初始污染菌检查
生物学检查初始污染菌检查空气中细菌总数检测方法物体表明和生产人员手细菌总数检测方法初始污染菌检测初始污染菌检测目的:保证灭菌的效果，确定灭菌剂量，监控灭菌过程的有效性。
引用标准: GB15980-1995 一次性使用医疗用品卫生标准中华人民共和国药典2010版附录微生物限度检查法 GB15980-1995 规定了一次性使用医疗用品灭菌、消毒前、后的卫生标准。
对一次性使用医疗用品(包括灭菌和消毒的一次性使用医疗用品)生产企业中生产、装配、包装车间(空气中细菌总数检查方法)等生产过程和生产工人手提出卫生要求的质量控制。
检测环境和检验量在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向空气区域内进行。
洁净区设置可在微生物室操作各类产品每批随机抽样10件样品(10个包装) 方法主要步骤采样初始污染菌检测初始污染菌检测检验方法将每样取5份平行样(取一份样品，根据限值制备好供试液后，取5份1:10，取5份1:100，取5份
1:1000，……) 初始污染菌检测结果计算公式:
平均菌落数×稀释倍数菌数菌数/每件次(或
g) ―――――――――――――――――――
件次或重量(g) 注意事项: 供试品的取样必须在万级环境中100级净化条件下，无菌操作，防止污染。
应严格遵守无菌操作，同时消除抑菌成份的干扰。
产品初始污染菌数限值: 灭菌产品管道类内腔?10cfu/件次，外部?100cfu/件次，非管道类?100cfu/件次，敷料类?100cfu/g;
消毒产品?1000cfu/件次或重量(g) 初始污染菌检测细菌计数细菌计数
先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5-10倍的放大镜检查，以投射光衬以暗色背景，以防遗漏(可辅助菌落计数器)记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度
各平皿生长的平均菌落数(每个稀释度的5个平板值，相加后除以5)。
若平皿中
有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数，若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘2，以代表全皿菌落数。
菌落特征 ? 形态特征:常为白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、淡黄色(如果培养基中加入0.1%TTC 氯化三苯基四氮唑试剂，菌落为红
色) ? 边缘整齐或不整齐，表面有光滑、粗糙，皱褶、突起或扁平。
? 大小差异
很大。
菌落计数基本规则菌落计数基本规则空气中细菌总数检测方法测定空气中动态下细菌总数。
采用平板暴露法:车间在30m2以上者，于东、西、南、北(距墙1m处)、中五点;小于30m2者，于一条对角线里、中、外三点，高度均在1.5m
处采样，将普通营养琼脂平板(9cm直径)按上述采样点和高度布放，暴露15min后
立即关盖，于37?温箱培养24h后观察后果，求出5个或3个采样点的平均菌数
计算公式菌数/m3 式中: A――平板面积，cm2; T――平板暴露时间，min;
N――平均菌落数。
标准限值:灭菌和消毒产品分别?500和?2000cfu/m3 物体
表面和生产人员手细菌总数检测方法采样方法: 将内径为5cm×5cm的灭菌规格板，放在被检物体表面，根据物体表面积大小，采平行样1,4个，用浸有灭菌生理盐水的棉拭子，在规格板内涂抹10次(往返计为1次)，将棉拭子放入10ml灭菌生理盐水的采样管中。
对生产人员手采样:被检人五指并拢，将浸有灭菌生理盐水的棉拭子在右手指曲面，从指尖、甲沟至指根处往返涂抹10次后，
将棉拭子放入10ml灭菌生理盐水的试管中。
检验方法和结果计算将每个采
样管震打80次，混匀，10倍递减稀释，对每个稀释度取3个稀释度，分别取
1ml放于灭菌平皿内，每个稀释度倾注2块平板)，用普通琼脂培养基作倾注培
养，置37?温箱倒置培养24h，观察结果，取菌落数为30,300的平板计算，求出平均菌落数。
菌数/cm2 菌数/每只手平均菌数×稀释倍数 * * * 微生物学检查无菌检查微生物限度检查细菌、真菌数量控制菌其他(初始污染菌) 指标含义(～)
通过测定检品细菌总数可用来判明检品细菌污染的程度，以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、生产人员的卫生状况，是对检品进行卫生学评价的综合依据。
供试液制备培养菌落计数采样方法供试液制备供试品是敷料、可以破坏性类可用无菌手续称取10g,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。
作为1:10的供试液。
2.供试品是液体取10ml加至100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。
作为1:10的供试液。
3.对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积为100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。
作为供试液。
4.可用破坏性方法取样供试品:(参照中华人民共和国药典2010年规定进行
5. 对有内腔的医疗用器:用定量洗脱液，无菌操作冲洗内腔，反复冲洗，充分振落后取样。
6. 对一次性输液(血)器的零配件及其他医疗器械:直接用定量洗脱液
(1ml/10cm2)冲洗，将洗脱液置于无菌容器中，充分振荡后取样。
梯度稀释 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 供试液 9mlNacl 9mlNacl 1:10 1:100 1:1000 供试液制备推荐的制备方法样品制备供试液制备梯度稀释加样用灭菌剪刀将纱布剪成小块，称取10g，移入100ml灭菌生理盐水中，不时振摇。
作为1:10供试液。
供试液10倍递减稀释。
尽量避免丝线等杂物的混入。
(1)每个稀释级各吸取1ml至每个灭菌平皿，每个稀释级注5个平皿。
(2)经灭菌完毕的营养琼脂培养基冷却至45-50 ?时，倾注上述各个平皿15ml，另倾注一个注入1ml稀释液(灭菌生理盐水)灭菌空平皿作阴性对照。
按一个方向快速转动平皿，使供试液与培养基充分混匀。
纱布模拟培养琼脂凝固后，倒置，37 ?培养48h 基本概念细菌数测定是微生物的定量检查，对非规定灭菌产品中污染的活
菌数量进行测定，通常以每克或每毫升供试品作为计量单位。
限制条件平板菌落计数法的特点是先使细胞分散、定位，增生可见菌落后计数。
它是一种有条件的计数法，其限制条件大致如下: ?以菌落数为基础。
CFU colony
forming units :一个菌落就是一个细菌形成单位，它可以由一个也可以由多个菌细胞形成。
?受特定培养基和培养条件限制。
?有繁殖能力的菌细胞才能认定“活菌”。
平皿号细菌数平行行间菌落均值 ? ? ? ? ? 37?48h菌落计
数 37?48h菌落计数阴性对照 1:100 1:10 1、选取平均菌落数在30,300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。
如只有1个稀释级平均菌落数在30,300之间，则将稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告。
2、如有两个相邻稀释级的平均菌落数在30,300之间，则先计算两稀释级菌落数的
比值。
高稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数比值―――――――――――――――――――― 低稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数当比值?2时，则以2个稀释级的平均菌落数均值报告。
当比值 2时，则以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告。
补充:如有3个稀释级，平均菌落数均在30,300之间，则以后2级计算级间比值报告。
(增加解释2) 3、如各稀释级平
均菌落数均在300以上，则按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告;如各稀释级平均菌落数均在30以下，则按稀释度最低的
平均菌落数乘以稀释倍数报告。
4、如各稀释级平均菌落数均不在30,300之间，则以最接近30或300的稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。
5、如各稀释级平均菌落数均无菌落生长或最低稀释级平均菌落数小于1时，应报告菌数为 10个/g或ml。
6、菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告。
大于100时，采用二位有效数字，在两位有效数值后面，应以四舍五入法计算。
在报告菌落数为“不可计”时，应表明样品的稀释度细菌计数结果及报告方法 31000或3.1×104 30500 , 12 305 不可计 6 270或2.7×102 270 , 5 11 27 5 510000
或5.1×105 513000 , 513 4650 不可计 4 27000或2.7×104 27100 2.2 60 271 2890 3 38000或3.8×104 38000 1.6 46 295 2760 2 16000或1.6×104 16400 , 20 164 1365 1 10-3 10-2 10-1 报告方式个/g或个/ml 菌落
总数个/g或个/ml 两稀释度菌数之比不同稀释度的平均菌落数例次。
