专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数知识梳理1.选择培养基：在微生物学中，将允许的微生物生长，同时其他种类微生物生长的培养基。

（依据某些微生物对某些物质或环境条件的嗜好、抗性而设计，从众多微生物中分离所需的微生物。

）★利用选择培养基分离微生物通过控制培养基的，使营养缺陷型微生物不能正常生长：培养基可以分离自生固氮微生物；作为唯一碳源时，可以分离出能消除石油污染的微生物；筛选尿素分解菌时使用以为唯一氮源的培养基进行培养。

在完全培养基中加入加入可以分离出酵母菌和霉菌等真菌，同时抑制细菌的生长；加入高浓度的可以选择培养金黄色葡萄球菌。

改变微生物的。

在环境中培养可以得到耐高温的微生物；将培养基调至较低水平可以得到耐酸的微生物等。

鉴别培养基：依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中的特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计。

用于鉴别不同种类的微生物。

___________培养基可以鉴别大肠杆菌2.统计菌落数目： (1)常用方法：。

①原理：当样品的___________足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个_________。

通过统计平板上的___________来推测样品中大约含有的活菌数。

②实验计数要求：为了保证结果准确，一般选择菌落数在____________的平板进行计数。

③公式：每克样品中的菌株数= C：某稀释度下平板上生长的_________；V：涂布平板时所用的稀释液的_______(mL)； M：__________。

④误差：统计的菌落数比活菌的实际数目。

原因：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是。

(2)显微镜直接计数法①原理：利用或，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。

②误差：统计的菌落数比活菌的实际数目。

（不能区分细胞死活）3.实验流程：土壤取样→→微生物的培养与观察→细菌的计数(1)土壤取样：①取样原因：土壤有“微生物的___________”之称，同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量_____，种类_____。

专题2 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（选修1）来源：拇指教育作者：小茹1．(2011年松原高二检测)土壤中的细菌能分解尿素，是因为它们能合成一种() A．尿素酶B．脲酶C．蛋白酶D．肽酶解析：选B。

能够分解利用尿素的细菌，其细胞内含有脲酶，可以把尿素分解成氨，然后进一步利用。

2．在培养基中加入尿素(惟一氮源)，以分离出能分解尿素的细菌，这种加入尿素的培养基在功能上属于()A．选择培养基B．固体培养基C．液体培养基D．半固体培养基解析：选A。

选择培养基是从功能上对培养基进行分类的，B、C、D三项所述的培养基是根据培养基的物理状态进行分类的。

题述培养基能分离出以尿素为惟一氮源的细菌，故是一种选择培养基。

3．实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂平板上画3条等长的平行线(3条线均与图中的链霉素带接触)，将平板置于37 ℃条件下恒温培养3天，结果如图所示。

从实验结果分析，以下叙述不正确的是()[来源:21世纪教育网]A．链霉素能阻止结核菌的生长B．链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效C．链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效D．链霉素可以用于治疗伤寒病人解析：选D。

从图中可以看出，这是含有链霉素的选择培养基，接种的三种细菌中，霍乱菌和结核菌都可以被杀灭，并且链霉素对结核菌杀灭的有效程度大于霍乱菌，而伤寒菌照常生长不受影响，所以选项D错。

4．测定土壤中细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释，其原因是()A．细菌个体小，真菌个体大B．细菌易稀释，真菌不易稀释C．细菌在土壤中数量比真菌多D．随机的，没有原因解析：选C，土壤中的微生物大约70%～90%是细菌，真菌的数量要比细菌少。

样品的稀释度越高，在平板上生成的菌落数目就越少。

在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30～300之间，适于平板计数，所以细菌的稀释倍数要高于真菌的稀释倍数。

【土壤中分解尿素的细菌的分离和计数】一、研究思路1．筛选菌株尿素是一种重要的肥，农作物不能直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为和CO2，才能被植物利用，土壤中的这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成。

可以利用这一特点，将其从土壤中筛选出来。

(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于_____ _生长的条件(包括营养、、pH等)，同时____ _或其他微生物生长。

(2)选择培养基：在微生物学中，将允许的微生物生长，同时和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

2．统计菌落数目(1)常用来统计样品中数目的方法是__________ _______。

即当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中。

通过统计平板上的，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。

例如每克样品中的菌株数= ,C代表 ,V代表 ,M代表。

通常统计出的菌落数比活菌的实际数目。

这是因为。

因此，统计结果一般用而不是活菌数来表示。

(2) 也是测定微生物数量的常用方法。

(3)细菌的数目还可以通过法来测定。

例如，测定饮水中大肠杆菌的数量，可将的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现色，可以根据培养基上的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。

在该实验中至少应取___个水样。

3．设置对照(1)设置对照的主要目的是排除实验组中___________对实验结果的影响，提高实验结果的。

例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需用______________________________ 作为空白对照。

(2)对照实验是指除了的条件外，其他条件都的实验，其作用是比照实验组，排除任何其他可能原因的干扰，证明确实是所测试的条件引起相应的结果。

二、实验设计实验设计包括对实验方案，所需仪器、材料，用具和药品，具体的以及时间安排等的综合考虑和安排。

关于土壤中某样品细菌的分离与计数的实验操作步骤如下：1．土壤取样土壤微生物约70%～80%为，主要分布在距地表的近性土壤中。

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数研究思路（一）筛选菌株1、尿素是一种重要的氮肥，农作物（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为，这是因为细菌能合成。

2、PCR技术中使用的耐高温的酶是，它是从中分离出来的。

科学家能从中把筛选出来是因为，这样也适用于实验室中微生物的筛选，原理是_ 。

点评：生物适应一定环境，环境对生物具有作用。

所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。

〖本课题使用的培养基——见旁栏资料〗〖思考1〗在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是，提供氮源的的是，琼脂的作用是。

〖思考2〗该培养基对微生物（具有，不具有）选择作用。

如果具有，其选择机制是。

3、选择培养基是指特定种类的微生物生长，同时其他种类微生物生长的培养基（二）统计菌落数目1、在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是。

除此之外，也是测定微生物数量的常用方法。

【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。

公式：观察到的红细胞平均数∶观察到的细菌平均数＝红细胞含量∶细菌含量2、统计菌落数目的理论依据是：当样品的稀释度足够时，_ 。

通过统计，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

因此，恰当的是成功地统计菌落数目的关键。

3、．为保证统计结果准确，通常将都涂布在平板上，培养后再选择的平板进行计数。

4、在设计实验时，一定要涂布至少个平板作为重复组，才能增强实验的说服力和准确性。

在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果，结果，意味着操作有误，需要重新实验。

〖思考3〗统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是_ 〖思考4〗第位同学的结果接近真实值。

你认为这两位同学的实验需要改进的操作是第一位同学需；第二位同学_ 。

5、统计的菌落数比活菌的实际数目。

因为当两个或多个细胞时，平板上观察到的只是菌落。

因此，统计结果一般用来表示。

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、研究思路1．筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。

(2)选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。

2．统计菌落数目(1)活菌计数法：常用稀释涂布平板法。

①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。

通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

②计算公式：每克样品中的菌株数＝(C ÷V )×M 。

C ：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数。

V ：代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)。

M ：代表稀释倍数。

③统计方法：为了保证结果准确，一般设置3～5个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取其平均值。

.1.实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)同时抑制或阻止其他微生物的生长。

2．在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。

3．测定微生物数量的常用方法有活菌计数法和显微镜直接计数法。

稀释涂布平板法常用来统计活菌的数目，但统计结果往往比活菌的实际数目低。

4．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素作为唯一氮源的选择培养基分离能分解尿素的细菌。

5．鉴定分解尿素细菌的方法是在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，依据是否变红进行判断。

(2)显微镜直接计数法：在显微镜下直接观察和计数微生物的数量。

3．设置对照(1)对照实验：指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。

(2)主要目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

二、实验设计1．土壤取样从富含有机质、酸碱度接近中性且潮湿的土壤取样。