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中华医学科技奖形式审查结果公布年份2018推荐奖种医学科学技术奖项目名称RASSF1A抑制肝细胞癌生长的基础和临床研究推荐单位推荐单位：江苏省医学会推荐意见：本项目在国内外较早提出RASSF1A等是新的肝细胞癌（HCC）预后的预测分子，初步阐明RASSF1A抑制肝癌发生发展的分子机制，利用自行构建的双重靶向性的纳米载体介导RASSF1A在HCC过表达，可明显抑制HCC在体内外的生长，本项目研究丰富了HCC发生发展的分子机制，还为利用RASSF1A基因进行HCC基因治疗提供了可行性依据，并为进行HCC基因治疗联合化疗药物治疗的临床前研究提供了实验依据。
关键技术还可临床转化。
本项目的实施及推广运用具有开拓性和创新性的贡献，也具有很强的前瞻性和可操作性。
该成果在基层医院中得到运用，对评估HCC患者的预后起到很好的预测作用，进一步指导临床治疗，取得良好的社会效益及经济效益。
目前获得国家发明专利授权1项，发表相关研究论文17篇，其中被SCIE收录17篇、在Web of Science核心合集中共被引用122次，引起国内外的广泛重视和认可，具有广泛的应用前景和深远的社会价值。
经认真审阅，该项目推荐材料真实可靠，候选单位、候选人具备获奖条件，提交资料齐全，符合要求，不存在知识产权纠纷或项目完成单位、完成人员排序争议。
同意申报中华医学科技奖。
项目简介多年来薛万江团队勇于创新，使得RASSF1A（Ras association domain family 1 A）在肝细胞癌（HCC）基础和临床研究处于国内领先地位，部分达到国际先进水平。
本项目已在SCI收录期刊发表论文17篇，已获国家发明专利1项，研究成果已获南通市科技进步二等奖2项。
在多年研究基础上，获得1项国家自然科学基金资助，1项江苏省高校自然科学研究项目资助，1项南通市科技计划项目资助。
此外，研究成果被多家单位应用，并多次在国内学术会议上交流。
本项目主要特色有以下四方面：1、HCC预后相关分子标志物的研究HCC的发生发展过程是一个由多个因素诱导、多基因和多条信号通路激活共同参与的复杂网络机制。
·综述·SHOX 2和RASSF 1A 基因甲基化在消化道肿瘤 诊断和预后预测中价值的研究进展单阳阳 张健锋 毛振彪【摘要】 消化道肿瘤发病率较高，由于其早期诊断较为困难，导致患者预后较差，因此对高危人群的筛查、早期诊断和及时治疗尤为重要。
近年来，表观遗传学在肿瘤发病机制中的作用受到了广泛关注并取得了突破性研究进展。
促癌基因矮小同源盒基因2（SHOX 2）和抑癌基因Ras 相关结构域家族1A （RASSF 1A ）甲基化作为生物标志物在消化道肿瘤诊断和预后预测中的敏感度和特异度较高，有较高的应用价值。
该文就SHOX 2和RASSF 1A 基因甲基化在消化道肿瘤诊断和预后预测中价值的研究进展作一综述。
【关键词】 SHOX 2基因；RASSF 1A 基因；DNA 甲基化；消化道肿瘤DOI: 10. 3969/j. issn. 1673-534X. 2023. 02. 004基金项目：吴阶平医学基金会临床科研专项资助基金项目 （320.6750.19088-75）；南通市科技局基础科学研究面上项目 （JC22022040）；南通市卫健委面上项目（MA2021004）作者单位：226001 南通大学附属医院消化内科通信作者：毛振彪，Email:*************尽管在消化道肿瘤治疗方面的研究已取得了较大进展，但在全球范围内消化道肿瘤的病死率仍较高，结直肠癌（CRC ）、胃癌、原发性肝癌的病死率分别为9.2%、8.2%、8.2%[1]。
因此，应用非侵入性方法检测早期肿瘤标志物十分重要，而DNA 甲基化是被研究得较多的表观遗传修饰，DNA 甲基化水平和模式的改变，可以导致抑癌基因沉默，或原癌基因激活，进而增高肿瘤的发生风险。
矮小同源盒基因2（SHOX 2）和Ras 相关结构域家族1A （RASSF 1A ）基因是多种肿瘤信号通路的调节剂，已被证明可以促进肿瘤的发生和进展；SHOX 2和RASSF 1A 基因甲基化检测的敏感度较高，尤其在疾病早期阶段[2]。
应用研究RASSF1A和SHOX2基因甲基化检测联合快速现场细胞学评价对肺癌的诊断价值任雪珠1，2，张树森2，3，蔡志刚1，2△，李海涛1，2，许晓岚1，2，齐天杰1，2，李宏林1，2摘要：目的评估RAS相关区域家族1A（RASSF1A）联合矮小同源盒基因2（SHOX2）基因甲基化检测和快速现场细胞学评价（C-ROSE）对肺癌的诊断价值。
方法选取行RASSF1A和SHOX2甲基化检测并有明确病理诊断的179例可疑肺癌患者，其中肺癌58例，肺良性病变121例。
179例中114例（肺癌45例，肺良性病变69例）通过迪夫快速染色完成C-ROSE检测。
以病理结果为金标准，分析RASSF1A、SHOX2甲基化和（或）C-ROSE诊断肺癌的敏感度及特异度，同时明确不同标本类型和不同肿瘤类型中RASSF1A和SHOX2甲基化的结果与病理诊断的一致性。
结果RASSF1A联合SHOX2甲基化检测的敏感度为77.59%（45/58），特异度为80.17%（97/121）。
亚组分析中，肺穿刺活检及肺泡灌洗液标本中甲基化与病理诊断一致率较好，分别为88.8%（8/9）、79.75%（126/158），而胸水的一致率稍差，为63.64%（7/11）。
小细胞肺癌和鳞癌甲基化检测准确率分别为100%（5/5）、92.31%（12/13），肺腺癌为66.67%（18/27）。
C-ROSE检测的敏感度为75.56%（34/45），特异度为95.65%（66/69）。
甲基化检测联合C-ROSE的敏感度为86.96%（39/45），特异度为86.67%（60/69）。
结论RASSF1A、SHOX2甲基化检测及C-ROSE用于肺癌的诊断均具有较高的敏感度和特异度，两者结合将成为病理学诊断的有效的补充手段，两者结合有助于进一步提高诊断肺癌的效能。
关键词：肺肿瘤；DNA甲基化；诊断；RAS相关区域家族1A；矮小同源盒基因2；快速现场细胞学评价中图分类号：R446.8，R734.2文献标志码：A DOI：10.11958/20212015Diagnostic value of RASSF1A and SHOX2gene methylation detection combined with rapid on-site cytological evaluation in lung cancerREN Xuezhu1,2,ZHANG Shusen2,3,CAI Zhigang1,2△,LI Haitao1,2,XU Xiaolan1,2,QI Tianjie1,2,LI Honglin1,2 1The Frist Department of Respiratory and Critical Care Medicine,the Second Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang050000,China;2Hebei Key Laboratory of Respiratory Critical Care;3Department of Respiratory and CriticalCare Medicine,Xingtai People's Hospital Affiliated to Hebei Medical University△Corresponding Author E-mail:*******************Abstract:Objective To evaluate the diagnostic value of RASSF1A and SHOX2gene methylation detection combined with rapid on-site cytological evaluation(C-ROSE)in lung cancer.Methods A total of179patients suspected lung cancer patients with RASSF1A and SHOX2methylation detection and definite pathological diagnosis were selected,including58 cases of lung cancer and121cases of benign lung disease.C-rose detection was performed in114of179patients(45lung cancers and69benign lung lesions)by Diff-quick ing pathological results as the gold standard,the sensitivity and specificity of RASSF1A,SHOX2methylation and/or C-ROSE in the diagnosis of lung cancer were analyzed.The consistency between the results of RASSF1A and SHOX2methylation in different specimen types and different tumor types and pathological diagnosis was determined.Results The sensitivity and specificity of RASSF1A combined with SHOX2 methylation detection were77.59%(45/58)and80.17%(97/121),respectively.In the subgroup analysis,the coincidence rates between methylation and pathological diagnosis in lung biopsy and biopsy and alveolar lavage fluid(BALF)specimens were88.89%(8/9)and79.75%(126/158),respectively,while the consistency of pleural fluid was less than63.64%(7/11).In the subgroup analysis of lung cancer types,the accuracy of methylation detection was100%(5/5)and92.31%(12/13)in lung small cell carcinoma and squamous cell carcinoma.which was66.67%(18/27)in lung adenocarcinoma.The sensitivity and specificity of C-ROSE detection were75.56%(34/45)and95.65%(66/69)respectively.The sensitivity of methylation 基金项目：2020年度河北省医学科学研究课题计划（20200060）；河北省县级综合医院适宜卫生技术推广项目资助（20200017）作者单位：1河北医科大学第二医院呼吸与危重症医学一科（邮编050000）；2河北呼吸危重症重点实验室；3河北医科大学附属邢台市人民医院呼吸与危重症医学科作者简介：任雪珠（1986），女，主管检验师，主要从事ROSE在呼吸介入技术中的应用价值研究。
文章编号：1673-8640（2012）07-0554-03中图分类号：Q503文献标志码：A白血病患者RASSF 1A 基因甲基化状态及其临床意义陈卫群1，黄琛2，詹喜炎2，刘水逸2，余洁2，张红梅2，卢忠心1（1．武汉市中心医院中心实验室，湖北武汉430014；2．武汉市中心医院检验科，湖北武汉430014）摘要：目的研究白血病患者骨髓中Ras 相关区域家族1A （RASSF 1A ）基因启动子甲基化状态及其临床意义。
方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MS-PCR ）检测86例白血病患者和60例非白血病患者对照组骨髓中RASSF 1A 基因启动子的甲基化状况，分析不同白血病类型之间的差异。
结果86例白血病患者中，有12例（13．95%）RASSF 1A 基因启动子甲基化，而60例非白血病患者骨髓均未检测到甲基化，二者比较差异均有统计学意义（P ＜0．05）。
淋巴系白血病患者RASSF 1A 基因甲基化比例（23．1%）明显高于髓系白血病患者（6．4%）（P ＜0．05）。
结论白血病患者骨髓中存在RASSF 1A 基因甲基化，淋巴系白血病甲基化比例明显高于髓系白血病。
RASSF 1A 基因甲基化检测可能成为白血病分型的生物标志物之一。
关键词：白血病；Ras 相关区域系统1A 基因；甲基化；生物标志RASSF 1A gene methylation and its clinical significance in leukemia patients CHEN Weiqun 1，HUANGChen 2，ZHAN Xiyan 2，LIU Shuiyi 2，YU Jie 2，ZHANG Hongmei 2，LU Zhongxin 1．（1．Central Laboratory ，the CentralHospital of Wuhan ，Hubei Wuhan 430014，China ；2．Department of Clinical Laboratory ，the Central Hospital of Wuhan ，Hubei Wuhan 430014，China ）Abstract ：ObjectiveTo research Ras association domain family 1A （RASSF 1A ）gene promoter regionmethylation in bone marrow of leukemia patients and its clinical significance．MethodsMethylation of RASSF 1A genepromoter region was detected by methylation specific polymerase chain reaction （MS-PCR ）in the bone marrow of 86leukemia patients ，and the difference of different kinds of leukemia was analyzed．A total of 60non-leukemia subjects were enrolled as controls．ResultsTwelve of 86（13．95%）leukemia patients had RASSF 1A gene promoter regionmethylation．No methylation was found in bone marrow of the control group ，and there was a statistical significance （P ＜0．05）．RASSF 1A gene methylation ratio in lymphoid leukemia （23．1%）was higher than that in myeloid leukemia （6．4%）（P ＜0．05）．ConclusionsLeukemia patients have RASSF 1A gene methylation．The ratio ofRASSF 1A gene methyaltion in lymphoid leukemia is obviously higher than that in myeloid leukemia．RASSF 1A gene methyaltion may be a significant parameter for diagnosis and genotyping of patients with leukemia．Key words ：Leukemia ；Ras association domain family 1A gene ；Methylation ；Biomarker基金项目：国家自然科学基金（81071921）；湖北省自然科学基金（2010CDB09002）；武汉市卫生局基金（WX08D11）作者简介：陈卫群，女，1968年生，副主任技师，主要从事肿瘤标志物与基因治疗研究。
通讯作者：卢忠心，联系电话：027-82211532。
白血病是造血系统的恶性疾病，是国内十大高发恶性肿瘤之一。
我国白血病患者约为3 4人/10万人。
小儿的恶性肿瘤中以白血病的发病率最高，每年至少以3 4万的速度增加。
目前白血病的发病机制尚不十分清楚，一般认为白血病的发生与理化因子（如核辐射、苯中毒等）有密切的联系。
Ras 相关区域家族1A （RASSF 1A ）基因是2000年新发现的抑癌基因，其甲基化与许多肿瘤相关，但其与白血病的关系还不清楚。
我们以不同类型的白血病患者为研究对象，用甲基化特异性聚合酶链反应（methylation specific polymerase chain reaction ，MS-PCR ）检测其骨髓RASSF 1A 基因甲基化水平，探讨RASSF 1A 基因甲基化与白血病的发生和变化之间的关系。
材料和方法一、研究对象收集86例经骨骼穿刺病理细胞学确诊的白血病患者骨髓，男41例，女45例，年龄22 87岁。
其中急性髓系白血病（AML ）24例、慢性髓系白血病（CML ）23例、急性淋巴系白血病（ALL ）19例、慢性淋巴系白血病（CLL ）20例。
同时收集60例因贫血或发热原因待查经骨骼穿刺病理细胞学确诊为非白血病患者骨髓作为对照组，男28例，女32例，年龄22 80岁。
二、仪器与试剂QIAamp DNA kit试剂盒购自美国QIAGEN 公司；甲基化修饰试剂盒购于ZYMO RESEARCH 公司；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）试剂盒购于TaKaRa公司；引物由上海生工公司合成；聚合酶链反应（PCR）仪为美国BIO-RAD CFX96荧光定量PCR仪；核酸检测仪为美国Beckman DU730紫外可见分光光度仪。
三、MS-PCR检测RASSF1A基因甲基化应用QIAamp DNA kit试剂盒提取总DNA，提取核酸用紫外分光光度计检测纯度，于-80ħ保存。
按EZ DNA Methylation Kit试剂盒说明将提取的DNA未甲基化胞嘧啶转化为尿嘧啶，转化后的样本进行PCR扩增。
引物序列为：甲基化引物5'-GTGTTAACGCGTTGCGTATC-3'和5'-AAC CCCGCGAACTAAAAACGA-3'；非甲基化引物5'-TTTGGTTGGAGTGTGTTAATGTG-3'和5'-CAAACC CCACAAACTAAAAACAA-3'。
反应体系为25μL，反应条件为：95ħ预变性10min，95ħ变性1 min，65ħ退火1min，72ħ延伸1min，共35个循环，最后一轮72ħ延伸10min。
扩增后的产物经琼脂糖凝胶电泳后检测。
以已知甲基化细胞系K562和非甲基化细胞系RPMI8226提取DNA 混合物作为甲基化和非甲基化的阳性对照，以不含DNA的水作为阴性对照。
四、统计学方法采用SPSS13．0软件进行统计学分析。
组间比较采用卡方检验，P＜0．05表示差异有统计学意义。
结果一、RASSF1A基因启动子甲基化检测结果86例白血病患者骨髓中有12例（13．95%）检出甲基化条带，而60例非白血病患者均未检出甲基化条带，二者比较差异有统计学意义（χ2= 9．122，P=0．001）。
见图1，表1。
注：Marker为DNA标志；M为甲基化；U为非甲基化；Control为已知甲基化细胞系K562和非甲基化细胞系RPMI8226提取DNA混合物作为甲基化和非甲基化的阳性对照；H2O为不含DNA的水（阴性对照）；P4、P10、P11、P15、P22为患者样本图1白血病患者RASSF1A基因启动子甲基化状态二、RASSF1A基因启动子甲基化与白血病分型的关系淋巴系白血病患者骨髓中RASSF1A基因甲基化率（23．1%）明显高于髓系白血病患者（6．4%）（P＜0．05）。
髓系白血病中AML患者的骨髓甲基化率为8．3%，而CML患者为4．3%，二者比较差异无统计学意义（P＞0．05）。
淋巴系白血病中ALL患者的骨髓甲基化率为26．3%，而CLL患者为20．0%，二者比较差异无统计学意义（P＞0．05）。
见表1。
表1白血病患者RASSF1A基因启动子甲基化状态组别例数甲基化例数甲基化率（%）χ2值P值白血病组4．9470．028髓系白血病4736．40．3560．500 AML2428．3CML2314．3淋巴系白血病39923．10．2190．465 ALL19526．3CLL20420．0急性白血病43716．30．3870．378慢性白血病43511．6讨论肿瘤中普遍存在DNA甲基化状态的改变，表现为抑癌基因与修复基因的高甲基化与癌基因的去甲基化。
基因的甲基化沉默机制有2种：（1）由于启动子区的甲基化导致启动子区结构改变，启动困难；（2）甲基化引起组蛋白脱乙酰化而致染色质结构改变，关闭基因［1］。
RASSF1A基因是2000年新发现的候选抑癌基因，位于染色体的3p21．3。
作为Ras的负性调控分子，RASSF1蛋白通过抑制细胞内Cyclin D1聚积、抑制cdc20介导的APC活性、维持微管的稳定等途径诱导细胞凋亡和阻滞细胞周期进程。
RASSF1A基因缺失和启动子区高甲基化是大多数人类肿瘤组织的频发事件，是RASSF1A基因失活的主要机制［2-3］。
多数肿瘤组织RASSF1A基因启动子区甲基化的发生率为35% 60%，小细胞肺癌（72% 79%）、肝癌（66．7% 95%）、鼻咽癌（67% 84%）等具有更高的甲基化发生率。
