熊果酸液相检测方法(1)

超声提取高效液相色谱测定保健食品中熊果酸
靳学远;任晓燕;王谦
【期刊名称】《中国卫生检验杂志》
【年(卷),期】2008(18)3
【摘要】目的：建立测定保健食品中熊果酸的分析方法。

方法：采用超声提取熊果酸，以高效液相色谱（HPLC）法为含量测定方法。

结果：样品超声提取30 min后，其熊果酸的提取率与回流提取6 h相当。

HPLC法测定熊果酸的线性范围在0.2-2.0μg范围（相关系数为0.9999）。

相对标准偏差为3.02%，加标回收率为97.65%-98.75%。

结论：此法简单、快速、经济，是测定保健食品中熊果酸含量的有效方法。

【总页数】2页(P440-441)
【关键词】超声提取;高效液相色谱;保健食品;熊果酸
【作者】靳学远;任晓燕;王谦
【作者单位】淮南联合大学化工系
【正文语种】中文
【中图分类】O657.72
【相关文献】
1.超高效液相色谱串联四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱同时测定含银杏叶提取物保健食品中的萜类内酯和黄酮醇类成分 [J], 钮正睿;郑天驰;曹进;李珉;丁宏
2.超声辅助酶法提取-高效液相色谱-原子荧光光谱联用技术测定大米中6种硒形态
[J], 曾云想; 梁婷婷; 汤明河; 金璇; 俞兴伟; 刘国强
3.超声提取-凝胶渗透色谱法净化-超高效液相色谱-串联质谱法测定鸭肠及其制品中6种常见抗生素的残留量 [J], 宁方尧;温韬
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乌梅药材中齐墩果酸和熊果酸的高效液相色谱含量测定(一)作者：范成杰，刘友平，陈鸿平，石宇华【摘要】目的应用高效液相色谱（HPLC）法测定乌梅药材中齐墩果酸和熊果酸的含量，并以齐墩果酸和熊果酸为指标成分建立乌梅肉的质量标准。

方法采用Hypersil ODS C18(150 mm×4.6 mm, 5 μm)；甲醇－0.2%乙酸铵水溶液（83∶17）为流动相；检测波长210 nm，流速0.8 ml/min，柱温25℃。

结果齐墩果酸的线性范围为0.168～1.512 μg，r＝0.999 6，回收率为98.00%（RSD=0.53%）；熊果酸的线性范围为0.452～4.068 μg，r=0.999 9，回收率为97.13%（RSD=1.17%）。

结论该方法简便、可靠、准确，可用于乌梅药材中齐墩果酸和熊果酸的含量比较和乌梅肉的质量控制。

【关键词】高效液相色谱法乌梅肉齐墩果酸熊果酸Abstract：ObjectiveTo determine the ursolic acid and oleanolic acid in the pulp of Fructus Mume by HPLC. MethodsThe ursolic acid and oleanolic acid were separated on C18 column.Methanol-0.2% Ammonium acetate solution (83∶17) was used as mobile phase and the detection wavelength was 254nm.ResultsThe linearity of ursolic acid and oleanolic acid was in the range of 0.168～1.512μg, 0.452～4.068μg, respectively; the average recoveries of ursolic acid and oleanolic acid were 98.00%(RSD=0.53%,n=5) and 97.13%(RSD=1.17%,n=5). ConclusionThe method is simple, quick and reproducible，and it can be used for the quality control of the pulp of Fructus Mume.Key words：HPLC; Pulp of Fructus Mume; Ursolic acid; Oleanolic acid乌梅，别名酸梅、黑梅，由蔷薇科植物梅Prunus mume (Sieb.) Sieb. et Zucc.（Armeniaca mume Sieb.）的干燥近成熟果实加工而成。

夏枯草中熊果酸含量的UPLC测定目的建立夏枯草药材中熊果酸含量的超高效液相色谱法（UPLC）测定方法。

方法采用UPLC进行测定，色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），以甲醇-0.5%冰乙酸水为流动相进行等度洗脱，流速为0.3 ml/min，柱温30℃，检测波长210 nm。

结果熊果酸在0.2461～0.4922 mg 范围内呈良好的线性关系（r2=0.9999），平均回收率为99.29%，RSD=1.74%，熊果酸在夏枯草中的含量为0.28%～0.53%。

结论该方法快速、高效、重现性好，可以为夏枯草药材的质量控制提供更有效的手段。

标签：夏枯草；熊果酸；超高效液相色谱法；含量测定夏枯草为唇形科植物夏枯草（Prunella vulgaris L.）的干燥成熟果穗，味辛、苦，性寒，具有清肝泻火、明目、散结消肿之功效[1]。

夏枯草的主要化学成分有三萜、黄酮、甾体、香豆素、蒽醌、苯丙素等[2]。

其中的主要成分熊果酸具有镇静、抗溃疡、降低血糖、抗炎、抗菌等多种生物学效应[3-5]。

近年来，又发现熊果酸具有抑制癌细胞增长、转移和诱导癌细胞凋亡等作用，极有可能成为一种新型抗癌药物[6-8]。

另外，熊果酸还具有明显的抗氧化功能，被广泛用作医药和化妆品原料[9]。

目前关于夏枯草药材的质量控制研究主要是以熊果酸、齐墩果酸和迷迭香酸等的HPLC含量测定和夏枯草药材的HPLC指纹图谱为主[10-14]，关于夏枯草超高效液相色谱法（UPLC）含量测定的研究还未有报道，且相比于传统的HPLC 而言，UPLC具有柱效高、分离度好和分离快等优点，大大缩短了样品运行的时间，可以满足当下高通量分析的要求。

因此，本实验采用UPLC建立夏枯草药材中熊果酸含量测定方法[15]，测定不同批次的夏枯草药材中熊果酸的含量，该方法灵敏度高，分离度好，重现性好，可以为夏枯草药材的质量控制提供更有效的手段。

高效液相色谱法测定藏药结血蒿中熊果酸含量目的建立藏药结血蒿药材中活性成分熊果酸的定量分析方法，测定熊果酸含量。

方法采用高效液相色谱法（HPLC法），色谱柱为Aglient XDB C18（4.6 mm × 150 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液，体积流量1.0 mL/min，检测波长210 nm。

结果熊果酸在60~190 μg的质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系（r = 0.9997）；平均回收率为93.22%，RSD为2.64%。

结论所建立的HPLC 法简便快捷、准确，可用于结血蒿药材成分的定量测定及质量控制，为安全、合理、有效用药及制定藏药结血蒿的药材质量标准提供科学依据。

[Abstract] Objective To establish a HPLC method for determining ursolic acid in different fractions of Artemisia vestita Wall. ex Bess. Methods The separation was performed on Aglient XDB C18 (4.6 mm × 150 mm, 5 μm) by HPLC, using methanol - 0.1 % phosphoric as mobile phase. The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was 210 nm. Results The linear range of ursolic acid was 60-190 μg ( r = 0.9997). The average recoveries was 93.22% with RSD of 2.64%. Conclusion This method is simple, rapid and sensitive, and it can be used for the quality control of Artemisia vestita Wall. ex Bess..[Key words] Artemisia vestita Wall. ex Bess.; Ursolic acid; Assay; Quality control; HPLC结血蒿Artemisia vestita Wall. ex Bess.，藏语名普尔芒嘎保、普尔芒、普尔那，是菊科蒿属植物毛莲蒿干燥的地上部分，是西藏自治区常用植物藏药材之一。

熊果酸
取本品粉末1g，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml 使溶解，作为供试品溶液。

另取枇杷叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液。

再取熊果酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮（5：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

【检查】水分不得过5.0%(附录IX H第一法)。

总灰分不得过5.0% (附录IX K)。

【含量测定】照高效液相色谱法（附录Ⅵ D）测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-0.5%乙酸铵溶液（67:12:21）为流动相；检测波长为210nm。

理论板数按熊果酸峰计算应不低于5000。

对照品溶液的制备取齐墩果酸对照品适量，精密称定，加乙醇分别制成每1ml含熊果酸0.2mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品约10mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W 频率50kHz)30分钟，放冷，称定重量，加乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含熊果酸（C30H48O3）的总量不得少于90%。

高效液相色谱法测定六味地黄胶囊中熊果酸的含量摘要：为建立质控指标，有效控制药品质量，建立高效液相色谱法测定六味地黄胶囊中熊果酸的含量。

色谱柱为Agilent zorbax SB-18柱（4.6mm×150mm，5µm），流动相为乙腈—甲醇—0.5%乙酸胺（60：12：28），流速为1.0ml·min-1，检测波长为215nm，柱温为25℃。

熊果酸在0.05088～0.2544mg·mL-1的范围内与峰面积呈良好线性关系，熊果酸回收率为95.87%，RSD为0.67% ，方法重复性良好，RSD为1.8%，12小时稳定性的RSD为1.6%，结果表明此方法高效便捷，为熊果酸含量测定提供了依据。

关键词: 高效液相色谱法；六味地黄胶囊；熊果酸；含量测定六味地黄胶囊由六味药制成，其特点是补泻并用，具有滋阴补肾之功效，是的滋补肾阴的经典名方。

对六味地黄胶囊主药的有效成分建立质控指标，是控制药品质量的主要手段。

山茱萸中含有多种有效成分，熊果酸、齐墩果酸、山茱萸苷、没食子酸等[1]。

其中熊果酸具有抗肿瘤，护肝、抗菌、免疫调节等多种药理作用[2-3]。

具有较高的研究价值。

目前熊果酸含量的测定方法有薄层扫描法、比色法、高效液相色谱法[4-6]。

《中国药典》2015版一部[7]采用薄层扫描法对六味地黄胶囊中熊果酸进行含量检测，该法操作复杂、烦琐，耗时费力，准确性和重现性差。

为了更高效准确测定熊果酸的含量，建立高效液相色谱法进行含量测定，现报道如下。

1.材料、试剂与仪器1.1供试品六味地黄胶囊：修正药业集团股份有限公司，S1；江西普正制药有限公司，S2；黑龙江省济仁药业有限公司，S3；大连汉方药业有限公司，S4；通化茂祥制药有限公司，S5。

1.2试剂及试药熊果酸对照品，购于中国食品药品检定研究院，批号为110742-200519）；甲醇、乙腈为色谱纯，乙醇、乙酸胺为分析纯。

1.3仪器电子分析天平：MS205Du，梅特勒-托利多（上海）有限公司；超声仪器：KQ5200DB，江苏省昆山市超声仪器有限公司；紫外可见光分光光度计：Agilent Cary60，安捷伦科技有限公司；高效液相色谱仪：Agilent 1260（紫外检测器），安捷伦科技有限公司1.试验方法与结果2.1色谱条件与系统试用性试验Agilent zorbax色谱柱：SB-C18；流动相：乙腈-甲醇-0.5%的乙酸铵溶液（60：12：28）；流速:1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：215nm；进样量：20µL。

高效液相色谱法测定苦丁茶含片中熊果酸含量
危华玲;蒙大平;郭炎荣
【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】2008(17)3
【摘要】目的建立苦丁茶含片的熊果酸含量测定方法.方法采用高效液相色谱(HPLC)法,色谱柱为C18柱,流动相为甲醇-水-磷酸(90:10:0.03).流速为0.5
mL/min,检测波长为220 nm.结果熊果酸进样量在0.426～4.26μg 范围内与峰面积线性关系良好,r=0.999 8,平均回收率为97.56%,RSD 为0.62%(n=9).结论HPLC 法简便、准确、重现性好,适用于苦丁茶含片的质量控制.
【总页数】2页(P14-15)
【作者】危华玲;蒙大平;郭炎荣
【作者单位】广西壮族自治区人民医院药剂科,广西,南宁,530021;广西壮族自治区人民医院药剂科,广西,南宁,530021;广西壮族自治区人民医院药剂科,广西,南
宁,530021
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1;R286.0
【相关文献】
1.微波辅助萃取-高效液相色谱法测定苦丁茶中熊果酸的含量 [J], 丘秀珍;郭凤飞;郭建新
2.高效液相色谱法测定山楂精降脂片中齐墩果酸和熊果酸含量 [J], 林轶男;金慧子;
苏娟
3.高效液相色谱法测定小儿胃宝咀嚼片中熊果酸含量 [J], 杜小英;姜锦花;宋愿智;马东卫
4.高效液相色谱法测定消食健胃片中熊果酸含量 [J], 李培;潘广洲
5.反相高效液相色谱法测定苦丁茶含片中槲皮素和山柰素的含量 [J], 路玫;荣延平;蒙大平
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迪信泰检测平台
熊果酸检测
熊果酸（Ursolic acid），又称为乌索酸、乌苏酸，是一种五环三萜类化合物，存在于夏枯草、铁冬青等多种植物中。

具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗糖尿病、抗溃疡等多种生物学功能，目前已广泛应用于医药领域。

迪信泰检测平台采用高效液相色谱(HPLC)和液质联用(LC-MS)技术，可高效、精准的检测熊果酸的含量变化。

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锁阳中熊果酸的超声提取及高效液相色谱法测定作者：危晴杨国伟苏东海陈亮来源：《湖北农业科学》2014年第12期摘要：采用超声波辅助萃取法提取，高效液相色谱法测定了锁阳（Cynomorium songaricum）中的熊果酸含量。

在单因素试验基础上，以乙醇体积分数、料液比、超声时间、超声功率为研究对象，进行了4因素3水平正交试验。

结果表明，熊果酸在4.0～16.0 μg/μL范围内呈良好线性关系，回归方程为y=622.7x-85.517，r=0.999 8，加样回收率为98.08%。

锁阳中熊果酸最佳提取工艺为：超声功率150 W，料液比1∶25，85%（V/V，下同）乙醇超声提取30 min，在此条件下，锁阳中熊果酸含量为1.53%。

该工艺能有效提取锁阳中熊果酸，为评价中药材中的熊果酸水平提供参考。

关键词：锁阳（Cynomorium songaricum）;熊果酸;超声提取;高效液相色谱中图分类号：TS201.2 ; ; ; ;文献标识码：A ; ; ; ;文章编号：0439-8114（2014）12-2894-04 Ultrasonic Extraction and HPLC Determination of Ursolic Acid in Cynomorium songaricunWEI Qing，YANG Guo-wei，SU Dong-hai，CHEN Liang（Beijing Polytechnic，Beijing 100029，China）Abstract：Ursolic acid in Cynomorium songaricum was ultrasonically extracted and detected by HPLC. According to single-factor experiments，three levels of four factors including ethanol concentration，material-liquid ratio，ultrasonic time， and ultrasonic power were selected for the orthogonal design.The results showed that the calibration curve of ursolic acid was linear （r=0.999 8） in the range of 4.0～16.0 μg/μL.The equation was y=622.7x-85.517，r=0.999 8，and recovery was 98.08%.The optimum extraction was carried out in 85%（V/V） ethanol for 30 min with the ultrasonic power of 150 W，and the material-liquid ratio 1∶25.Under the optimal conditions，the content of ursolic acid was 1.53%.The method can extract ursolic acid efficiently，and provide a reference for evaluation ursolic acid in medicinal materials.Key words：Cynomorium songaricum;ursolic acid;ultrasonic extraction; HPLC锁阳（Cynomorium songaricum）是一种稀有名贵中草药，俗称“不老药”，是锁阳科锁阳属的单科单属单种植物[1，2]，含有多种药用成分，例如：有机酸、黄酮类、氨基酸等[3-6]，具有抗肿瘤、降低血糖等作用[7]。