蚕蛹蛋白水解液中游离氨基酸测定方法初探

游离氨基酸的测定实验报告背景游离氨基酸是构成蛋白质的基本组成单位，对人体的生理功能起着重要作用。

因此，准确测定游离氨基酸的含量对于研究和分析蛋白质代谢、营养摄入以及疾病发展等方面具有重要意义。

本实验旨在通过一系列分析方法测定样品中游离氨基酸的浓度。

分析实验设备和试剂•恒温水浴器•离心机•分光光度计•超纯水系统•氨基酸标准品•Ninhydrin标准溶液•稀盐酸（6 mol/L）•无水乙醇（95%）•氨水（25%，体积分数）•Na2CO3溶液（3%，取6 g Na2CO3溶于200 mL水）实验步骤1. 样品制备将待测样品（例如食品、体液等）取适量加入10 mL离心管中，并加入适量稀盐酸溶液，使样品pH降至酸性，以保证游离氨基酸不会发生气化。

利用离心机对样品进行离心，取上层液保存。

2. 氨基酸含量测定2.1 Ninhydrin法准备一系列浓度已知的氨基酸标准品溶液，分别为0、2、4、6、8和10 μmol/mL。

取6个离心管，分别加入1 mL样品上层液或相应浓度的标准品溶液。

然后，对每个离心管加入1 mL Ninhydrin标准溶液，混匀后放入恒温水浴器中，温度设定为80°C，加热15分钟使其反应完成。

在背景相对较深的条件下使用分光光度计，设置波长为570 nm进行吸光度测定，记录吸光度值。

2.2 紫外分光光度法准备一系列浓度已知的氨基酸标准品溶液，分别为0、2、4、6、8和10 μmol/mL。

在离心管中分别加入1 mL样品上层液或相应浓度的标准品溶液，然后加入1 mLNa2CO3溶液，混匀后放入分光光度计进行紫外吸光度测定，设置波长为280 nm，并记录吸光度值。

3. 结果和分析根据实验步骤2中的测定结果，计算出标准曲线的方程和相关系数，并根据标准曲线对待测样品中的游离氨基酸含量进行定量分析。

结果下表为实验测定获得的标准曲线数据：氨基酸浓度(μmol/mL)Ninhydrin反应吸光度值紫外吸光度值0 0 02 0.3 0.14 0.7 0.26 1.2 0.38 1.6 0.410 2.1 0.5根据上述数据，可得到标准曲线的方程为：•Ninhydrin法：吸光度 = 0.2[氨基酸浓度(μmol/mL)] + 0.1，相关系数r = 0.99；•紫外分光光度法：吸光度 = 0.05[氨基酸浓度(μmol/mL)] + 0.1，相关系数 r = 0.98。

游离氨基酸的测定实验报告3页
实验目的：测定蛋白质水解液中游离氨基酸的含量。

实验原理：蛋白质是由若干个氨基酸通过肽键连接而成，而氨基酸是构成蛋白质的基本单元。

游离氨基酸是水解蛋白质后剩余的未发生缩合反应的氨基酸，可以用二硫化二钠与氨基酸发生二级反应，并且具有荧光性质，故可以通过比色法或荧光法测定其含量。

实验步骤：
1.取约1g蛋白质水解液，加入等量的50%三硝酸溶液，使测定溶液呈红棕色。

2.将上述混合溶液蒸干，加入少量蒸馏水，使含盐量达到适宜比例。

3.将上述溶液通过20μ滤器滤过，在滤液中加入0.1%的二硫化二钠溶液。

4.加入等量的1.5N盐酸，使 pH 值降至2左右。

5.将上述混合液振荡30秒，静置10分钟，测定荧光强度或比色度。

实验结果：测量得到游离氨基酸的含量为x mg/L。

实验分析：游离氨基酸在酸性条件下可以与二硫化二钠反应生成荧光物质，故可以用荧光法或比色法进行测定。

本实验采用的是荧光法，即通过荧光分光光度计测定游离氨基酸的荧光强度，再由标准曲线推算游离氨基酸的含量。

需要注意的是，在测定过程中必须确保荧光试剂与游离氨基酸充分反应，否则会导致测定结果偏低。

实验结论：本实验成功测定了蛋白质水解液中游离氨基酸的含量为x mg/L，实验结果具有一定的可靠性和准确性。

游离氨基酸的测定实验方案（茚三酮比色法）一、实验目的茚三酮比色法测定发酵液中游离氨基酸含量，利用氨基酸含量这个参数，控制发酵过程.二、实验原理游离氨基酸的游离氨基可与水合茚三酮作用,产生蓝紫色的化台物二酮茚一二酮茚胺,产物的颜色深浅与游离氨基酸含量成正比，用分光光度计在570nm 下测其含量.因蛋白质中的游离氨基酸也会产生同样反应,在测定前必须用蛋白质沉淀剂将其除掉。

三、实验材料发酵液样品；实验试剂:水合茚三酮;氨基酸标准液；0.1%抗坏血酸实验仪器:100ml容量瓶；漏斗；三角瓶；研钵；移液器;枪头；沸水浴；具塞刻度试管20 ml×10;分光光度计四、实验方法1.溶液配制（1)水合茚三酮称取0。

6g重结晶的茚三酮放烧杯中，加入15ml 正丙醇、30ml正丁醇、60ml乙二醇及9 ml PH4。

54的醋酸盐缓冲液混匀,棕色瓶中冰箱内保存,10天内有效。

（2）氨基酸标准液称取80℃烘干的亮氨酸23.4mg,以10％的异丙醇溶解定溶至50ml（含氮为50ug/ ml)，取此液5ml，用水定容至50 ml，此为含氮量5ug/ ml工作液。

（3）0.1%抗坏血酸称取0。

1g抗坏血酸定容100 ml，随用随配。

2.标准曲线绘制取6支20ml 试管,按下表加剂：试剂管号12 3 4 5 6 亮氨酸标准液（ml ） 0 0.2 0.4 0。

6 0。

8 1.0 无氨蒸馏水（ml ） 2.0 1。

8 1。

6 1.4 1.2 1.0 水合茚三酮（ml) 3.0 3。

0 3。

0 3.0 3.0 3。

0 抗坏血酸（ml ） 0.1 0.1 0.1 0.1 0。

1 0.1 氨基氮量（ug/管 )1.02.03.04.05.0将各管溶液混合均匀，封口，在沸水中加热15min ，取出后立即用冷水摇动冷却,用60%乙醇定容至20 ml ，摇匀。

λ=570nm 处测定吸光度0 0.025 0.055 0。

0990。

146 0.186以吸光度为纵坐标，氨基氨ug 数为横坐标，绘标准曲线如图：茚三酮比色法测定游离氨基氮标准曲线-0.0500.050.10.150.2氨基氮（ug）吸光度A3.样品中游离氨基酸的测定取20ml 试管，取待测液1ml ，加蒸馏水l ml ，水合茚三酮3.0 ml,坏血酸0。

柱前衍生高效液相色谱法测定蚕蛹提取物中氨基酸含量梁卫青;魏克民;浦锦宝;祝永强;郑军献;胡轶娟【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2008(37)8【摘要】目的用柱前衍生法测定蚕蛹提取物中氨基酸含量,方法以磺酰氯二甲胺偶氮苯(DABS-CL)作衍生剂,采用柱前衍生高效液相色谱法(RP-HPLC),YMC-Pack ODS-A柱(250mm×4.6mm,5mm),流动相A为25mol/L KH2PO2,流动相B为乙腈:甲醇=70:30;流速1.5 ml/min梯度洗脱,检测波长436nm,柱温35℃,结果各种氨基酸均具有良好的线性关系(相关系数,=0.9989～0.9999)、精密度(RSD<1.50%)、稳定性(RSD<3.50%)、平均回收率(98.83%～107.83%),测定蚕蛹提取物中氨基酸含量,其含有人体必需氨基酸占总氨基酸含量的40%以上,结论该方法简便实用,分析结果准确可靠,适用于动植物中富有氨基酸含量的测定.【总页数】4页(P42-45)【作者】梁卫青;魏克民;浦锦宝;祝永强;郑军献;胡轶娟【作者单位】310007,杭州,浙江省中医药研究院;310007,杭州,浙江省中医药研究院;310007,杭州,浙江省中医药研究院;310007,杭州,浙江省中医药研究院;310007,杭州,浙江省中医药研究院;310007,杭州,浙江省中医药研究院【正文语种】中文【中图分类】R2【相关文献】1.AccQ-Tag柱前衍生反相高效液相色谱法测定谷物及食糜中氨基酸含量 [J], 韩粉丽;韩飞;李爱科;陈曦;宋歌;范柳萍;余治权2.柱前衍生-反相高效液相色谱法测定柞蚕蛹蜕中氨基酸 [J], 杨彬;阮长春;刘志;孙光芝3.柱前衍生高效液相色谱法测定中韩泡菜中的氨基酸含量 [J], 贾载凯; 毛新刚; 苏晓岚; 张云; 洒荣波4.柱前衍生高效液相色谱法测定中韩泡菜中的氨基酸含量 [J], 贾载凯;毛新刚;苏晓岚;张云;洒荣波5.柱前衍生高效液相色谱法测定注射用骨肽中15种氨基酸含量 [J], 张雪艳;郭雷;周长明;张建敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

游离氨基酸的测定方法
游离氨基酸咋测定呢？其实有不少方法呢！比如说茚三酮比色法。

先准备好样品，把它处理成合适的状态。

然后加入茚三酮试剂，经过一系列反应后，通过比色来确定游离氨基酸的含量。

这过程中可得小心操作，要是弄错了一步，那结果可就不靠谱啦！那安全性咋样呢？只要按照正确的步骤来，一般没啥大问题。

稳定性嘛，只要试剂没问题，操作规范，结果还是挺稳定的。

这方法能用到好多地方呢！像食品检测领域，你想想，要是不知道食品里的游离氨基酸含量，咋能保证食品的质量和营养呢？优势也不少呢！操作相对简单，成本也不高。

咱举个实际案例哈。

有个食品加工厂，用这个方法检测产品中的游离氨基酸含量，及时调整了生产工艺，提高了产品质量。

这效果多棒啊！
游离氨基酸的测定方法真的超实用，能帮我们了解各种物质中的氨基酸情况，为我们的生活和生产带来很多好处。

咱可得好好利用这些方法，让它们发挥更大的作用。

游离氨基酸测定方法嘿，朋友们！今天咱就来聊聊游离氨基酸测定方法。

这可真是个有意思的事儿呢！你想想看，那小小的游离氨基酸，就像一群小精灵，在各种物质里蹦跶来蹦跶去。

咱要想抓住它们，搞清楚它们的情况，那可得有点本事和窍门哟！先来说说茚三酮比色法吧，这就好比是个神奇的“照妖镜”。

把样本往那里面一放，经过一系列操作，那些游离氨基酸就会现形啦！颜色一变，咱就能知道个大概啦。

是不是很神奇呢？就好像变魔术一样呢！还有离子交换色谱法，这就像是给氨基酸们来了一场特殊的“选美比赛”。

不同的氨基酸在这个过程中会按照各自的特点排好队，然后咱就能清楚地分辨出它们来啦。

这多有意思呀！分光光度法呢，就像是给游离氨基酸们拍了一张特别的“照片”。

通过对这张“照片”的分析，咱能了解到它们的好多信息呢。

咱在做这些测定的时候可得细心点哦，就像呵护宝贝一样。

要是不小心弄错了一步，那可就像在森林里迷了路，找不到那些小精灵啦。

而且呀，各种方法都有它的特点和适用范围，咱得根据实际情况来选择，可不能瞎搞哟！就像你不能穿着拖鞋去跑步比赛一样，得选对合适的装备呀！那有人可能会问啦，为啥要费这么大劲去测这些游离氨基酸呀？嘿，这用处可大了去啦！比如说在食品领域，咱能知道食物的营养好不好呀；在医学领域，能帮助医生诊断疾病呢。

这就好像是给我们打开了一扇了解世界的窗户，让我们能看到那些平时看不到的东西。

总之呢，游离氨基酸测定方法就像是一把神奇的钥匙，能帮我们打开知识的大门，让我们对这个世界有更深入的了解。

咱可得好好掌握这些方法，让它们为我们服务呀！所以呀，大家可别小瞧了这些看似普通的测定方法哦，它们可有着大能量呢！。

饲料中游离氨基酸的检测方法
一、样品制备
1.采集样品：选择有代表性的饲料样品，用干净、干燥的容器采集，避免污染和变质。

2.粉碎样品：将采集的样品进行粉碎，使氨基酸分布更均匀。

3.称取样品：按照实验室规范，精确称取一定量的样品用于后续实验。

二、衍生化处理
1.确定衍生化试剂：根据待测氨基酸的化学性质和仪器检测需求，选择合适的衍生化试剂。

2.衍生化反应条件：确定衍生化反应的温度、时间、pH值等条件，确保反应完全、稳定。

3.衍生化产物纯化：对衍生化产物进行纯化，去除杂质，提高检测的准确性。

三、分离纯化
1.选择色谱柱：根据氨基酸的性质和分离要求，选择合适的色谱柱。

2.确定色谱条件：调整流动相的组成、pH值、流速等条件，达到最佳的分离效果。

3.检测器选择：根据需要选择合适的检测器，如紫外检测器、荧光检测器等。

4.分离纯化过程：将样品溶液进行分离纯化，得到纯化的氨基酸
溶液。

四、检测分析
1.仪器准备：根据选择的检测器类型，准备好相应的仪器设备。

2.进样分析：将纯化的氨基酸溶液进行进样分析，记录色谱图和峰信息。

3.数据处理：对色谱数据进行处理，计算各氨基酸的含量和相关参数。

4.结果分析：根据计算结果，对饲料中游离氨基酸的含量和分布进行分析。

以上是饲料中游离氨基酸的检测方法，包括样品制备、衍生化处理、分离纯化和检测分析等方面。

根据实际需求和实验室条件，可以选择合适的实验方法和仪器设备进行检测和分析。

蚕蛹水解液的分子量测定
吴文茵;刘盈
【期刊名称】《广州化学》
【年(卷),期】1990(000)004
【摘要】凝胶过滤法是测定蛋白质分子量的常用方法之一,但标准蛋白质不易得到,且保存较困难。

本工作用已知分子量的聚乙二醇作标样,采用凝胶过滤色谱外插法定量测定蚕蛹酶解液的分子量。

实验色谱柱填料用Sephadex—50,聚乙二醇分子量为20000～1000,洗脱液用紫外光谱检测。

根据洗脱体积与蛋白质分子量成直线关系的原理,作分子量与洗脱体积的关系曲线,并用已知分子量的细胞色素C验证。

实验表明,该法所得结果与聚丙烯酰胺凝胶电泳和GPC法的测定结果一致。

【总页数】3页(P71-73)
【作者】吴文茵;刘盈
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】S886.9
【相关文献】
1.蚕蛹蛋白水解液中游离氨基酸测定方法初探 [J], 洪炳财
2.蚕蛹蛋白水解液的制取 [J], 施鸿飞;曹晖;孙鸿才
3.富硒蚕蛹氨基酸水解液的制取及抗肿瘤的初步研究 [J], 胡德聪;刘琼;王红;韩定献;徐辉碧
4.蚕蛹水解液的脱酸脱色研究 [J], 糜淑珍
5.蚕蛹水解液的氨基酸分组分离法 [J], 朱祥瑞;周飞波;蒋振东
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2021年第2期丝绸科技27蚕丝蛋白中氨基酸的色谱分析检测方法研究李婷，朱兰，周小进，卞歆灵，张妍琰(1.苏州市纤维检验院，江苏苏州215128; 2.国家丝绸及服装产品质量监督检验中心江苏苏州215128 )摘 要：氨基酸是构成蚕丝蛋白的基础物质，氨基酸检测也是衡量蚕丝被是否增重的重要指标之 一。

色谱法因分析速度快、检测灵敏度高、适用范闱广等特点而广泛应用于各领域。

本文扼要概述了 色谱法分析氨基酸的方法，包括氨基酸分析仪法、高效液相色谱（H PLC)法等，为今后的蚕丝氨基酸 分析检测提供了参考。

关键词：氨基酸；高效液相色谱法；氨基酸分析仪法；柱前衍生；柱后衍生；综述；研究进展 中图分类号：T S141 文献标志码：A文章编号：1003-9110(2021)02-27-03丝素和丝胶中包含的氨基酸是组成蚕丝蛋白的 基本物质，丝素含量较多的2种氨基酸是A la与 Gly，接下来是S ct和Tyr,占了蚕丝氨基酸总含量的 85%左右。

蚕丝经脱胶处理后，蚕丝的质量要减 少，当然其机能也会发生相应的变化。

跟随技术发 展，研究人员通过增重技术，来弥补因蚕丝脱胶而 引起的重量损失。

近年来，蚕丝价格上浮的较快，市场上出现了 一些以化工原料对丝绵增重的蚕丝 被，逐步蔓延并成为行业潜规则=蚕丝被的增重处 理不仅扰乱行业规则，其接枝的化学物质残留对人 体造成伤害。

目前新修订的蚕丝被国家标准中通过 测定4种氨基酸的含量来判断丝绵是否进行增重处理:色谱分离的方法是当前分析氨基酸应用最广的 方法，主要包括氨基酸分析仪法、高效液相色谱 (HPLC)等具有分析速度快、线性范围宽，灵敏度高、检出限低的特点，可将多种氨基酸同时 定性、定量，更好满足氨基酸检测的需要，所以使 用也越加广泛。

本文将扼要概述蚕丝蛋内氨基酸的 色谱分析方法，为蚕丝蛋白中氨基酸检测今后的研 究提供参考。

1氨基酸分析仪在早期广泛用于检测氨基酸成分与含量，茚三 酮作为衍生试剂的柱后衍生技术，阳离子交换色谱 法分离技术进行检测，具有重现性好、分析结果稳作者简介：李婷（1986-)，女，江苏南京人，硕士研究生，主要研究方向为纺织品检测■基金项目：2019年度市场监管总局科技计划项目（2019MK025 ); 2019年度江苏省市场监管局科技项目U J196023 )28丝绸科技=)2021年第2期定、灵敏等优点丨11。

柱前衍生高效液相色谱法测定蚕蛹提取物中氨基酸含量梁卫青，魏克民，浦锦宝，祝永强，郑军献，胡轶娟（浙江省中医药研究院，杭州310007）摘要：目的用柱前衍生法测定蚕蛹提取物中氨基酸含量，方法以磺酰氯二甲胺偶氮苯（DABS-CL）作衍生剂，采用柱前衍生高效液相色谱法（RP-HPLC），YMC-Pack ODS-A柱(250×4.6mm，5µm)，流动相A为25mol/L KH2PO4，流动相B为乙腈：甲醇=70：30；流速1.5 ml/min梯度洗脱，检测波长436nm，柱温35℃，结果：各种氨基酸均具有良好的线性关系（相关系数r=0.9989～0.9999）、精密度（RSD＜1.50%）、稳定性（RSD＜3.50%）、平均回收率（98.83%～107.83%），测定蚕蛹提取物中氨基酸含量，其含有人体必需氨基酸占总氨基酸含量的40%以上，结论：该方法简便实用，分析结果准确可靠，适用于动植物中富有氨基酸含量的测定。

关键词：柱前衍生；蚕蛹提取物；氨基酸；高效液相色谱Determination of Amino Acids in silkworm extract by High Performance Liquid Chromatography with Precolumn Derivatization. Liang Weiqing, Wei Kemin, Pu Jinbao, Zhu Yongqiang, Zheng Junxian, Hu Yijuan, Zhejiang Academy Of Traditional Chinese Medicine, Hangzhou, 310007, ChinaAbstract: Objective Determination of Amino Acids in silkworm extract by High Performance Liquid Chromatography with Precolumn Derivatization. Methods The technology of precolumn derivatization, along with high performance liquid DABS-CL, A high-efficiency YMC-Pack ODS-A column(250×4.6mm, 5 μm), The mobile phase was A: 25mol/L KH2PO4 and B: acetonitrile : methyl alcohol =70:30, at flow rate of 1.5 ml/min, peaks were detected at 436 nm, column temperature 35℃. Results All kinds of amino acids have a nice linear relations (r=0.9989~0.9999), precision (RSD<1.50%), stability (RSD<3.50%), the average recovery rate of amino acids (98.83%~107.83%), it contains more than 40% essential amino acid. Conclusio n The method is simple, precise and reliable. It can be used to determine Amino Acids in animal and plant.Key words: precolumn derivatization; silkworm extract; amino acid; RP-HPLC蚕蛹蛋白系全价蛋白，是理想的天然优质氮源，蚕蛹水解提取物中含有人体生长发育，新陈代谢所需要的十八种氨基酸，包括不能在体内合成的8种必需氨基酸，蚕蛹提取物的应用十分广泛，为能更好控制蚕蛹提取物中复合氨基酸[1-2]的质量，以确保作为高附加值药品、保健食品、化妆品的原料资源，需对其中各个氨基酸的含量作出准确可靠的分析。