如何选择二抗

*教你如何正确选择二抗通常情况下，某一特定的实验中可能同时有几种二抗可供选择，如何能选择到最适合该实验的二抗，需要综合以下几个方面进行考虑：●一抗的物种来源一抗是在什么物种来源的，相应的二抗也要是抗该物种的抗体。

例如，如果一抗是在小鼠体内制备的，那么你就应当选择抗小鼠的二抗，如果一抗是在兔体内制备的，那么二抗就应当是抗兔的抗体。

至于二抗本身是在什么动物中制备的对二抗的质量并无明显的影响。

●一抗是属于哪个类或亚类二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。

这通常是针对单克隆抗体而言。

多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体.单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品列表中列出，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM，或是抗小鼠IgG抗体。

如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。

如果你不知道一抗是哪一类别或亚类，那么抗小鼠IgG是一个不错的选择，因为此种抗体可以识别大多数类型的IgG免疫球蛋白。

二抗的特异性下面总结了几种具有不同特异性的二抗：针对整个抗体分子（H＋L）具有特异性：如抗IgG(H+L)，此类抗体既可以与抗体的重链结合也可以与轻链结合，即与抗体分子的Fc，F(ab’)2/Fab部分（见图5）均可反应，抗IgG(H+L)也可以与其他免疫球蛋白家族反应（如IgM和IgA），因为所有的免疫球蛋白都具有相同的轻链（kappa链或lambda 链）。

针对Fab片段具有特异性：这类抗体与重链轻链均可以结合，由于它们可以与轻链反应，它们同时也已和具有相同轻链的其他种类的免疫球蛋白反应。

这对Fc片段或重链具有特异性：这类抗体和重链的Fc部分反应，一次它们是类别特异性的（即gamma链特异性抗体只与IgG反应，mu链特异性抗体只识别IgM，依此类推）。

荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求，听起来好像很高级的样子，但是其实咱们普通人也能轻松理解。

今天，我就来给大家讲讲这个话题，希望能够帮助大家更好地进行荧光双染实验。

咱们要明确一点，荧光双染实验是用来检测细胞中特定蛋白的表达情况的。

那么，为什么我们需要选择一抗和二抗呢？因为一抗和二抗可以特异性地识别我们想要检测的蛋白，从而帮助我们找到这些蛋白在细胞中的定位。

那么，如何选择合适的一抗和二抗呢？这里有几个基本的要求：
1. 一抗和二抗要能够特异性地识别我们想要检测的蛋白。

这就意味着，它们不能识别其他无关的蛋白。

否则，我们的实验结果就会被干扰。

2. 一抗和二抗的亲和力要足够强。

这是因为，如果它们的亲和力不够强，它们就不能很好地与我们想要检测的蛋白结合。

这样一来，我们的实验结果也会受到影响。

3. 一抗和二抗的价格要合理。

毕竟，我们做实验是为了得到有用的结果，而不是为了花很多钱买昂贵的试剂盒。

所以，我们在选择一抗和二抗的时候，也要考虑到它们的价格因素。

4. 一抗和二抗要容易保存和使用。

这是因为，有些试剂盒可能需要特殊的条件才能保存稳定，或者需要特殊的操作步骤才能使用。

如果一抗和二抗不能方便地保存和使用，那么我们在实验过程中也会遇到很多麻烦。

选择合适的一抗和二抗对于荧光双染实验来说是非常重要的。

希望大家在进行实验的时候，能够根据这些基本要求来选择合适的试剂盒，从而得到准确、可靠的实验结果。

荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求荧光双染实验，这名字听起来就很炫酷，对吧？其实它就是一个让我们能同时看到两种不同标记物的实验。

没错，就是让我们在显微镜下像变魔术一样，看到细胞中的不同成分。

为了能让这个实验顺利进行，我们得好好挑选一抗和二抗，别小看这两个“小家伙”，它们可是实验成功的关键哦。

接下来，我们就来聊聊挑选一抗和二抗的那些事儿。

1. 选择一抗的基本要求首先，一抗是我们的“主角”，它负责直接和目标抗原结合。

为了让实验更靠谱，我们在挑选一抗的时候有几个基本要求。

首先，得确保一抗的特异性。

简单来说，就是一抗要能够准确地识别目标抗原，不会跟其他东西搭上关系。

你可以把它想象成找一个能只看中你家猫的侦探，千万别让它误认成了邻居家的狗狗。

此外，一抗的亲和力也很重要。

亲和力高的话，一抗就能牢牢地抓住目标抗原，不容易掉链子。

就像是找一个有“强烈吸引力”的好朋友一样，这样才能在关键时刻依靠得住。

1.1 一抗的来源选择一抗时，来源也要考虑清楚。

市面上的一抗分为很多种，有的是从小鼠身上提取的，有的是从兔子身上提取的，甚至还有从山羊身上提取的。

每种来源的一抗都有自己的优点和缺点。

例如，小鼠单克隆抗体常常具有高度的特异性，但可能在某些实验条件下效果不如其他来源的抗体好。

像兔子或者山羊的抗体则可能在灵敏度上表现得更好。

了解这些，才能找到最适合你实验的一抗。

1.2 一抗的纯度一抗的纯度也不能忽视。

想象一下，如果你的试剂里混杂了很多其他东西，就像是在派对上有太多不认识的人一样，肯定会让实验结果变得扑朔迷离。

因此，选择纯度高的一抗非常重要，它能让你减少实验中的干扰，提高结果的准确性。

选择纯度高的一抗，就像在举办一个小型的、只有好友参与的派对，所有人都知道自己干嘛的，大家都玩得开心。

2. 选择二抗的基本要求说完了一抗，接下来咱们聊聊二抗。

二抗是我们的“帮手”，它负责和一抗结合，并且带上荧光标记。

二抗的选择也有讲究，首先是它的特异性。

荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求，听起来好像很专业的样子，但是其实很简单，就是让我们的实验数据更加清晰明了。

那么，我们该如何选择合适的一抗和二抗呢？接下来，就让我来给大家普及一下吧！我们要明确什么是一抗和二抗。

一抗，就是第一抗体，也就是我们要检测的目标物质；二抗，就是第二抗体，它可以与一抗结合，形成一种复合物，从而使我们能够看到目标物质的存在。

那么，如何选择合适的一抗和二抗呢？1.1 选择一抗选择一抗的时候，我们要考虑到以下几个方面：(1)特异性：一抗要能够准确地识别目标物质，不能误识别其他物质。

这就好比是我们要找一个人，但是他长得像很多人，我们不能因为他长得像别人就把他当成那个人。

(2)灵敏度：一抗要有足够的敏感性，能够在低浓度下检测到目标物质。

这就好比是我们要在人海中找到一个特定的人，但是他的出现频率很低，我们不能因为他出现的次数少就忽略了他。

(3)稳定性：一抗要具有一定的稳定性，不会因为外界因素的影响而失去活性。

这就好比是我们要找一个人，但是他总是在关键时刻消失不见。

选择合适的一抗就是要找到一个既能准确识别目标物质，又有足够敏感性和稳定性的人。

1.2 选择二抗选择二抗的时候，我们要考虑到以下几个方面：(1)特异性：二抗要能够准确地识别一抗，不能误识别其他一抗或者背景分子。

这就好比是我们要找一个人，但是他长得像很多人，我们不能因为他长得像某个特定的人就把他当成那个人。

(2)灵敏度：二抗要有足够的敏感性，能够在低浓度下检测到与一抗结合的复合物。

这就好比是我们要在人海中找到一个特定的人，但是他出现的频率很低，我们不能因为他出现的次数少就忽略了他。

(3)稳定性：二抗要具有一定的稳定性，不会因为外界因素的影响而失去活性。

这就好比是我们要找一个人，但是他总是在关键时刻消失不见。

选择合适的二抗就是要找到一个既能准确识别一抗，又有足够敏感性和稳定性的人。

2.1 一抗和二抗的选择时机在进行荧光双染实验时，我们需要根据实际情况来选择合适的一抗和二抗。

免疫荧光一抗二抗的选择及其技巧据一抗种属及类型-如何选择二抗?如何选择二抗——根据一抗种属及类型选择合适的二抗二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，艾美捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。

检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：【一抗的种属来源】二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。

即根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。

艾美捷能为您提供最全的抗不同种属的原装进口二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗。

【一抗的类别亚型】二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。

这通常是针对单克隆抗体而言。

多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。

其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM。

如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。

在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种IgG。

艾美捷能为您提供通用的IgG（H+L）二抗，或者特异性只结合IgM的Anti IgM （mu） Antibody、IgA的Anti IgA （alpha-Antibody、IgE的Anti IgE （epsilon） Antibody等。

免疫组化的二抗还有区别的么！要怎么选？免疫组化大家基本上都做过，你知道有二抗，也应该知道免疫组化的原理就是一抗结合到目标蛋白，再有二抗来进行信号放大，大概是这样：但是你知道二抗的信号放大实际上有多种方法……这就需要你进行二抗标记方法的选择，最简单的二抗标记方法是直接法：就是直接在二抗上标记酶，比如HRP，来进行显色，这样的二抗实际上很便宜，但是缺点就是灵敏度低，好多低丰度的蛋白，结合不上，免疫组化染出来的效果就不太好。

第二种方法，叫做PAP，比如二抗标记了HRP，他们就在孵育二抗后，再孵育一种能结合HRP的一抗，就像这样：这种方法灵敏度是上去了，但是非特异性增高了，于是被主流淘汰了。

第三种方法被称为ABC法或者SABC法，主要是在二抗上标记生物素，孵育二抗后，加入亲和素以及标记了HRP的生物素，以这样的聚合方式，来进行信号的放大作用：这种方法的优点是能够成倍提高灵敏度，但同时也会提高非特异性，于是就产生了第四种方法，LSAB法标记的二抗：这种方法，直接在亲和素上加上HRP标记，灵敏度也很高，同时降低了SABC法的非特异性。

而且，LSAB法在实验的时一般孵育时间短（通常就10分钟）。

但SABC法和LSAB法在实验过程中会需要进行内源生物素封闭，会麻烦一些。

为了省去麻烦，就产生了第五种标记方法，也就是Polymer法，就是在二抗上标记聚合的HRP：这样二抗的信号就得到了放大，灵敏度也提高了，但Polymer法、SABC法、LSAB法，都不能用于定量实验，只能用在IHC上。

那免疫荧光呢？免疫荧光主流是采用直接法、LSAB法，以及直接标记或者LSAB标记的三抗来进行信号放大的。

总结一下，就是直接法的二抗便宜但是灵敏度差；PAP法基本已经淘汰，LSAB和SABC法的灵敏度高，但是贵，步骤多；Polymer法灵敏度高，步骤简单，但是贵。

好了，如果有兴趣的话，可以看一下这样两篇文献：当然你也能回复“公克”（不要在评论区回复），去下载吧。

如何选择二抗羊抗兔：指把兔体内的抗原注射到羊的体内，而在羊的体内产生抗兔的抗体，即羊抗兔抗体，这个抗体来由羊产生的，是羊源的。

一抗如果是鼠抗人的抗体，二抗应该是另一种动物抗鼠的抗体，而且一抗和二抗的动物种属原则上不应该相同。

一般来说，一抗多用兔抗和鼠抗，而二抗多用羊抗。

二抗一般选择被碱性磷酸酶标记过的。

单克隆抗体是指针对于抗原标志物上某一种抗原决定簇产生的单一种类的抗体，一般通过杂交瘤细胞技术制得；多克隆抗体是指针对抗原上多个抗原决定簇产生的抗体，一般将抗原免疫动物血清直接制得。

对于一抗来说，现用单克隆抗体较多。

相对于一抗的特异性，二抗要求广谱抗体，最好能够一对多。

现在购买的二抗多是二抗加亲和素生物素的复合物，与传统二抗有所不同。

In most cases, there are actually several antibody-conjugates that would work well in a particular application and finding the best one requires comparing them side-by-side.The following information is provided to help you decide which secondary antibody may be best for your particular application:1.In what animal was the primary antibody developed?For example if your primary antibody is raised in a mouse, you will need ananti-mouse secondary antibody. If it is raised in a rabbit, for example A2066(rabbit anti-actin), you will need an anti-rabbit secondary antibody.2.What is the class and/or subclass of the primary antibody.This is primarily important in the case of monoclonal antibodies. Polyclonalantibodies (generally developed in rabbit, goat, sheep or donkey) are typicallyIgG class immunoglobulins. For this reason, the secondary antibodies for thesespecies will mainly be anti-IgG. Monoclonal antibodies (MAbs) are mostcommonly developed in mice and occasionally in rats. The class and subclass ofour monoclonals is indicated in the product listing. For example, if the primaryMab is mouse IgM, one would want a secondary antibody that reacts with mouseIgM (anti-Mouse IgM or anti-Mouse IgG (Fab)).If the primary monoclonal is one of the mouse IgG subclasses (IgG1, IgG2a,IgG2b, IgG3), almost any of our anti-mouse IgG secondary antibodies shouldbind to it. However, we offer different specificities to provide the end-user withoptions, especially for specific double labeling experiments. If the class and/orsubclass of the primary antibody is not known, the anti-Mouse IgG (Fab)secondary antibodies may be used since they recognize most mouseimmunoglobulin subtypes.You may experience difficulty when choosing a the best secondary anti-mouseor anti-human IgG. This is because there are many specificities to IgG. The important thing to remember is that light chains (kappa and lambda) of immunoglobulins are shared among all the immunoglobulin classes. That is, IgG, IgM, IgA, IgD and IgE all have either kappa or lambda light chains. The heavy chain (lambda for IgG, µ for IgM and alpha for IgA), however, is class specific. The following summarizes the specificities we offer:1.Polyvalent: react with all classes2.Fc and heavy-chain specific:react with heavy chains only,therefore, they are class specific (i.e. gamma chain specific reactsonly with IgG; µ chain specific reacts only with IgM, etc.)3.Fab and whole molecule (wm) specific:react with heavy andlight chains. Due to the light chain reactivity, they can react with allclasses.4.Light chain (kappa, lambda) specific:react with all classes,since all classes use the same kappa or lambda light chains.1.What form of antibody should be used?Most people prefer affinity isolated antibodies. These products are the most purified, and therefore, give the lowest amount of non-specific binding. However, in certain cases, IgG fractions may be considered. IgG fractions may have the benefit of containing very high affinity antibodies. Affinity isolation may remove some very high affinity antibodies because they bind so tightly to the affinity matrix that they are not eluted. Therefore, IgG fractions may be useful in situations where very high affinity is required, most commonly when the antigen of interest is rare or present in low abundance.2.What kind of label?The label is very application dependent. For immunoblotting and ELISA, enzyme-labeled secondary antibodies are the most popular. Peroxidase is economical, rapid and a more stable enzyme, in general, than alkaline phosphatase. Also, It has become very popular for use in chemiluminescent detection systems. Alkaline phosphatase on the other hand is considered more sensitive than peroxidase particularly when colorimetric detection is used. For cell or tissue staining, alkaline phosphatase, peroxidase or fluorescent secondary antibodies may be used for cytochemistry or histochemistry.Secondary antibodies labeled with a fluorochrome (FITC, phycoerythrin, and Quantum Red) may be used for flow cytometry.To generate increased amplification, a two-step biotin/avidin system may be used. Biotin binds with very high affinity to avidin resulting in an essentially irreversible interaction. A biotinylated secondary antibody is applied first, then avidin, ExtrAvidin. or streptavidin conjugated to an enzyme or fluorochrome binds to multiple sites on the biotinylated secondary antibody, thus amplifying the signal and resulting in greater sensitivity than that achieved with an antibody-enzyme or antibody-fluorochrome conjugate alone.3.Is there an appropriate adsorbed secondary antibody available?If working with human tissues, cells or proteins, choose a secondary antibody that has been adsorbed with human serum or human IgG. If working with bovine tissues, cells or proteins, choose a product that has been adsorbed with bovine serum or bovine IgG, etc. Using these products will reduce non-specific background4.Is a F(ab )2 fragment product necessary?If working with tissues or cells that have Fc receptors (thymus, spleen, blood, leukocytes, B cells etc.), choose an F(ab )2 fragment when possible to eliminate non-specific binding through Fc receptors present on cells.Alternatively, Fc receptors can be blocked. Perform an absorption step, using purified IgG from the host species of the your secondary antibody. In that case an F(ab)2 secondary antibody may not be necessary.5.If all else is equal, decide based on price/titer and availability.。

二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，艾美捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。

检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：【一抗的种属来源】二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。

即根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。

艾美捷能为您提供最全的抗不同种属的原装进口二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗。

【一抗的类别亚型】二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。

这通常是针对单克隆抗体而言。

多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。

其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM。

如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。

在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种IgG。

艾美捷能为您提供通用的IgG（H+L）二抗，或者特异性只结合IgM的Anti IgM （mu）Antibody、IgA的Anti IgA （alpha-Antibody、IgE的Anti IgE （epsilon）Antibody等。

【二抗的种属来源】一般来说，不同的种属来源与二抗的质量没有必然的联系，来源于山羊的二抗与来源于驴的二抗在一般的实验里没有太多的差别。

荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求，听起来好像很高大上，但其实也就是让我们的实验结果更清晰、更有说服力。

那么，我们该如何选择合适的一抗和二抗呢？接下来，就让我用简单易懂的语言给大家科普一下吧！我们要明确什么是一抗和二抗。

在荧光双染实验中，一抗就是用来检测我们想要研究的蛋白质的第一种抗体，而二抗则是用来检测我们想要研究的蛋白质的第二种抗体。

它们就像是我们的“眼睛”，帮助我们看清楚实验结果中的细节。

那么，如何选择合适的一抗和二抗呢？这里有两个基本要求：一是尽量选择特异性高、灵敏度高的抗体；二是尽量选择与我们想要研究的蛋白质结合良好的抗体。

下面，我分别给大家详细介绍一下这两个要求。

1. 尽量选择特异性高、灵敏度高的抗体特异性是指一抗只能识别我们想要研究的蛋白质，而不会误识别其他蛋白质。

灵敏度是指一抗能够检测到我们想要研究的蛋白质的能力。

这两个要求都很重要，因为如果一抗的特异性和灵敏度不高，那么我们的实验结果可能会被其他蛋白质的影响所干扰，从而导致结果不准确。

那么，如何判断一抗的特异性和灵敏度呢？这里给大家一个小技巧：可以先用一些已知特异性和灵敏度较高的一抗进行初步筛选，然后再根据我们的实验需求进行优化。

这样，我们就可以尽量选择到特异性高、灵敏度高的一抗了。

2. 尽量选择与我们想要研究的蛋白质结合良好的抗体结合良好意味着一抗能够与我们想要研究的蛋白质紧密地结合在一起，从而不会被其他蛋白质的影响所干扰。

这样，我们就可以更准确地检测到我们想要研究的蛋白质了。

那么，如何判断一抗与我们想要研究的蛋白质结合得好不好呢？这里也给大家一个小技巧：可以先用一些已知与目标蛋白结合良好的一抗进行初步筛选，然后再根据我们的实验需求进行优化。

这样，我们就可以尽量选择到与我们想要研究的蛋白质结合良好的一抗了。

当然啦，选择合适的一抗和二抗并不是一件容易的事情，需要我们不断地尝试和优化。

但是，只要我们遵循上述的基本要求，相信我们一定能够找到最适合我们的一抗和二抗的！荧光双染实验一抗和二抗的选择是非常重要的，它关系到我们的实验结果是否准确。

荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求荧光双染实验是一种常见的生物学研究方法，它可以用于观察细胞内某些蛋白质的分布情况。

在进行荧光双染实验时，一抗和二抗的选择是非常重要的，因为它们直接影响到实验结果的准确性和可靠性。

本文将从理论和实践两个方面，详细介绍荧光双染实验中一抗和二抗选择的基本要求。

一、一抗选择的基本要求1.1 特异性一抗是指与目标蛋白高度匹配的抗体，它能够特异性地结合目标蛋白，而不会与其他蛋白质发生反应。

在荧光双染实验中，一抗的选择应满足以下条件：(1)高度特异性：一抗应能与目标蛋白高度匹配，避免与背景蛋白产生干扰。

一般来说，一抗的亲和力越高、识别位点越精确，其特异性就越高。

(2)稳定性：一抗在实验过程中应保持稳定，不发生变性、失活等现象。

这有助于保证实验结果的可靠性和重复性。

1.2 灵敏度一抗的灵敏度是指其能够检测到的目标蛋白的数量。

在荧光双染实验中，灵敏度较高的一抗可以帮助我们更准确地定位目标蛋白的位置，从而提高实验的成功率。

1.3 检测范围一抗的选择还应考虑其检测范围。

有些一抗只能检测特定类型的蛋白质，而有些则具有较广的检测范围。

因此，在选择一抗时，应根据实验目的和需求，综合考虑其检测范围等因素。

二、二抗选择的基本要求2.1 特异性二抗是指与一抗相结合的抗体，它同样需要具备高度特异性，以避免与背景蛋白产生干扰。

一般来说，二抗的亲和力应低于一抗，以确保其不会影响到一抗的结合效果。

二抗的选择还应考虑其对目标蛋白的识别能力。

2.2 稳定性二抗在实验过程中也应保持稳定，避免发生变性、失活等现象。

这有助于保证实验结果的可靠性和重复性。

二抗的稳定性还会影响到其与一抗结合后形成的信号强度和持续时间，因此在选择时也需要充分考虑这一因素。

2.3 检测范围与一抗类似，二抗的选择也应考虑其检测范围。

有些二抗只能检测特定类型的蛋白质，而有些则具有较广的检测范围。

因此，在选择二抗时，应根据实验目的和需求，综合考虑其检测范围等因素。

如何选择荧光二抗如何选择二抗--根据一抗种属及类型选择合适的二抗二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：【一抗的种属来源】二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。

即根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。

抗不同种属的原装进口二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗。

【一抗的类别亚型】二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。

这通常是针对单克隆抗体而言。

多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。

其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM。

如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。

在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种IgG。

通用的IgG（H+L）二抗，或者特异性只结合IgM的Anti IgM （mu）Antibody、IgA的Anti IgA （alpha-Antibody、IgE的Anti IgE （epsilon）Antibody等。

【二抗的种属来源】一般来说，不同的种属来源与二抗的质量没有必然的联系，来源于山羊的二抗与来源于驴的二抗在一般的实验里没有太多的差别。

一抗的选择检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体，需要考虑如下几种因素：分析试验应用的类型l样本蛋白的结构性质l样本的种属l抗体宿主的种类l抗体的标记和检测l1.分析试验应用的类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于WB IHC ICC ELASA分析等，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用某些分析试验，则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。

2.样本蛋白的结构性质了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，至少两方面因素需要考虑待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。

如果打算用FACS流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。

l样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。

当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来l3.样本的物种应选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸序列同源性较高，如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对的方法来预测交叉反应，可应用Expasy 和 NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同源性比对。

荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求大家好，今天我们来聊聊荧光双染实验中一抗和二抗的选择问题。

这个问题可大可小，关键在于选对了，实验才能顺利进行。

那么，如何挑选出最适合的一抗和二抗呢？别着急，我这里有几个小建议，希望能帮到大家。

我们来说说一抗的选择。

一抗，就是第一抗体，它的作用是识别并结合我们想要研究的特定抗原。

在荧光双染实验中，一抗的选择非常重要，因为它直接影响到后续实验的结果。

那么，如何挑选出最合适的一抗呢？这里给大家提供几个参考因素：1. 特异性：一抗要能够特异性地识别目标抗原，不能与其它抗原发生反应。

这样才能保证实验结果的准确性。

2. 灵敏度：一抗要有足够的灵敏度，能够在低浓度的抗原样本中检测到目标抗原。

这样才能满足实际应用的需求。

3. 稳定性：一抗要具有较好的稳定性，不易受到环境因素的影响而失去活性。

这样才能保证实验的重复性和可靠性。

4. 亲和力：一抗与抗原之间的亲和力要适中，既不能过于强烈地结合抗原，也不能太弱而无法识别目标抗原。

这样才能保证实验的可操作性。

接下来，我们来说说二抗的选择。

二抗，就是第二抗体，它的作用是与一抗结合，形成可见的荧光信号。

同样地，二抗的选择也非常重要，因为它会影响到最终的荧光信号强度和分布。

那么，如何挑选出最合适的二抗呢？这里给大家提供几个参考因素：1. 特异性：二抗要能够特异性地识别一抗结合的目标抗原，不能与其它抗原发生反应。

这样才能保证实验结果的准确性。

2. 灵敏度：二抗要有足够的灵敏度，能够在高浓度的一抗结合物中检测到目标抗原。

这样才能满足实际应用的需求。

3. 稳定性：二抗要具有较好的稳定性，不易受到环境因素的影响而失去活性。

这样才能保证实验的重复性和可靠性。

4. 亲和力：二抗与一抗结合后形成的复合物要具有适当的亲和力，既不能过于紧密地结合在一起，也不能太松散而无法形成稳定的荧光信号。

这样才能保证实验的可操作性。

在荧光双染实验中，一抗和二抗的选择是非常关键的。

如何选择⼀抗和⼆抗？
1. ⼀抗选择
（1）确定抗体的名字，注意中英⽂名字、别名、亚型等信息。

（2）确定您的实验类型，Elisa，WB，IHC，ICC，或者是FACS。

⼀般抗体说明书都会列出抗体经验证过适⽤的实验类型，如果抗体说明书没有提及的应⽤类型，并不意味着该抗体不适⽤于此种分析应⽤类型，⽽仅是说明尚未经过此种实验验证。

（3）确定实验样本的种属，Human，Mouse，Rat等。

抗体说明书⼀般都会列出该抗体验证过的适⽤物种，可根据说明书列出已验证的种属来选择适合你实验需要的抗体。

（4）样本抗原蛋⽩的结构性质。

了解样本抗原蛋⽩的结构性质有助于选择最合适的抗体，待测样本蛋⽩的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变性，蛋⽩空间构象的改变，会影响抗体的免疫亲和反应。

（5）单多克隆抗体的选择。

⼀般单克隆抗体特异性强，但亲和⼒相对⼩，检测抗原灵敏度相对就低；⽽多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和⼒强，灵敏度⾼，但易出现⾮特异性染⾊（可以通过封闭等避免）。

2. ⼆抗选择
（1）种属来源。

主要根据⼀抗种属来源⽽决定⼆抗来源，如⼀抗是⼩⿏来源，那⼆抗就买抗⼩⿏的即可（⽺、兔等均可）。

（2）标记物的选择。

有HRP、Biotin、荧光素等标记物。

免疫组化，WB⼆抗主要选择HRP，Biotin标记的⼆抗，⽽免疫荧光染⾊可按实验需要选择不同荧光素标记的⼆抗，如FITC、Cy3、PE等。

免疫荧光中二抗种属和封闭抗体种属一、概述免疫荧光技术是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的方法，它利用免疫荧光染色可以快速准确地检测细胞或组织中特定的蛋白质分布和表达情况。

而其中二抗和封闭抗体的种属对于免疫荧光技术的成功应用至关重要。

二、免疫荧光中二抗种属1. 源自不同种属的抗体在免疫荧光技术中，二抗是指与待检测抗体相互作用的第二个抗体。

为了避免原发抗体与被检测物种属的冲突，二抗和原发抗体应来自不同的物种。

常用的二抗种属包括兔抗小鼠、小鼠抗兔等。

2. 减少假阳性结果使用源自不同种属的二抗有助于减少假阳性结果的发生，提高检测结果的准确性和可靠性。

在选择二抗种属时，应充分考虑原发抗体的种属，以确保实验结果的准确性。

三、封闭抗体种属1. 封闭抗体的种属选择在免疫荧光技术中，封闭抗体是指用于阻断非特异性结合的抗体，在免疫组织化学和免疫细胞化学应用中，封闭抗体能够有效地提高检测的特异性。

封闭抗体的种属选择应根据待检测标记物的来源和原发抗体的种属进行选择，以确保封闭抗体与原发抗体不发生交叉反应。

2. 提高检测结果的特异性封闭抗体的种属选择直接影响着检测结果的特异性，正确选择种属可有效降低背景信号，提高检测结果的清晰度和可读性。

封闭抗体的种属选择是免疫荧光技术中至关重要的一环。

四、总结免疫荧光技术在生物医学研究和临床诊断中具有重要的应用价值，而其中二抗和封闭抗体的种属选择对于免疫荧光技术的成功应用至关重要。

正确选择二抗种属和封闭抗体种属可以有效减少假阳性结果，提高检测结果的准确性和特异性，为科研工作者和临床医生提供可靠的实验结果和诊断依据。

在进行免疫荧光实验时，科研工作者和临床医生应该充分考虑二抗和封闭抗体的种属选择，确保实验结果的准确和可靠。

五、实验设计中的考虑在进行免疫荧光实验设计时，正确选择二抗和封闭抗体的种属至关重要。

在实验设计中，应充分考虑以下几个方面：1. 样本来源不同样本来源可能含有不同种类的抗原和受体，因此在实验设计中，需要根据样本来源选择合适的二抗和封闭抗体的种属，以确保实验结果的准确性和特异性。

宿主物种丨Jackson告诉你选择二抗的注意事项蛋白质印迹实验中二抗的选择是非常重要的。

那么接下来就一起来看Jackson ImmunoResearch公司选择二抗的相关注意事项吧~ 宿主物种的相容性如果使用多种二抗，例如探测两种一抗，请选择相同的宿主物种以尽量减少任何交叉反应。

如果这不可能，则选择与实验中其他二抗的宿主物种交叉吸附的二抗。

交叉反应物种虽然在蛋白质印迹中不常见，但某些应用需要针对其他物种吸附的二抗，以尽量减少对内源性免疫球蛋白的识别（例如用抗大鼠一抗探测小鼠组织裂解物）或其他一抗。

因此，请选择可用于预期应用的具有适当交叉吸附的二抗宿主。

经验或偏好宿主物种的选择通常归结为个人偏好或先前的实验验证。

在不同宿主物种中产生的二抗之间似乎几乎没有质量差异，只是某些物种更适合大规模生产。

特异性选择具有正确特异性的二抗很重要。

尽管全 IgG (H+L) 适用于大多数免疫测定，但其他专业特异性允许设计更复杂的实验，以消除不必要检测的潜在干扰。

抗 IgG (H+L)Jackson ImmunoResearch 公司抗 IgG (H+L)与 IgG 分子的重链和轻链都发生反应，即与 IgG 的 Fc 和 F(ab')2 / Fab 区发生反应（图 1）。

抗 IgG (H+L) 抗体也与其他免疫球蛋白类别（IgM、IgA、IgD、IgE）和亚类发生反应，因为它们都共享相同的轻链（kappa 或 lambda）。

抗 IgG (H+L) 抗体比抗片段特异性抗体具有更广泛的表位识别。

它们也被建议用于所有一般的免疫检测程序。

同种型特异性：Fc 特异性抗体大多数一抗是 IgG 同种型。

有时根据抗体的产生方式使用其他类别，例如 IgM 和 IgA。

对免疫球蛋白的 Fc 域特异的二抗将特异于该特定 Fc 域的同种型。

因此，Fcγ特异性抗体将对IgG特异性，而对Fcα特异性的抗体将特异性检测IgA，而Fcμ将检测IgM。