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噬菌体滴度测定方法
噬菌体滴度测定是一种用于测定噬菌体（一种寄生于细菌的病毒）浓度的方法。
这种方法通常用于实验室中对噬菌体的研究和生产中的质量控制。
噬菌体滴度测定可以通过以下步骤来进行：
1. 制备宿主细菌，首先，需要培养并生长宿主细菌，通常是大肠杆菌等细菌。
这些细菌将被用作噬菌体的寄主。
2. 制备稀释系列，将噬菌体样品进行一系列的稀释，通常是1:10的稀释系列，以便在测定时得到合适的滴度范围。
3. 混合噬菌体和宿主细菌，将每种稀释倍数的噬菌体样品与宿主细菌混合，并在琼脂平板上均匀涂布。
4. 孵育，将含有噬菌体和宿主细菌的琼脂平板在适当的温度下孵育一段时间，通常是在37摄氏度下孵育。
5. 计数形成的克隆，在孵育后，观察并计数每个琼脂平板上形成的克隆（也就是细菌克隆）。
根据稀释倍数和克隆的数量，可以计算出噬菌体的滴度。
噬菌体滴度测定的结果通常以噬菌体的孔径形成单位（PFU）表示，这是一种衡量噬菌体浓度的常用单位。
这种方法对于确定噬菌体溶液的浓度以及在实验室中进行噬菌体相关实验和研究中都具有重要的意义。
除了上述步骤外，还有一些改进的噬菌体滴度测定方法，如双层琼脂平板法和流式细胞术等，可以根据具体实验需求选择合适的方法进行测定。
总的来说，噬菌体滴度测定方法是一种重要的实验技术，对于噬菌体研究和应用具有重要意义。
噬菌体快速检测方法一、目的要求1.定期检测生产车间空气中和二级种子罐培养液中的噬菌体污染度，观察噬菌斑的形态和大小。
2.学会快速检查发酵液中是否被噬菌体污染的方法。
二、基本原理噬菌体是一类专性寄生于细菌和放线菌等微生物细胞的病毒，某种噬菌体往往只能感染一种或与它相近的某种细菌。
按其感染细菌的过程分两类：大多数烈性噬菌体侵染细菌后迅速引起敏感细菌裂解，释放出大量子代噬菌体，因而可在含有敏感细菌的平板上出现肉眼可见的噬菌斑如图1。
温和噬菌体侵染细菌后呈原噬菌体（或称前噬菌体）状态，一般不引起细菌裂解，使宿主成为溶源性细菌。
在肉膏蛋白胨双层琼脂平板上产生透明噬菌斑中心的菌落，即为溶源性细菌。
了解噬菌体的特性，快速检查噬菌体，在生产和科研工作中防止噬菌体污染具有重要作用。
图1 敏感细菌的平板上出现肉眼可见的噬菌斑空气中和二级种子罐培养液中的噬菌体污染度是预防噬菌体的一个措施。
在连续使用特定菌株进行赖氨酸发酵时，首先是空气中的噬菌体浓度增加，数月后种子罐的噬菌体浓度也急剧增加，随之主发酵罐发酵液中的噬菌体检出浓度也就增加；当空气中的噬菌体浓度上升到每个平板达10～20PFU/ml（噬菌斑生成单位）时，二级种子罐的噬菌体浓度为40～50 PFU/ml；之后迅速增加，达到102 PFU/ml的程度，终于在主发酵罐发生溶菌。
经常检测赖氨酸分厂环境中，特别是空气中与种子罐二级种子液中的噬菌体数，就能知道环境的噬菌体污染程度，也就能预知主发酵罐中会不会发生噬菌体的污染。
噬菌体是病毒的一种，是一种极其微小的生物，体积是细菌的1/1000左右，它可以通过细菌过滤器，只有在电子显微镜下才能看到。
噬菌体具有非常专一的寄生性，只能在特异性寄主细胞中增殖。
由于噬菌体缺乏独立代谢的酶体系，不能脱离寄生而自行生长繁殖，因而噬菌体的繁殖必须依存于寄生菌的繁殖，只能在活的正在繁殖阶段的细胞中进行增殖。
在死的、衰老的、处于休眠状态的细胞中以及在代谢产物或培养基上都无法繁殖。
噬菌体一、生物学特性噬菌体（Phage）属于非细胞型微生物，是侵染细菌、放线菌等细胞型微生物的病毒。
它们个体微小，通常仅能在电子显微镜下观察到；结构简单，多数噬菌体仅由蛋白质和核酸两种成分组成，蛋白质构成的衣壳包裹着核酸。
在自然界单独存在的噬菌体不表现出生命规象，但具有潜在的生命力。
噬菌体从吸附至宿主细胞上的一瞬间，就开始了自己的生命过程。
根据噬菌体与宿主的关系，可将其分为烈性噬菌体与温和噬菌体。
烈性噬菌体通过吸附、侵人、生物合成、装配与释放等步骤使宿主细胞裂解死亡；而温和噬菌体侵染宿主后，则将其核酸整合在宿主基因组上，并以原噬菌体状态存在，宿主则转为溶原性菌株；但有时也有机率较少的温和噬菌体与烈性噬菌体一样，引起宿主细胞的裂解死亡。
温和噬菌体对溶原状态和裂解途径的选择，取决于感染细胞内的一些宿主基因产物和噬菌体基因产物活性之间的平衡。
[1]噬菌体广泛分布于自然界是与其宿主的广泛分布分不开的。
迄今为止，几乎没有一群细菌尚未发现其相应的噬菌体，只有那些我们了解的还很肽浅的细菌才尚未见其相应噬菌体的报导。
[2] 根据大小、形态结构特征，可以把噬菌体分为3种类型，一是蝌蚪状不可收缩尾的噬菌体，其头部为二十面体，直径约110 -120nm，尾部长220-230 nm,尾宽13-15 nm,无尾鞘、基板、尾丁、尾兹等结构。
二是蝌蚪状可收缩尾的噬菌体，其头部为三十面体，约70nm x 110 nm，尾部长约120 -130 nm,尾宽约18-22nm，有尾鞘、基板、尾丁、尾兹等结构，该噬菌体似有包膜。
三是短尾噬菌体，其头部为二十面体，大小为20 nm，尾部长约2-3 nm。
[3]图1. 噬菌体生活周期二 噬菌体的繁育技术1. 繁殖方式噬菌体为非细胞型微生物，其增殖(复制)方式与细菌的繁殖(二分裂)方式不同，从吸附宿主菌到子代噬菌体的释放是一个爆发的过程，表现为“一步生长”的特点。
一步生长实验于1939年Ellis 和Delbruck 创立，据此可以测知噬菌体在细菌内增殖的潜伏期即每一个细菌产生噬菌体的平均裂解量。
噬菌体的污染和防治在许多发酵生产中，如氨基酸发酵、丙酮-丁醇发酵和抗生素发酵中常常遇到噬菌体（b acteriaphage）污染，引起溶菌，并随之出现发酵迟缓或停止发酵等异常现象。
本节主要介绍噬菌体污染的特征，检查方法及防治措施。
一噬菌体污染的特征1 发酵液光密度上升缓慢，甚至下降，肉眼可见发酵液逐渐变清；2 耗糖速度缓慢或停止，产物生成量少或不增加，发酵液中残糖高；3产生大量泡末，发酵液呈粘稠状；4 菌体不规则，甚至出现畸形。
二噬菌体的检查方法1．双层琼脂平板法（1）双层琼脂平板的制备：先用7~8mL 2%的琼脂培养基作底层，凝固后，加入3~4mL 冷至45℃的1%琼脂上层培养基（其中含0.2mL发酵菌种悬液和0.1mL待检发酵液），让其平整凝固；（2）在发酵菌的适宜温度下培养，若是细菌，一般培养16~20小时。
（3）检查有无透明的噬菌斑。
2．液体培养检查法将培养基、发酵菌种及待检发酵液三者混合，培养后观察培养液是否变清。
3．斑点试验法先制备好涂布有发酵菌种的平板，再用接种环或无菌吸管取少许发酵液在平板上点种，培养后，观察是否有噬菌斑。
4．玻片快速法将发酵菌种、发酵液和少量琼脂培养基（含0.5~0.8%的琼脂）混匀后涂布于无菌载玻片上，经短期培养后，在低倍镜下观察是否有噬菌斑。
三噬菌体的防治发酵液中污染噬菌体，不外乎有两种原因。
1 菌种本身带噬菌体，特别是溶源性噬菌体，对这种菌种，一经发现，应立即弃去。
2 生产的环境中有噬菌体。
因此，可采取相应的预防措施：1 决不使用可疑菌种；2 清除周围环境中存在的噬菌体。
能灭菌的灭菌，能消毒的消毒，搞好清洁卫生工作；3 选育抗噬菌体菌株4 轮换使用菌株。
因为一个菌株用的时间一长，就有可能出现该菌种的噬菌体。
5 注意通气质量。
取风口应设在30~40米的高空，空气过滤器要保证质量；四发酵液污染噬菌体后的抢救措施如果一旦发现噬菌体污染，应及时采取补救措施1．若在发酵前期污染了噬菌体，因为此时耗糖还不多，常用以下措施（1）补加抗性种子，并根据发酵液中的营养多少，适当补加营养物质；（2）补加约50%的已培养至对数期的正常的发酵液，再进行发酵；（3）若噬菌体轻度污染，菌体仍能较正常地生长，并积累代谢产物，则可照常进行发酵，若污染严重，则用加热法（70~80℃）灭活噬菌体，放罐后重消毒。
噬菌体裂解法快速检测结核分枝杆菌的应用目的:了解噬菌体裂解试验对结核病的诊断价值。
方法:噬菌体裂解法和涂片法,同时检测150份标本。
结果:噬菌体法阳性率为63.3%(95/150),涂片法为40.0%(60/150)。
结论:噬菌体裂解法具有较高的敏感性和检出率,同时还能区分是否有活菌的存在,为结核病的临床治疗可提供有用的依据,具有很高的推广价值。
标签：噬菌体;分枝杆菌;裂解法传统经典的结核分枝杆菌(TB菌)培养、鉴别的检测方法操作繁琐、耗时,不能满足临床诊断的需要。
笔者采用结核分枝杆菌噬菌体裂解法快速检测结核病患者标本中的结核分枝杆菌的有无,能快速为临床诊疗提供可靠的依据。
1 材料与方法1.1 材料结核分枝杆菌噬菌体裂解法试剂盒(FASTPlaqeTBTM)购自英国Biotec公司。
1.2 检测对象150份结核菌标本源于本院已确诊为结核病的住院患者。
1.3 临床标本前处理挑取2～5 ml痰液于50 ml无菌离心管中,加1倍体积的4% NaOH溶液液化,漩涡振荡、打散痰液,20 min后,离心15 min,4 000 r/min弃去上清液。
加无菌液(C 液)20 ml,重悬下层沉淀,离心15 min,4 000 r/min,弃去上清液。
重复加入C液1 ml,重悬沉淀物,无菌条件下转移至反应管中。
胸腹腔积液、脑脊液和尿液标本离心后弃去上清液,无菌条件下加入C液1 ml后转入反应管中。
1.4 培养基的制备分别取噬菌体(D液)100 μl于阳性对照、阴性对照及标本中,轻轻摇晃,确保试管内容物位于试管底部,37℃孵育60 min。
分别加入100 μl杀菌剂(F溶液)于阳性对照、阴性对照及标本中,充分混匀(确保杀菌剂与反应管内壁完全接触),置室温5 min后,分别加入5 ml培养液(C液)和1 ml指示细胞(E液)于阳性对照、阴性对照及标本中。
上述混合培养物与5 ml已溶解冷却至(55±2)℃的琼脂溶液(G液)于培养皿中快速混匀。
噬菌体实验差速离心法底部摘要：1.噬菌体实验简介2.差速离心法原理3.底部样品处理与分析4.实验操作步骤及注意事项5.实验结果与应用正文：一、噬菌体实验简介噬菌体实验是研究病毒与细菌相互作用的重要方法。
通过该实验，我们可以了解噬菌体如何侵染细菌、复制和释放的过程。
在实验中，差速离心法是一种常用的分离病毒与细菌的技术，而底部样品则包含了实验过程中所需的各类物质。
二、差速离心法原理差速离心法是一种利用离心机对样品进行分离的方法。
通过调整离心机的转速和离心时间，使得不同密度的物质在离心管中形成不同的层次。
在噬菌体实验中，病毒、细菌和其它杂质因密度不同，可分别位于离心管的顶部、底部和中间层。
三、底部样品处理与分析1.底部样品中含有细菌、病毒和其他杂质，首先需要进行沉淀处理，去除上清液。
2.对沉淀物进行悬浮，然后进行梯度离心，进一步分离不同密度的物质。
3.收集底部沉淀物，进行病毒核酸提取和纯化。
4.对提取的病毒核酸进行扩增和测序，分析噬菌体基因序列。
四、实验操作步骤及注意事项1.实验前确保仪器设备和实验用品的清洁和消毒。
2.严格遵循实验方案，设置合适的离心条件和时间。
3.操作过程中轻拿轻放，避免剧烈震动，以免影响分离效果。
4.沉淀处理时，注意观察液体透明度，判断沉淀是否完全。
5.梯度离心时，注意观察离心管中物质的分层情况，确保达到预期分离效果。
6.实验结束后，妥善处理废弃物，遵循实验室安全规定。
五、实验结果与应用通过噬菌体实验差速离心法底部的分析，我们可以获得关于病毒、细菌和其他杂质的信息。
这些信息对于研究噬菌体的侵染机制、病毒基因工程和疫苗研发等方面具有重要意义。
此外，该方法还可应用于环境保护、食品安全和医学检测等领域。
总之，噬菌体实验差速离心法底部是一个富有挑战和价值的实验环节。
噬菌体效价的测定方法噬菌体效价的测定方法1. 引言噬菌体效价的测定方法是研究噬菌体杀菌能力的重要手段。
本文将详细介绍几种常用的噬菌体效价测定方法。
2. 噬菌体效价测定方法斑点法斑点法是最常用的测定噬菌体效价的方法之一。
具体步骤如下：1.准备一系列浓度递减的噬菌体溶液。
2.在琼脂平板上均匀涂敷被测细菌悬浮液。
3.取一定体积的已知浓度的噬菌体溶液滴在已涂敷的平板上，静置一段时间。
4.观察液滴周围是否出现菌落溶解区，根据出现溶解区的数量和大小，推断噬菌体的效价。
流式细胞术法流式细胞术法是一种快速测定噬菌体效价的方法，适合大规模实验。
具体步骤如下：1.准备一系列浓度递减的噬菌体溶液。
2.将被测细菌悬浮液加入流式细胞仪中，通过光散射和荧光信号检测细菌的状态。
3.依据细菌的状态判断噬菌体的效价。
确定感染能力的法确定感染能力的法是一种精确测定噬菌体效价的方法，可以测定细菌在固定时间内被噬菌体感染的能力。
具体步骤如下：1.准备一系列浓度递减的噬菌体溶液。
2.将细菌与噬菌体溶液接触一定时间后，离心沉淀细菌。
3.通过对沉淀细菌进行计数或直接培养识别，确定细菌被感染的数量。
4.根据感染数量和噬菌体浓度计算噬菌体的效价。
3. 结论本文介绍了斑点法、流式细胞术法和确定感染能力的法三种常用的噬菌体效价测定方法。
这些方法各有优缺点，研究者可以根据实际需求选择合适的方法进行噬菌体效价的测定。
4. 斑点法的优点和缺点优点•斑点法操作简单，易于掌握。
•可以同时测定多个噬菌体效价，提高效率。
•结果直观，通过观察菌落溶解区可以准确判断噬菌体效价。
缺点•斑点法需要较长的时间来观察菌落溶解区的形成，耗时较长。
•结果的定量分析相对不准确，只能通过观察溶解区数量和大小来推测效价。
•受到环境因素的影响较大，如温度、湿度等。
5. 流式细胞术法的优点和缺点优点•流式细胞术法速度快，可对大量样本进行高通量分析。
•结果定量准确，可以精确地获得细菌的状态信息。
噬菌体展示[3篇]以下是网友分享的关于噬菌体展示的资料3篇，希望对您有所帮助，就爱阅读感谢您的支持。
噬菌体展示（一）测定噬菌体滴度只有当噬菌体的感染复度MOI (噬菌体数/细菌数)值远低于1时（即细菌过量时），噬菌斑的数量才会随着加入噬菌体的量而呈线性增加。
正因如此，建议检测噬菌体贮液的滴度时，在感染前进行稀释，而不是在高MOI值的情况下稀释被感染的细胞。
低MOI值有助于确保每个噬菌斑仅含一个DNA序列。
1. 接种ER2738单菌落于5-10 ml LB培养基中，摇床培养至对数中期（OD600 ~0.5）。
2. 细胞生长时，微波炉融化上层琼脂，分成3 ml等份于灭菌试管中，每个噬菌体稀释度一管。
保存于45℃备用。
3. 37℃预温LB/IPTG/Xgal平板，每个噬菌体稀释度取一个平板备用。
4. 在LB中准备10倍系列稀释的噬菌体。
建议稀释范围：扩增的噬菌体培养物上清：108-1011；未扩增的淘选洗脱物：101-104。
每个稀释度换一新鲜吸头，建议使用带滤芯吸头以避免交叉污染。
5. 当菌体培养物达对数中期，分成200 μl等份于微量离心管中，每个噬菌体稀释度一管。
6. 每管加入10 μl不同稀释度的噬菌体，快速震荡混匀，室温温育1-5 min。
7. 将感染细胞加入45℃预温的上层琼脂培养管中，每次一管，快速混匀，立即倾注于37℃预温的LB/IPTG/Xgal平板上。
适当倾斜平板将上层琼脂均匀铺开。
8. 待平板冷却5 min后，倒置于37℃培养过夜。
9. 检查平板，计数有~102个噬菌斑的平板上的斑数。
然后用此数目乘以稀释因子即得到每10 μl噬菌体的空斑形成单位（pfu）滴度。
淘选程序最简单直接的淘选方法有：直接将靶分子包被于塑材表面（通过非特异的疏水作用或静电相互作用），洗去过量的未吸附分子，然后将噬菌体库覆盖在已包被的靶分子的表面。
根据靶分子的不同，直接包被法偶尔会导致配体结合位点难以进入，这或许是由于分子的立体封阻或许是由于靶分子表面的部分变性而引起。
噬菌体快速检测方法
一、目的要求
1.定期检测生产车间空气中和二级种子罐培养液中的噬菌体污染度，观察噬菌斑的形态和大小。
2.学会快速检查发酵液中是否被噬菌体污染的方法。
二、基本原理
噬菌体是一类专性寄生于细菌和放线菌等微生物细胞的病毒，某种噬菌体往往只能感染一种或与它相近的某种细菌。
按其感染细菌的过程分两类：大多数烈性噬菌体侵染细菌后迅速引起敏感细菌裂解，释放出大量子代噬菌体，因而可在含有敏感细菌的平板上出现肉眼可见的噬菌斑如图1。
温和噬菌体侵染细菌后呈原噬菌体（或称前噬菌体）状态，一般不引起细菌裂解，使宿主成为溶源性细菌。
在肉膏蛋白胨双层琼脂平板上产生透明噬菌斑中心的菌落，即为溶源性细菌。
了解噬菌体的特性，快速检查噬菌体，在生产和科研工作中防止噬菌体污染具有重要作用。
图1 敏感细菌的平板上出现肉眼可见的噬菌斑
空气中和二级种子罐培养液中的噬菌体污染度是预防噬菌体的一个措施。
在连续使用特定菌株进行赖氨酸发酵时，首先是空气中的噬菌体浓度增加，数月后
种子罐的噬菌体浓度也急剧增加，随之主发酵罐发酵液中的噬菌体检出浓度也就增加；当空气中的噬菌体浓度上升到每个平板达10～20PFU/ml（噬菌斑生成单位）时，二级种子罐的噬菌体浓度为40～50 PFU/ml；之后迅速增加，达到102 PFU/ml的程度，终于在主发酵罐发生溶菌。
经常检测赖氨酸分厂环境中，特别是空气中与种子罐二级种子液中的噬菌体数，就能知道环境的噬菌体污染程度，也就能预知主发酵罐中会不会发生噬菌体的污染。
噬菌体是病毒的一种，是一种极其微小的生物，体积是细菌的1/1000左右，它可以通过细菌过滤器，只有在电子显微镜下才能看到。
噬菌体具有非常专一的寄生性，只能在特异性寄主细胞中增殖。
由于噬菌体缺乏独立代谢的酶体系，不能脱离寄生而自行生长繁殖，因而噬菌体的繁殖必须依存于寄生菌的繁殖，只能在活的正在繁殖阶段的细胞中进行增殖。
在死的、衰老的、处于休眠状态的细胞中以及在代谢产物或培养基上都无法繁殖。
噬菌体的繁殖过程可分为：吸附→侵入（注入DNA）→复制→成熟→裂解五步，寄生细胞裂解后释放出来的成熟子代噬菌体随时又侵染其他细菌，开始新的生活循环。
赖氨酸发酵中污染噬菌体，由于侵染时间和感染量的不同，以及噬菌体“毒力”和菌株敏感性的差异，表现症状是不一样的，一般泡沫多、pH偏高、OD基本不长甚至下降，轻度感染或后期感染常看不出异常变化，可用快速检测法。
三、实验材料
（一）菌种
赖氨酸生产菌。
（二）噬菌体来源
赖氨酸发酵异常发酵液。
（三）培养基
平板培养基、种子罐培养基。
（四）仪器
台式离心机、721型分光光度计、显微镜、恒温水浴、培养箱、冷藏箱等。
（五）其他物品
培养皿、试管、吸管、玻璃涂棒、离心管、方瓶等。
四、实验内容
（一）噬菌体污染快速检查方法
生产或科研中使用的菌株，若被噬菌体污染，常有异常表现：接种的斜面或克氏瓶生长的菌苔上出现不长菌的透明区；液体发酵过程镜检菌体染色不均匀，细胞形态不整齐或膨大呈将破裂状，活细菌数目减少；发酵过程糖消耗减慢，氨基氮和pH变化异常；发酵液稀薄，发酵终产物产率降低等异常状况，以上多为被噬菌体侵染的现象。
目前采用生物测定法进行噬菌体检查，约需12h左右，这样不能及时判断是否有噬菌体污染，无法针对情况迅速采取必要的措施。
快速检查大致确定是否被噬菌体污染可采用以下方法：
1．显微镜直接检查：
定时取发酵液进行涂片染色，在显微镜下检查有无异常菌体。
取赖氨酸发酵正常发酵液和异常发酵液，涂片染色，显微镜观察菌体形态及生长情况。
2．离心分离加热法：
根据微生物细胞被噬菌体裂解后，其高分子内容物从细胞逸出的特点，采用发酵液离心分离后的上清液加热来快速检测噬菌体。
原理是基于正常发酵液离心后菌体沉淀，离心后的上清液若蛋白含量不多，加热后仍清亮；侵染噬菌体的异常发酵液离心后的上清液因含高分子内含物，加热后自裂解菌中逸出有活性蛋白沉淀，在光线照射下出现丁达尔效应而不清亮。
此法简单、快速，对发酵液污染噬菌体的判断亦较准确。
但不适于溶源性细菌及温和噬菌体的诊断，对侵染噬菌体较少的一级种子培养液，也往往不适用。
离心分离加热法快速、便捷、准确，半小时就能确定料液是否污染噬菌体。
具体操作步骤：
取赖氨酸发酵正常发酵液和异常发酵液，4000r／min离心20min，分别取两组
发酵液离心后的上清液（A
1），在721型分光光度计上测定OD
650
光密度值OD
1
650；
再分别将两组发酵液离心后的上清液（A
1
）5ml于试管中，置沸水浴中煮沸2min
（A
2），检测A
2
溶液OD
650
光密度值OD
2
650。
判断：（1）OD
1650 ≈ OD
2
650 ，正常；OD
1
650 «OD
2
650说明污染噬菌体。
（2）目视比浊：A
1清亮； A
2
若有浑浊或明显浑浊或明显大块悬浮物则说
明污染噬菌体。
但当出现明显浑浊后，悬浮物下沉料液清亮，这时若检测OD值可能会比A
1
的还低，出现误判断。
这就要求料液煮沸冷却后必须目视比浊，若有轻微浑浊无法判断，过1h取样检测比较混浊度再做判断。
3. 平板交叉划线法：
取平皿按常规倒入培养基，制成平板，然后取指示菌液划线，再取与其交叉划线。
37.5℃恒温培养10～12h左右。
这种交叉划线检查法，当噬菌体较少时能发现噬菌斑，如果噬菌体较多，则发现交叉处透明，同时可见到由含噬菌体胶液
线向敏感菌线析展的一条亮线（噬菌带）。
此法既可检查噬菌体，又可检查杂菌污染。
4．单层平板法：
单层平板法是液体和空气检测的常规方法。
具体操作步骤：
无菌操作下吸取待测样品1ml，指示菌液0.5ml，加入平皿内，将冷却至45℃的培养基倒入8ml，摇匀后，于37.5℃恒温箱中培养18～24h，细心观察有无噬菌空斑。
实验一：
（1）方法：取指示菌划线平板0h（1#）和培养24h以后（2#）平皿各一块，在划线处分开各滴3d噬菌体污染液，于37.5℃恒温箱中培养18～24h，细心观察有无噬菌空斑。
（2）结果：1#无变化，2#有三个明显噬菌空斑。
实验二：
（1）方法：1＃平皿：车间活化后培养96h平皿
2＃平皿：车间活化后培养24h又冷藏24h平皿
3＃平皿：刚活化0h平皿
往三个平皿中各滴入3d噬菌体污染液于37.5℃恒温箱中培养18～24h，细心观察有无噬菌空斑。
（2）结果：1#、2#无变化，3#有三个明显噬菌空斑。
实验三：
（1）方法：1＃平皿：分别沾取指示菌液与污染噬菌体液交叉划线，
2＃平皿：指示菌划线培养48h后沾取污染噬菌体液与之交叉划线。
于37.5℃恒温箱中培养18～24h，细心观察有无噬菌空斑。
（2）结果：1#有亮斑或亮线（见图2）
2#无变化。
图2 敏感细菌的平板上出现亮斑或亮线
由上述可以证实：噬菌体只侵染正在繁殖的敏感细菌，在死的、衰老的、处于休眠状态的细胞中以及在代谢产物或培养基上都无法繁殖。
这就可以解释分厂发酵罐污染噬菌体，而平皿却检查不出环境污染噬菌体的现象。
（三）噬菌体污染快速检查注意事项：
1.检验噬菌体的细菌，必须是敏感细菌纯种；加入培养皿中的对数中期菌悬液，应在皿中均匀形成菌层（每皿细菌密度约109个）。
2.钙、镁等离子帮助噬菌体尾丝吸附于细菌表面，用自来水配制的肉膏蛋白胨培养基和蛋白胨水即可满足噬菌体增殖和检测需要，不必另外添加无机离子。
培养基中的琼脂浓度对噬菌斑大小有显著影响，底层琼脂浓度以1.5％～2.0％，上层琼脂浓度以0.8％～1.0％为宜。
3.噬菌体对温度极其敏感，一般噬菌体60℃ 5min绝大部分失活。
对氧化物敏感，可被酸碱致死。
此外，凡能引起蛋白质变性的化学药品（如0.5%的甲醛、1%的新洁尔灭、0.5%的苯酚或漂白粉等）都可使噬菌体失活，但是值得注意的是，噬菌体在干燥状态比湿润状态稳定，能长时间以活性状态浮游于空气中，这是生产车间受噬菌体污染的一个重要原因。
4.为保证获得单个、彼此分离的噬菌斑，培养皿盖上和培养基表面不得有凝结水滴，平置培养，不能倒放，每皿中噬菌体数量不能太多，维持100～300个为宜，否则噬菌斑不能分开而连成一片。
（四）污染噬菌体的处理
抗生素等产品发酵过程中有时出现噬菌体污染,轻者造成生产能力大幅度下降,重者造成停产。
一般噬菌体污染后往往出现发酵液突然转稀,泡沫增多,早期镜检发现菌体染色不均匀，在较短时间内菌体大量自溶,最后仅残留菌丝断片,平皿培养出现典型的噬菌斑,溶氧浓度回升提前,营养成分很少消耗,产物合成停止等现象。
发酵过程中污染噬菌体后，一般做如下处理：1.发酵液用高压蒸汽灭菌后放掉,严防发酵液任意流失；2.全部停产,对环境进行全面的清洗和消毒,断绝噬菌体的寄生基础；3.更换生产菌种,不断筛选抗噬菌体菌种,防止噬菌体的重复污染。
污染烈性噬菌体时出现上述现象。
如果污染温和噬菌体时,其反应温和,平皿培养不出现明显的噬菌斑,只出现部分菌体自溶,生化指标变化不显著,生产能力降低,对生产的危害亦是严重的,但不易被发现。
防止温和噬菌体污染的方法同上所述。
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