熊果酸检测方法-药典

【摘要】目的建立山茱萸中熊果酸的含量测定方法方法采用HypersilODS色谱柱;流动相乙腈-甲醇-水-醋酸铵（68∶10∶22∶0.5）;检测波长为220nm;流速为1ml/min。

结果在1.99～9.96μg范围内具有良好的线性关系，r=0.9994，平均回收率为97.63%，RSD =1.00%。

结论该方法简便、重复性好，可作为山茱萸质量控制方法。

中国药典2000年版部山茱萸是用薄层扫描法测定熊果酸含量，由于薄层扫描法测定误差，近年来已有不少用HPLC法测定熊果酸的含量的文献报导。

本文拟用HPLC法对山茱萸中熊果酸进行了定量分析，现将结果报告如下。

1 仪器与试药HP-1050高效液相色谱仪;乙腈、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯;熊果酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号742-200111）;山茱萸（购于广东省药材公司中药饮片厂）。

2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱:Hypersil ODS（250×4.0mm，5μm）;流动相为乙腈-甲醇-水-醋酸铵（68∶10∶22∶0.5）;流速:1ml/min;检测波长:220nm;柱温:室温，在上述条件下样品中熊果酸（保留时间为18.9min）与齐墩果酸（保留时间为17.8min）等成分分离度大于1.5，理论塔板大于8000，见图1～2。

图1 熊果酸对照品HPLC图谱图2 山茱萸HPLC图谱2.2 对照品溶液的制备取熊果酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg 的溶液，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备取本品粗粉约1g，精密称定，置索氏提取器内，加乙醇醚适量，加热回流提取4h，提取液回收乙醚至干，残渣加石油醚（30℃～60℃）浸泡2次，每次1 5ml（约浸泡2min），倾去石油醚，残渣加甲醇微热使溶解，定量转移至5ml量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.4 线性关系考察精密称取熊果酸对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.498mg的对照品溶液。

HPLC 法测定迷迭香叶提取物中熊果酸的含量
1 试剂
超纯水
甲醇（色谱纯）
乙腈（色谱纯）
磷酸
2 对照品
熊果酸对照品
3 仪器和用具
万分之一电子天平
玻璃仪器：容量瓶
0.45μm 微孔滤膜及针筒式过滤器
超声波清洗器
日本岛津LC-15C 型高效液相色谱仪
4 色谱条件
色谱柱：Diamonsil ® C18(2) 5μ 250×4.6mm
流动相：甲醇﹕乙腈﹕水﹕磷酸=57﹕33﹕10﹕0.01（V/V ）
流速：1.0mL/min
检测波长：210nm
进样量：20μL
柱温：40℃
5 操作步骤
供试品溶液的制备
取样品约30mg （精确至0.1mg ）至25mL 容量瓶，加15mL 甲醇超声溶解，溶解后加甲醇定容至刻度，摇匀，再取1mL 定容至10mL 容量瓶，摇匀，过0.45μm 微孔滤膜，待测。

标准品溶液的制备
精密称取熊果酸标准品适量，加甲醇配成浓度为0.12mg/mL 左右的溶液，过0.45μm 微孔滤膜，待测。

将标准品溶液、供试品溶液各20μL 分别注入高效液相色谱仪中检测。

6 计算
含量（%）=%1001
221⨯⨯⨯⨯⨯P M A V C A 其中 1A ：样品峰面积
2A ：标准品峰面积
C：标准品浓度（mg/mL）2
M：样品称样量（mg）1
V：样品的稀释体积（mL）P：标准品的含量。

抗宫炎片中齐墩果酸和熊果酸的含量测定抗宫炎片由广东紫珠干浸膏、益母草干浸膏和乌药干浸膏等成分组成。

具有清湿热、止带下的作用，临床主要用于湿热下注所致的带下病，如宫颈糜烂、白带量增多等。

研究发现，紫珠中含有黄酮、酚酸、三萜和苯丙素等类别化合物[1-4]，黄酮是其抗宫颈炎有效成份[5]，三萜主要含齐墩果酸和熊果酸等成分[6-7]，有良好的护肝作用和对肝脏的抗脂质过氧化（LPO）作用[8-9]；益母草主要含有生物碱、黄酮和二萜类等成分，总生物碱具有明显的抗炎镇痛作用和改变血流动力学及血液流变学作用[10-11]；乌药主要含有生物碱和萜类成分，生物碱具有较好的抗菌和抗病毒作用[12-13]。

本实验采用高效液相色谱法对抗宫炎片中齐墩果酸和熊果酸的含量进行测定，为抗宫炎片的质量评价提供依据。

1仪器与材料11仪器Agilent1260高效液相色谱仪、G1311B四元泵（带在线脱气机）、G4212B DAD阵列二极管检测器、Agilent汉化版色谱工作站；迪马Diamonil C18（250mm ×46mm，5μm）色谱柱；电子分析天平（岛津AUW120D）；超声波中药处理机（LC-350A）。

12试剂齐墩果酸对照品（批号：110709-201206）、熊果酸对照品（批号：110742 -201220）由中国药品生物制品检定研究院提供；甲醇、乙腈为色谱纯（天津赛福瑞科技XX公司）；水为重蒸水；其它试剂均为分析纯。

13试药抗宫炎片分析样品购置于湖南怀化龙源药业，分别为2个厂家8个批次的样品，编号见表3。

2方法与结果21色谱条件色谱柱：迪马Diamonil C18（250mm ×46mm，5μm）；流动相：乙腈-水（92∶8）；流速：05ml/min；进样量：10μl；检测波长210nm。

上述条件下齐墩果酸和熊果酸基线基本能够分离，峰形对称，色谱图见图1。

22对照品溶液的制备分别精确称取齐墩果酸40mg、熊果酸44mg于10ml容量瓶，用甲醇溶解并定容至刻度，即得040mg/ml 齐墩果酸储备液和044mg/ml熊果酸储备液。

维药硬尖神香草中熊果酸的薄层鉴别方法研究目的：以熊果酸为对照品，建立新疆维吾尔药材硬尖神香草的薄层色谱鉴别方法。

方法：收集两个产地8个批次的硬尖神香草生药材，根据2010版《中国药典》附录VI B（薄层色谱法）中相关项下方法进行薄层鉴别，以熊果酸作为对照品，考察不同展开系统、显色剂、温度、湿度、点样量和不同厂家硅胶板对尖神香草中熊果酸薄层鉴别的影响，从中选出维药硬尖神香草中熊果酸薄层鉴别的最佳条件。

结果：吸取供试品溶液和对照品溶液各3μl点于青岛海洋化工有限公司产高效硅胶板上，在三氯甲烷-丙酮（12∶1）系统中展开，喷以10%硫酸乙醇显色，供试品与熊果酸对照品在同样的位置显紫色的斑点，所得的薄层色谱分离效果较好。

结论：研究建立的硬尖神香草药材中熊果酸的薄层鉴别方法操作简便，重现性好，专属性强，可以用于维吾尔药硬尖神香草的质量控制。

标签：硬尖神香草；质量标准；薄层鉴别；熊果酸Abstract：Objective To set up the TLC identification of Hyssopu cuspidatus Boriss with ursolic acid as standard compound.Method According to the Chinese Pharmacopoeia （2010 Revision）Appendix VI B （TLC），different extract methods and solvents，developing system，comogemc agents，temperature，humidity，drawing amounts and thin layer boards were investigated for optimizing TLC identification of ursolic acid. Results Drawing 3μl solution on efficient layer board （200mm×100mm，Qingdao Ocean Chemical Co.Ltd），developing system trichloromethane-acetone（12∶1）was applied.After spaying with 10% sulfuric acid in ethanol，significant purple color appeared on the sample solution with the ursolic acid at same position.Conclusion The established TLC identification on the quality standardization of Hyssopu cuspidatus Boriss（ursolic acid as the standard compound）is simple，repeatable and specific. It can improve and lay a foundation on the quality standardization of Hyssopu cuspidatus Boriss.Keywords：Hyssopu cuspidatus Boriss；Quality Standards；TLC；Ursolic Acid硬尖神香草Hyssopu cuspidatus Boriss为唇形科植物，主要产于新疆北部阿勒泰地区[1]，维吾尔医常用名称为神香草。

熊果酸
取本品粉末1g，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml 使溶解，作为供试品溶液。

另取枇杷叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液。

再取熊果酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮（5：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

【检查】水分不得过5.0%(附录IX H第一法)。

总灰分不得过5.0% (附录IX K)。

【含量测定】照高效液相色谱法（附录Ⅵ D）测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-0.5%乙酸铵溶液（67:12:21）为流动相；检测波长为210nm。

理论板数按熊果酸峰计算应不低于5000。

对照品溶液的制备取齐墩果酸对照品适量，精密称定，加乙醇分别制成每1ml含熊果酸0.2mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品约10mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W 频率50kHz)30分钟，放冷，称定重量，加乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含熊果酸（C30H48O3）的总量不得少于90%。

夏枯草中熊果酸含量的UPLC测定口的建立夏枯草药材中熊果酸含量的超高效液相色谱法（UPLC）测定方法。

方法釆用UPLC进行测定，色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18 （2.1 mmxlOO mm, 1.7 pm）,以中醇-0.5%冰乙酸水为流动相进行等度洗脱，流速为0.3 ml/min,柱温30°C,检测波长210 nm。

结果熊果酸在0.2461〜0.4922 mg 范围内呈良好的线性关系（r2=0.9999）,平均回收率为99.29%, RSD=1.74%,熊果酸在夏枯草中的含量为0.28%〜0.53%。

结论该方法快速、高效、重现性好, 可以为夏枯草药材的质量控制提供更有效的手段。

标签：夏枯草；熊果酸；超高效液相色谱法；含量测定夏枯草为唇形科植物夏枯草（Primella vulgaris L.）的干燥成熟果穗，味辛、苦，性寒，具有清肝泻火、明目、散结消肿之功效［1］。

夏枯草的主要化学成分有三菇、黄酮、當体、香豆素、蔥覘、苯丙素等［2］。

其中的主要成分熊果酸具有镇静、抗溃疡、降低血糖、抗炎、抗菌等多种生物学效应［3-5］o近年来，乂发现熊果酸具有抑制癌细胞增长、转移和诱导癌细胞凋亡等作用，极有可能成为一种新型抗癌药物［6-8］o另外，熊果酸还具有明显的抗氧化功能，被广泛用作医药和化妆品原料［9］。

U前关于夏枯草药材的质量控制研究主要是以熊果酸、齐墩果酸和迷迭香酸等的HPLC含量测定和夏枯草药材的HPLC指纹图谱为主［10-14］,关于夏枯草超高效液相色谱法（UPLC）含量测定的研究还未有报道，且相比于传统的HPLC 而言，UPLC具有柱效高、分离度好和分离快等优点，大大缩短了样品运行的时间，可以满足当下高通量分析的要求。

因此，本实验釆用UPLC建立夏枯草药材中熊果酸含量测定方法［15］,测定不同批次的夏枯草药材中熊果酸的含量，该方法灵敬度高，分离度好，重现性好，可以为夏枯草药材的质量控制提供更有效的手段。

山茱萸及其制剂中熊果酸的含量测定方法研究
孙立华;闫光军
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】1995(017)007
【摘要】应用３种方法：薄层扫描法、薄层比色法、薄层限量法，分别测定了杞菊地黄丸中熊果酸的含量。

其中薄层扫描法为中国药典（１９９０年版一部）法，即药典中山茱萸和六味地黄刃中熊果酸的含量测定法。

实验结果表明，该方法同样适用于杞菊地黄丸中熊果酸的含量测定，但受仪器、展开剂、显色剂等多种因素影响，特别是仪器不普及，基层单位难以实施。

薄层比色法操作繁琐、精密度差、结果不稳定；而薄层限量法可准确定量、不用仪器，操作简
【总页数】3页(P9-11)
【作者】孙立华;闫光军
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.山茱萸中熊果酸的提取及含量测定 [J], 赵玉丛;李建军;刘国际;屈凌波
2.川鄂山茱萸不同部位中熊果酸的含量测定 [J], 王丽萍;宋良科;董关涛;李迪强
3.山茱萸果核中白桦脂酸和熊果酸含量测定 [J], 李军;姜华;张宁;王琦;陈雯雯;宋文博
4.甲肿消制剂及其含药血清中熊果酸的含量测定 [J], 崔翰明;程慧平;刘喜明;陈双
厚;朱晓芸
5.高效液相色谱法测定山茱萸制剂中熊果酸的含量 [J], 宋宝珠;张建超;刘义梅;万江陵
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山楂含片中熊果酸的含量测定目的建立山楂片中熊果酸的含量测定方法。

方法采用高效液相色谱法测定熊果酸。

色谱柱：phenomenex Kinete x2.6u XB-C18 100A柱（100 mm×4.6 mm ，5μm），流动相：以乙腈-0.1%磷酸水洗脱，流速1.0ml/min，检测波长：210nm，柱温40℃。

结果阴性对照无干扰，熊果酸在13.5～53.9ng范围内线性关系良好（r=0.9999），平均回收率为98.3%，RSD=0.9（n=9），该法操作简便，方法稳定，专属性强，可作为三箭草和堂山楂含片的质量控制方法。

标签：山楂含片；HPLC；熊果酸；含量测定三箭草和堂山楂含片由山楂、白砂糖制成。

山楂中富含熊果酸等成分，具有疏肝理气，活血化瘀，助消化等功效，主要用于治疗脂肪肝和肝纤维化等症状。

本研究采用HPLC法对三箭草和堂山楂含片中指标成分熊果酸进行含量测定。

经查阅文献，尚未有对其成分熊果酸做含量测定的报道。

1 仪器与试药1.1 仪器Aglient 1260生物惰性四元高效液相色谱仪，德国梅特勒-托利多XA205DU电子分析天平。

1.2样品山楂含片：广西梧州三箭制药有限公司保健品厂出品（批号20120816，20121217，20120320）；阴性样品：按处方缺山楂按工艺制备。

熊果酸对照品购于中国药品生物制品检定所（批号：110742-200517，供含量测定用）；其他化学试剂均为分析纯。

2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱phenomenex Kinete x2.6u XB-C18 100A柱（100 mm×4.6 mm ，5μm）；乙腈-0.1%磷酸水溶液（68：32）为流动相；流速为1.0ml.min-1；检测波长为210nm。

2.2 对照品溶液的制备精密称取熊果酸对照品1.078mg置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成每1ml含107.8μg的溶液。

高效液相色谱法测定六味地黄胶囊中熊果酸的含量摘要：为建立质控指标，有效控制药品质量，建立高效液相色谱法测定六味地黄胶囊中熊果酸的含量。

色谱柱为Agilent zorbax SB-18柱（4.6mm×150mm，5µm），流动相为乙腈—甲醇—0.5%乙酸胺（60：12：28），流速为1.0ml·min-1，检测波长为215nm，柱温为25℃。

熊果酸在0.05088～0.2544mg·mL-1的范围内与峰面积呈良好线性关系，熊果酸回收率为95.87%，RSD为0.67% ，方法重复性良好，RSD为1.8%，12小时稳定性的RSD为1.6%，结果表明此方法高效便捷，为熊果酸含量测定提供了依据。

关键词: 高效液相色谱法；六味地黄胶囊；熊果酸；含量测定六味地黄胶囊由六味药制成，其特点是补泻并用，具有滋阴补肾之功效，是的滋补肾阴的经典名方。

对六味地黄胶囊主药的有效成分建立质控指标，是控制药品质量的主要手段。

山茱萸中含有多种有效成分，熊果酸、齐墩果酸、山茱萸苷、没食子酸等[1]。

其中熊果酸具有抗肿瘤，护肝、抗菌、免疫调节等多种药理作用[2-3]。

具有较高的研究价值。

目前熊果酸含量的测定方法有薄层扫描法、比色法、高效液相色谱法[4-6]。

《中国药典》2015版一部[7]采用薄层扫描法对六味地黄胶囊中熊果酸进行含量检测，该法操作复杂、烦琐，耗时费力，准确性和重现性差。

为了更高效准确测定熊果酸的含量，建立高效液相色谱法进行含量测定，现报道如下。

1.材料、试剂与仪器1.1供试品六味地黄胶囊：修正药业集团股份有限公司，S1；江西普正制药有限公司，S2；黑龙江省济仁药业有限公司，S3；大连汉方药业有限公司，S4；通化茂祥制药有限公司，S5。

1.2试剂及试药熊果酸对照品，购于中国食品药品检定研究院，批号为110742-200519）；甲醇、乙腈为色谱纯，乙醇、乙酸胺为分析纯。

1.3仪器电子分析天平：MS205Du，梅特勒-托利多（上海）有限公司；超声仪器：KQ5200DB，江苏省昆山市超声仪器有限公司；紫外可见光分光光度计：Agilent Cary60，安捷伦科技有限公司；高效液相色谱仪：Agilent 1260（紫外检测器），安捷伦科技有限公司1.试验方法与结果2.1色谱条件与系统试用性试验Agilent zorbax色谱柱：SB-C18；流动相：乙腈-甲醇-0.5%的乙酸铵溶液（60：12：28）；流速:1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：215nm；进样量：20µL。