植物组织培养 PPT

路 线 一
路 线 二
路 线 三
1.培养基配制
MS+6-BA 2 mg/L+琼脂粉 5.5 mg/L+糖 30
mg/L pH 6.0
1L
2.培养基灭菌
植物组织培养技术流程
三、外植体的消毒与无菌操作 1.外植体消毒
消毒剂
使用浓度 (%)
消毒时间 (minຫໍສະໝຸດ )效果残液去除 难易
乙醇
70-75
0.1-3
好
易
新洁尔灭 10～20 5～30 好
易
氯化汞
0.1～1
2～15 最好 最难
过氧化氢 抗菌素
10～12 5～15
4～50mgl1
30～60
较好 较好
最易 较难
次氯酸钙/纳 9 ～ 10 5～30 好
易
植物组织培养技术流程
正确
错误
2.无菌操作
。
植物组织培养技术流程
植物组织培养技术流程
植物组织培养技术流程
正确
错误
§3.植物组织培养流程
植物组织培养操作流程
植物组织培养技术流程
植物组织培养技术流程
§2 实验基本操作
一、母液的配制 1.MS母液的配制
大量元素(20倍)、微量元素(1000倍)、铁盐 (100倍)、有机元素(100倍)
2.激素母液的配制 6-BA、KT、ZT等浓度为0.5mg/ml； NAA浓度为0.1mg/ml
二、培养基的配制与灭菌

，愈伤组织便开 始分化，又可重新分化成 根或芽等器官，这一过程 称为再分化。
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图示再分化形成的试管苗，移 栽到花盆中,可以发育成完整的 植物体，产生出植物的各种组 织和器官，进而发育成一棵完 整的植株。
退 4出
cai7cxknet课堂讲练互动课堂讲练互动24图示离体的植物器官组织或细胞如芽茎尖根尖或花药放在适当的人工培养基上进行培养这些器官或组织就会进行细胞分裂形成新的组织
图示在无菌条件下，将植物体的器官或组织片段（如芽、茎尖、 根尖或花药）切下来。本例取的是胡萝卜根部的组织片段。
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图示离体的植物器官、组织或细 胞（如芽、茎尖、根尖或花药）， 放在适当的人工培养基上进行培 养，这些器官或组织就会进行细 胞分裂，形成新的组织。不过， 这种组织没有发生分化，只是一 团薄壁细胞，叫做愈伤组织。这 一过程称为植物细胞的脱分化， 或去分化。

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主要有:
➢ 原生质体（Protoplast）培养 ➢ 悬浮细胞培养 ➢ 组织（愈伤组织Callus、茎尖分生组织）培
养 ➢ 器官（胚，花药，子房，根和茎）培养
其中最常见的是愈伤组织培养。
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植物细胞组织培养范畴：
（广义）又叫离体培养：指从植物体分离出 符合需要的组织、器官或细胞、原生质体等， 通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养 以获得再生的完整植株或生产具有经济价值 的其他产品的技术。
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三、植物组织培养的生理依据
植物生长调节物质对于植物细胞组织的分化和决定具 有关键性作用。它包括：生长素类、细胞分裂素类、 赤霉素、脱落酸、乙烯等
生长素类主要用于愈伤组织的形成，体细胞胚的产生及试管 苗的生根。常用的有2,4-D、NAA、IBA、IAA等。其作用强 弱为2,4-D>NAA>IBA>IAA。
细胞分裂素类则有促进细胞的分裂与分化，延迟组织的衰老， 促进芽的产生等作用。常用的有Zip(异戊烯腺嘌呤)、KT、6BA、ZT等作用强弱顺序为。Zip>KT>6-BA>ZT。
赤霉素则有促进已分化的芽伸长生长，打破种子休眠的作用。 常用的为GA3。
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四、植物组织培养的原理
★植物细胞全能性（Cellular totipotency）： 任何具有完整细胞核的植物细胞，都拥有形成
种子培养
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3. 组织或愈伤组织培养(tissue， callus culture) ：是对植物体的各部分
组织进行培养，如茎尖分生组织、形成层、 木质部、韧皮部、表皮组织、胚乳组织和薄 壁组织等等；或对由植物器官培养产生的愈 伤组织进行培养，二者均通过再分化诱导形 成植株.

器官发生根据起源的不同可以分为： 器官型：由外植体的细胞形成器官原基，继而发育成器官 器官发生型：先形成愈伤组织，由愈伤组织产生不同的器 官原基。
离体培养下的器官原基的形成过程：
外植体脱分化
形成愈伤组织
在器官纵轴上 出现单向性
分生细胞团
分化成维管组织
分化成不同的器官原基
4）植株再生：
离体培养再生植株的主要途径是器官发生和胚胎 发生。
分化期
– 细胞发生生理代谢变化而形成有不同形态和 功能的细胞形成的愈伤组织。
– 特点：出现形态各异的细胞
愈伤组织形成过程中各期细胞形态和RNA含量的 变化
4.愈伤组织增殖
将诱导形成的愈伤组织转接到新鲜的培养基上时， 愈伤组织就会进一步增殖生长，生长一段时间以 后，又必须重新将愈伤组织切割成一定大小的愈 伤组织块，转接到新鲜的培养基上继续增殖。
发生。 4.在遗传进化方面 ：变异性增加
二、植物细胞分化
分化：指植物体各个部分出现异质性的现象，包括 细胞分化、组织分化或器官分化等。
细胞分化：指在个体发育过程中，不同部位的细胞 的形态结构和生理功能发生改变，形成不同的组织 和器官。
细胞分化是发育生物学的核心问题，是基因选择性 活化或阻遏的结果。5%-10%
细胞特性的细胞的过程。
2.脱分化种类
1）通过细胞分裂形成细胞团或愈伤组织； 2）本身细胞恢复分生状态，即可再分化。 脱分化也为植物界常有的现象
3.脱分化的机理
尚未清楚，诱导脱分化期间细胞学以及生理生化方面的变化： 以下变化改变了细胞原有的生理状态，引起细胞分裂
膜透性改变 细胞核增大 内质网范围扩大 多核糖体形成 气体交换率增加 不同基因活化引起生长激素的分解或合成 过氧化物酶增加 蛋白和酚类物质合成活跃 乙烯产物增加

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图示在适合的光照、温度 等条件下，愈伤组织便开 始分化，又可重3
图示再分化形成的试管苗，移 栽到花盆中,可以发育成完整的 植物体，产生出植物的各种组 织和器官，进而发育成一棵完 整的植株。
退 4出
图示在无菌条件下，将植物体的器官或组织片段（如芽、茎尖、 根尖或花药）切下来。本例取的是胡萝卜根部的组织片段。
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图示离体的植物器官、组织或细 胞（如芽、茎尖、根尖或花药）， 放在适当的人工培养基上进行培 养，这些器官或组织就会进行细 胞分裂，形成新的组织。不过， 这种组织没有发生分化，只是一 团薄壁细胞，叫做愈伤组织。这 一过程称为植物细胞的脱分化， 或去分化。

5.无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键
（1）必要性：植物材料体积小、抗性差，培养条件要求高。 （2）范围：培养基灭菌和外植体的消毒。 既要考虑药剂的消毒效果；还要考虑植物材料的耐受能力。
1.打开封口膜、 培养间生长几日
接种——培养——移栽——栽培
1.70%酒精消毒、灼烧 2.不要倒插 3.每瓶接种6－8块 2.清洗培养基转移消 过毒的蛭石、珍珠岩
2．产生花粉植株 (1)产生花粉植株的两种途径：
离体条件下，未经受精，但经 过胚胎发生和发育过程，形成 的与合子胚相类似的结构。
胚状体：
(2)上述两种途径并无绝对界限，主要取决于
种类及其浓度配比 。
（一）材料选取
1、从花药看： 月季的初花期 从花粉看： 单核期 从花蕾看： 完全未开放的 2、通过镜检来确定是否处于适宜的发育期。
幼苗长壮， 移栽到土壤.
菊花的组织培养的实验操作
【回扣教材】
菊花植物组织培养的实验操作，归纳如下： 母液 、 1．制备MS固体培养基：具体操作是配制各种_____ 灭菌 。 配制培养基、_______ 消毒 。 2．外植体_______ 工作台 3．接种：要先消毒 ________(70% 酒精)，所有的接种 酒精灯 旁进行。 操作都必须在_________
定期消毒 ， 4．培养：________ 无菌箱 中培养，培养期间___________ 培养温度控制在______________ 18～22℃ ，每日用日光灯光照 12 h。 流水 清 移栽 ：打开培养瓶封口膜培养 ―→_______ 5 ． _______ 洗根部培养基 ―→ 移植到消毒蛭石或珍珠岩等环境 土壤 中。 ―→移栽到________
生长情况 ，适时浇水、 6 ．栽培：观察并记录幼苗 __________ 开花 。 施肥，直至_________