高效液相色谱法检测UV-1164的含量

高效液相色谱仪常用的检测器及其性能(1)紫外汲取(UV)检测器 UV检测器是目前HPLC应用最广泛的检测器。

它是依据光汲取原理，以适当的光路和电路，输出一个与试样组分浓度成正比的紫外一可见光汲取信号，其结构与普通光度计相像。

其流通池是组分流过的光学通道，池体积普通为8μl，内径小于lmm，长度10mm 左右。

这种检测器敏捷度高，线性范围宽，对流速和温度变幻不敏感，可用于梯度洗脱分别。

紫外汲取检测要求被检测样品组分有紫外一可见光汲取，而用法的流淌相无汲取，或在被测组分汲取波特长无汲取。

普通挑选在欲分析物有最大汲取的波特长举行检测，以获得最大敏捷度和抗干扰能力。

在没有最大汲取时，可采纳末端汲取。

检测波长的挑选除取决于待测物质的成分和分子结构外，还必需考虑流淌相组成、共存组分干扰等因素。

特殊是各种溶剂都有一定的透过波长下限值，超过这个波长，溶剂的汲取会变得很强，以至于不能很好地测出待测物质的汲取强度。

表1列出了HPLC中一些常用的溶剂透过波长的下限。

(2)光电二极管阵列(IJDA)检测器 PDA检测器又称为二极管阵列检测器(diode array UV detector，DAD)，这种检测器以光电二极管阵列作为检测元件，可举行多通道并行检测，在一次色谱测量中，可同时获得时光、波长、吸光度三者的关系，通过计算机处理，在荧光屏上显示出三维图谱，也可作出随意波长的吸光度一时问曲线和随意时光的吸光度一波长曲线。

DAD的光路与紫外检测器不同，光源发出的光聚焦后先通过检测池，通过检测池的透射光由全息光栅色散成多色光，不同波长的色散光按波长挨次聚焦在阵列元件上，每个元件对应一定的纳米数。

当光照耀到光电二极管时，光电二极管产生讯号。

因为色散过程及透射光的检测是全波长范围的，可在眨眼检测流经检测池的全汲取光谱，得到三维色谱一光谱图。

计算机化的数据处理，还可举行色谱峰光谱相像性比较、峰纯度检测及利用谱图库对掣定样品举行检索等，为定性、定量分析提供更丰盛的信息。

水胺硫磷结构改造研究工作总结一、概述水胺硫磷是一种速效广谱硫逐式一硫代磷酰胺类杀虫、杀螨剂，对蛛形纲中的螨类、昆虫纲中的鳞翅目、同翅目昆虫具有很好的防治作用。

水胺硫磷能通过食道、皮肤和呼吸道引起中毒。

由于其属于高毒农药（急性经口毒性雄大鼠LD50为25mg/kg、雌大鼠63mg/kg，雄小鼠11mg/kg，雌小鼠13mg/kg）。

因此，我们期望对其进行结构改造以获得活性相当但毒性大大降低的新型衍生物。

从经济性考虑，结构改造主要集中水胺硫磷氨基的衍生化，先后设计并合成了下列化合物：二、合成部分2.1 Y11164（Y11183）的合成将原料1水胺硫磷60克（207.6 mmol）溶于20克冰醋酸中，降温至10℃以下，开始缓慢滴加14.22克三氯化磷（103.8 mmol），滴加完毕，升温至65-70℃，继续反应约4小时，反应完全。

向体系中加入等体积的水，浓氨水调节PH=7，有大量固体析出，抽滤得粗产品，石油醚：乙酸乙酯=5:1重结晶得产品58克，纯度97%，产率84%。

2.2 Y11180和Y11181的合成将原料1水胺硫磷1克（3.46 mmol）溶于8 ml二氯甲烷中，再加入1.09克（5.19 mmol）三氟乙酸干,降温至-20℃，缓慢滴加0.524克（5.19 mmol）三乙胺，滴加完毕，缓慢升温至室温，继续反应至原料点消失，约5小时反应完全，加水多次洗涤有机层，干燥拌样柱层析得产品Y11180:192mg，产率14%。

Y11181:257mg，产率：19%。

补充说明：此步反应得到两个产物Y11180和Y11181，这两个化合物结构相似，从谱图上分析无法确定哪一个为目标分子。

2.3 Y11182的合成将原料1水胺硫磷2克（6.92mmol）溶于1.66克（13.83 mmol）原乙酸三甲酯中，再加入30 mg 一水合对甲苯磺酸，加热至120℃，反应至原料点消失，约12小时，脱干溶剂，加入乙酸乙酯，拌样柱层析得产品1.7克,产率60%。

高效液相色谱紫外检测氟哌酸血药浓度的方法
高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分析方法，可以用于测量氟哌酸血药浓度。

紫外（UV）检测器是HPLC中常见的检测器，可以根据样品中化合物的紫外吸收特性来定量分析。

以下是使用HPLC和紫外检测器测量氟哌酸血药浓度的一般步骤：
1.样品制备：准备氟哌酸的标准溶液和血液样品。

标准溶液
用于建立标准曲线，血液样品是待测样品。

2.色谱条件设置：根据实验要求和仪器的性能，设置合适的
色谱条件。

包括色谱柱的选择、流动相的组成和流速、柱
温等。

常用的是反相色谱柱，流动相一般可以是水/有机
溶剂混合物。

3.校准曲线绘制：使用一系列已知浓度的标准溶液，进行
HPLC分析，并记录峰面积与浓度之间的关系。

绘制标准
曲线用于后续的浓度计算。

4.样品注射和分析：将标准溶液和血液样品以适当体积注射
到HPLC系统中，使其通过色谱柱。

紫外检测器将监测到
氟哌酸的吸收峰，并计算出浓度。

5.浓度计算：使用标准曲线和样品的峰面积，可以计算出样
品中氟哌酸的浓度。

需要注意的是，确保色谱柱和仪器的性能稳定，并且样品处理和测量过程中避免任何污染对结果的干扰。

高效液相色谱法测定异菌脲原药的含量建立了利用高效液相色谱法测定异菌脲含量的方法，采用ODS不锈钢柱，以乙腈+水=60+40（V/V）为流动相，在检测波长220nm下采用外标法对异菌脲原药进行了定量测定。

相对标准偏差0.18%，回收率99.65%，线性相关系数0.9997。

标签：高效液相色谱；异菌脲；外标法1 概述异菌脲是一种广谱杀菌剂，为了检测异菌脲含量，文章采用高效液相色谱外标法对其含量进行了测定，建立了简便、快速、准确的测定方法，方法的精密度和准确度试验结果令人满意，可以用于异菌脲原药的含量测定。

2 实验部分2.1 仪器LC-1260高效液相色谱仪；平头注射器（100μL）超声波Auw220D电子天平（日本岛津）。

2.2 试剂乙腈：HPLC级；纯水：纯化水；磷酸：分析纯；异菌脲标样（含量≥98%）：异菌脲样品2.3 高效液相色谱操作条件流动相：乙腈+水=60+40（V/V），水用磷酸调节pH至4.0。

色谱柱：C18 250mm×4.6mm×5.0μm；流动相流速：1.0mL/min检测波长220nm。

2.4 测定步骤2.4.1 标样溶液的制备。

称取异菌脲标样约50mg（称准至±0.1mg）于50ml 容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。

移取5ml于50ml容量瓶中，加流动相定容，摇匀待用。

2.4.2 试样溶液的制备。

称取异菌脲样品约50mg（称准至±0.1mg）于50ml 容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。

移取5ml于50ml容量瓶中，加流动相定容，摇匀待用。

2.4.3 实验方法。

在2.3所述操作条件下，待仪器基线稳定后，按标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序依次进行测定，记录色谱图并计算异菌脲的峰面积。

2.4.4 结果计算。

将测得的两针试样溶液以及试样前后两标准溶液中异菌脲峰面积，按下式计算异菌脲百分含量。

式中：R1-标样溶液中，异菌脲峰面积；R2-试样溶液中，异菌脲峰面积；M1-异菌脲标样的质量，g；M2-试样的质量，g；P-异菌脲标样的质量分数，%。

高效液相色谱仪的四种检测方法及计算高效液相色谱仪（HPLC）在化学、生物学、制药、食品等领域都有广泛应用，其检测方法多种多样，以下将详细介绍四种常用的检测方法及其计算方式。

一、紫外-可见光检测法 (UV-Vis)紫外-可见光检测法是最常用的HPLC检测方法。

在此方法中，样品组分在紫外或可见光区域有吸收，因此可以被检测。

计算方法一般采用峰面积或峰高法定量。

峰面积法比峰高法更为准确，因为它同时考虑了峰的高度和宽度。

在计算时，首先需要获得标准品的校正曲线，然后根据未知样品的峰面积或峰高在校正曲线上找到对应的浓度。

二、荧光检测法 (Fluorescence)荧光检测法的灵敏度通常比紫外-可见光检测法更高，但并非所有化合物都能产生荧光。

在这种方法中，样品组分被激发光照射后发出荧光，荧光强度与组分浓度成正比。

计算方式与紫外-可见光检测法类似，也是通过校正曲线进行定量。

三、电化学检测法 (Electrochemical Detection)电化学检测法通常用于检测具有电化学活性的化合物，如许多药物和神经递质。

它可以在没有光学性质的情况下对物质进行检测，提高了HPLC的应用范围。

常见的电化学检测方法包括安培检测法和电导检测法。

定量计算通常基于法拉第定律，即电流与通过电解池的电荷量成正比。

四、质谱检测法 (Mass Spectrometry)质谱检测法是与HPLC连用的一种高级检测方法，可以提供待测物质的分子量信息，从而确定其化学结构。

在此方法中，HPLC分离后的组分直接进入质谱仪进行检测。

定量计算通常使用内标法或外标法，需要对待测物质进行同位素标记或使用已知量的内标物质。

此外，还可以使用多反应监测模式（MRM）进行更准确的定量。

以上四种方法各有优缺点，应根据具体的应用需求和样品性质选择合适的方法进行检测和计算。

同时，为了获得准确可靠的结果，还需要对HPLC系统进行适当的维护和校准。

液相色谱检测方法液相色谱检测方法是一种快速、灵敏、准确的分析技术，用于分析多种分子，如蛋白质、糖、脂肪和碱性物质。

液相色谱技术定义了一种将分子分离到各自不同相中的方法，被用于分析和检测各种化学活性物质和有机小分子，其中一般用于分子量分析和结构鉴定、确证药物及其代谢物。

液相色谱技术主要是在液相和柱室里进行分析。

在液相和柱室里，将溶液经由内部管道输入，在离子拉曼分离器的作用下，溶液的相分离产生。

常用的液相色谱方法有高效液相色谱法(HPLC)、近红外分光光度法(NIR)、紫外分光光度法(UV-Vis)、离子色谱法(IC)以及毛细滤纸法等。

高效液相色谱法是一种依靠溶剂逆渗混合的技术，能将溶液中的混合物分离来研究物质的组成和结构。

它的基本原理是将混合物的分子分别压入液相色谱填料的孔隙，即拆分混合物。

使用这种技术可实现对多种药物的鉴别和定量分析。

近红外分光光度法是一种快速、简单、准确的分析方法，比传统的液相色谱法有较大的优势。

由于它具有近红外光谱的高灵敏度和分辨率，可以以很少的试样量快速、准确地完成一次分析。

该方法可以用于测定蛋白质、糖、脂肪、碱性物质或有机物质的含量、性质和组成。

紫外分光光度法是通过利用紫外分光仪，利用化合物吸收紫外光谱中不同波长光下的吸收高度，以及色谱法把混合物分离，以实现对化合物的定量和质量分析。

它比其他常用的分析方法更加灵敏，可以检测比较低浓度的物质，也可以检测有机物的定量和质量分析。

离子色谱法是一种强效的分析技术，它利用离子的化学性质和质谱仪的特殊性能，通过混合物的分子离子化为活性离子，然后根据离子的分离效果，将它们分离出来，以完成有机物质的定量和质量分析。

最后，毛细滤纸法也是一种常用的液相色谱技术。

它是将混合溶液和密度液共同通过一块毛细滤纸，根据不同化学物质的溶解度、分子张力、质子交换能力等特性，分离混合物，以准确地检测有机物质。

总之，液相色谱法是一种快速、灵敏、准确的分析技术，它主要作为传统的液相色谱法、近红外分光光度法、紫外分光光度法、离子色谱法和毛细滤纸法，以及细分有机物质等技术，用于研究有机物质的含量、性质及组成，扮演着不可替代的作用。

精选全文完整版可编辑修改高效液相色谱法含量测定1检验方法高效液相色谱法2检验原理高效液相色谱法系采用高压输液泵，将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对样品进行测定的色谱方法。

注入样品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依此进入检测器，由数据处理系统记录和处理色谱信号。

3检验试剂甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、纯水（高纯水）、磷酸等。

4供试品溶液制备取要测试的供试品适量，参照《药典》及《制剂规范》，用规定的溶剂适宜的提取精制方法，配制成一定浓度的供试品溶液。

供试品溶液注入色谱柱前要经适宜的0.45nm的滤膜滤过。

5对照品溶液制备根据供试品所要测定的成分取相应的对照品，用适宜的溶剂配制成相应浓度的对照品溶液。

6流动相配制用高纯度的试剂配制流动相，水应为新鲜配制的高纯水。

配制好的流动相通过适宜的0.45nm 的滤膜滤过，用前脱气。

7操作7.1打开自动进样器、检测器、泵、柱温箱，进入工作站。

7.2自动进样器排气自动进样器排气用50%甲醇（用前脱气），点击自动进样器界面上的purge键，自动排气25分钟。

7.3泵排气分析界面中，设置方法参数，下载方法参数。

用流动相冲洗吸滤头，再把吸滤头浸入流动相中，逆时针旋转排气阀90-180度，点击purge键，排气3-4分钟，顺时针旋转排气阀90-180度，激活仪器。

7.4进样操作7.4.1.将对照品溶液和供试品溶液分别置于样品瓶中，盖上带有垫片的瓶盖，顺时针旋紧，7.4.2将样品瓶按顺序放置于样品瓶架上。

7.4.3设置方法参数，选择波长、柱温、流速、结束时间等，下载并保存方法文件，待色谱系统充分稳定，基线平直。

7.4.4设置批处理分析表。

分析界面主项目中，点击批处理分析，依次设置样品瓶号、样品瓶架号、样品名、方法文件、数据文件、进样体积，保存批处理分析表，点击批处理分析开始，开始数据采集。

7.4.5不同浓度的对照品溶液和同一浓度的供试品溶液应分别进样不少于5针。

高效液相色谱波长确定原则
高效液相色谱（HPLC）波长确定原则是指在HPLC分析中，通过选择合适的检测波长进行检测，以达到最佳的分离和检测效果。

HPLC分析中，通常会选择比较敏感的检测波长进行分析。

这些波长通常是化合物的最大吸收波长或者是在特定波长下具有特定吸
收峰的波长。

同时，考虑到样品的色谱性质和检测灵敏度，选择合适的波长也是非常关键的。

在HPLC波长确定过程中，常用的方法包括：根据荧光性质选择波长、通过UV-Vis吸收光谱分析选择波长、参照文献中的已知波长等。

值得注意的是，在选择检测波长时，还需要考虑到样品的化学性质和色谱条件。

例如，对于含有多种化合物的混合物样品，需要选择不同的波长进行检测以达到最佳的分离效果；同时，在HPLC色谱条件中，如流速、柱温等参数的控制也会对检测波长的选择产生影响。

综上所述，HPLC波长确定原则需要综合考虑样品的化学性质、色谱性质和检测灵敏度等因素，以选择最合适的检测波长，从而达到最佳的分离和检测效果。

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高效液相色谱法测定更昔洛韦的含量作者：龚文敏来源：《经营管理者·中旬刊》2016年第07期摘要：目的：建立高效液相色谱法测定更昔洛韦的含量。

方法：采用ZORBAX SB-C18（4.6×150mm，5μm）的色谱柱，流动相为甲醇-水（10：90，V/V）。

检测波长：254nm，柱温：30℃，流速：1.0ml/min。

结果：本方法测定的线性范围0.20μg /ml-20μg /ml，r=0.99976，更昔洛韦的加标回收率为90%-100%，最低检出限为0.045μg/ml（S/N=3）。

结论：本方法简单，灵敏，重现性好，结果准确，适合更昔洛韦的含量检测。

关键词：高效液相色谱法更昔洛韦含量测定更昔洛韦（gancidovir，GCL）是继阿昔洛韦之后开发的一种新型核苷类抗病毒药物，主要针对巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、水痘疱疹病毒和EB病毒，其中对于抗人体巨细胞病毒感染，它是第一个能能够有效的治疗此病毒感染的药物。

尤其对艾滋病患者CMV感染具有很强的抗病毒作用。

更昔洛韦与阿昔洛韦有着相似的化学结构，经人体吸收后可代谢转化为三磷酸GCV，此物质可以通过竞争抑制三磷酸脱氧鸟苷结合到延伸的病毒DNA中，从而达到抗病毒的作用。

在本文中，笔者采用HPLC法测定更昔洛韦的含量。

现报道如下。

一、仪器和试剂1.仪器。

Aglient 1260高效液相色谱仪（配有四元泵、自动进样器、紫外可见波长检测器）（安捷伦公司），德国IKA Vortex 3涡旋混合器，Milli-Q超纯水系统（美国Millipore公司），分析天平（精度为万分之一）。

2.试剂。

更昔洛韦标准品（中国药品生物制品检定所）、更昔洛韦原料、甲醇（色谱纯）、水为超纯水、氢氧化钠（分析纯）、盐酸（分析纯）、过氧化氢（分析纯）。

二、实验方法和结果1.色谱条件。

色谱柱：ZORBAX SB-C18（4.6×150mm，5μm），流动相为甲醇-水（10：90，V/V），检测波长：254nm，柱温：30℃，流速：1.0ml/min。

高效液相色谱法测定氯霉素泡腾片中氯霉素含量氯霉素泡腾片为《中国人民解放军医疗机构制剂规范》中收载的外用制剂，属于抗生素类药物，临床上主要用于阴道炎及宫颈糜烂。

本品现行质量标准为《中国人民解放军医疗机构制剂规范》[1]，该标准规定本品每片含氯霉素（C11H12Cl2N2O5）应为标示量的85.0%～115.0%，含量测定采用紫外分光光度法。

《中国药典》2010年版颁布后，氯霉素原料药的含量测定方法采用高效液相色谱法，为提高氯霉素泡腾片的质量标准，有效控制产品质量，本研究参考《中国药典》2010年版及文献方法[2-4]，拟建立高效液相色谱法测定氯霉素泡腾片中氯霉素的含量。

研究结果表明本方法操作简便，专属性好，精密度高，可作为氯霉素泡腾片的含量测定方法。

1 仪器与试药Agilent1100高效液相色谱仪；BT25S电子天平（赛多利斯）；UNICO-2102C型紫外分光光度计（上海UNICO仪器XX公司）；PHS-3E型pH计（上海雷磁）。

甲醇、乙腈为色谱纯（上海星可高纯溶剂XX公司）；庚烷磺酸钠为色谱纯（天津市科密欧化学试剂XX公司）；三乙胺、磷酸二氢钾为分析纯（北京化工厂）。

氯霉素（中国食品药品检定研究院，批号：130555-201203）；氯霉素二醇物（中国药品生物制品检定所，批号：130436-200704）；对硝基苯甲醛（中国药品生物制品检定所，批号：130562-200902）；氯霉素泡腾片（解放军总医院第一附属医院自制，批号130903、130904、130905）。

2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：Kromasil 100-5 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.01 mol/L庚烷磺酸钠缓冲溶液（取磷酸二氢钾6.8 g，用0.01 mol/L庚烷磺酸钠溶液溶解并稀释至1000 mL，再加三乙胺5 mL，混匀，用磷酸调pH值至2.5）-乙腈（70∶30）；柱温：室温；检测波长：274 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL。

高效液相色谱-四通道紫外可见检测法测定不同产地谷精草中槲皮素含量陈芳;冯丽娟【摘要】[ Objective] To establish a quantitative method of determination of quercetin in Eriocauion buergerianum ,and determine the content of quercetin in Eriocauion buergerianum from different growing areas.[ Method] High proficiency liquid chromatography ( HPLC) coupled with four-channel UV-visible detector was used, C18 chromatographic column, mobile phase was the buffer solution of methanol and phosphoric acid (0. 6% ) , the volume ratio of methanol and phosphoric acid (0.6% ) was 52= 48. Qualitative evaluation was done by retention lime and four-channel UV spectrum at the same time, and the detection wavelength were 254, 360, 365, 370 nm. Quantitative evaluation had done at the best sensitive wave of 254 nm. [ Result ] The linearity of quercelin was in the range of 5 - 30μg/ml (R = 0.999 8), the average recovery was 99.56% , the RSD was 2. 30%. The content of quercetin in samples from diiferent growing areas was in the range of 29.5 - 92. 5 μg/ g, [ Conclusi on ] The method is reliable, and can be used for quality control of Eriocauion buergerianum. The content of quercetin in samples from different growing areas has greater difference.%[目的]建立谷精草中槲皮素含量的测定方法,测定8个产地谷精草中槲皮素的含量.[方法]高效液相色谱-四通道紫外可见检测法,C18为色谱柱(250 mm ×4.6 mm,5 μm),流动相为无水甲醇-浓度0.6％磷酸(52∶48,V/V).通过保留时间结合四波长紫外光谱定性,定性检测波长为254、360、365和370 nm.选用灵敏度最高的波长254 nm定量.[结果]槲皮素在5～30μg/ml范围内线性关系良好(R=0.999 8),平均回收率99.56％,RSD为2.30％；不同产地谷精草中槲皮素含量范围为29.5～92.5μg/g.[结论]该方法测定结果可靠,稳定易行,重复性好,可用于谷精草中槲皮素的含量测定;不同产地谷精草中槲皮素含量差异较大.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2012(000)012【总页数】2页(P7091-7092)【关键词】高效液相色谱法;四通道紫外可见;谷精草;槲皮素【作者】陈芳;冯丽娟【作者单位】江汉大学化学与环境工程学院,湖北武汉430056;遵义医学院珠海校区生物工程系,广东珠海519041【正文语种】中文【中图分类】S567;R284.1谷精草(FLOS ERIOCA ULI)为谷精草科(Eriocaulacea)谷精草(Eriocaulon buergerianum Koern.)植物的干燥全草［1］，具有疏散风热、明目和退翳等功效，主治风热目赤、肿痛羞明、眼生翳膜和风热头痛等，为岭南常用的中草药之一［2－3］。

高效液相色谱法测定对乙酰氨基酚片的含量
吴卫涛
【期刊名称】《中国医药导报》
【年(卷),期】2009(0)15
【摘要】目的:建立对乙酰氨基酚片含量的高效液相色谱测定法.方法:色谱柱为依利特C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm).流动相为磷酸盐缓冲液(pH4.5)-甲醇(80:20),流速为1.0ml/min,检测波长为254 nm,柱温为30℃.结果:对乙酰氨基酚在0.05～0.30 mg/ml浓度范围内呈良好线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率为100.5%(n=5),RSD为1.2%.结论:该方法准确、可靠,与标准法比较,结果较为满意,可用于对乙酰氨基酚片的含量测定.
【总页数】2页(P52-53)
【作者】吴卫涛
【作者单位】河南省安阳市食品药品检验所,河南安阳,455000
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
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1.反相高效液相色谱法测定对乙酰氨基酚片的含量 [J], 逯小萌
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3.高效液相色谱法同时测定复方对乙酰氨基酚片中3组分的含量 [J], 李秀梅;张伟
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高效液相色谱法的计算方法高效液相色谱法的计算方法高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。

1、对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪。

色谱柱的填料和流动相的组分应按各品种项下的规定。

常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅胶。

后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用；离子交换填料，用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等，用于分子排阻色谱等。

注样量一般为数微升。

除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。

在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法（附录Ⅳ A ）项下对溶剂的要求。

正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。

一般色谱图约于20分钟内记录完毕。

2、系统适用性试验按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度和拖尾因子。

(1) 色谱柱的理论板数(N，用于定量表示色谱柱的分离效率，简称柱效) 。

在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间t R （以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半高峰宽(Wh/2) ，按n ＝5.54(tR /Wh/2) 2计算色谱柱的理论板数，如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。

(2) 分离度(R)定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。

高效液相色谱法测定氯霉素滴眼液的含量氯霉素滴眼液是一种常见的眼科用药，主要用于治疗由敏感细菌引起的眼部感染。

为了确保其质量和疗效，准确测定氯霉素滴眼液中氯霉素的含量至关重要。

高效液相色谱法（HPLC）作为一种高效、准确、灵敏的分析方法，在药物含量测定中得到了广泛的应用。

一、氯霉素滴眼液简介氯霉素滴眼液中的氯霉素是一种广谱抗生素，对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有抑制作用。

然而，氯霉素的使用需要严格控制剂量，因为过量使用可能会导致一些不良反应，如骨髓抑制等。

因此，准确测定氯霉素滴眼液中氯霉素的含量对于保障药物的安全性和有效性具有重要意义。

二、高效液相色谱法的原理和优势高效液相色谱法是在经典液相色谱法的基础上发展起来的一种色谱分析技术。

它基于混合物中各组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，从而实现分离。

与其他分析方法相比，高效液相色谱法具有许多优势。

首先，它具有很高的分离效率，能够在短时间内将复杂混合物中的各组分分离出来。

其次，它的灵敏度高，可以检测到微量的物质。

此外，该方法的重复性好，准确度高，适用于各种类型的化合物分析。

三、实验部分（一）仪器与试剂1、高效液相色谱仪：配备紫外检测器、输液泵、进样器等。

2、色谱柱：选用适合氯霉素分离的反相色谱柱。

3、试剂：氯霉素标准品、甲醇（色谱纯）、水（超纯水）等。

（二）色谱条件1、流动相：通常采用甲醇水或乙腈水的混合溶液，通过优化比例以获得最佳分离效果。

2、流速：根据色谱柱的规格和实验要求，设定合适的流速。

3、检测波长：根据氯霉素的紫外吸收特性，选择合适的检测波长。

（三）标准溶液的制备精密称取适量的氯霉素标准品，用流动相溶解并定容，配制成一系列不同浓度的标准溶液。

（四）样品溶液的制备准确吸取一定量的氯霉素滴眼液，用流动相稀释至适当浓度。

（五）进样与测定将标准溶液和样品溶液分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

根据标准溶液的浓度和峰面积，绘制标准曲线。

通过样品溶液的峰面积，在标准曲线上查得样品中氯霉素的浓度，并计算其含量。

高效液相色谱法测定普鲁卡因青霉素注射液的含量发表时间：2019-01-11T14:30:03.557Z 来源：《心理医生》2018年36期作者：宋岳[导读] 在弱碱性流动相条件下，普鲁卡因呈游离状态，在反相色谱柱上有一定保留，可以获得较好的色谱分离。

（佳木斯市食品药品检验检测中心黑龙江佳木斯 154000）【摘要】目的：探讨应用高效液相色谱法（HPLC法）测定普鲁卡因青霉素注射液的含量。

方法：采用高效液相色谱仪对普鲁卡因青霉素注射液进行含量的测定。

结果：供试品溶液同对照品溶液主峰的保留时间基本，普鲁卡因、青霉素在此色谱条件下分离良好。

鲁卡因、青霉素的检测，其回收率良好，均在95％～105％之间。

普鲁卡因含量精密度为0．86％，青霉素含量精密度为1．26％。

结论：HPLC法可用于普鲁卡因青霉素注射液的质量控制，操作方便，快捷，结果准确，重复性好。

【关键词】高效液相色谱法；HPLC法；普鲁卡因青霉素注射液；含量测定【中图分类号】R917 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）36-0310-02普鲁卡因青霉素该产品是青霉素的普鲁卡因盐，其中青霉素是主要的抗菌活性成分。

青霉素除对链球菌具有良好的抗菌活性，其它还有溶血性链球菌，肺炎链球菌和不产生青霉素酶的葡萄球菌等。

该产品还具有抗流感嗜血杆菌和百日咳博德特氏菌的抗菌活性。

青霉素通过抑制细菌细胞壁合成发挥杀菌作用[1]。

将普鲁卡因青霉素注射液进行脱油并通过高效液相色谱（HPLC）进行测定其含量。

1.药品与仪器1.1 仪器采用高效液相色谱仪为美国lablliance公司；GR-202日本AND分析天平；CHB-1型抗生素效价测量仪。

1.2 药品乙腈为色谱纯；对氨基苯甲酸、盐酸普鲁卡因、青霉素对照品；注射用普鲁卡因青霉素样品。

1.3 色谱条件使用十八烷基硅烷键合的硅胶作为填料缓冲液（将14g磷酸二氢钾和40%四丁基氢氧化铵溶液溶解在约700mL水中，并用1mol/L氢氧化钾溶液调节pH为7.0，进行加水稀释至 1000mL，混匀，缓冲液-水-乙腈为（52:23:25），流动相用1mol/L氢氧化钾溶液或10%稀磷酸溶液调节pH至7.5±0.05，检测波长为235nm。

高效液相色谱紫外光检测法概述说明1. 引言1.1 概述:高效液相色谱紫外光检测法（High-Performance Liquid Chromatography with Ultraviolet Detection，HPLC-UV）是一种常用的分析技术，通过将样品溶液通过色谱柱，在不同组分之间进行分离和检测。

紫外光检测器可根据各组分在紫外光下的吸收特性来定量分析和鉴定样品中的化学物质，并广泛应用于药物分析、环境监测以及食品安全检测等领域。

1.2 文章结构:本文将对高效液相色谱紫外光检测法进行全面概述。

首先介绍了其原理和仪器设备，然后详细阐述了其分析步骤。

接着，探讨了该方法在药物分析、环境监测以及食品安全检测等领域中的应用。

同时，我们也会评价该方法的优势特点，并探讨其中存在的技术限制与挑战。

最后，我们对该方法未来的发展方向和前景进行了展望。

1.3 目的:本文旨在系统地介绍高效液相色谱紫外光检测法，并深入剖析其原理和应用领域。

通过对该方法的分析步骤和仪器设备的介绍，读者将了解如何正确操作并获取准确的结果。

此外，对方法的优势特点和限制进行评估，有助于读者全面了解该技术，并为未来发展提供指导。

通过本文，读者将获得对高效液相色谱紫外光检测法的全面认识，为在相关领域开展研究或应用提供参考依据。

2. 高效液相色谱紫外光检测法：2.1 原理介绍：高效液相色谱紫外光检测法是一种常见且广泛应用的分析方法。

其原理基于物质对紫外光的吸收特性，通过测量样品在不同波长下的吸光度来确定样品中目标化合物的含量。

在该方法中，先将待测样品溶解于适当的溶剂中，并注入到高效液相色谱仪进行分离。

待分离出目标化合物后，进入紫外可见光检测器进行检测。

紫外检测器使用一个或多个波长（通常为固定波长，如200-400 nm范围内）的紫外光束照射样品，并通过比较入射和出射之间的光强差异来计算吸收峰面积。

2.2 仪器设备：高效液相色谱紫外光检测过程中需要使用以下主要设备：- 高效液相色谱仪：用于将待测样品分离成不同组分。

高效液相色谱质检方法
高效液相色谱（HPLC）是一种广泛应用于分析和分离化学物质的技术。

以下是一些高效液相色谱质检方法的步骤：
1. 准备样品：将待测样品进行前处理，如过滤、萃取、浓缩等，以确保样品适合进行HPLC 分析。

2. 选择色谱柱：根据待测物质的性质和分离要求选择合适的色谱柱，如反相柱、正相柱、离子交换柱等。

3. 选择流动相：根据待测物质的性质和色谱柱的要求选择合适的流动相，如有机相、水相、缓冲液等。

4. 设定仪器参数：根据色谱柱和流动相的要求设定仪器参数，如流速、柱温、检测波长等。

5. 进样：将待测样品注入HPLC 系统，通常使用微量注射器或自动进样器。

6. 分离和检测：待测物质在色谱柱中进行分离，并通过检测器进行检测。

常用的检测器包括紫外检测器、荧光检测器、示差折光检测器等。

7. 数据分析：根据检测结果进行数据分析，如计算峰面积、保留时间、分离度等。

高效液相色谱是一种高灵敏度、高分辨率的分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域的质量控制和分析检测。