★植物组织培养培养基的主要成分1.无机营养物：无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素主要包括氮、磷、钾、钙、镁和硫六种，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。
磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。
钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。
而钙、钠、镁的需要则较少。
培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。
微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁,这些元素有的对生命活动的某个过程十分有用，有的对蛋白质或酶的生物活性十分重要，有的是参与某些生物过程的调节。
培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA（螯合剂）的混合。
2.碳源：培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。
因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。
培养基中的碳水化合物通常是蔗糖或D-葡萄糖，用量通常为2%-4%，高者可达5%，亦可用市售的白糖所代替，但一般应增加用量，而且最好用比较固定的厂家生产的产品，以保证实验的稳定性。
3.有机营养成分：包括人工合成或天然的有机附加物（包括维生素，氨基酸及其它有机物质等）。
最常用的有酪朊水解物(水解乳蛋白、水解酪蛋白CH)、酵母提取物、玉米胚乳、麦芽浸出物、西红柿汁、椰子汁(CM)及各种氨基酸如甘氨酸（氨基乙酸）等。
维生素：在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。
培养基中的维生素属于B族维生素，其中效果最佳的有硫氨素（维生素B1）、盐酸吡哆醇（维生素B6）和维生素H（生物素）、泛酸钙等、肌醇（环己六醇）、烟酸。
在部分培养基中还添加维生素BX（氨酰苯甲酸）、维生素C（抗坏血酸）、维生素E（生育酚）、、维生素B12（氰钴胺酸）、维生素BC（叶酸）、维生素B2（核黄素）和氯化胆碱等维生素。
这些可能对某些植物或植物的某些代谢过程有重要作用，如肌醇主要以磷酸肌醇和磷脂酰肌醇的形式参与由Ca介导的信号转导。
4.生长调节物质（常称为激素）常用的生长调节物质大致包括以下三类：(1)植物生长素类。
主要作用是：诱导愈伤组织的产生，促进细胞脱分化；促进细胞的伸长；促进生根。
如吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、IBA（吲哚丁酸）、NOA（萘氧乙酸），P-CPA（对氯苯氧乙酸）、2，4-D（2，4-二氯苯氧乙酸），2，4，5-T（2，4，5-三氯苯氧乙酸）和ABT生根粉等。
生长素的使用浓度通常为0.1～10mg/L。
(2)细胞分裂素。
如玉米素（Zt，6-（4-羟基-3-甲基-反式-2-丁烯氨基）嘌呤）、6-苄基嘌呤（6-BA或BAP）和激动素（Kt，6-呋喃氨基嘌呤）、2IP（异戊烯氨基嘌呤）和TDZ（thidiazuron,噻二唑苯基脲）等。
作用主要是：第一，促进细胞分裂和扩大(与生长素促进细胞伸长的作用不同)，可使茎增粗，而抑制茎伸长；第二，诱导芽的分化，促进侧芽萌发生长；第三，抑制衰老，减少叶绿素的分解。
延缓离体组织或器官的衰老过程，有保鲜的效果。
但是，细胞分裂素对根的生长一般起抑制作用。
在组培中，细胞分裂素的使用浓度通常为0.1～10mg／L。
细胞分裂素常常与生长素相互配合，用以调节细胞分裂，细胞伸长，细胞分化和器官形成。
(3)赤霉素。
组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸（GA3）。
虽然已经用于顶端分生组织的培养和维管分化的研究，但在培养基中很少添加，因为它的作用往往是负面的。
乙烯等。
5.琼脂或其他支持物除液体悬浮培养外，就目前情况而言，琼脂是一种极为理想的支持物。
一般浓度0.4%-1%，质量越差的琼脂用量越大。
琼脂作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，以利于各种外植体的培养。
6.其他添加剂（含天然提取物、抗生素等）活性炭渗透调节剂抗生素抗氧化剂等。
活性炭加入培养基中的目的主要是利用其吸附能力，减少一些有害物质的影响，例如防止酚类物质污染而引起组织褐化死亡。
这在兰花组织培养中效果更明显。
另外，活性炭使培养基变黑，有利于某些植物生根。
但活性炭对物质吸附无选择性，既吸附有害物质，也吸附有利物质，因此使用时应慎重考虑，不能过量，一般用量为1%—5％。
活性炭对形态发生和器官形成有良好的效应。
在失去胚状体发生能力的胡萝卜悬浮培养细胞中加入1％一4%活性炭可使胚状体的发生能力得以恢复。
7.水水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。
配制培养基母液时要用蒸馏水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止储藏过程发霉变质。
大规模生产时可用自来水。
但在少量研究上尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。
常用0.1mol/L的Na0H和0.1mol/L的HCl来调节培养基的PH。
但需注意两点：第一，经高温高压灭菌后，培养基的PH会下降0.2—0.8，故调整后的PH应高于目标pH0.5个单位；第二，pH的大小会影响琼脂的凝固能力，一般当pH大于6.0时，培养基将会变硬，低于5.0时，琼脂就不能很好地凝固。
培养基种类：根据培养基态相不同分为固体培养基与液体培养基。
固体培养基是指加凝固剂(多为琼脂)的培养基，其优点是外植体只是部分接触培养基，因此会使培养基中的效应物质产生一定的浓度梯度，从而有利于外植体的分化、生长。
液体培养基是指不加凝固剂的培养基。
外植体在液体培养基中能够与效应物质更好地接触，因此，生长速度比在固体培养基中更快。
根据培养物的培养过程，培养基分为初代培养基与继代培养基。
初代培养基是指用来第一次接种外植体的培养基。
继代培养基是指用来接种继初代培养之后的培养物的培养基。
根据其作用不同，培养基分为诱导培养基、增殖培养基和生根培养基。
根据其营养水平不同，培养基分为基本培养基和完全培养基。
基本培养基(就是通常称呼的培养基)主要有MS、White、B5、N6、改良MS、Heller、Nitsh、Miller、SH等。
完全培养基就是在基本培养基的基础上，根据试验的不同需要，附加一些物质，如植物生长调节物质和其他复杂有机附加物等。
组织培养培养基配制：选择合适的培养基是植物组织培养成功的基础。
选择合适的培养基主要从以下两个方面考虑：一是基本培养基；二是各种激素的浓度及相对比例。
MS培养基适合于大多数双子叶植物，B5和N6培养基适合与许多单子叶植物，特别是N6培养基对禾本科植物小麦、水稻等很有效，White培养基适合于根的培养。
①根据配方要求，用量筒或移液管从每种母液中分别取出所需的用量，放入同一烧杯中，并用粗天平称取蔗糖、琼脂放在一边备用。
②将①中称好的琼脂加蒸馏水300～400毫升，加热并不断搅拌，直至煮沸溶解呈透明状，再停止加热。
③将①中所取的各种物质（包括蔗糖），加入煮好的琼脂中，再加水至1000毫升，搅拌均匀，配成培养基。
④用1N的氢氧化钠或盐酸，滴入③中的培养基里，每次只滴几滴，滴后搅拌均匀，并用pH试纸测其pH值，直到将培养基的pH值调到5.8。
⑤将配好的培养基，用漏斗分装到三角瓶（或试管）中，并用棉塞塞紧瓶口，瓶壁写上号码。
瓶中培养基的量约为容量的1/4或1/5。
培养基的成分比较复杂，为避免配制时忙乱而将一些成分漏掉，可以准备一份配制培养基的成分单，将培养基的全部成分和用量填写清楚。
配制时，按表列内容顺序，按项按量称取，就不会出现差错。
组织培养培养基的灭菌与保存培养基配制完毕后，应立即灭菌。
培养基通常应在高压蒸汽灭菌锅内，在汽相120℃条件下，灭菌20分钟。
如果没有高压蒸汽灭菌锅，也可采用间歇灭菌法进行灭菌，即将培养基煮沸10分钟，24小时后再煮沸20分钟，如此连续灭菌三次，即可达到完全灭菌的目的。
经过灭菌的培养基应置于10℃下保存，特别是含有生长调节物质的培养基，在4～5℃低温下保存要更好些。
含吲哚乙酸或赤霉素的培养基，要在配制后的一周内使用完，其它培养基最多也不应超过一个月。
在多数情况下，应在消毒后两周内用完。
组织培养中几种常用培养基的配方培养基配方B5培养基(Gamborg 等,1968)(1)无机物NaH2PO4·H2O 150 mg/L；KNO33000 mg/L；(NH4)2SO4 134mg／L；MgSO4·7H2O 500 mg/L；Na2一EDTA 37.3 mg/L；FeSO4·7H2O 27.8 mg/L；MnSO4·H2O 10 mg/L；ZnSO4·7H2O 2mg/L；H3BO3 3mg/L ；Na2MoO·2H2O 0.25 m g/L；CuSO4·5H2O 0.025 mg/L；CoCl2·6H20 0.025 mg/L；KI 10 mg/L。
(2)有机物维生素B1 10mg/L；维生素B6 1 mg/L；甘氨酸2.0 mg/L；叶酸0.5 mg/L；肌醇100.0mg／L；蔗糖50 g／L；pH 5.5。
B5培养基是1968年由Gamborg等设计的。
它的主要特点是含有较低的铵盐，较高的硝酸盐和盐酸硫胺素。
铵盐可能对不少培养物的生长有抑制作用，但它适合于有些植物如双子叶植物特别是木本植物的生长。
HB培养基 Holley &Baker(1963) (1)无机盐(以1/2浓度的Knop液为基础) Ca(NO3)2.4H2O 1000mg/L；KNO3 125 mg/L；MgSO4·7H2O 125mg/L；KH2PO4 125 mg/L；Berthelot's液 0.5ml/L。
Berthelot's液成分组成:MnSO4·4H2O 20g/L，KI 0.5g/L，NiCl2·6H20 0.05 g/L，CoCl2·6H20 0.05g/L，ZnSO4·7H20 0.10 g/L，CuSO4·5H2O 0.05g/L，BeSO4·4H2O 0.10 g/L，H3BO30.05g/L，浓硫酸 1ml。
(2)有机物维生素B1理学 1 mg/L；腺嘌呤 8 mg/L；NAA 2 mg/L；蔗糖 40g／L 。
H培养基(1)无机盐KNO3 950 mg/L；NH4N03 720mg／L；MgSO4·7H2O 185 mg/L；CaCl2·2H2O 166 mg/L；KH2PO468 mg/L；Na2一EDTA 37.3 mg/L；FeSO4·7H2O 27.8 mg/L；MnSO4·4H2O 25 mg/L；ZnSO4·7H2O 10mg/L；H3BO3 10mg/L ；Na2MoO·2H2O 0.25 m g/L；CuSO4·5H2O 0.025 mg/L；(2)有机物维生素B1 0.5mg/L；维生素B6 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；叶酸0.5 mg/L；肌醇100.0mg／L；烟酸0.5 mg/L；生物素0.05 mg/L；蔗糖20 g／L；pH 5.5。
