高效液相色谱分析方法的建立

精油单萜化合物高效液相色谱分析方法的建立马娜;何敬愉;程皓;刘陈立;蒙海林【摘要】文章建立了一种高效液相色谱方法对精油中常见的三种单萜化合物橙花醇、芳樟醇、香茅醇进行定性和定量分析,并进行了方法学验证.得到最佳色谱条件为:C18柱(4.6 mm i.d.×150 mm,5 μm),以乙腈∶水=1∶1 (v/v)为流动相,流速为1.0 mL/min,UV检测波长205 nm.同时验证了其精密度及方法的稳定性.结果表明,该方法灵敏度高,重复性好,方法学验证符合要求.进而采用此方法分析了玫瑰精油、柠檬精油、玫瑰香精、柠檬香精中三种单萜化合物的含量.【期刊名称】《集成技术》【年(卷),期】2016(005)001【总页数】4页(P44-47)【关键词】精油;橙花醇;芳樟醇;香茅醇;高效液相色谱【作者】马娜;何敬愉;程皓;刘陈立;蒙海林【作者单位】广州中国科学院先进技术研究所生物工程研究中心广州511458;广州中国科学院先进技术研究所生物工程研究中心广州511458;广州中国科学院先进技术研究所生物工程研究中心广州511458;广州中国科学院先进技术研究所生物工程研究中心广州511458;中国科学院深圳先进技术研究院合成生物学工程研究中心深圳518055;广州中国科学院先进技术研究所生物工程研究中心广州511458;中国科学院深圳先进技术研究院合成生物学工程研究中心深圳518055【正文语种】中文【中图分类】O657.7+2芳香精油是从植物的花、叶、茎、根或果实中，通过蒸馏、挤压、冷浸或溶剂提取等方法提炼萃取的挥发性芳香物质，具有美容养颜、抑菌抗菌、消除疲劳、缓解烦躁焦虑、改善内分泌失调等功效［1］，广泛用于制造高级名贵香水、化妆品、医药和食品等领域中。

精油中的芳香化合物组成复杂，大多含有香茅醇、香叶醇、橙花醇、芳樟醇、苯乙醇、丁香酚、金合欢醇及其酯类、倍半萜及其衍生物等［2］。

其中，挥发性单萜化合物橙花醇、芳樟醇、香茅醇在自然界中广泛存在，是多种天然精油的成分，亦为绝大多数香型香精的调配原料。

高效液相色谱检测葡萄及葡萄酒中7种有机酸方法的建立沈 燕1，张正文1，刘兴凯1，王福成2，邵学东1*（1.君顶酒庄有限公司，山东烟台 265607；2.烟台市蓬莱区葡萄与葡萄酒产业发展服务中心，山东烟台 265699）摘 要：目的：建立了利用高效液相色谱测定葡萄及葡萄酒中7种有机酸的检测方法。

方法：色谱条件为Hi-Plex H色谱柱（300 mm×7.7 mm，8 μm），PL Hi-Plex H保护柱（50 mm×7.7 mm，8 μm）；紫外检测波长210 nm；流动相为0.006 mol·L-1的硫酸；流速0.6 mL·min-1；柱温55 ℃；进样量10 μL。

结果：草酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸、乳酸和乙酸出峰时间均在20 min以内；标准曲线线性关系良好，相关系数（R2）在0.999 9～1.000 0；检出限在0.031 4～0.722 3 mg·L-1；加标回收率在95.24%～102.04%，其相对标准偏差在0.16%～1.87%。

结论：该方法操作简单，检测时间短，具有较高的准确性和精确性。

关键词：有机酸；葡萄；葡萄酒；高效液相色谱；检测方法Establishment the Method of Seven Kinds of OrganicAcids in Grape and Wine by High Performance LiquidChromatographySHEN Yan1, ZHANG Zhengwen1, LIU Xingkai1, WANG Fucheng2, SHAO Xuedong1*(1.Junding Castle Co., Ltd., Yantai 265607, China; 2.Yantai Penglai District Grape and Wine Industry DevelopmentService Center, Yantai 265699, China)Abstract: Objective: To establish a HPLC method for the determination of 7 organic acids in grape and wine. Method: The chromatographic conditions were Hi-Plex H column (300 mm×7.7 mm, 8 μm) and PL Hi-Plex H protective column (50 mm×7.7 mm, 8 μm). UV detection wavelength 210 nm; sulfuric acid with 0.006 mol·L-1 mobile phase; flow rate 0.6 mL·min-1; column temperature 55 ℃. The sample size was 10 μL. Result: The peak time of oxalic acid, citric acid, tartaric acid, malic acid, succinic acid, lactic acid and acetic acid were all within 20 min. The standard curve has a good linear relationship with the correlation coefficient（R2） ranging from 0.999 9 to 1.000 0. The detection limit was 0.031 4～0.722 3 mg·L-1. The recoveries ranged from 95.24% to 102.04%, and the relative standard deviations ranged from 0.16% to 1.87%. Conclusion: The method is simple to operate, short detection time, and has high accuracy and accuracy.Keywords: organic acid; grape; wine; high performance liquid chromatography; detection method有机酸是葡萄果实及葡萄酒中体现风味的主要物质之一，其含量是衡量葡萄果实成熟度和品质的重要参数，在葡萄酒的酿造中发挥着关键作用，对酒的感官质量有一定的影响，与酒的物理化学以及微生物稳定性有着紧密联系[1-4]。

液相色谱方法开发（实例讲解）2010© 未经许可，不得复制。

转载请注明出处。

色谱分离与在线检测技术已经成为当今分析化学的一门重要学科，而因其衍生出的相关产品也日益丰富。

对色谱工作者来说，在面对具体方法开发中如何获得适当的分离度则成为关注的焦点。

本文仅从网络上的资源收集简要介绍反相液相色谱法的建立思路。

一、 基本术语基本术语读者可跳过本部分内容，直接阅读实例讲解部分在评价色谱分离的品质时，通常用以下相关术语来反映色谱特征（如图1.）：图1. 典型色谱图1. 保留因子(k)：t t t k R −=(1) 用于反映化合物的色谱保留性质，跟化合物性质有密切关系。

如图1，设t R1 =3.65min, t 0 =1.20min, 则峰1的保留因子为：(3.65-1.20)/1.20=2.042. 拖尾因子(T f )液相色谱方法开发（实例讲解）2010© 未经许可，不得复制。

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aba f W W W T 2+=(2)图2. 典型拖尾峰在理想情况下，色谱峰为高斯型对称峰，其拖尾因子为1.0，但在实际情况中，由于化合物的二次保留等其他因素，色谱峰大多会呈现一定程度的拖尾。

如图2中，该色谱峰的拖尾因子可计算得：{(41.5-37.0)+(37.0-35.0)}/{2*(37.0-35.0)}=1.63.3. 理论塔板数（N ）液相色谱方法开发（实例讲解）2010© 未经许可，不得复制。

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图3. 峰高与峰宽的关系2(16Wt N R= (3) 或2(54.55.0W t N R= (4) 注意：在上式中W 为图3中的W b ，为基线峰宽(4σ)，W 0.5 为峰高一半处的峰宽W h (2.335σ), 并非峰宽的一半(2σ)。

设图1中峰1的基线峰宽为0.25min, 则塔板数为：16*(3.65/0.25)^2=34104. 分离因子(α)10212t t t t k k R R −−==α (5) 又称两个色谱峰的相对保留值。

赛默飞高效液相色谱使用方法
赛默飞高效液相色谱（HPLC）是一种用于分离和分析样品的精密仪器。

具体的使用方法如下：
1.准备工作：
○确保仪器电源已开启。

○安装∗∗谱柱和其他相关配件。

○准备样品和流动相。

2.建立方法：
○进入液相色谱仪的操作界面，选择适宜的色谱柱。

○设置流动相的种类、比例和流速。

○设置样品进样体积和积分时间。

3.进样：
○将样品溶液注入进样器。

○按下开始按钮，液相色谱仪会自动进行分离和检测。

4.数据处理：
○分析结束后，仪器会自动生成色谱图。

○通过数据分析软件对色谱图进行处理，获取目标物质的保留时间、峰面积等数据。

5.清洗和维护：
○实验结束后，关闭仪器电源。

○清洗色谱柱和其他配件。

○定期检查仪器状态，确保正常运行。



需要注意的是，具体操作步骤可能因仪器型号和实验需求而有所不同。

在使用液相色谱仪时，请务必参考相应的说明书并进行培训。


。

一. 方法建立的步骤二．开始前应知道1. 样品的性质在开始方法建立之前，我们应该检查自己对样品的了解程度，并明确分离目标。

表 1 有关样品组分和性质的重要信息所含化合物的数目化合物的化学结构（官能团）化合物的分子量化合物的pKa值化合物的UV光谱图化合物在样品中的浓度范围样品的溶解度样品的化学成分能够为选择HPLC分离的最佳初始条件提供有价值的线索根据已知的样品信息，HPLC方法建立有两种不甚相同的模式。

一种模式依据样品的“化学性质”选择最佳初始条件，色谱工作者需很大程度依赖于过去的经验（如类似结构化合物的分离）和/或用文献资料补充现有信息而另一种模式则直接开始色谱分离，而对样品的性质不大注意这两种HPLC的方法建立模式可分别称为理沦型与经验型初始分离一旦开始，可以根据类似的思路（理论的与经验的）选择进一步的实验。

2.分离的目的HPLC分离的目的必须十分明确，下面的问题在建立方法之初就应确定：（1）主要目的是什么？定量或定性，还是定性、定量同时做？；（2）是否有必要解析出样品的所有成分？譬如可能有必要分离出产品中的所有降解物或杂质，以使含量测定结果更加可靠，但却没必要将它们彼此完全分开。

（3）如要求定量分析，准确度与精密度需多大？样品主要成分的精密度通常能达到±1—2%，特别是不需样品预处理的情况。

（4）特殊化合物可能会以不同的样品形式出现（如：原料药，一种或多种形态，环保样品等）。

是否需要一种以上的HPLC方法？单一方法分离不同形态样品是否理想？（5）一次将分析多少样品？当必须同时处理大量样品时，运行时间将变得非常重要。

有时甚至为了缩短运行时间而以牺牲样品分离度作代价，如缩短柱长或加快流速。

当一次分析的样品数目超过10个，运行时间一般应控制在20min以内。

（6）将要使用该方法的实验室中，有哪些HPLC设备？色谱柱能否恒温系统能否做梯度洗脱？该方法是否可在不同设计与生产的设备上运行？方法建立实验开始之前，应明确对方法的这些要求。

液相色谱方法开发（实例讲解）2010© 未经许可，不得复制。

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色谱分离与在线检测技术已经成为当今分析化学的一门重要学科，而因其衍生出的相关产品也日益丰富。

对色谱工作者来说，在面对具体方法开发中如何获得适当的分离度则成为关注的焦点。

本文仅从网络上的资源收集简要介绍反相液相色谱法的建立思路。

一、 基本术语基本术语读者可跳过本部分内容，直接阅读实例讲解部分在评价色谱分离的品质时，通常用以下相关术语来反映色谱特征（如图1.）：图1. 典型色谱图1. 保留因子(k)：t t t k R −=(1) 用于反映化合物的色谱保留性质，跟化合物性质有密切关系。

如图1，设t R1 =3.65min, t 0 =1.20min, 则峰1的保留因子为：(3.65-1.20)/1.20=2.042. 拖尾因子(T f )液相色谱方法开发（实例讲解）2010© 未经许可，不得复制。

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aba f W W W T 2+=(2)图2. 典型拖尾峰在理想情况下，色谱峰为高斯型对称峰，其拖尾因子为1.0，但在实际情况中，由于化合物的二次保留等其他因素，色谱峰大多会呈现一定程度的拖尾。

如图2中，该色谱峰的拖尾因子可计算得：{(41.5-37.0)+(37.0-35.0)}/{2*(37.0-35.0)}=1.63.3. 理论塔板数（N ）液相色谱方法开发（实例讲解）2010© 未经许可，不得复制。

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图3. 峰高与峰宽的关系2(16Wt N R= (3) 或2(54.55.0W t N R= (4) 注意：在上式中W 为图3中的W b ，为基线峰宽(4σ)，W 0.5 为峰高一半处的峰宽W h (2.335σ), 并非峰宽的一半(2σ)。

设图1中峰1的基线峰宽为0.25min, 则塔板数为：16*(3.65/0.25)^2=34104. 分离因子(α)10212t t t t k k R R −−==α (5) 又称两个色谱峰的相对保留值。

建立液相色谱仪分析方法的一般步骤1. 前言液相色谱法是现代分析化学中常用的一种分析方法，它具有灵敏度高、选择性好、分离速度快等优点。

如何建立一种良好的液相色谱分析方法，对于有机合成和中药研究等领域的研究工作都具有重要意义。

本文将介绍建立液相色谱仪分析方法的一般步骤，希望能够对初学者和相关工作者有所帮助。

2. 样品制备液相色谱仪分析方法的第一步是样品制备。

样品的制备过程要充分考虑样品的性质和分析方法的需要，以保证样品能够被完全溶解并且保证分析结果的准确性和可重复性。

在样品制备时，应注意以下几点：•样品的制备要按照分析方法的要求进行，不同的样品需要不同的制备方式。

•样品的制备过程一定要控制好温度和pH值。

•样品制备后要进行过滤或离心，以去除悬浮物和大分子物质。

3. 建立液相色谱仪分析方法的步骤步骤一：选定色谱柱选定合适的色谱柱对于建立一种良好的液相色谱分析方法非常重要。

根据样品的性质和分析目的，可以选择不同的色谱柱。

色谱柱的选择要具体考虑以下因素：•样品性质，如分子量、极性、酸碱性等。

•分析目的，如官能团分析、含量测定、结构鉴定等。

•色谱柱的反相或正相特性。

步骤二：选择适当的移动相移动相是液相色谱分析中的重要组成部分，它通过色谱柱与样品相互作用，使样品分离出来。

在选择适当的移动相的时候，需要考虑以下几点：•移动相的极性和pH值。

•移动相的流速。

•移动相的稳定性和可重复性。

步骤三：建立分离程序建立分离程序是液相色谱仪分析方法的核心部分之一。

在建立分离程序的时候，需要考虑以下几点：•分离程序中每个组分的波长和保留时间。

•分离程序中的流速和温度。

（流速和温度都对分析结果有很大影响）•是否需要预柱或后柱来减小杂质的干扰。

步骤四：校准检测器校准液相色谱仪检测器是保证分析结果准确性的重要步骤。

在校准检测器时，需要注意以下几点：•校准曲线的线性范围。

•校准曲线的斜率和截距。

•校准曲线的相关系数和检测限。

4. 结语建立液相色谱仪分析方法是一项需要熟练掌握才能从事的技术。

高效液相色谱测定含量的方法
高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种广泛用于测定化合物含量的分析技术。

以下是一般的HPLC测定含量的步骤和方法：
1.样品制备：根据分析的目的，准备含有目标化合物的样品。

样
品制备可能涉及提取、溶解、过滤等步骤。

2.标准曲线制备：准备一系列已知浓度的标准溶液，用于建立标
准曲线。

标准曲线上的点数通常越多越好，以提高测定的准确
性。

3.HPLC系统设置：设置HPLC系统，包括选择合适的色谱柱、
移动相（流动相）和检测器。

根据样品性质和目标分析物，选
择适当的柱和检测条件。

4.进样：将标准溶液和待测样品注入HPLC系统。

通常使用自动
进样器，以提高精度和重复性。

5.色谱条件优化：通过调整流速、温度等条件，优化色谱分离，
使目标化合物得到良好的分离和峰形。

6.数据采集和分析：使用检测器（如紫外-可见（UV-Vis）检测
器）记录样品在色谱柱中的吸收峰，并使用标准曲线计算目标
化合物的浓度。

7.质量控制：包括在分析中加入质量控制样品，以确保实验的准
确性和可靠性。

8.结果报告：报告目标化合物的浓度，通常以样品中目标化合物
的峰面积或峰高度与标准曲线的关系来表示。

需要注意的是，HPLC分析的方法会因分析的具体目的和分析物的性质而有所不同。

因此，在进行HPLC分析之前，建议参考相关的方法学文献、标准操作程序（SOP）或咨询有经验的分析师。

采用高效液相色谱建立分析方法的思路和流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classicarticles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分析技术，用于分离、鉴定和定量化合物。

实用HPLC方法的建立在分析领域中，高效液相色谱法（HPLC）被广泛应用于各种样品的分离、测定和定量分析。

建立实用的HPLC方法是确保准确、可重复的分析结果的关键步骤之一、以下是建立实用HPLC方法的一般步骤：1.目标设定：首先确定所需分析的目标和要求。

例如，确定分析样品的化学性质和特征，以及需要测定的分析目标物的特定参数，如灵敏度、选择性和分离度。

2.选择色谱柱：选择适当的色谱柱对于建立实用的HPLC方法至关重要。

色谱柱的选择应根据样品的性质、化学特性和分析目标物的特定参数进行。

常见的色谱柱类型包括反相色谱柱、离子交换色谱柱、凝胶过滤色谱柱等。

3.选择流动相：流动相是HPLC方法中另一个重要的考虑因素。

根据样品的性质、分析目标物和色谱柱类型来选择合适的流动相。

流动相可以是单一相或混合相，常见的溶剂包括水、有机溶剂和缓冲液。

4.优化色谱条件：根据选定的色谱柱和流动相，优化色谱条件以实现最佳的分离和分析结果。

这包括优化柱温、流速、梯度条件、洗脱条件等。

通过调整这些参数，可以实现样品中各组分的高效分离和灵敏的检测。

5.确定检测方法：选择合适的检测方法以测定或定量分析目标物。

常见的HPLC检测方法包括紫外-可见吸收检测、荧光检测、电化学检测等。

选择检测波长或参数应根据目标化合物的特征和在所选色谱柱上的吸收或发光特性进行。

6.确定校准曲线和方法验证：对于定量分析，建立校准曲线和进行方法验证非常重要。

校准曲线是使用一组已知浓度的标准溶液进行测定，以建立测定物质浓度与信号响应之间的关系。

方法验证是验证HPLC方法的准确性、精确度、选择性和线性范围。

7.验证方法的稳定性：一旦建立了可靠的HPLC方法，需要验证其稳定性。

这可以通过进行一定时间内的重复测定、精密度和准确度研究来实现。

这些研究可以评估方法的可重复性和稳定性，并确保得到准确、可靠的结果。

8.文档化和验证记录：所有实验数据、实验条件和相关结果都应进行详细记录和文档化。

高效液相标准曲线在高效液相色谱技术中，标准曲线是非常重要的一部分，它能够帮助我们准确地定量分析待测物质的浓度。

本文将介绍如何建立高效液相色谱的标准曲线，以及如何进行标准曲线的验证和应用。

首先，建立高效液相色谱的标准曲线需要准备一系列不同浓度的标准品溶液。

这些标准品溶液的浓度应该覆盖待测物质的浓度范围，并且需要有一定的间隔，以便能够得到较为均匀的标准曲线。

在准备标准品溶液时，需要确保每种溶液的浓度准确无误，可以通过称量、稀释等方法来保证。

接下来，将这些标准品溶液依次注入高效液相色谱仪中进行分析。

在分析过程中，需要记录下每种标准品溶液的峰面积或峰高，并且要进行多次重复实验以确保数据的准确性。

得到的数据将会构成标准曲线的数据点，我们可以利用这些数据点来进行曲线拟合，得到标准曲线的方程和相关系数。

在得到标准曲线之后，需要对其进行验证。

验证标准曲线的方法可以包括再现性实验、稳定性实验、加标回收率实验等。

通过这些验证实验，可以评估标准曲线的可靠性和稳定性，确保其可以准确地用于待测物质的定量分析。

最后，建立的标准曲线可以用于实际样品的浓度测定。

在进行样品浓度测定时，需要将待测样品的峰面积或峰高代入标准曲线的方程中，通过计算得到待测样品的浓度。

需要注意的是，在进行样品浓度测定之前，要先进行样品前处理，以确保样品中没有干扰物质影响测定结果的准确性。

总之，建立高效液相色谱的标准曲线是一项重要的工作，它直接影响到待测物质浓度的准确性。

通过合理准备标准品溶液、进行标准曲线的建立和验证，以及对样品的浓度测定，可以确保我们得到准确可靠的分析结果。

希望本文的介绍能够对您在高效液相色谱分析中的标准曲线建立有所帮助。