初始污染菌数检测

初始污染菌检查生物学检查初始污染菌检查空气中细菌总数检测方法物体表明和生产人员手细菌总数检测方法初始污染菌检测初始污染菌检测目的:保证灭菌的效果，确定灭菌剂量，监控灭菌过程的有效性。

引用标准: GB15980-1995 一次性使用医疗用品卫生标准中华人民共和国药典2010版附录微生物限度检查法 GB15980-1995 规定了一次性使用医疗用品灭菌、消毒前、后的卫生标准。

对一次性使用医疗用品(包括灭菌和消毒的一次性使用医疗用品)生产企业中生产、装配、包装车间(空气中细菌总数检查方法)等生产过程和生产工人手提出卫生要求的质量控制。

检测环境和检验量在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向空气区域内进行。

洁净区设置可在微生物室操作各类产品每批随机抽样10件样品(10个包装) 方法主要步骤采样初始污染菌检测初始污染菌检测检验方法将每样取5份平行样(取一份样品，根据限值制备好供试液后，取5份1:10，取5份1:100，取5份1:1000，……) 初始污染菌检测结果计算公式:平均菌落数×稀释倍数菌数菌数/每件次(或g) ―――――――――――――――――――件次或重量(g) 注意事项: 供试品的取样必须在万级环境中100级净化条件下，无菌操作，防止污染。

应严格遵守无菌操作，同时消除抑菌成份的干扰。

产品初始污染菌数限值: 灭菌产品管道类内腔?10cfu/件次，外部?100cfu/件次，非管道类?100cfu/件次，敷料类?100cfu/g;消毒产品?1000cfu/件次或重量(g) 初始污染菌检测细菌计数细菌计数先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5-10倍的放大镜检查，以投射光衬以暗色背景，以防遗漏(可辅助菌落计数器)记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数(每个稀释度的5个平板值，相加后除以5)。

若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数，若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘2，以代表全皿菌落数。

初始污染菌检验规程初始污染菌检验规程1、准备工作1）与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸汽灭菌器内121℃30min。

2）采样数量：每批产品随机抽取10件样品.3）检测标准《GB 15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准》：≤100cfu/件次。

4）洗脱液、稀释液采用0.9％无菌氯化钠溶液。

2、试验步骤：1）用无菌手续取出10个样品，分别放入10支装有10ml0.9％无菌氯化钠溶液的试管中，将每个采样管震打80次，混匀，分别吸取1ml放入灭菌平皿，用普通琼脂培养基作倾注培养，置37℃温箱培养48±2h观察结果。

2）用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。

若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辩时仍以2个或2个以上菌落计数。

3）计算公式为：菌数/件次=平均菌数×稀释倍数/件次。

阴性对照试验：将使用的0.9％无菌氯化钠溶液吸取1ml放入无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。

制备2个平板均不得有菌生长。

3、注意事项：1）在无菌操作台上做试验，防止环境对样品的再次污染，采取一切措施防止人为对样本的污染。

2）由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀的区别，必要时用显微镜鉴别。

编制：审核：批准：ZC-14-8初始污染菌监测操作规程1范围适用于对刚包装好的外科手套和检查手套的初始污染菌的监测和对新购进的小包装（接触手套的小包装）的监测。

第一个月每周进行一次监测，如果监测结果是稳定的以后每个月监测一次，如果3个月都稳定，监测周期改为每季度一次。

2职责质管部负责取样、按ISO 11737进行试验、如试验结果初始污染菌超过6 cfu/cm2,要及时查找原因，提出改进措施，包括工艺中产品防护和进行环境消毒。

3生物负载测定方法A.1概要A.1.1生物负载测定，可使用不同的方法内容。

初始污染菌检测指导书一、引言在日常生活和工业生产中，微生物污染是一个不可忽视的问题。

特别是在食品加工、制药、卫生保健和医疗设施等领域，微生物污染可能对人体健康造成严重影响。

因此，对于这些领域中的设施和设备进行初始污染菌检测至关重要。

本指导书旨在提供一份详细的指南，以帮助进行有效的初始污染菌检测。

二、定义1. 初始污染菌：指在设施和设备投入使用之前，存在于环境中的微生物菌群，可能对人体健康产生影响的细菌、真菌、病毒等。

2. 初始污染菌检测：是通过采集、分离和鉴定设施和设备表面的微生物来评估其是否受到初始污染的检测方法。

三、初始污染菌检测的步骤1. 准备工作在进行初始污染菌检测之前，需要做好以下准备工作：- 确定检测的目标区域：根据需要，确定需要检测的设施和设备区域。

- 收集必要的工具和材料：包括培养基、采样棉签、橡胶手套、消毒剂等。

- 清洁检测区域：确保待检测的区域清洁整齐，以减少外界污染的干扰。

2. 采样- 选择合适的采样方法：根据不同的设施和设备，选择合适的采样方法，常见的包括印迹法、刷子法、划线法等。

- 采样过程中的注意事项：确保采样过程中的卫生条件，佩戴橡胶手套，并在每个采样点上更换新的采样棉签，以避免交叉污染。

- 采样点的选择：根据设施和设备的特点，选择具有代表性的采样点，如接触频繁的表面、接口和难以清洁的区域。

3. 分离与鉴定- 样品处理：将采集到的样品，按照合适的程序进行处理，包括加入适量的培养基，进行可行菌总数的分析。

- 培养与鉴定：将样品在适当的温度和湿度条件下进行培养，待细菌或真菌生长形成菌落后，再通过各种常见鉴定方法（如形态学观察、生化试验、分子生物学技术等）来鉴定菌落的种类。

- 数据记录与分析：将分离鉴定得到的数据记录下来，进行统计和分析，了解初始污染的菌群组成和水平。

四、初始污染菌检测结果的评估与应对1. 结果评估根据初始污染菌检测结果，可以对设施和设备的初始污染情况进行评估。

初始污染菌检验操作规程文件编号：版本：编制/日期：审核/日期：批准/日期：受控状态:8批准实施1 目的为了规范产品初始污染菌检验操作，编制本规程。

2 适用范围本规程适用于产品初始污染菌检验操作。

3 职责3.1 检验室负责对产品初始污染菌检验操作的取样和化验，并填写检验报告；3.2 品管部经理负责签发检查报告。

4 工作程序（《中国药典》2020年版）4.1 供试品数量成品：灭菌前产品至少取3个单位以上。

4.2 供试液制备和接种4.2.1 取样品至少10个，以无菌操作方法移入灭菌的50ml 0.9%NaCl震摇洗脱备用。

4.2.2 用无菌吸管取上述样品洗脱液混合物2ml，分别注入两个灭菌平皿内，每平皿1ml。

另取1ml 注入到9ml灭菌洗脱液中，用手振荡80次充分混匀，使成1:100稀释液，另取一支吸管吸取2ml，分别注入两个灭菌平皿内，每平皿1ml。

4.2.3 将熔化并冷却至45℃左右的大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）倾注于平皿内，每平皿约15ml，另倾注一个不加样品的灭菌空平皿，作空白对照。

随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平皿，在37±1℃恒温培养48小时，观察结果。

4.3结果观察4.3.1 先用肉眼观察计数菌落，然后再用5-10倍放大镜检查，以防遗漏。

记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。

若其中一个平板有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。

若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。

4.3.2 首先选取平均菌落数在30—300之间的平板，作为菌落总数测定的范围。

当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数。

4.3.3 若有两个稀释度，其平均菌落数在30—300之间，则应求出两者菌落总数之比值来决定。

1.目的验证产品初始污染菌数的试验方法。

2.范围适用于质量部门对产品初始污染菌数验证试验的检测。

3.职责质量检验人员负责执行此规程。

4.依据标准及相关文件2010 版《中华人民共和国药典第二部》附录ⅪJ微生物限度检查法GB/T19973.1-2005 《医疗器械的灭菌- 微生物学方法 - 第一部分产品中微生物数量的估计》GB15980-2009 《一次性使用医疗用品卫生标准》5.试验产品6.注意事项6.1本操作应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度 100级的无菌操作台内进行。

操作过程应尽量避免任何可能使结果发生偏差的污染。

6.215min 后方可进行实验操作。

6.3膜在过滤前后的完整性。

7.器材与试剂7.1器材35℃恒温培养箱、 23℃恒温培养箱、灭菌器、洁净工作台、无菌过滤装置、镊子、剪子、电子天平、移液器、接种环7.2稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液配制后按说明书要求进行灭菌。

pH 7.0无菌氯化钠溶液—蛋白胨缓冲液0.9%无菌氯化钠溶液。

7.3培养基营养琼脂培养基：按说明书方法保存配制。

玫瑰红钠琼脂培养基：按说明书方法保存配制。

改良马丁液体培养基：按说明书方法保存配制。

改良马丁琼脂培养基：按说明书方法保存配制。

营养肉汤培养基：按说明书方法保存配制。

8.计数方法的验证试验当建立产品初始污染菌数检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证：以确认所采用的方法适合于该产品细菌、霉菌及酵母菌的测定。

若产品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。

验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行。

对各试验菌的回收率应逐一进行验证。

8.1菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过 5 代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为0 代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。

金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus〔 CMCC B26 003 〕大肠埃希菌 Escherichia coli〔 CMCC B 11 102 〕枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis〔CMCC B 63 501 〕白色念珠菌 Candida albicans〔 CMCC F 98 001 〕黑曲霉 Aspergillus niger〔 CMCC F98 003 〕8.2菌液制备接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，30-35 ℃培养 18-24 小时，接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上23-28 ℃培养 24-48小时。

一、目的：为测试灭菌前以及内包装袋的初始污染菌是否符合标准。

二、适用范围：本厂产品以及包装袋。

三、引用标准：GB 15980-1995四、所用的仪器和设备1、高压消毒锅：使用时严格按照仪器说明书操作。

2、恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。

3、培养皿：一般采用90mm×15mm的硼酸玻璃培养皿。

4、生理盐水：浓度为 0.9%5、灭菌规格板：5×5cm；玻璃试管：13×150mm6、培养基：普通肉汤琼脂培养基，其配制方法见试剂说明书五、、操作步骤1、对敷料类可用无菌手续取10g，放入 100mL 灭菌生理盐水中，充分震荡 80 次后。

取各管洗液进行检测。

2、对导管类:选取三套新制备的样品，在净化操作台上，将每套样品用无菌的剪刀剪成大约 1 厘米长的段，放入事先灭菌的具塞三角瓶中，加 50 毫升生理盐水，加塞，充分震荡，使样品的内壁、外壁得到充分的洗脱，然后将冲洗液转移到另一个无菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。

将每一样本洗液充分均匀后，接种2 个平皿，每个平皿加入 1ml 洗液。

当估计含菌量过高时（每个平板生长菌落数超过 300 个），应对洗液进行稀释倍数再接种，一般需 2-3 个不同稀释度，每吸取一个稀释度洗液，更换一支无菌吸管。

3、将凉至45℃普通琼脂培养基，倾注于已加入样液的平皿中，每平皿约 15-20ml 培养基。

4、将培养基与样液小心摇匀，待琼脂凝固后倒置平皿，置37℃培养箱内培养 48h，计算最终结果菌落数。

六、采样数量：各类产品每批随机抽取 10 件样品。

七、结果计算计算公式为：菌数/每件次（或g） = 平均菌数×稀释倍数---------------------(C2)件次或重量（g）初始菌试验报告检品名称生产批号检验日期检验人复核人一、细菌数测定（37±1℃，3 天）初始菌试验报告检品名称生产批号检验日期检验人复核人一、霉菌数测定（27±1℃，3 天）样品天数123评价表示：卫生标准结果判断样品2出现浑浊用“х”没有出现浑浊用“√”100 个/套合格（）不合格（）性照阳对性照阴对31样品天数123评价表示：卫生标准结果判断样品2出现浑浊用“х”没有出现浑浊用“√”100 个/套合格（）不合格（）性照阳对性照阴对31。

一、目的检测产成品初始污染菌是否符合要求二、适用范围适用于非灭菌的产成品检验三、职责化验室化验员按标准操作规程检测四、仪器、设备生化培养箱、洁净工作台、电子天平、PH 计、压力蒸汽灭菌器、4℃冰箱、酒精灯、250Ml 的三角烧瓶、30Ml 试管、无菌镊子、无菌剪刀、试管架、90mm 玻璃培养皿、放大镜。

五、检验方法1.普通肉汤琼脂培养基的制备 1.1所用试剂 胨10g 氯化钠5g 琼脂15-20g 肉浸液1000ml2.产品采集与样品处理于同一批号的三个运输包装中至少抽取200个最小销售包装样品，1/4样品用于检测，1/4样品用于留样，另1/2样品（可就地封存）必要时用于复检。

抽样的最小销售包装不应有破裂，检验前不得启开。

在100级净化条件下用无菌方法打开用于检测的至少10个包装，从每个包装中取样，准确称取25g ±1g 样品，剪碎后加入到225ml 灭菌生理盐水中，充分混匀，得到一个生理盐水样液。

液体产品用原液直接做样液。

如被检样品含有大量吸水树脂材料而导致不能吸出足够样液时，稀释液量可按每次50倍递增，直到能吸出足够测试用样液。

在计算细菌菌落总数与真菌菌落总数时应调整稀释度。

文件号: QS/CKL03B-ZJ-26-A/0 受控状态 文件名称：初始污染菌检测SOP 版本号 编制时间 修改状态： 审核时间 生效日期 批准时间发放号六、细菌菌落总数与初始污染菌检测方法本方法适用于产品初始污染菌与细菌菌落总数（以下统称为细菌菌落总数）检测。

1.操作步骤量取100 Ml的供试液，采用滤膜过滤法，用供试液冲洗滤膜表面，并确保供试液完全覆盖滤膜表面。

（滤膜孔径不大于0.45um ；直径50mm）取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基上，做两个平行对照，同时做一个空白对照。

倒置于30℃±5℃恒温培养箱内培养3天，观察并记录结果，空白应无菌生长，若空白有菌生长该试验则视为无效。

2.结果报告计算平板上菌落的平均值，再将平均值乘以相应的稀释倍数作为每克（g）/毫升(Ml)样品中平板菌落数。

成品初始污染菌检测操作规程1、目的：对产品初始污染菌检测的方法做出指导，正确操作以保证实验结果的可靠性和准确性。

2、试用范围：用于检测产品的成品、半成品、部件、原材料、及其内包装袋上的活菌数。

3、职责：实验室操作人员负责操作。

4、试验前准备4.1 按包装说明营养琼脂培养基的配制；4.2与供试液接触的所有器具及制备好的营养琼脂培养基一并放入高压蒸汽灭菌器115℃持续30min,待灭菌器冷却后连同抽取的供试品一并放入无菌室内,启动工作台风机,开紫外线灯30min.4.3环境及人员要求无菌检查应在环境洁净度10 000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。

单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。

隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。

无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。

还应该具有高度的责任心和严谨细致的工作作风。

检验方法55 1胨10g 氯化钠5g 琼脂15-20g 肉浸液1000ml5 2取牛肉浸膏3 g加水1000 ml调节PH为7。

29 mm的细菌培养皿中15-20ml/每个平皿于4。

C保存备用。

5 3从每个清洗批次的产品中随机抽样。

同一批次产品数<503批次产品数为50~1005>10010件。

5 3取样1ml5提液。

5 4接种皿表面在超净止放置至培养皿表面浸液十后进入下一步操作。

5 5培养接37。

C培养48暗时后观察结果。

56结果判定依据GB15980-1995<10cfu/。

初始污染菌检验操作规程1.目的测定样品细菌总数可用来判明样品细菌污染的程度，以及生产单位工具设备、工艺流程、生产人员的卫生状况，是对样品进行卫生学评价的综合依据，确定灭菌前产品中微生物的数量和性质，为下一步灭菌提供参考依据。

2.适用范围适用于所有需要消毒灭菌前的产品、洁净车间3．作业条件：3.1无菌检测在洁净度为100级单向流空气区域内进行，严格遵守无菌操作，避免污染。

3.2超净台及工作台面，必须进行洁净度验证。

4．作业方法与步骤4．1制作营养琼脂培养基（参见《培养基制作作业指导书》），培养基需按要求培养16-18H 后，检查无菌生长方可使用。

4．2无菌室洁净度验证4．2．1取3只培养皿在超净工作台平均位置打开上盖，暴露30min后盖好置30～35℃培养48h后检查，3只培养皿上生长的菌落数平均应不超过1个4．3产品采集与样品处理（制备供试液）4.3.1用无菌手续称取10g可以破坏性类供试品,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡，保温于45℃水浴中5～10min，不时振摇。

作为1：10供试液。

4.3.2对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。

保温于45℃水浴中5～10min，不时振摇。

作为1：10的供试液。

4.3.3采样数量：各类产品每批随机抽取10件样品。

4.3.4供试液10倍递减稀释4.3.5待上述供试液自然沉降后取上清液1ml，加入9ml生理盐水，制备1：100的供试液。

制备过程中尽量避免碎片等杂物的混入。

4.4接种检验4.4.1取上述供试液上清液作初始污染菌数检测，取4个培养皿，每个稀释级各吸取1ml至每个灭菌平皿，每个稀释级注2个平皿。

4.4.2经灭菌完毕的营养琼脂培养基冷却至45-50 ℃时，倾注上述各个平皿15ml，另倾注一个不加样品灭菌空平皿作空白对照。

以顺时针或逆时针方向快速转动平皿，使供试液与培养基充分混匀。

产品初始污染菌检验规范1 目的本规范规定了产品初始污染菌的检验方法。

2 参考标准GB/T19973.1-2005 《医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的估计》中华人民共和国药典ENISO11737:2006 《医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的测定》3 操作前准备3.1 主要仪器设备数个90mm双蝶平皿、三角烧瓶，电炉、电热恒温鼓风干燥箱、电热恒温培养箱、蒸汽消毒器、0.9%氯化钠溶液、刻度吸管数支、超净工作台3.2 试剂0.9%氯化钠溶液、营养琼脂培养基。

3.3 试验前准备3.3.1 将Ф90mm的培养皿、试管等与试验接触的所有器具，放入棉布袋或用棉布包好，置压力蒸气灭菌器内121℃灭菌30min后备用排出蒸汽，稍微冷却，取出用具。

3.3.2 按脱水营养琼脂培养基说明书上的要求称取培养基，加纯化水加热溶解，加塞，和0.9%氯化钠溶液同置1210C灭菌30min后备用。

3.3.3 将消好的平皿、刻度吸管，放入电热干燥箱内1600C干燥2小时，当温度降低至70ºC以下时进行无菌存放。

3.3.4 打开超净工作台上的电源、照明、风机、紫外线灯30分钟开关。

3.3.5 将实验所需的物品通过传递窗紫外线灯消毒，然后进入洁净室内，开启洁净室紫外线照射30min以上灭菌。

3.3.6 洗手、更衣后，进入无菌室，用消毒液对手进行消毒。

4 试验方法4.1 供试品数量灭菌前样品至少取3个。

4.2 供试液制备和接种4.2.1 把采取的样品送入无菌净化工作台内，用无菌操作法分别在每条产品上剪样5g，取样品至少3个（一份试验、一份留样、一份复测），将5g样品剪碎，放入100 ml灭菌0.9%NaCl的三角烧瓶中振荡80次，形成1次10倍稀释液。

4.2.2 用无菌吸管取上述样品洗脱液混合物2ml，分别注入两个灭菌平皿内，每平皿1ml。

另取1ml 注入到9ml灭菌洗脱液中，用手振荡80次充分混匀，使成1:100稀释液，另取一支吸管吸取2ml，分别注入两个灭菌平皿内，每平皿1ml，如样品含菌量高，还可以再稀释1:1000、1:10000等，每个稀释度应换一支移液管。

初始污染菌检测⼀、⽬的检测产成品初始污染菌是否符合要求⼆、适⽤范围适⽤于⾮灭菌的产成品检验三、职责化验室化验员按标准操作规程检测四、仪器、设备⽣化培养箱、洁净⼯作台、电⼦天平、PH 计、压⼒蒸汽灭菌器、4℃冰箱、酒精灯、250Ml 的三⾓烧瓶、30Ml 试管、⽆菌镊⼦、⽆菌剪⼑、试管架、90mm 玻璃培养⽫、放⼤镜。

五、检验⽅法1.普通⾁汤琼脂培养基的制备 1.1所⽤试剂胨10g 氯化钠5g 琼脂15-20g ⾁浸液1000ml2.产品采集与样品处理于同⼀批号的三个运输包装中⾄少抽取200个最⼩销售包装样品，1/4样品⽤于检测，1/4样品⽤于留样，另1/2样品（可就地封存）必要时⽤于复检。

抽样的最⼩销售包装不应有破裂，检验前不得启开。

在100级净化条件下⽤⽆菌⽅法打开⽤于检测的⾄少10个包装，从每个包装中取样，准确称取25g ±1g 样品，剪碎后加⼊到225ml 灭菌⽣理盐⽔中，充分混匀，得到⼀个⽣理盐⽔样液。

液体产品⽤原液直接做样液。

如被检样品含有⼤量吸⽔树脂材料⽽导致不能吸出⾜够样液时，稀释液量可按每次50倍递增，直到能吸出⾜够测试⽤样液。

在计算细菌菌落总数与真菌菌落总数时应调整稀释度。

⽂件号: QS/CKL03B-ZJ-26-A/0 受控状态⽂件名称：初始污染菌检测SOP 版本号编制时间修改状态：审核时间⽣效⽇期批准时间发放号六、细菌菌落总数与初始污染菌检测⽅法本⽅法适⽤于产品初始污染菌与细菌菌落总数（以下统称为细菌菌落总数）检测。

1.操作步骤量取100 Ml的供试液，采⽤滤膜过滤法，⽤供试液冲洗滤膜表⾯，并确保供试液完全覆盖滤膜表⾯。

（滤膜孔径不⼤于0.45um ；直径50mm）取出滤膜，菌⾯朝上贴于营养琼脂培养基上，做两个平⾏对照，同时做⼀个空⽩对照。

倒置于30℃±5℃恒温培养箱内培养3天，观察并记录结果，空⽩应⽆菌⽣长，若空⽩有菌⽣长该试验则视为⽆效。

2.结果报告计算平板上菌落的平均值，再将平均值乘以相应的稀释倍数作为每克（g）/毫升(Ml)样品中平板菌落数。