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血站核酸检测工作导则一、核酸检测技术用于血液筛查概述1.筛查项目目前用于血液筛查得核酸检测项目包括：人类免疫缺陷病毒核糖核酸(Huｍan Ｉmｍuｎｏdefｉcｉency Ｖirus Ｒiboｎuｃｌeiｃ Acid, ＨIV RNＡ)、丙型肝炎病毒核糖核酸（Hｅpatitｉs C Ｖirus Ｒibonucleic Acid,ＨCＶ RNA)与乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(Ｈeｐatitis B Virus Ｄeoxyｒｉboｎucleｉc acｉｄ,ＨBＶＤＮA）.2.检测方式核酸检测技术（NAT)筛查可通过两种方式进行:单人份检测(ＩDＴ)与混合样本检测(Ｐooｌｅｄ Teｓting)。
混合样本检测方法就是先将献血者样本进行不多于8人份混合，然后进行核酸分离纯化与扩增检测。
对于反应性得混合样本再进行拆分检测,若拆分出反应性样本(可为一个或多个），则呈反应性反应得血液进入隔离程序；呈阴性反应得血液可进入合格放行程序;如全部样本检测结果均为阴性，则全部血液均可进入合格放行程序。
混合样本检测模式宜在进行血清学检测后,将血清学检测阴性得样本进行混合样本检测。
单人份检测模式,就是对单个样本进行检测得模式,其中对单个样本同时三个项目得检测而无法区分反应性项目得检测称为联合检测。
对于反应性得样本可进行鉴别试验以确定结果.对于联检阳性样本不需等待鉴别结果,可以直接进入血液得隔离程序.3.应用原则实验室得检测策略应该以有效保证阳性样本得检出为目得.与血清学抗原抗体检测相结合才能真正起到提高血液安全性得作用,核酸检测对于早期感染得检测效果与当地得流行病学状况与献血人群就是相关得，因此在选择检测体系与检测模式时应从检测通量、检测系统性能、检测成本、献血人群流行状况、业务工作流程等几个方面进行综合分析，选择适合得检测模式。
二、检测技术人员要求1、人员得配备与资质应有与核酸检测业务相适应得岗位设置与人员配备,满足从血液样本采集、接收到实验室报告发出得整个核酸检测过程及其支持保障等需求.血站核酸检测实验室人员资质应至少满足《血站质量管理规范》与《血站实验室质量管理规范》关于人员得要求,并经过省级以上卫生计生行政部门组织或认可得核酸检测相关得理论与技术培训考核合格。
国卫医函…2019‟98号附件血站技术操作规程（2019版）2019年4月前言《血站技术操作规程（2015版）》自施行以来，对促进血站规范化管理，实现并巩固核酸检测全覆盖，提升血液质量安全水平发挥了重要作用。
为不断适应血站技术发展要求，我委组织相关单位和专家对规程进行系统梳理，按照保留现有体系框架、追踪前沿技术发展趋势、逐步提高标准要求、确保血液质量安全和献血者权益的思路，对规程进行修改完善，组织制定了《血站技术操作规程（2019版）》（以下简称《规程》）。
本《规程》正文包括献血者健康检查、血液采集、血液成分制备、血液检测、血液储存、发放与运输和质量控制等6个部分，对所涉及的关键技术做出相应规定。
其中一些原则性规定，血站在制定本单位操作规程时应当根据实际情况进一步细化。
以“宜”表述的内容为推荐性内容。
本《规程》的附录为资料性附录，供血站参考。
各血站应当按照国家相关法律、法规、规章、技术规范和标准，以及本《规程》的要求，结合具体工作实际，编制适合本血站使用的技术操作规程。
如有关血液标准、规范与《规程》存在不一致的地方，以《规程》规定为准。
本《规程》自2019年9月1日起施行。
《血站技术操作规程（2015版）》同时废止。
为不断提升血站质量管理水平和技术能力，《规程》将每3年修订1次。
目录1 献血者健康检查 (1)2 血液采集 (4)3 血液成分制备 (12)4 血液检测 (22)5 血液储存、发放与运输 (39)6 质量控制 (46)附录A 献血者血红蛋白检测（硫酸铜目测法） (58)附录B 血液检测方法的确认 (62)附录 C 血液检测试剂（血清学检测/核酸检测试剂）进货验收与放行记录表 (79)附录D 检测过程的性能监控 (80)附录E 微板法ABO血型定型试验 (86)附录F 血液质量控制检查方法 (88)附录G 血袋标签确认方法 (101)附录H （资料性附录）血站使用的强制检定工作计量器目录 (103)附录I 献血者健康检查要求 (105)1 献血者健康检查1.1 导则按照国家有关献血者健康检查要求（见附录I）的规定，对具有献血意向的人员进行健康检查，对检查结果进行综合分析和判断，做出是否适合献血的结论，保障献血者健康和安全。
重庆市血站核酸检测项目工作方案为提高血液检测技术水平，缩短经血传播疾病检测的“窗口期”，降低经输血传播疾病风险，最大限度保证临床用血安全，根据《卫生部办公厅关于印发2010年血站核酸检测项目管理方案的通知》（卫办医政函20101118号）要求，我市将在部分血站开展血液核酸检测工作。
一、项目目标在市血液中心、万州中心血站分别建设1个核酸检测实验室，开展核酸检测工作。
完成血液核酸检测设备及配套设备的配置、建立完善相关质量管理体系管理、组织开展人员培训、进行信息系统建设及数据统计分析。
二、项目内容（一）市血液中心、万州中心血站各配备1台（套）核酸检测设备及1套用于样本运输、分离和储存等的配套设备（见附件2）。
（二）市血液中心、万州中心血站各培训5名核酸检测技术人员，开展核酸检测。
（三）开展信息系统标准化建设，并及时对数据进行收集、分析和评估。
（四）建立完善核酸检测实验室质量体系建设，确保实验室生物安全，保证检测质量。
三、项目资金安排根据《财政部、卫生部关于下达2010年公共卫生补助资金的通知》（财社2010271号），中央财政给予我市中央资金补助508万元，分别给市血液中心、万州中心血站划拨资金254万元,其中160万元用于核酸检测设备购置，72万元用于核酸检测实验室配套设备购置，2万元用于人员培训，20万元用于实验室信息系统建设与数据统计分析。
资金分配和使用方案见附件1。
四、工作要求（一）项目开展单位市血液中心、万州中心血站要高度重视，根据项目目标和内容，建立管理制度，落实各项工作措施，推动项目顺利实施，既要确保项目的顺利开展，又不影响血站各项业务工作的正常进行。
（二）市血液中心、万州中心血站要按照血站核酸检测实验室建设标准制定实验室建设、质量管理体系建设、信息系统建设和人员培训的相关工作方案，并报市卫生局备案。
（三）市血液中心和万州中心血站应严格资金管理，做到专款专用，严禁挤占挪用。
要根据《中华人民共和国采购法》的有关规定，通过政府采购进行相关设备的招标采购工作，并将采购结果和工作进展及时报市卫生局。
国卫医函〔2019〕98 号附件血站技术操作规程（2019 版）2019 年4 月前言《血站技术操作规程（2015 版）》自施行以来，对促进血站规范化管理，实现并巩固核酸检测全覆盖，提升血液质量安全水平发挥了重要作用。
为不断适应血站技术发展要求，我委组织相关单位和专家对规程进行系统梳理，按照保留现有体系框架、追踪前沿技术发展趋势、逐步提高标准要求、确保血液质量安全和献血者权益的思路，对规程进行修改完善，组织制定了《血站技术操作规程（2019 版）》（以下简称《规程》）。
本《规程》正文包括献血者健康检查、血液采集、血液成分制备、血液检测、血液储存、发放与运输和质量控制等6 个部分，对所涉及的关键技术做出相应规定。
其中一些原则性规定，血站在制定本单位操作规程时应当根据实际情况进一步细化。
以“宜”表述的内容为推荐性内容。
本《规程》的附录为资料性附录，供血站参考。
各血站应当按照国家相关法律、法规、规章、技术规范和标准，以及本《规程》的要求，结合具体工作实际，编制适合本血站使用的技术操作规程。
如有关血液标准、规范与《规程》存在不一致的地方，以《规程》规定为准。
本《规程》自2019 年9 月1 日起施行。
《血站技术操作规程（2015 版）》同时废止。
为不断提升血站质量管理水平和技术能力，《规程》将每3 年修订1 次。
目录1 献血者健康检查 (1)2 血液采集 (4)3 血液成分制备 (12)4 血液检测 (22)5 血液储存、发放与运输 (39)6 质量控制 (46)附录A 献血者血红蛋白检测（硫酸铜目测法） (58)附录B 血液检测方法的确认 (62)附录 C 血液检测试剂（血清学检测/核酸检测试剂）进货验收与放行记录表 (79)附录D 检测过程的性能监控 (80)附录E 微板法ABO 血型定型试验 (86)附录F 血液质量控制检查方法 (88)附录G 血袋标签确认方法 (101)附录H （资料性附录）血站使用的强制检定工作计量器目录 (103)附录I 献血者健康检查要求 (105)1 献血者健康检查1.1 导则按照国家有关献血者健康检查要求（见附录 I）的规定，对具有献血意向的人员进行健康检查，对检查结果进行综合分析和判断，做出是否适合献血的结论，保障献血者健康和安全。
医疗机构新冠状病毒酸检测工作手册（试行）为落实国务院应对新型冠状病毒感染肺炎疫情联防联控机制《关于做好新冠肺炎疫情常态化防控工作的指导意见》（国发明电〔2020〕14号）要求，进一步规范新型冠状病毒（以下简称新冠病毒）核酸检测的技术人员、标本采集、标本管理、实验室检测、结果报告等工作，保证检测质量，提高检测效率，满足新冠病毒核酸检测需求，特制定本手册。
本手册适用于所有开展新冠病毒核酸检测的医疗机构。
一、技术人员基本要求（一）采样人员。
从事新冠病毒核酸检测标本采集的技术人员应当经过生物安全培训（培训合格），熟悉标本种类和采集方法，熟练掌握标本采集操作流程及注意事项，做好标本信息的记录，确保标本质量符合要求、标本及相关信息可追溯。
（二）检测人员。
实验室检测技术人员应当具备相关专业的大专以上学历或具有中级及以上专业技术职务任职资格，并有2年以上的实验室工作经历和基因检验相关培训合格证书。
实验室配备的工作人员应当与所开展检测项目及标本量相适宜，以保证及时、熟练地进行实验和报告结果，保证结果的准确性。
二、标本采集基本要求（一）基本原则1.各医疗机构的检测能力应当与门急诊就诊人次、住院人次等诊疗量相匹配，并与采集的标本量相适应，避免采集数量明显超出检测能力导致的标本积压、标本失效、检测结果反馈迟缓等问题。
2.各医疗机构在采集标本时，要根据不同采集对象设置不同的采样区域，将发热患者与其他患者、“愿检尽检”人群分区采样，避免交叉感染。
3.标本采集应当在满足本机构发热门诊、住院患者、陪护人员及院内职工的检测需求基础上，进一步保障其他重点人群“应检尽检”和一般人群“愿检尽检”的要求。
（二）采样点设置医疗机构设置新冠病毒采样点应当遵循安全、科学、便民的原则。
采样点应当为独立空间，具备通风条件，内部划分相应的清洁区和污染区，配备手卫生设施或装置。
采样点需设立清晰的指引标识，并明确采样流程和注意事项。
设立独立的等候区域，尽可能保证人员单向流动，落实“1米线”间隔要求，严控人员密度。
血站核酸检测工作导则一、核酸检测技术用于血液筛查概述1.筛查项目目前用于血液筛查的核酸检测项目包括：人类免疫缺陷病毒核糖核酸（Human Immunodeficiency Virus Ribonucleic Acid, HIV RNA）、丙型肝炎病毒核糖核酸（Hepatitis C Virus Ribonucleic Acid,HCV RNA）和乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（Hepatitis B Virus Deoxyribonucleic acid,HBV DNA）。
2.检测方式核酸检测技术（NAT）筛查可通过两种方式进行：单人份检测（IDT）和混合样本检测（Pooled Testing）。
混合样本检测方法是先将献血者样本进行不多于8人份混合，然后进行核酸分离纯化和扩增检测。
对于反应性的混合样本再进行拆分检测，若拆分出反应性样本（可为一个或多个），则呈反应性反应的血液进入隔离程序；呈阴性反应的血液可进入合格放行程序；如全部样本检测结果均为阴性，则全部血液均可进入合格放行程序。
混合样本检测模式宜在进行血清学检测后，将血清学检测阴性的样本进行混合样本检测。
单人份检测模式，是对单个样本进行检测的模式，其中对单个样本同时三个项目的检测而无法区分反应性项目的检测称为联合检测。
对于反应性的样本可进行鉴别试验以确定结果。
对于联检阳性样本不需等待鉴别结果，可以直接进入血液的隔离程序。
3.应用原则实验室的检测策略应该以有效保证阳性样本的检出为目的。
与血清学抗原抗体检测相结合才能真正起到提高血液安全性的作用，核酸检测对于早期感染的检测效果与当地的流行病学状况和献血人群是相关的，因此在选择检测体系与检测模式时应从检测通量、检测系统性能、检测成本、献血人群流行状况、业务工作流程等几个方面进行综合分析，选择适合的检测模式。
二、检测技术人员要求1.人员的配备与资质应有与核酸检测业务相适应的岗位设置和人员配备，满足从血液样本采集、接收到实验室报告发出的整个核酸检测过程及其支持保障等需求。
血站核酸检测实验室人员资质应至少满足《血站质量管理规范》和《血站实验室质量管理规范》关于人员的要求，并经过省级以上卫生计生行政部门组织或认可的核酸检测相关的理论和技术培训考核合格。
2.岗位设置与职责实验室岗位的设置应根据核酸检测的技术要求及血站的检测策略来决定，应有足够的人力资源以满足工作的需求及履行质量体系相关的职责。
应具有明确的岗位说明，以明确各个岗位的职责和需要达到的标准。
实验室管理层应对各个岗位的操作人员实施授权。
3.人员培训及能力评估1）培训：符合资质的核酸检测技术人员还要接受实验室生物安全以及厂家的上岗前仪器设备操作、维护及校准等的培训。
技术培训内容应覆盖工作人员所涉及的所有工作范畴，培训的评估结果是确定人员是否适合其岗位的依据。
2）能力评估：实验室应建立操作人员能力评估机制。
每年至少实施一次人员的能力评估，以评估其血液核酸检测工作的胜任程度。
参照评估结果制定人员持续培训计划。
操作人员的操作误差分析、检测过程变更可作为培训需求纳入培训活动，需记录人员的能力评估过程。
三、实验室建筑、环境与设施1.基本原则根据核酸检测的特点，以防止实验室交叉污染为目的，实施实验区域划分和空气流向、环境温湿度的控制。
生物安全等防护设施、噪音控制等应以保证检测样本的安全和操作人员的健康为原则。
2.分区及功能要求1）分区原则：核酸检测实验室原则上应设置4个独立的工作区域: 试剂耗材储存和准备区、样本处理区、样本制备区（核酸纯化）和扩增检测区，4个区域空间上完全相互独立，处于分隔状态。
区域之间不能直接相通，需有缓冲区。
a)试剂耗材储存和准备区：该区必须独立设置。
用于试剂的制备、分装和扩增反应混合液的准备以及离心管、吸头等耗材的贮存和准备。
贮存试剂和用于样本制备的耗材等材料应直接运送至试剂贮存和准备区，不能经过扩增检测区。
试剂盒中的阳性对照品及质控品不能保存在该区，应保存在样本处理区。
b)样本处理区：核酸纯化前样本的保存、样本的开盖和混合；如果采用样本混合和核酸纯化为一体的设备，该区可以和样本制备区合并。
c)样本制备（核酸纯化）区：进行核酸（RNA、DNA）提取和纯化、贮存及核酸模板加入至扩增反应管。
d)扩增检测区（扩增后区域）：cDNA合成、DNA扩增及检测。
2）适当合并原则：采用样本汇集及核酸纯化一体的设备，可以将样本处理区b）、样本制备区c）进行合并。
核酸纯化及扩增检测为一体的全自动分析仪，可将样本制备区c)、扩增检测区d)合并。
不需做混样检测，且核酸纯化检测为一体的的检测系统可将b）、c)、d)3个区域合并。
3)样本接收区域样本接收区域应与核酸实验室样本处理区域分开，以免过多人员进入样本处理区域造成污染。
3.通风系统实验室的空气流向可按照从试剂耗材储存和准备区→样本处理区→样本制备区→扩增检测区的方向，以空气压力递减的方式，实施空气流向控制。
防止扩增产物顺空气气流进入扩增前的区域。
扩增前和扩增后区域应具有独立通风系统。
建议扩增后区域保持负压状态。
其它区域保持正压或常压状态。
4.实验室环境温度湿度的控制根据设备的运行要求确定温度湿度的允许及波动范围，实验室应有保证相应环境温度和湿度的设施，以满足试验过程和检测系统的要求，同时应监控并记录实验室温度和湿度。
5.电源实验室应配备UPS电源，以保证核酸检测工作正常进行。
6.限制进入核酸检测实验室应有限制进入的要求，非授权人员不得进入核酸检测实验室。
7.清洁、消毒及环境监控实验室应具有清洁、消毒设施，在试验开始前和结束后对实验室地面、实验台面和空气实施清洁和消毒。
废弃物需放置在指定位置或容器。
可采用消毒设备（紫外灯、臭氧消毒装置）实施空气或相关位置的消毒。
工作人员在进行实验室清洁消毒时，应遵从从清洁区域向污染区域实施消毒的原则。
不同的实验区域应有其各自的清洁用具以防止交叉污染。
每月至少实施暴露表面（包括设备表面、工作台面表面等）有无核酸扩增产物污染的监测。
具体见假阳性结果分析部分。
8.安全设施实验室应配备数量充足、布局合理的照明、消防器具、可用的逃生通道和应急处理设施，如紧急喷淋和洗眼装置。
为操作者提供良好的操作环境，将发生伤害及职业暴露的风险降至最低。
四、检测系统的确认、运行与维护1.基本要求血站开展核酸检测时，除应配备满足检测工作需要的核酸检测系统、信息系统（包括硬件和软件）等关键设备，还应配备离心机、冷藏冷冻设备满足样本采集、处理和保存的工作要求。
集中化检测的实验室的设备配备与信息系统应能满足其工作需要。
实验室需保存关键设备管理相关记录。
核酸检测系统包括核酸混样（混样检测模式）设备、纯化设备、核酸扩增检测设备、配套的信息系统及配套的试剂和耗材。
2.检测系统的确认实验室必须实施核酸检测系统的确认活动。
确认活动包括检测系统购置前的设计确认，使用前的安装确认、运行确认和性能确认，检测系统使用后的性能监控及再确认。
除应提供厂商的安装确认报告之外，实验室还应对每个检测系统进行分析灵敏度验证。
3.检测系统的使用和维护实验室需依据设备厂家说明书或操作手册，建立有可操作性的设备标准操作规程。
操作规程需定期评审，以适应检测过程的变化。
实验室需建立设备维护计划和维护程序，明确设备维护分级、周期及职责，采用监控指标监控设备的维护效果，使设备始终处于在控状态。
设备的维护内容应包括日维护、周维护、月维护和视需要进行的维护。
同时应建立检测系统回顾性评价指标，包括初筛阳性率（混检或联检阳性率）、鉴别阳性率、拆分阳性率等。
4.设备故障设备故障时，应停止使用，并清楚标记防止误用。
设备故障后，应首先分析故障原因，如果设备故障可能影响了方法学性能，故障修复后的设备应经校准、验证或检测等方式表明其达到规定的可接受标准后方可使用。
实验室应检查上述故障对之前检验的影响，必要时对之前的数据进行评估和验证，并确认维修后的设备运行情况。
实验室应采取合理措施在设备投入使用、修理或退役之前对其去污染。
5.设备运行的安全问题应维持设备处于安全工作状态，包括检查电气安全、紧急停止装置、以及化学和生物材料。
只要适用，应使用制造商提供的规格说明和/或使用说明。
应将所采取降低污染措施的内容清单提供给使用该设备工作人员。
实验室应留出合适的空间以供设备修理和放置适当的个人防护装备。
6.设备的校准实验室需校准或验证的设备，应由具备合格资质的技术人员完成，校准后的设备应贴标签或以其他编码标示设备的校准或验证状态，并标明再次校准或再次验证的日期。
7.试剂和耗材试剂和耗材的选择和采购应遵循血站相应的管理制度，同时满足核酸检测样本采集、检测的质量要求。
1）试剂耗材的质量检测：接收试剂耗材时应首先确认其包装是否完整、标识是否清晰、运送状态是否符合要求。
在开封后应注意观察试剂耗材有无破损或条码不清晰等现象。
样本汇集管、核酸提取纯化和扩增检测使用的消耗品如为非核酸检测试剂厂商提供时,应每批进行有无干扰物的实验。
2）试剂耗材的使用和保存：试剂和耗材应保存在试剂耗材储存和准备区。
在经过质检后的试剂可将试剂盒内的阳性对照和质控品放置于样本混样处理区的冰箱内，使用前应核对试剂耗材的规格、批号，按相应的标准操作规程进行操作并作相应记录，按照先进先出的原则，不同批号的试剂不得混用。
五、样本的采集与管理1.样本的采集1）采血管要求：应使用适用于核酸检测，带分离胶的真空采血管，无菌、无DNA酶、无RNA酶，样本为血清或者血浆（EDTA 或者枸橼酸盐抗凝），宜采用含惰性分离胶的EDTAK2真空采血管留取。
应有采血管质量要求，规定储存条件，包括出库前及出库后（献血场所）的保存条件。
2）样本的采集量：用于核酸检测的样本，样本量对检测非常重要。
不同实验室所使用的检测系统不同，对样本量的要求也会有所不同。
在确定采血量时应考虑如下因素：混样联合检测或者单人份联合核酸检测中，需进行样本鉴别试验或拆分试验；仪器故障等意外原因，需要重新检测；以及对献血者感染状况进行进一步评估的检测，如DNA或者RNA定量及乙肝五项指标检测等。
3）样本采集：应制定静脉穿刺和血液采集标准操作规程，严格采用无菌操作技术进行静脉穿刺。
留样时用针头刺穿试管密封塞，按照采血管标注的留取量准确留取，注意使用加抗凝剂的采血管应在采血后颠倒混匀5-10次（或按照采血管技术要求进行），使血液与抗凝剂充分混匀。
应依据选用的采血管规格及自动加样仪的条码扫描要求在采血管相应的位置粘贴条码。
条码粘贴整齐，无污渍、无划痕、无缺损。
2.样本采集后的处理与保存应制定样本采集后的处理与保存程序。
样本在采血现场保存温度通常为2-10℃。
采集后的样本宜在4小时内实施低温离心，分离红细胞和血浆。
如不能按上述要求处理采集的样本，应对所采集的样本保存、处理（离心时间和条件）等条件进行保证弱阳性样本有效检出的确认。
