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【摘要】目的建立山茱萸中熊果酸的含量测定方法方法采用HypersilODS色谱柱;流动相乙腈-甲醇-水-醋酸铵（68∶10∶22∶0.5）;检测波长为220nm;流速为1ml/min。
结果在1.99～9.96μg范围内具有良好的线性关系，r=0.9994，平均回收率为97.63%，RSD =1.00%。
结论该方法简便、重复性好，可作为山茱萸质量控制方法。
中国药典2000年版部山茱萸是用薄层扫描法测定熊果酸含量，由于薄层扫描法测定误差，近年来已有不少用HPLC法测定熊果酸的含量的文献报导。
本文拟用HPLC法对山茱萸中熊果酸进行了定量分析，现将结果报告如下。
1 仪器与试药HP-1050高效液相色谱仪;乙腈、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯;熊果酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号742-200111）;山茱萸（购于广东省药材公司中药饮片厂）。
2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱:Hypersil ODS（250×4.0mm，5μm）;流动相为乙腈-甲醇-水-醋酸铵（68∶10∶22∶0.5）;流速:1ml/min;检测波长:220nm;柱温:室温，在上述条件下样品中熊果酸（保留时间为18.9min）与齐墩果酸（保留时间为17.8min）等成分分离度大于1.5，理论塔板大于8000，见图1～2。
图1 熊果酸对照品HPLC图谱图2 山茱萸HPLC图谱2.2 对照品溶液的制备取熊果酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg 的溶液，摇匀，即得。
2.3 供试品溶液的制备取本品粗粉约1g，精密称定，置索氏提取器内，加乙醇醚适量，加热回流提取4h，提取液回收乙醚至干，残渣加石油醚（30℃～60℃）浸泡2次，每次1 5ml（约浸泡2min），倾去石油醚，残渣加甲醇微热使溶解，定量转移至5ml量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.4 线性关系考察精密称取熊果酸对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.498mg的对照品溶液。
熊果酸含量测定方法研究进展
李华荣;孙鑫
【期刊名称】《时珍国医国药》
【年(卷),期】2010(21)6
【总页数】2页(P1564-1565)
【关键词】熊果酸;含量测定方法
【作者】李华荣;孙鑫
【作者单位】华中科技大学同济医学院附属荆州医院
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
【相关文献】
1.六味地黄丸熊果酸含量测定方法的改进 [J], 尤慧莲;王健
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4.溪黄草中熊果酸含量测定方法学研究 [J], 李楚源;邓乔华;黄琳;徐友阳
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熊果酸的研究进展作者：孟艳秋， 陈瑜， 王趱， 刘丹， MENG Yan-qiu， CHEN Yu， WANG Zan， LIU Dan作者单位：沈阳化工学院制药工程教研室,沈阳,110142刊名：中国新药杂志英文刊名：CHINESE JOURNAL OF NEW DRUGS年，卷(期)：2007,16(1)被引用次数：34次1.王婷;宋怀燕熊果酸药理作用研究进展 2005(05)2.陈武;熊筱娟;李开泉乌索酸的化学、药理及临床研究 2001(02)3.陈鸿英;马雪梅泽兰中齐墩果酸和熊果酸的提取、分离[期刊论文]-天津中医药 2003(05)4.黄建林;张展霞微波萃取、高效液相色谱法测定番石榴叶中的齐墩果酸和熊果酸[期刊论文]-化学与生物工程2005(04)5.郑亚杰;张长弓;李晓斌正交试验法优选山楂中熊果酸的提取工艺[期刊论文]-湖北中医学院学报 2004(02)6.袁干军;易延逵海南五层龙根的化学成分研究[期刊论文]-中药材 2005(01)7.崔星明;王勇为;陈光宇CO2超临界流体萃取芦笋中熊果酸的研究[期刊论文]-上海农业学报 2004(01)8.任秀莲;魏琦峰;周春山沉淀吸附法提取苦丁茶中的熊果酸[期刊论文]-中南大学学报（自然科学版） 2004(04)9.闫花丽;赵陆华;朱丹妮衍生化气相色谱法测定夏枯草中齐墩果酸和熊果酸的含量[期刊论文]-中国中药杂志1999(12)10.罗晓清;祝玮;钱苏生RP-HPLC法测定石楠叶中熊果酸和齐墩果酸的含量[期刊论文]-现代中药研究与实践2003(05)11.LIU HX;SHI YH;WANG DX MECC determination of oleanolic acid and ursolic acid isomers in Ligustrum lucidum Ait[外文期刊] 2003(03)12.SARASWAT B;VISEN PKS;DAYAL R Protective action of ursolic acid against chemical induced hepatotoxicity in rats 1996(04)13.韩德伍齐墩果酸防止实验性肝硬变发生的研究 1981(03)14.张乐之;李新芳齐墩果酸对大鼠实验性肝损伤作用机理的研究 1992(02)15.NIIKAWA M;HAYASHI 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HPLC法测定降脂灵胶囊中熊果酸的含量[摘要]目的：建立高效液相色谱法测定降脂灵胶囊中熊果酸的含量方法：色谱柱：ywgc18柱（250mm×4.6mm，5µm）；流动相：甲醇-0.4%磷酸（86：14）；流速：1.0ml/min；检测波长：205nm 结果：熊果酸在0.470~3.760µg之间线性关系良好，相关系数r=0.99997。
回收率为99.15%，rsd=0.72%结论：本方法简便，准确，重复性好，可用于降脂灵胶囊的质量控制[关键词]降脂灵胶囊；熊果酸；高效液相色谱法降脂灵胶囊是由山楂、泽泻、丹参等七味中药组成的制剂，具有利湿祛痰，活血逐瘀之功效，用于痰瘀互结型高脂血症，本文对其君药山楂中的熊果酸进行含量测定，作为检测和控制该制剂的含量指标，以利于该产品质量的有效控制。
1仪器与试药美国hp1100高效液相色谱仪（hp g1322a真空脱气泵、hp g1311a 四元泵、hp g1313a als自动进样器，hp g1315 dad二极管阵列检测器、hp chemstation system化学工作站） sb3200超声波处理器（上海必能信仪器厂）；电子天平（德国赛多利斯bp211d）；熊果酸对照品（中国药品生物制品检定所）甲醇为色谱醇（天津化工二厂）；水为双蒸水；其他化学试剂均为分析纯2方法与结果2.1色谱条件色谱柱ywg c18柱（250mm×4.6mm，5µm）；流动相：甲醇-0.4%磷酸（86：14）；流速：1.0ml/min；检测波长为205nm；理论塔板数按熊果酸峰计算应不低于30002.2对照品溶液的制备精密称取在60℃减压干燥4h的熊果酸对照品适量，加流动相制成每1ml含150µg的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备取本品内容物4g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，回流提取至提取液基本无色，回收乙醚至干，残渣用石油醚（30~60℃）浸泡2次，每次15ml（约2min），倾去石油醚液，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得。
保和丸中熊果酸含量测定技术分析[目的]通过薄层色谱扫描法来测定保定丸中的熊果酸含量，以此证明这种实验方法进行测定是有效可行的。
[方法]精密吸取对照溶液4μl，6μl及保和丸中熊果酸供试品溶液4μl交叉点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚-丙酮（3：1）为展开剂展开，取出，晾干，喷以10% 硫酸无水乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出。
照薄层色谱法进行线性扫描；检测波长：310nm，参比波长365 nm。
测得供试品吸收峰面积与对照品吸收峰面积，计算即得。
[结果]通过绘制标准曲线。
结果显示，熊果酸在0.6～3.0ug范围内，点样量和峰面积有良好的线性关系，其标准曲线回归方程为：Y=974.53X+150.22，相关系数为0.9979，保和丸中熊果酸的回收率为98.75%，RSD为0.343（n=5）%。
[结论]通过实验得出薄层色谱扫描法具有灵敏度高，分离效果好，结果准确的优点，能用于保和丸中熊果酸的含量测定。
标签：保和丸；熊果酸；实验研究1 材料与方法1.1 材料薄层层析硅胶G（青岛海洋化工有限公司）；熊果酸对照品（中国药品生物制品检定所），山楂（焦）（市售）；六神曲（炒）（市售）；半夏（制）（市售）；茯苓（市售）；陈皮（市售）；连翘（市售）；莱菔子（炒）（市售）；麦芽（炒）（市售）；保和丸（市售）；乙酸乙酯（分析纯）；丙酮（分析纯）；石油醚60-90℃（分析纯）1.2 仪器电子天平（JM10001）；分析天平；超声波清洗机（RSQ-30AS）；微量进样器（平头）；电热恒温干燥箱（DGG-9140B型）；暗箱紫外透射仪（ZF-90型）；薄层扫描仪岛津（CS一930型）。
1.3 对照品溶液的制备精密称取熊果酸对照品1.50mg，置5ml量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（每lmL含熊果酸0.3000mg）。
1.4 供试品溶液的制备“取保和丸适量捣碎，取药丸约4g，精密称定为3.7595g，以乙酸乙酯为提取溶剂，体积比1：6。
高效液相色谱法测定六味地黄胶囊中熊果酸的含量摘要：为建立质控指标，有效控制药品质量，建立高效液相色谱法测定六味地黄胶囊中熊果酸的含量。
色谱柱为Agilent zorbax SB-18柱（4.6mm×150mm，5µm），流动相为乙腈—甲醇—0.5%乙酸胺（60：12：28），流速为1.0ml·min-1，检测波长为215nm，柱温为25℃。
熊果酸在0.05088～0.2544mg·mL-1的范围内与峰面积呈良好线性关系，熊果酸回收率为95.87%，RSD为0.67% ，方法重复性良好，RSD为1.8%，12小时稳定性的RSD为1.6%，结果表明此方法高效便捷，为熊果酸含量测定提供了依据。
关键词: 高效液相色谱法；六味地黄胶囊；熊果酸；含量测定六味地黄胶囊由六味药制成，其特点是补泻并用，具有滋阴补肾之功效，是的滋补肾阴的经典名方。
对六味地黄胶囊主药的有效成分建立质控指标，是控制药品质量的主要手段。
山茱萸中含有多种有效成分，熊果酸、齐墩果酸、山茱萸苷、没食子酸等[1]。
其中熊果酸具有抗肿瘤，护肝、抗菌、免疫调节等多种药理作用[2-3]。
具有较高的研究价值。
目前熊果酸含量的测定方法有薄层扫描法、比色法、高效液相色谱法[4-6]。
《中国药典》2015版一部[7]采用薄层扫描法对六味地黄胶囊中熊果酸进行含量检测，该法操作复杂、烦琐，耗时费力，准确性和重现性差。
为了更高效准确测定熊果酸的含量，建立高效液相色谱法进行含量测定，现报道如下。
1.材料、试剂与仪器1.1供试品六味地黄胶囊：修正药业集团股份有限公司，S1；江西普正制药有限公司，S2；黑龙江省济仁药业有限公司，S3；大连汉方药业有限公司，S4；通化茂祥制药有限公司，S5。
1.2试剂及试药熊果酸对照品，购于中国食品药品检定研究院，批号为110742-200519）；甲醇、乙腈为色谱纯，乙醇、乙酸胺为分析纯。
1.3仪器电子分析天平：MS205Du，梅特勒-托利多（上海）有限公司；超声仪器：KQ5200DB，江苏省昆山市超声仪器有限公司；紫外可见光分光光度计：Agilent Cary60，安捷伦科技有限公司；高效液相色谱仪：Agilent 1260（紫外检测器），安捷伦科技有限公司1.试验方法与结果2.1色谱条件与系统试用性试验Agilent zorbax色谱柱：SB-C18；流动相：乙腈-甲醇-0.5%的乙酸铵溶液（60：12：28）；流速:1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：215nm；进样量：20µL。
熊果酸含量测定方法研究进展（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【关键词】熊果酸；含量测定方法熊果酸（ursolie acid，UA）又名乌索酸、乌苏酸，属于三萜类化合物，广泛存在于熊果、白花蛇舌草、女贞子、乌梅等天然植物和草药中，具有抗炎、护肝、降血脂等多种生物学活性［1～4］。
目前许多中药材及其制剂常选用熊果酸的含量作为其质量控制指标。
本文对熊果酸含量测定方法的研究进展综述如下。
1 分光光度法李国章等［5］建立了湘产3种苦丁茶中熊果酸含量测定的分光光度法，具体操作是取苦丁茶经索氏提取器提取后，加入5%香草醛－冰醋酸、高氯酸显色，在波长548 nm处测定吸光度，结果熊果酸在4～20 μg·ml-1浓度范围内线性关系良好，加样回收率为98.96%。
罗启剑等［6］采用同样方法测定了连钱草中熊果酸含量，结果熊果酸在0～18 μg·ml-1浓度范围内线性关系良好，加样回收率为100.64%。
2 薄层扫描法白洁等［7］采用双波长薄层扫描法测定了夏枯草中熊果酸的含量，具体操作为取夏枯草药材粗粉经95％乙醇超声提取两次，滤液用70℃水浴蒸干，残渣用石油醚浸泡两次，挥干溶剂，用95％乙醇溶解后测定。
采用硅胶G板，以环己烷－氯仿－醋酸乙酯（20∶5∶8）为展开剂，用10％硫酸乙醇溶液显色，选用λS=540 nm，λR=700 nm进行双波长反射式锯齿扫描，结果熊果酸在0.314～1.570 μg范围内线性关系良好，加样回收率为99.3％。
张军等［8］建立了狼疮静颗粒中熊果酸的薄层扫描法测定方法，具体操作为取狼疮静颗粒用乙醚萃取3次，合并乙醚萃取液水浴蒸干乙醚，残留物加无水乙醇－氯仿（3∶2）混合液溶解后测定，以环己烷－氯仿－醋酸乙酯－甲酸（20∶5∶8）为展开剂，用10％的硫酸乙醇液显色，以λS=520 nm，λR=700 nm进行双波长薄层扫描，结果熊果酸在0.498～3.084 μg范围内线性关系良好，加样回收率为97.91％。
3 高效液相色谱法3.1 HPLC－UV法戚志华等［9］采用HPLC法测定了陕西女贞子中熊果酸的含量，其方法为取女贞子粉末经超声提取后采用HPLC法，选用Lichrospher C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，流动相为乙腈－甲醇－水－磷酸－三乙胺（50∶30∶20∶0.02∶0．04），流速1 ml·min-1，测定波长为205 nm，结果熊果酸在20.48～102.4 μg范围内线性关系良好，加样回收率为100.6％。
梁洁等［10］采用HPLC法测定了广西产美味猕猴桃根中熊果酸的含量，具体操作为取美味猕猴桃根粗粉经超声提取后测定，选用Thermo Hypersil BDS C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈－0.1％磷酸水溶液（85∶15），流速1.0 ml·min-1，检测波长210 nm，结果该方法熊果酸线性范围为12.5～150 μg·ml-1，平均回收率为99.35％。
3.2 HPLC－ELSD法赵永席等［11］建立了高效液相色谱－蒸发光散射检测法（HPLC－ELSD）测定山茱萸中熊果酸的含量，具体操作为取山茱萸经索氏提取后采用Phenomenex C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，流动相为甲醇－0.5％冰醋酸水溶液（87:13），流速0.8 ml·min-1，蒸发光散射检测器漂移管温度65℃，载气（N2）流速2.0L·min-1，结果熊果酸在1.16～3.48 μg范围内时线性关系良好，平均回收率为97.5％。
赵宇新等［12］建立了HPLC－ELSD法测定中药饮片木瓜及中成药制剂知柏地黄丸中熊果酸的含量，其操作为去样品经提取后采用Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，柱温40℃，甲醇－水－冰醋酸（260∶40∶0.15）为流动相，流速0.6 ml·min-1，漂移管温度85℃，气体流速2.60 L·min-1，结果熊果酸在0.380～1.90 μg范围内线性关系良好，熊果酸的回收率分别为99.8％。
3.3 HPLC－MS法杨宜华等［13］采用液质连用法测定了白花蛇舌草中熊果酸含量，其操作为取样品经超声提取后选用Hypersil ODS C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，流动相甲醇－0.05％冰醋酸（75∶25），二极管阵列检测器，流速0.2 ml·min-1，柱温45℃，质谱采用大气压化学离子化探头，选择性离子流模式（正离子），APCI400℃，CDL250℃，BLOCK 250℃，结果熊果酸在20.4～163.2 μg·ml-1范围内线性关系良好，加样回收率为100.78％。
4 气相色谱法黄建林等［14］建立了测定番石榴叶中熊果酸的气相色谱－质谱（GC－MS）方法，具体操作为取样品经微波萃取后以双（三甲硅烷）三氟乙酰胺（BSTFA）为衍生化试剂，将熊果酸制成三甲基硅烷衍生物后，在DB－5 MS毛细管柱上进行分离，柱升温程序为：柱初温100℃，恒温保持2 min，以每分钟10℃的速度升温至300℃，保持14 min，通过与标准样品对照比较保留时间和质谱确认样品中熊果酸的色谱峰，以峰面积进行定量测定，结果熊果酸在4.7～114 μg·ml-1范围内线性关系良好，回收率为89.4%。
5 高效毛细管电泳法迟道兵等［15］建立了高效毛细管电泳（HPCE）法测定山茱萸中熊果酸含量的方法，其操作为取样品经索氏提取后以15 mmol·L-1磷酸氢二钠（Na2HPO4）－15 mmol·L-1硼砂（Na2B4O7）（pH9.22）、含10%甲醇（V/V）的缓冲体系作为运行电解质溶液，检测波长214 nm，分离电压20.0 kV进行分离检测，结果熊果酸在0.57～0.95 mg·ml-1范围内线性关系良好，平均加样回收率为97.43%。
张锋等［16］采用毛细管电泳高频电导法测定了夏枯草中熊果酸的含量，其方法为取样品经索氏提取后以布洛芬为内标，采用毛细管区带电泳，高频电导检测，未涂层弹性融硅石英毛细管柱（55 cm×75 μm ID，有效长度46cm），1.2 mmol·L-1三乙胺－HCl（pH=10.60），β-环糊精（0.08 mmol·L-1）为运行缓冲液，分离电压12.5 kV，重力进样10 s（高度20 cm），结果熊果酸在4.3～120.4 μg·ml-1范围内线性关系良好，加样回收率分别为98.2％。
6 其他熊果酸的含量测定除以上几种方法外，文献报道的还有β-环糊精增敏荧光法［17］、近红外光谱法［18］和毛细管胶束电动色谱法［19］等，但这些方法往往因为条件限制或准确度不够高等原因而使用率较低。
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