一抗、二抗的选择

荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求荧光双染实验，这名字听起来就很炫酷，对吧？其实它就是一个让我们能同时看到两种不同标记物的实验。

没错，就是让我们在显微镜下像变魔术一样，看到细胞中的不同成分。

为了能让这个实验顺利进行，我们得好好挑选一抗和二抗，别小看这两个“小家伙”，它们可是实验成功的关键哦。

接下来，我们就来聊聊挑选一抗和二抗的那些事儿。

1. 选择一抗的基本要求首先，一抗是我们的“主角”，它负责直接和目标抗原结合。

为了让实验更靠谱，我们在挑选一抗的时候有几个基本要求。

首先，得确保一抗的特异性。

简单来说，就是一抗要能够准确地识别目标抗原，不会跟其他东西搭上关系。

你可以把它想象成找一个能只看中你家猫的侦探，千万别让它误认成了邻居家的狗狗。

此外，一抗的亲和力也很重要。

亲和力高的话，一抗就能牢牢地抓住目标抗原，不容易掉链子。

就像是找一个有“强烈吸引力”的好朋友一样，这样才能在关键时刻依靠得住。

1.1 一抗的来源选择一抗时，来源也要考虑清楚。

市面上的一抗分为很多种，有的是从小鼠身上提取的，有的是从兔子身上提取的，甚至还有从山羊身上提取的。

每种来源的一抗都有自己的优点和缺点。

例如，小鼠单克隆抗体常常具有高度的特异性，但可能在某些实验条件下效果不如其他来源的抗体好。

像兔子或者山羊的抗体则可能在灵敏度上表现得更好。

了解这些，才能找到最适合你实验的一抗。

1.2 一抗的纯度一抗的纯度也不能忽视。

想象一下，如果你的试剂里混杂了很多其他东西，就像是在派对上有太多不认识的人一样，肯定会让实验结果变得扑朔迷离。

因此，选择纯度高的一抗非常重要，它能让你减少实验中的干扰，提高结果的准确性。

选择纯度高的一抗，就像在举办一个小型的、只有好友参与的派对，所有人都知道自己干嘛的，大家都玩得开心。

2. 选择二抗的基本要求说完了一抗，接下来咱们聊聊二抗。

二抗是我们的“帮手”，它负责和一抗结合，并且带上荧光标记。

二抗的选择也有讲究，首先是它的特异性。

荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求，听起来好像很专业的样子，但是其实很简单，就是让我们的实验数据更加清晰明了。

那么，我们该如何选择合适的一抗和二抗呢？接下来，就让我来给大家普及一下吧！我们要明确什么是一抗和二抗。

一抗，就是第一抗体，也就是我们要检测的目标物质；二抗，就是第二抗体，它可以与一抗结合，形成一种复合物，从而使我们能够看到目标物质的存在。

那么，如何选择合适的一抗和二抗呢？1.1 选择一抗选择一抗的时候，我们要考虑到以下几个方面：(1)特异性：一抗要能够准确地识别目标物质，不能误识别其他物质。

这就好比是我们要找一个人，但是他长得像很多人，我们不能因为他长得像别人就把他当成那个人。

(2)灵敏度：一抗要有足够的敏感性，能够在低浓度下检测到目标物质。

这就好比是我们要在人海中找到一个特定的人，但是他的出现频率很低，我们不能因为他出现的次数少就忽略了他。

(3)稳定性：一抗要具有一定的稳定性，不会因为外界因素的影响而失去活性。

这就好比是我们要找一个人，但是他总是在关键时刻消失不见。

选择合适的一抗就是要找到一个既能准确识别目标物质，又有足够敏感性和稳定性的人。

1.2 选择二抗选择二抗的时候，我们要考虑到以下几个方面：(1)特异性：二抗要能够准确地识别一抗，不能误识别其他一抗或者背景分子。

这就好比是我们要找一个人，但是他长得像很多人，我们不能因为他长得像某个特定的人就把他当成那个人。

(2)灵敏度：二抗要有足够的敏感性，能够在低浓度下检测到与一抗结合的复合物。

这就好比是我们要在人海中找到一个特定的人，但是他出现的频率很低，我们不能因为他出现的次数少就忽略了他。

(3)稳定性：二抗要具有一定的稳定性，不会因为外界因素的影响而失去活性。

这就好比是我们要找一个人，但是他总是在关键时刻消失不见。

选择合适的二抗就是要找到一个既能准确识别一抗，又有足够敏感性和稳定性的人。

2.1 一抗和二抗的选择时机在进行荧光双染实验时，我们需要根据实际情况来选择合适的一抗和二抗。

WB检测抗体如何选择WB检测之二抗二抗选择二抗是用一抗免疫动物制备的抗一抗的抗体，选择范围较窄，基本是商品化的，在不考虑二抗修饰类型的前提下，二抗的选择需要遵循以下原则：二抗来源种属、一抗来源种属和抗原来源种属互不相同。

例如如果研究对象是人的蛋白X，选择了鼠抗X一抗，则可选择兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二抗。

二抗选择要考虑的问题有：①对单抗类一抗，二抗需与一抗的类别或亚类相匹配（多抗类一抗主要是IgG类免疫球蛋白故相应二抗就是抗IgG F(ab’)2二抗，避免各种Ig保守结构域导致的交叉反应。

然而各种Ig仍具有保守的轻链结构域，因此还是有一定程度的交叉反应。

WB检测之内参抗体Western Blot检测方法不仅能检测靶蛋白存在与否，还能比较不同条件下或者不同组织中靶蛋白的相对表达量，可作为蛋白表达水平最直接的证据。

在WB实验中有众多不确定因素影响靶蛋白表达水平的测定，如方法学本身性质、操作误差等。

为准确衡量靶蛋白表达水平，需要精确一致的上样量，使用内参的意义即是保证上样量的一致。

内参即内部参照（Internal Control），对哺乳动物细胞一般指管家基因的表达蛋白(Housekeeping Proteins)。

此类蛋白在各组织和细胞中的表达相对恒定，可作为检测蛋白表达水平变化的参照物。

当内参条带亮度基本一致时，基本可以确定上样量是一致的，通常采用比较靶蛋白和内参蛋白条带亮度比值来进行相对定量。

WB实验中涉及到的蛋白-抗体结合是一个复杂的活性生物大分子间的相互作用，众多因素都会影响实验的结果。

例如时间、温度、浓度、离子强度等，在实验设计时就需要有严谨的对照方案，通过对照就容易判断问题所在，严谨的WB实验中需要设立蛋白分子量标准、空白载体对照、未诱导对照、已知量标准物正对照和内参。

内参使用方法1.标记内参：酶标的内参抗体可避免二抗结合总蛋白中某些免疫球蛋白产生的杂带，使用时只需在二抗孵育时加入酶标内参抗体，按照正常操作即可。

随着生命科学的发展，围绕蛋白进行的研究越来越多，抗体试剂在实验中的重要性越来越举足轻重。

面临着纷呈复杂的抗体试剂市场，如何选择到适合自己实验的抗体就变得尤为重要。

当我们要检测目的蛋白在组织中表达情况的时候，如何选择适合我们实验需要的抗体，并恰当保存使用，是每个科研人员需要细心考虑的。

抗体种类繁多，品牌众多，技术参数不一，价格和质量更是相差甚大，如何购买到高质量价格合适的抗体，并准确地做出我们想要的结果，其中有很多细节需要注意。

一、抗体选择总体原则1. 关于特异性的选择特异性的选择主要需要考虑四个方面：蛋白特异性、种属特异性、实验方法特异性、标记物的特异性。

（1）蛋白特异性针对需要检测的蛋白查找抗体，几个细节要区分，重组表达的蛋白和内源性蛋白的检测，对抗体的要求是不一样的，注意查看抗体说明书的检测说明。

如果重组蛋白不是全长表达，则需要注意抗体的免疫原区域是否在重组蛋白区域内。

内源性蛋白最好能清楚其剪切与修饰的方式，特殊表型的蛋白需要进行序列比对，并结合抗体免疫原序列，查看交叉反应的情况。

磷酸化蛋白检测需要确定具体位点，不同位点的磷酸化意味着可能有不同的机制存在，不宜一概而论。

（2）种属特异性同种蛋白不同物种，有着或大或小的差异。

目前大部分商品化抗体都是以人源蛋白序列为模板重组蛋白或设计多肽抗原的，根据蛋白的同源性情况与其他种属发生交叉反应。

需要参照说明书注明的可反应种属信息。

一些稀有种属很难找到抗体，可以通过蛋白的序列比对，选择同源序列免疫的抗体，不过一般这种情况生产商不会受理其关于质量的申诉，如果可以申请到免费的抗体样品，则利于抗体选择。

（3）实验方法特异性目前使用抗体的实验方法有很多，不同的使用方法过程中，因为对蛋白样品的处理方式不一样，蛋白的含量有差异，对抗体的识别表位和效价要求都是不一样的。

具体的根据说明书注明的产品应用方法进行选择。

但是生产商一般不会将每个抗体都进行各种实验的检测，目前检测比较多的只是WB、IHC、IF等，如果针对具体的实验方法没有找到合适的抗体的，可以结合蛋白序列分析和抗体的抗原信息，选择尽可能有效果的抗体。

免疫荧光一抗二抗的选择及其技巧据一抗种属及类型-如何选择二抗?如何选择二抗——根据一抗种属及类型选择合适的二抗二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，艾美捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。

检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：【一抗的种属来源】二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。

即根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。

艾美捷能为您提供最全的抗不同种属的原装进口二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗。

【一抗的类别亚型】二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。

这通常是针对单克隆抗体而言。

多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。

其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM。

如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。

在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种IgG。

艾美捷能为您提供通用的IgG（H+L）二抗，或者特异性只结合IgM的Anti IgM （mu） Antibody、IgA的Anti IgA （alpha-Antibody、IgE的Anti IgE （epsilon） Antibody等。

一抗的选择检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体，需要考虑如下几种因素：分析试验应用的类型l样本蛋白的结构性质l样本的种属l抗体宿主的种类l抗体的标记和检测l1。

分析试验应用的类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于WB IHC ICC ELASA分析等，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用某些分析试验，则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。

2。

样本蛋白的结构性质了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，至少两方面因素需要考虑待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括:全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。

如果打算用FACS流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。

l样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。

当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来l3.样本的物种应选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸序列同源性较高，如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白,而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过,应通过序列比对的方法来预测交叉反应，可应用Expasy 和 NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同源性比对。

WB检测抗体如何选择WB检测之二抗二抗选择二抗是用一抗免疫动物制备的抗一抗的抗体，选择范围较窄，基本是商品化的，在不考虑二抗修饰类型的前提下，二抗的选择需要遵循以下原则：二抗来源种属、一抗来源种属和抗原来源种属互不相同。

例如如果研究对象是人的蛋白X，选择了鼠抗X一抗，则可选择兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二抗。

二抗选择要考虑的问题有：①对单抗类一抗，二抗需与一抗的类别或亚类相匹配（多抗类一抗主要是IgG类免疫球蛋白故相应二抗就是抗IgG F(ab’)2二抗，避免各种Ig保守结构域导致的交叉反应。

然而各种Ig仍具有保守的轻链结构域，因此还是有一定程度的交叉反应。

WB检测之内参抗体Western Blot检测方法不仅能检测靶蛋白存在与否，还能比较不同条件下或者不同组织中靶蛋白的相对表达量，可作为蛋白表达水平最直接的证据。

在WB实验中有众多不确定因素影响靶蛋白表达水平的测定，如方法学本身性质、操作误差等。

为准确衡量靶蛋白表达水平，需要精确一致的上样量，使用内参的意义即是保证上样量的一致。

内参即内部参照（Internal Control），对哺乳动物细胞一般指管家基因的表达蛋白(Housekeeping Proteins)。

此类蛋白在各组织和细胞中的表达相对恒定，可作为检测蛋白表达水平变化的参照物。

当内参条带亮度基本一致时，基本可以确定上样量是一致的，通常采用比较靶蛋白和内参蛋白条带亮度比值来进行相对定量。

WB实验中涉及到的蛋白-抗体结合是一个复杂的活性生物大分子间的相互作用，众多因素都会影响实验的结果。

例如时间、温度、浓度、离子强度等，在实验设计时就需要有严谨的对照方案，通过对照就容易判断问题所在，严谨的WB实验中需要设立蛋白分子量标准、空白载体对照、未诱导对照、已知量标准物正对照和内参。

内参使用方法1.标记内参：酶标的内参抗体可避免二抗结合总蛋白中某些免疫球蛋白产生的杂带，使用时只需在二抗孵育时加入酶标内参抗体，按照正常操作即可。

免疫组化IHC实验抗体选择在设计免疫组化IHC实验时，抗体的选择是相当重要的。

因为免疫组化试验的核心就是抗原与抗体的特异性结合,因此抗体的重要性就不言而喻。

下面我们就跟大家分享一下免疫组化IHC实验中一抗与二抗的选择要点与技巧。

一、选择单抗还是多抗单克隆和多克隆抗体的内在特征决定了它们用于免疫组化IHC时的优势和限制。

单克隆抗体由单个B细胞克隆产生，代表了同质群体，能够高亲和力高特异性地与单个表位结合。

这在检测蛋白家族的某个成员时特别有用，因为蛋白家族有着高比例的氨基酸同源性。

过去的鼠单抗灵敏度上要劣于多抗。

但是兔单抗的出现，大大的扭转了它的劣势。

也在免疫组化实验中表现出卓越性。

个人认为，在实验中特异性是至高无上，如果你的实验特异性无法保证，那么这个实验就不可信。

因此基于以上因素，推荐单克隆抗体更常用于免疫组化IHC实验。

尤其是兔单抗，以特异性强和灵敏度高，最适于免疫组化而著称。

二、抗体的应用范围一抗在选择时，要确定该抗体可以应用到免疫组化IHC。

也就说不是所有的抗体都可以用于免疫组化IHC。

所以在购买抗体时可以在详情页查阅一下，或者咨询一下销售客服了解该抗体详细应用范围（咨询销售客服的好处就是你还有可能获得一些意外惊喜）。

三、冰冻切片还是石蜡切片你实验做得是石蜡切片还是冰冻切片，这个在实际应用上，抗体也是有所区别的。

你要确认你所购买的抗体能否用于IHP(石蜡切片)或者IHF（冰冻切片）。

一般能做石蜡切片的抗体，基本上可以用来检测冰冻切片，但能做冰冻切片的抗体，不一定能检测石蜡切片中的抗原。

四、species reactivity抗原分子表面存在着能与抗体相互作用的部位即抗原决定簇,一种抗原物质可以有两个或更多的决定簇。

研究表明,抗体是从抗原决定簇的立体结构而不是从抗原的全面分子排列来“认识”抗原的。

这样,有时一种抗体可以与分子结构并不完全相同但具有类似抗原决定簇的不同抗原起反应,这称为交叉反应。

一抗(d e)选择公司内部档案编码：[OPPTR-OPPT28-OPPTL98-OPPNN08]一抗(de)选择检测任何目(de)靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,为缩小抗体(de)选择范围选中合适(de)抗体,需要考虑如下几种因素：分析试验应用(de)类型l样本蛋白(de)结构性质l样本(de)种属l抗体宿主(de)种类l抗体(de)标记和检测l1.分析试验应用(de)类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型,如：可以应用于WB IHC ICC ELASA分析等,如果抗体说明书没有提及(de)应用类型,并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,而仅是说明尚未经过此种分析试验验证,如果抗体不适用某些分析试验,则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验.2.样本蛋白(de)结构性质了解样本蛋白(de)结构性质有助于选择最合适(de)抗体,至少两方面因素需要考虑待测样本蛋白(de)结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来,其中(de)免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞,抗体说明书一般都有免疫原(de)描述,如果打算检测(de)是蛋白片断或一种特殊(de)同型物或蛋白全长(de)某一区域,则必须选择用含此片段域(de)免疫原制备出(de)抗体.如果打算用FACS流式检测活细胞(de)表面蛋白,则需要选择含该表面蛋白(de)胞外域来免疫制备(de)抗体.l样本(de)提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理,例如：许多抗体只识别还原和变性(de)、表位已暴露不受二级四级结构阻碍(de)蛋白样本,另一方面,某些抗体仅识别天然折叠状态(de)蛋白.当选择免疫组化(de)抗体时,应注意某些抗体只识别未固定(de)冷冻(de)组织,而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚(de)甲醛固定石蜡包埋(de)组织,这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来l3.样本(de)物种应选择物种相同或有交叉反应(de)抗体,抗体可能与不同物种(de)同种靶蛋白有交叉反应,因其氨基酸序列同源性较高,如果样本(de)种类未列入抗体说明书上(de)交叉反应种属表中,并不意味着该抗体不适用于检测该物种(de)蛋白,而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过,应通过序列比对(de)方法来预测交叉反应,可应用Expasy 和 NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同源性比对.4.一抗宿主物种(de)选择一般说来,在使用偶联二抗结合无偶联物(de)一抗时,一抗宿主动物(de)物种选择较为重要,对于免疫组化而言,尽可能选择与样本不同种系物种(de)一抗,从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应,例如：检测小鼠样本蛋白,则不应选择小鼠或大鼠源(de)一抗,最好选兔源(de)一抗,则二抗则可选择偶联了检测分子（酶、荧光素、生物素等）(de)抗兔IgG.如果选择有偶联物(de)一抗则不适用上述情况,除免疫组化外(de)其它对不含内源性免疫球蛋白样本(de)检测方法,则抗体宿主物种(de)影响不大,如对不含IgG(de)细胞裂解物样本(de)western blotting检测,尽管如此,含有血清(de)组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白,还原变性样本中含IgG,在western blot检测中则结合出现IgG分子50 and 25 kDa(de)重链和轻链条带.如何选择二抗——根据一抗种属及类型选择合适(de)二抗广义上是指专门和进行特异性反应和结合(de)抗体,在免疫学反应中,经常需要针对试验选择不同(de)二抗,艾美捷能为您(de)科研工作提供最适合和最全面(de)二抗产品.检测任何目(de)靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,同时在后继试验中也会有不同(de)检测方案,因此在选择二抗(de)时候要综合考虑一抗(de)类型及后继检测方案(de)要求,一般来说,选择合适(de)二抗需要从下面几个方面考虑：一抗(de)种属来源二抗应选用与使用(de)一抗相同(de)物种来源,例如：如果你(de)一抗是小鼠源(de)单克隆抗体,二抗则选抗小鼠(de)二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备(de)兔源多克隆抗体,则相应(de)二抗需要选择抗兔(de)二抗.即根据一抗(de)物种来源选择相应(de)抗该物种(de)二抗.艾美捷能为您提供最全(de)抗不同种属(de)原装进口二抗,包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗.一抗(de)类别亚型二抗需与一抗(de)类别或亚类相匹配.这通常是针对单克隆抗体而言.多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白,因此相应(de)二抗就是抗IgG抗体.其中单克隆抗体(de)类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述,如果你(de)一抗是小鼠IgM,那么相应(de)二抗就应当是抗小鼠IgM.如果单克隆一抗是小鼠IgG(de)某一亚类（IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3）,那么几乎所有(de)抗小鼠IgG都可以与之结合,或者你也可以选择专门针对这一亚类(de)二抗,例如,如果你(de)一抗是小鼠IgG1,那么你可以选择抗IgG1(de)二抗,此种抗体在双标记实验中尤其适合.在不清楚一抗为何种类/亚类(de)情况下,可以选用抗相应物种IgG.艾美捷能为您提供通用(de)IgG（H+L）二抗,或者特异性只结合IgM(de)Anti IgM （mu） Antibody、IgA(de)Anti IgA （alpha-Antibody、IgE(de)Anti IgE （epsilon）Antibody等.二抗(de)种属来源一般来说,不同(de)种属来源与二抗(de)质量没有必然(de)联系,来源于山羊(de)二抗与来源于驴(de)二抗在一般(de)实验里没有太多(de)差别.然而在一些特殊(de)实验里,如双标实验里,如果其中一个一抗是山羊来源(de),一个是小鼠来源(de),则相应(de)二抗分别要抗山羊和抗小鼠(de)二抗,这时候,二抗就不能选择山羊或者小鼠来源(de). 有相应(de)驴来源(de)二抗,非常适合做类似双标(de)免疫实验.二抗(de)耦联标记一般来讲,耦联到二抗上(de)探针主要有酶（辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP,PAP）,荧光基团（FITC、 Rhodamine、Texas Red、PE、Rhodamine、Dylight等）、生物素、金颗粒.选用哪种探针(de)二抗主要取决于具体(de)实验.对于Western Blot和ELISA,最常用(de)二抗是酶标二抗；而细胞或组织标记实验（细胞免疫化学,组织免疫化学,流式细胞术）中通常使用荧光基团标记(de)二抗,免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记(de)二抗.如果想要更大程度(de)放大检测信号,可以使用Biotin/Avidin检测系统.在一些荧光检测方案中,则需要选择不同(de)荧光标记；而金颗粒标记(de)二抗则更多(de)应用于免疫电镜中.艾美捷能为您提供上述所有不同类型标记(de)二抗.是否经过血清吸附过(de)二抗为减少二抗与样本(de)非特异性结合,艾美捷还能为您提供不同血清吸附(de)原装进口二抗.如您(de)检测样本是人源(de)蛋白,一抗是小鼠源(de)单克隆抗体,二抗就需要选择抗小鼠源(de)二抗,如果您对实验(de)特异性要求很高,那我们向您推荐经过人血清吸附过(de)抗小鼠源(de)二抗,这种二抗由于经过人血清吸附而排除了与人源组织（如IgG等）可能发生非特异性反应(de)IgG,因此将非特异性结合降低到最低.Anti-IgG还是Anti-IgG, F（ab’）2 fragment在一些如胸腺、脾脏、血液(de)组织以及造血细胞、淋巴细胞、B细胞等细胞内,通常含有较多(de)Fc受体,这时候选择二抗时最好选择Anti-IgG, F（ab’）2 fragment这样(de)特异性二抗,这样就消除了由于Fc部分与IgG(de)非特异性结合.常规(de)Anti-IgG （H+L）二抗与IgG(de)重链和轻链都有结合反应,即与IgG(de)Fc(de)F（ab’）2片段都能结合；由于IgG、IgM、IgA都有保守(de)轻链结构域,因此Anti-IgG （H+L）与它们都有交叉反应.而Anti-IgG, F（ab’）2 fragment经过了IgG Fc片段(de)吸附,因此只与IgG(de)F（ab’）2片段结合,然而IgG、IgM、IgA都有保守(de)轻链结构域,因此与它们也有交叉反应.Anti-IgG（H+L）、Anti-IgG （gamma）、Anti-IgM （mu）、Anti-IgA （alpha）在一些特殊(de)实验里,只需要检测样本里(de)IgG或者IgM,常规(de)Anti-IgG （H+L）由于与IgG(de)重链和轻链都有结合反应,而IgG、IgM、IgA都有保守(de)轻链结构域,因此不能特异性(de)检测某种类型(de)IgG或者IgM.这时候就需要针对特殊类型Ig分子(de)二抗.艾美捷备有全面(de)二抗现货产品并能提供最完整(de)二抗产品线.主要二抗品牌为全球最大(de)二抗产品以及前沿抗体生产商EarthOx.按照标记分,有HRP、AP、生物素等标记二抗,FITC、TRITC、Rhodamine、Cy3/5、Dylight等荧光二抗；按照检测物种分,有抗人、大鼠、小鼠、猪、驴、绵羊、山羊、小鸡、马、兔、仓鼠、狗、牛,以及多种细菌类二抗；另外,还有IgG、IgA、IgM以及IgG（Fc）、IgG（ab’）2等不同类型抗体.如抗原为A C物质,产生(de)抗体为抗-ac,如抗原为B C物质,产生(de)抗体为抗-bc,AC物质和抗-ac、BC物质和抗-bc产生(de)是特异性结合,而AC物质和抗-bc、BC物质和抗-ac就会产生交叉反应.什么是抗体(de)交叉反应性呢看到有(de)抗体是小鼠来源(de),但是跟人,大鼠,兔和猴子都有交叉反应性,什么是抗体(de)交叉反应性呢这样(de)抗体可以用于人来源(de)细胞做western blot实验吗抗原分子表面存在着能与抗体相互作用(de)部位即抗原决定簇,一种抗原物质可以有两个或更多(de)决定簇.研究表明,抗体是从抗原决定簇(de)立体结构而不是从抗原(de)全面分子排列来“认识”抗原(de).这样,有时一种抗体可以与分子结构并不完全相同但具有类似抗原决定簇(de)不同抗原起反应,这称为交叉反应.如果你(de)抗体和其它种属有交叉反应,理论上可以用于人源(de)WB.哦,那如果厂家(de)产品说明上交叉反应性一栏里写着人,大鼠,兔,猴,但是抗体来源是小鼠,是不是也就是说,这种抗体可以用于来源于人,大鼠,兔,猴(de)组织或者细胞(de)WB 可是为什么,买抗体(de)时候还要注意它(de)种属和来源呢,我对这个搞不清楚,希望指点,谢谢所谓抗原和抗体(de)特异性结合其实也是相对(de),抗原和抗体结合也就是十几到二十几个氨基酸,理论上在其他(de)蛋白中也可能存在同样或者相似(de)序列.其次至于抗体为什么能和不同种属同一个分子反应,那是因为有一部分蛋白在机体发挥较为重要(de)作用,因此可能在低等动物就存在,因此该分子(de)氨基酸序列存在较为严格(de)保守性,也就是同样(de)分子在不同种属(de)序列是相同或者相似(de),比如VEGF等.所以就出现免疫(de)时候是用人(de)抗原,但是后来产生(de)抗体可以和其他很多动物种属反应.楼主说(de)买抗体(de)时候为什么要注意种属来源,这个和你(de)实验目(de)有关,比如有(de)人同时要做人体试验和某个动物(de)实验,比如大鼠,那么就希望买(de)抗体可以同时针对人和大鼠,这样就可以节约资源.相反如果有人只做一个种属(de)试验,那么可能就希望抗体(de)特异性更高点,那么就和其他种属(de)交叉反应越少越好.至于抗体本身(de)来源,主要和你下游试验有关,也就是二抗和显色有关.。

如何选择二抗羊抗兔：指把兔体内的抗原注射到羊的体内，而在羊的体内产生抗兔的抗体，即羊抗兔抗体，这个抗体来由羊产生的，是羊源的。

一抗如果是鼠抗人的抗体，二抗应该是另一种动物抗鼠的抗体，而且一抗和二抗的动物种属原则上不应该相同。

一般来说，一抗多用兔抗和鼠抗，而二抗多用羊抗。

二抗一般选择被碱性磷酸酶标记过的。

单克隆抗体是指针对于抗原标志物上某一种抗原决定簇产生的单一种类的抗体，一般通过杂交瘤细胞技术制得；多克隆抗体是指针对抗原上多个抗原决定簇产生的抗体，一般将抗原免疫动物血清直接制得。

对于一抗来说，现用单克隆抗体较多。

相对于一抗的特异性，二抗要求广谱抗体，最好能够一对多。

现在购买的二抗多是二抗加亲和素生物素的复合物，与传统二抗有所不同。

In most cases, there are actually several antibody-conjugates that would work well in a particular application and finding the best one requires comparing them side-by-side.The following information is provided to help you decide which secondary antibody may be best for your particular application:1.In what animal was the primary antibody developed?For example if your primary antibody is raised in a mouse, you will need ananti-mouse secondary antibody. If it is raised in a rabbit, for example A2066(rabbit anti-actin), you will need an anti-rabbit secondary antibody.2.What is the class and/or subclass of the primary antibody.This is primarily important in the case of monoclonal antibodies. Polyclonalantibodies (generally developed in rabbit, goat, sheep or donkey) are typicallyIgG class immunoglobulins. For this reason, the secondary antibodies for thesespecies will mainly be anti-IgG. Monoclonal antibodies (MAbs) are mostcommonly developed in mice and occasionally in rats. The class and subclass ofour monoclonals is indicated in the product listing. For example, if the primaryMab is mouse IgM, one would want a secondary antibody that reacts with mouseIgM (anti-Mouse IgM or anti-Mouse IgG (Fab)).If the primary monoclonal is one of the mouse IgG subclasses (IgG1, IgG2a,IgG2b, IgG3), almost any of our anti-mouse IgG secondary antibodies shouldbind to it. However, we offer different specificities to provide the end-user withoptions, especially for specific double labeling experiments. If the class and/orsubclass of the primary antibody is not known, the anti-Mouse IgG (Fab)secondary antibodies may be used since they recognize most mouseimmunoglobulin subtypes.You may experience difficulty when choosing a the best secondary anti-mouseor anti-human IgG. This is because there are many specificities to IgG. The important thing to remember is that light chains (kappa and lambda) of immunoglobulins are shared among all the immunoglobulin classes. That is, IgG, IgM, IgA, IgD and IgE all have either kappa or lambda light chains. The heavy chain (lambda for IgG, µ for IgM and alpha for IgA), however, is class specific. The following summarizes the specificities we offer:1.Polyvalent: react with all classes2.Fc and heavy-chain specific:react with heavy chains only,therefore, they are class specific (i.e. gamma chain specific reactsonly with IgG; µ chain specific reacts only with IgM, etc.)3.Fab and whole molecule (wm) specific:react with heavy andlight chains. Due to the light chain reactivity, they can react with allclasses.4.Light chain (kappa, lambda) specific:react with all classes,since all classes use the same kappa or lambda light chains.1.What form of antibody should be used?Most people prefer affinity isolated antibodies. These products are the most purified, and therefore, give the lowest amount of non-specific binding. However, in certain cases, IgG fractions may be considered. IgG fractions may have the benefit of containing very high affinity antibodies. Affinity isolation may remove some very high affinity antibodies because they bind so tightly to the affinity matrix that they are not eluted. Therefore, IgG fractions may be useful in situations where very high affinity is required, most commonly when the antigen of interest is rare or present in low abundance.2.What kind of label?The label is very application dependent. For immunoblotting and ELISA, enzyme-labeled secondary antibodies are the most popular. Peroxidase is economical, rapid and a more stable enzyme, in general, than alkaline phosphatase. Also, It has become very popular for use in chemiluminescent detection systems. Alkaline phosphatase on the other hand is considered more sensitive than peroxidase particularly when colorimetric detection is used. For cell or tissue staining, alkaline phosphatase, peroxidase or fluorescent secondary antibodies may be used for cytochemistry or histochemistry.Secondary antibodies labeled with a fluorochrome (FITC, phycoerythrin, and Quantum Red) may be used for flow cytometry.To generate increased amplification, a two-step biotin/avidin system may be used. Biotin binds with very high affinity to avidin resulting in an essentially irreversible interaction. A biotinylated secondary antibody is applied first, then avidin, ExtrAvidin. or streptavidin conjugated to an enzyme or fluorochrome binds to multiple sites on the biotinylated secondary antibody, thus amplifying the signal and resulting in greater sensitivity than that achieved with an antibody-enzyme or antibody-fluorochrome conjugate alone.3.Is there an appropriate adsorbed secondary antibody available?If working with human tissues, cells or proteins, choose a secondary antibody that has been adsorbed with human serum or human IgG. If working with bovine tissues, cells or proteins, choose a product that has been adsorbed with bovine serum or bovine IgG, etc. Using these products will reduce non-specific background4.Is a F(ab )2 fragment product necessary?If working with tissues or cells that have Fc receptors (thymus, spleen, blood, leukocytes, B cells etc.), choose an F(ab )2 fragment when possible to eliminate non-specific binding through Fc receptors present on cells.Alternatively, Fc receptors can be blocked. Perform an absorption step, using purified IgG from the host species of the your secondary antibody. In that case an F(ab)2 secondary antibody may not be necessary.5.If all else is equal, decide based on price/titer and availability.。

荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求，听起来好像很高大上，但其实也就是让我们的实验结果更清晰、更有说服力。

那么，我们该如何选择合适的一抗和二抗呢？接下来，就让我用简单易懂的语言给大家科普一下吧！我们要明确什么是一抗和二抗。

在荧光双染实验中，一抗就是用来检测我们想要研究的蛋白质的第一种抗体，而二抗则是用来检测我们想要研究的蛋白质的第二种抗体。

它们就像是我们的“眼睛”，帮助我们看清楚实验结果中的细节。

那么，如何选择合适的一抗和二抗呢？这里有两个基本要求：一是尽量选择特异性高、灵敏度高的抗体；二是尽量选择与我们想要研究的蛋白质结合良好的抗体。

下面，我分别给大家详细介绍一下这两个要求。

1. 尽量选择特异性高、灵敏度高的抗体特异性是指一抗只能识别我们想要研究的蛋白质，而不会误识别其他蛋白质。

灵敏度是指一抗能够检测到我们想要研究的蛋白质的能力。

这两个要求都很重要，因为如果一抗的特异性和灵敏度不高，那么我们的实验结果可能会被其他蛋白质的影响所干扰，从而导致结果不准确。

那么，如何判断一抗的特异性和灵敏度呢？这里给大家一个小技巧：可以先用一些已知特异性和灵敏度较高的一抗进行初步筛选，然后再根据我们的实验需求进行优化。

这样，我们就可以尽量选择到特异性高、灵敏度高的一抗了。

2. 尽量选择与我们想要研究的蛋白质结合良好的抗体结合良好意味着一抗能够与我们想要研究的蛋白质紧密地结合在一起，从而不会被其他蛋白质的影响所干扰。

这样，我们就可以更准确地检测到我们想要研究的蛋白质了。

那么，如何判断一抗与我们想要研究的蛋白质结合得好不好呢？这里也给大家一个小技巧：可以先用一些已知与目标蛋白结合良好的一抗进行初步筛选，然后再根据我们的实验需求进行优化。

这样，我们就可以尽量选择到与我们想要研究的蛋白质结合良好的一抗了。

当然啦，选择合适的一抗和二抗并不是一件容易的事情，需要我们不断地尝试和优化。

但是，只要我们遵循上述的基本要求，相信我们一定能够找到最适合我们的一抗和二抗的！荧光双染实验一抗和二抗的选择是非常重要的，它关系到我们的实验结果是否准确。

荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求荧光双染实验是一种常见的生物学研究方法，它可以用于观察细胞内某些蛋白质的分布情况。

在进行荧光双染实验时，一抗和二抗的选择是非常重要的，因为它们直接影响到实验结果的准确性和可靠性。

本文将从理论和实践两个方面，详细介绍荧光双染实验中一抗和二抗选择的基本要求。

一、一抗选择的基本要求1.1 特异性一抗是指与目标蛋白高度匹配的抗体，它能够特异性地结合目标蛋白，而不会与其他蛋白质发生反应。

在荧光双染实验中，一抗的选择应满足以下条件：(1)高度特异性：一抗应能与目标蛋白高度匹配，避免与背景蛋白产生干扰。

一般来说，一抗的亲和力越高、识别位点越精确，其特异性就越高。

(2)稳定性：一抗在实验过程中应保持稳定，不发生变性、失活等现象。

这有助于保证实验结果的可靠性和重复性。

1.2 灵敏度一抗的灵敏度是指其能够检测到的目标蛋白的数量。

在荧光双染实验中，灵敏度较高的一抗可以帮助我们更准确地定位目标蛋白的位置，从而提高实验的成功率。

1.3 检测范围一抗的选择还应考虑其检测范围。

有些一抗只能检测特定类型的蛋白质，而有些则具有较广的检测范围。

因此，在选择一抗时，应根据实验目的和需求，综合考虑其检测范围等因素。

二、二抗选择的基本要求2.1 特异性二抗是指与一抗相结合的抗体，它同样需要具备高度特异性，以避免与背景蛋白产生干扰。

一般来说，二抗的亲和力应低于一抗，以确保其不会影响到一抗的结合效果。

二抗的选择还应考虑其对目标蛋白的识别能力。

2.2 稳定性二抗在实验过程中也应保持稳定，避免发生变性、失活等现象。

这有助于保证实验结果的可靠性和重复性。

二抗的稳定性还会影响到其与一抗结合后形成的信号强度和持续时间，因此在选择时也需要充分考虑这一因素。

2.3 检测范围与一抗类似，二抗的选择也应考虑其检测范围。

有些二抗只能检测特定类型的蛋白质，而有些则具有较广的检测范围。

因此，在选择二抗时，应根据实验目的和需求，综合考虑其检测范围等因素。

Westernblot一抗和二抗的选择抗体分类：根据重链恒定区的血清学类型，可将抗体分为IgM，IgG，IgA，IgD，IgE 五类，它们的重链分别为mu, gamma, alpha, delta, epsilon链。

在上述每一类别中，按重链构造上的变异又可分为几个亚类，例如人的IgG可分为IgG1，IgG2，IgG3，IgG4四个亚类。

轻链分为两种类型，kappa链和lambda链，但每种抗体中只存在一种类型的轻链。

二抗：二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体，上面通常连有酶或荧光素等标签。

由于二抗所具备的优点使得其在免疫学实验中得以应用广泛，如western blot（通过与特异性抗体结合来鉴定蛋白质），ELISA（以耦联有酶的抗体或抗原为标记来检测特异性的蛋白质，尤其是相应的抗原或抗体），免疫组织化学（检测组织中的特异性抗原），免疫细胞化学（通过免疫学方法检测细胞的抗原组成），流式细胞术（通过检测激光所激发荧光来鉴定分离不同类型的细胞）及免疫沉淀（通过抗原与抗体的特异性结合作用来分离相应抗原）。

二抗针对某一特定物种（如小鼠）的所有抗体均具有特异性，因而使用标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记，大大节省了时间和费用；此外，一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子，从而使信号大大增强，提高了实验灵敏度。

二，如何选择二抗——根据一抗种属及类型选择合适的二抗广义上是指专门和进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，**捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。

检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：【一抗的种属来源】二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。

免疫组化应注意什么原则免疫组化是一种广泛应用于生命科学领域的实验技术，用于检测、定位和鉴定细胞、组织和生物分子中的特定抗原。

在进行免疫组化实验的过程中，需要注意以下原则：1. 选择合适的抗原修复方法：组织固定和包埋的过程会使细胞或组织中的抗原发生变性或不可逆变化，因此需要对抗原进行修复操作。

常用的抗原修复方法包括热修复、酶解修复和酸性修复等。

选择适当的抗原修复方法可以恢复抗原的免疫反应性，提高实验的准确性和可重复性。

2. 合理选择一抗和二抗：在免疫组化实验中，一抗是检测目标抗原的抗体，二抗是针对一抗产生的抗体。

合理选择适合的一抗和二抗对实验结果的准确性和特异性至关重要。

一抗的选择应考虑抗原亲和力、特异性和交叉反应性等因素。

二抗则应选择与一抗来源物种不同的抗体，以避免非特异性反应的干扰。

3. 控制染色反应的时间和条件：染色反应时间和条件的控制直接影响实验结果的准确性和可靠性。

染色反应时间过长可能导致背景染色过度，影响抗原的可视化观察；染色反应条件温度过高或过低可能导致抗体与抗原结合的非特异性结构破坏或抑制，影响染色反应的特异性。

4. 注意负对照和阳性对照的设置：负对照用于评估实验过程中非特异性反应的背景水平，通常使用未与一抗进行反应的样本作为负对照。

阳性对照则用于评估一抗和二抗的有效性和敏感性，通常使用已知含有目标抗原的样本作为阳性对照。

合理设置负对照和阳性对照可以帮助准确判断实验结果和消除可能的假阳性或假阴性结果的干扰。

5. 实验结果的观察和分析：免疫组化实验结果的观察和分析应充分考虑细胞或组织的形态特征和染色强度等信息。

观察时应留意光线和显微镜的调节，结合已有的形态学知识进行判断和分析，避免主观因素对结果的干扰。

6. 实验参数的优化和标准化：实验参数的优化和标准化对于免疫组化技术的准确性和可靠性至关重要。

通过合理优化实验参数，如抗体浓度、抗原修复时间和温度、染色剂浓度和反应时间等，可以提高实验结果的准确性和可重复性。

荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求大家好，今天我们来聊聊荧光双染实验中一抗和二抗的选择问题。

这个问题可大可小，关键在于选对了，实验才能顺利进行。

那么，如何挑选出最适合的一抗和二抗呢？别着急，我这里有几个小建议，希望能帮到大家。

我们来说说一抗的选择。

一抗，就是第一抗体，它的作用是识别并结合我们想要研究的特定抗原。

在荧光双染实验中，一抗的选择非常重要，因为它直接影响到后续实验的结果。

那么，如何挑选出最合适的一抗呢？这里给大家提供几个参考因素：1. 特异性：一抗要能够特异性地识别目标抗原，不能与其它抗原发生反应。

这样才能保证实验结果的准确性。

2. 灵敏度：一抗要有足够的灵敏度，能够在低浓度的抗原样本中检测到目标抗原。

这样才能满足实际应用的需求。

3. 稳定性：一抗要具有较好的稳定性，不易受到环境因素的影响而失去活性。

这样才能保证实验的重复性和可靠性。

4. 亲和力：一抗与抗原之间的亲和力要适中，既不能过于强烈地结合抗原，也不能太弱而无法识别目标抗原。

这样才能保证实验的可操作性。

接下来，我们来说说二抗的选择。

二抗，就是第二抗体，它的作用是与一抗结合，形成可见的荧光信号。

同样地，二抗的选择也非常重要，因为它会影响到最终的荧光信号强度和分布。

那么，如何挑选出最合适的二抗呢？这里给大家提供几个参考因素：1. 特异性：二抗要能够特异性地识别一抗结合的目标抗原，不能与其它抗原发生反应。

这样才能保证实验结果的准确性。

2. 灵敏度：二抗要有足够的灵敏度，能够在高浓度的一抗结合物中检测到目标抗原。

这样才能满足实际应用的需求。

3. 稳定性：二抗要具有较好的稳定性，不易受到环境因素的影响而失去活性。

这样才能保证实验的重复性和可靠性。

4. 亲和力：二抗与一抗结合后形成的复合物要具有适当的亲和力，既不能过于紧密地结合在一起，也不能太松散而无法形成稳定的荧光信号。

这样才能保证实验的可操作性。

在荧光双染实验中，一抗和二抗的选择是非常关键的。