. 用超低温冰箱中保存的菌种在LB平板上进行划线培养，置37°C培养箱中静置培养12~16 h待菌落生长至直径1~2 mm大小。

2. 挑取一个生长正常的菌落，接种至10~15 mL液体LB培养基中，于37°C摇床充分振荡（≥ 250 rpm）培养12~16 h。

制备感受态细胞的原理
制备感受态细胞的原理是通过采用特定的培养条件和处理方法，使细胞转变为感受态细胞。

感受态细胞与其它类型的细胞相比，具有更特殊的功能和形态。

首先，制备感受态细胞通常需要选择合适的细胞系或细胞株作为起始材料。

这些细胞通常具有一定的可塑性和多能性，可以通过适当的诱导和处理转变为感受态细胞。

其次，制备感受态细胞需要提供一系列的培养条件，以满足细胞生长和分化的需要。

这包括提供适当的培养基组成、生长因子、细胞外基质支持等。

适当的培养条件可以促进细胞内信号传导途径的激活，从而触发感受态细胞的形成。

另外，制备感受态细胞的过程中还需要使用一些特定的诱导因子或化合物。

这些诱导因子可以通过激活或抑制特定的信号通路，调节细胞的基因表达和功能，从而诱导细胞转变为感受态细胞。

最后，制备感受态细胞还需要进行一系列的分析和鉴定，以确定细胞是否成功转化为目标细胞。

这包括检测特定标志物的表达、观察细胞形态学的改变、进行功能性实验等。

总之，制备感受态细胞的原理是通过选择合适的起始材料、提供适宜的培养条件、使用特定的诱导因子以及进行分析鉴定等步骤，将细胞转变为目标的感受态细胞。

这个过程涉及到多个层面的调控和影响，需要综合考虑细胞的内外环境因素。

制备感受态细胞的原理1. 什么是感受态细胞1.1 定义感受态细胞，听起来像是个高大上的名词，其实就是那些“准备好”接受外界信息和刺激的细胞。

想象一下，像个随时待命的服务员，时刻准备接待客人。

细胞的这种状态，通常是在特定的环境下，通过某些方法处理后形成的。

1.2 重要性为什么要制备感受态细胞呢？这可是生物实验中的关键一步！它们能帮助我们进行基因转化、疫苗研究，甚至是药物开发。

就像一个关键的道具，缺了它，很多实验都没法顺利进行。

2. 如何制备感受态细胞2.1 基本步骤制备感受态细胞的过程其实并不复杂，简单来说就是要让细胞放松心情，准备好接受外来的DNA。

首先，我们需要把细胞放在一个低温环境下，这就像给它们一个凉爽的SPA，让它们变得“懒洋洋”的。

接着，添加一些化学试剂，比如氯化钙，这些化学试剂可以帮助细胞的膜变得更容易接受外来的DNA，哇，真是神奇！2.2 处理时间然后，细胞要在这个特殊的环境中待一段时间，让它们完全“感受”这个过程。

通常，我们会让它们静置一小时左右，这段时间就像让一个小孩在游乐场里玩耍，兴奋而又期待。

当时间到了，嘿！细胞已经准备好迎接挑战了。

3. 实际应用3.1 科研领域在科研领域，感受态细胞的应用真是无处不在。

比如，科学家们可以将新的基因片段导入这些细胞中，看看它们会发生什么样的变化。

就像给一个平凡的角色增加超能力，结果往往出乎意料，有时候能发现新的疾病机制，有时候能找到新的治疗方法，简直就是科研的“黑科技”！3.2 工业应用当然，感受态细胞的应用不仅限于实验室，它们在工业上也大显身手。

比如，利用这些细胞生产蛋白质，甚至是药物，提升生产效率，降低成本，简直是企业的“秘密武器”。

有了它，企业就能在竞争中抢占先机，像个抢眼的明星一样脱颖而出。

总之，感受态细胞的制备虽然听起来复杂，但只要掌握了窍门，便能游刃有余。

它不仅是生物学研究的基础，更是现代科技进步的重要推动力。

就像一首动听的乐曲，细胞的“感受态”是其中不可或缺的音符。

感受态细胞制备(三种方法)
感受态细胞的制备是一项非常重要的实验技术，可应用于许多研究领域，如分子生物学、农药毒理学、农业植物保护等。

一般来说，将培养细胞转化为感受态细胞，可以有三种方法：
1、皮下注射引起的感受态细胞制备。

由于它是一种经典的制备方法，大多数细胞都可以使用。

其核心步骤是将小量液体注入传感源头(如病毒、菌株、多糖、细菌等)皮下。

这种技术可以帮助人们制备特定种类的感受态细胞，并且可以控制病毒的感染率。

2、利用细胞克隆引起的感受态细胞制备。

这种方法涉及到使用不同种类的细菌或病毒及其克隆进行感染。

一旦细胞受感染，感受态细胞就会形成。

此外，通过诱变基因表达等方式，也可以制备出不同感受源的感受态细胞。

3、利用小分子引起的感受态细胞制备。

小分子技术中的最新研究主要集中在核酸抑制剂、蛋白质结合蛋白、信号转导调节剂等。

这些小分子可以直接结合到感受细胞的特定分子，从而影响其功能，抑制或促进感受细胞的形成。

以上是三种感受态细胞制备的方法，它们均可用于解析某一特定基因或基因产物在细胞功能中的作用。

此外，这些技术还可用于识别及检测特定感受源，并评价其对细胞株功能的影响程度。

另外，它们还可用于发现新型抗病毒剂，以提高植物抗病能力。

因此，感受态细胞的制备实验在诸多方面都具有重要的意义，值得继续探索。

高效感受态制备1.平板划线活化菌种；2.挑单克隆接种到5ml培养基，37°C过夜培养；3.早上将过夜培养的菌液加入50ml 培养基中，准备3瓶50ml 培养基，分别加入菌液2ml，1ml，0.5ml；18°C培养；4.过2小时后开始测OD600，当OD600达到0.3-0.5时，停止培养；如没到，每隔45min测一次OD；5.冰浴10分钟；6.将冰浴好的菌液，在超净台内，收集到已灭菌的50ml离心管中；7.2500g，4°C离心10分钟；8.在超净台内倒掉上清，用200ul枪头吸去剩余的培养基；9.加入10ml 预冷的转化缓冲液；10.冰水浴中悬浮菌体；11.2500g，4°C离心10分钟；12.在超净台内倒掉上清，用200ul枪头吸去剩余的液体；13.加入5ml 预冷的转化缓冲液，再加350ul DMSO；14.冰水浴中悬浮菌体；15.将混匀的菌液分装到预冷的1.5ml离心管中，每管装50-200ul；16.将分装好的1.5ml离心管转移到预冷的冷藏用纸盒；17.将装好感受态的纸盒加入液氮迅速冷冻；18.将感受态保存到-80°C冰箱顶层注意事项：1.无菌、低温、快速是制备高活力感受态的三个重要因素2.菌种建议保存多管，每次冻融后建议丢弃3.制备前需准备好几样东西：A、已灭菌的新枪头和1.5ml离心管；B、已灭菌的50ml离心管（可用进口的CORNING管-橙色盖子，无需灭菌）；C、预冷1.5ml离心管和冷藏用纸盒4.部分菌种OD600到0.25以上即可，如BL21-GOLD，XL1-BLUE，有的菌种OD要0.4，如Rosetta5.如菌种生长速度慢，加入50ml培养基的菌液量可适当增加到2.5ml或3ml6.第一次加入10ml转化缓冲液用于清洗，可不用太准确，第二次加入5ml转化缓冲液用于保存，需精确7.悬浮菌体时要注意观察是否还有小块，必须将小块也悬浮散开才行8.超净台内应准备一个用75%乙醇喷过的塑料烧杯，用于收集废液9.分装感受态时，应将50ml离心管置于冰上（用塑料烧杯装冰）。

高效感受态细菌制备试剂盒(Hanahan方法)货号：M050012描述：Hanahan法（1）是制备高效感受态细菌的标准方法。

这种化学方法制备的感受态细菌的转化效率可达到109cfu/µg DNA，通常用于构建高质量的基因文库，对于普通的克隆操作更是绰绰有余。

对于很难获得有效连接和重组子的困难克隆操作，使用Hanahan法制备的感受态细菌无疑为克隆成功提供了最大保证。

然而Hanahan法的试剂准备相当繁琐，通常用于商业化感受态细菌，通常实验人员难得尝试。

本试剂盒以Hanahan原始文献(1)和《分子克隆实验指南》(2)发表的方法为基础，提供制备新鲜或冻存的高效感受态细菌的全套试剂和简化方案。

重复性甚好，转化效率高，可满足基因文库构建和所有的克隆操作。

组成：20ml Hanahan缓冲液，0.5ml加强液。

可制备100x50µl管高效感受态细菌，进行100-200次转化。

适用：制备新鲜或冻存的高效感受态细菌。

储存：短期4ºC避光，长期-20ºC。

操作步骤1.细菌培养：1.1准备器皿和培养基。

(1)使用洁净培养器皿，用普通复印纸或报纸覆盖瓶口或管口棉线扎紧高压消毒。

(2)厌氧生长的菌体难以达到高感受态。

为保证有氧培养，最好使用250ml三角瓶加入50ml培养基摇菌。

(3)最好用SOB培养基，用SOB要优于LB。

培养基pH值在6.8-7.2，含有20mM MgSO4or20mM MgCl2,，有利于获得高效感受态。

(SOB medium: 2%bacto-trytone,0.5%bacto-yeast extract,0.5%NaCl,2.5mM KCl,20mM MgSO4,pH7.0with NaOH)1.2细菌接种。

取250ml三角瓶加入50ml含10~20mM MgSO4的SOB培养基。

1:100接种冻存的菌液于SOB培养基，注意接种比例随冻存细菌浓度和类型而变。

感受态细胞的制备一、实验原理受体细胞通过一些特殊方法（如电击法，CaCl2，MnCl2，MgCl2等化学试剂法)的处理后，使细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的状态，成为感受态细胞。

本方案介绍的方法为TSS法和KCM转化法。

二、材料及准备工作一）材料准备二)试剂配制1、液体LB培养基（200ml，高压灭菌，4℃保存备用）蛋白胨 2.0g酵母提取物 1.0g氯化钠（NaCl） 2.0g2、固体LB培养基（2×100ml，高压灭菌）蛋白胨2×1.0g酵母提取物2×0.5g氯化钠（NaCl）2×1.0g琼脂粉2×1.5g温度降低到45℃后（不烫手），取其中一瓶加入氨苄至终浓度100μg/ml（100mlLB加100μl 100mg/ml的氨苄）后铺平皿，另一瓶直接铺平皿。

4℃保存备用。

3、TSS液（100ml）（有效期2周）聚乙二醇（PEG8000）10g 终浓度10%DMSO 5ml 终浓度5%MgCl2(1mol/L）5ml 终浓度50mmol/LLB 85ml 终浓度85%去离子水补足100ml，0.22μm过滤器过滤后，4℃保存备用注：聚乙二醇分子量可以为3000-80004、5×KCM液（10ml）（可-20℃长期保存备用）KCl（2mol/L） 2.5mlCaCl2(1mol/L) 1.5mlMgCl2(1mol/L) 2.5ml水补足到10ml, 0.22μm过滤器过滤后，4℃保存备用（不要高压消毒）5、氨苄青霉素（amp）（100mg/ml）取0.5g氨苄青霉素，溶解于5ml去离子水中，0.5ml分装，-20℃保存备用三）仪器设备1、低温大容量离心机2、恒温水浴锅3、超净台4、高压锅5、37℃孵育箱6、恒温摇床7、制冰机8、分光光度计9、微量移液枪10、低温冰箱三、步骤及注意事项一）感受态制备（TSS法）1、取菌种，划LB平皿板（无氨苄）；2、挑取分离良好的独立克隆，接种到5ml LB 中，220rpm ，37℃恒温摇床孵育过夜；3、取1 ml摇好的菌液，接种到100 ml LB 中（500ml锥形烧瓶），220rpm ，37℃孵育2.5-3.0h，菌液OD600达到0.2-0.5（0.36效果较好，不要超过0.6）；4、取出菌液，冰浴20min；然后4℃，3000 rpm离心5 min ，收集细菌；5、用10 ml 冰浴预冷的TSS液重悬细菌，然后4℃，3000 rpm离心5 min；再用冰浴预冷的TSS液重悬细菌，即成感受态；6、用1.5 ml离心管按150μl分装；-80℃长时间保存。

感受态细胞制备实验报告摘要本实验旨在探究感受态细胞的制备方法。

通过一系列步骤，我们成功地制备出感受态细胞，并通过染色实验证实了细胞的感受态转变。

实验结果表明，我们所采用的制备方法具有较高的可行性和有效性。

介绍感受态细胞是一种具有感受外界刺激并做出相应反应的细胞。

在生物学研究中，制备感受态细胞是一项重要的实验工作。

本文将详细介绍感受态细胞的制备方法，并通过实验证实其有效性。

实验材料和方法材料•细胞培养基•细胞培养器具（培养皿、离心管等）•细胞培养箱•细胞染色剂方法1.细胞培养基的制备：–将适量的细胞培养基粉末加入无菌蒸馏水中，并充分搅拌溶解。

–调整pH值至合适范围。

–通过过滤器过滤，获得无菌的细胞培养基。

2.细胞的预处理：–选择适宜的细胞系，如人类上皮细胞系。

–将细胞培养在培养皿中，以适宜的温度和湿度进行培养。

–在细胞生长到合适密度时，进行下一步操作。

3.细胞的感受态诱导：–将培养皿中的细胞用无菌PBS缓冲液洗涤一次，以去除培养基中的成分。

–加入含有感受态诱导剂的培养基。

–将培养皿置于细胞培养箱中，在适宜的温度和湿度条件下培养一定时间。

4.细胞的染色实验：–取出培养皿中的细胞，用PBS缓冲液洗涤去除培养基。

–按照染色剂使用说明，加入合适浓度的染色剂。

–在暗处孵育一定时间，使细胞充分染色。

–用PBS缓冲液洗涤细胞，以去除多余的染色剂。

–观察细胞染色情况，使用显微镜拍摄图像。

结果与讨论经过以上步骤，我们成功地制备了感受态细胞，并通过染色实验证实了细胞的感受态转变。

观察到染色后的细胞明显显示出感受态特征，与对照组相比，表现出明显的区别。

这说明我们所采用的制备方法具有较高的可行性和有效性。

通过本实验，我们对感受态细胞的制备方法有了更深入的了解。

然而，还需要进一步的研究来探究感受态细胞的特性以及其在生物学研究中的应用。

此外，我们也可以尝试其他方法来制备感受态细胞，以寻求更高效的制备方法。

结论本实验通过一系列步骤成功地制备出了感受态细胞，并通过染色实验证实了细胞的感受态转变。

感受态(2011-04-14 10:45:00)转载▼标签：杂谈方法一A液：1M，MnCl2：B液：1M，HEPES，pH=6.2-6.8，用无菌水配，配后不需灭菌；C液称取CaCl2 0.10g，KCl 1.18g，全部转入细口试剂瓶，然后加入46ml三蒸水，轻轻振荡使所有组分充分溶解。

将瓶塞盖上并用牛皮纸、棉线包扎，然后放入灭菌锅121℃高压灭菌备用。

取1管B液（0.6ml），全部加入C液(46ml)中，混匀后，再用1ml移液器加入3.3ml A液，混匀冰浴即可使用。

划线得到单菌落,37℃培养箱培养约17小时，挑取2-4个形态饱满的单菌落接种于装有100ml SOB 培养基的三角瓶,37℃剧烈振荡（300 rpms）培养3-4小时, 将培养温度调至18℃剧烈振荡（3280 rpms）培养，其余与普通感受态差不多，每管加入4ml TB缓冲液，轻轻振荡，使菌体重新悬浮，加入280ml DMSO（可用国产分析纯），混匀后分装入1.5ml EP管，冰上静置15分钟。

用纱布将所有装有感受态的EP管包好，用棉线系好后放入液氮中速冻，在液氮中静置12小时以上。

取出感受态放入-70℃超低温冰箱备用。

效率非常高，一般可到10*8，好时可到10*9，特别适宜于大片段与文库构建及珍贵材料的连接转化。

洁净是最重要的。

无菌都无所谓，在操作台上可正常操作。

离心力要注意不要超过2500g,建议1500-2000g 5min。

涂板要注意，不要觉得不匀而多次反复，轻轻在平板上带一下感觉板上大部分地方走过即可，特别在冰箱中保存过或在温箱中温浴2小时以上的板。

涂完后建议空气晾干（20-30分钟）这样会减少卫星菌落出现。

预冷是必要的。

整个过程的低温也并非特别重要，只要注意就行了，我在去残液时经常在室温倒置1min，对感受态效率提高有帮助，第一次多加一点缓冲液，我经常加至20ml，效果不错。

关于大肠杆菌的感受态制备及转化的方法很多，最复杂的莫过于电转化，而最简单的则是将LB平板上的菌落直接挑入装有缓冲液的EP管冰箱即开始转化。