课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数理一理判一判1.选择培养基只允许特定的微生物生长，而抑制或阻止其他微生物的生长。
(√)2．稀释涂布平板法能分离细菌，也能计数。
(√)3．平板划线法只能纯化细菌，不能计数。
(√)4．从土壤中取样时，土层越浅越好。
(×)5．来自土壤的微生物稀释倍数越大越好。
(×)6．测定不同微生物数量时，接种的土壤悬浮液的稀释度相同。
(×)7．菌落特征是鉴别菌种的重要依据。
(√)8．以尿素为唯一氮源的培养基是选择培养基。
(√)9．可用含酚红指示剂的培养基对筛选出的尿素分解菌作进一步鉴定。
(√)悟一悟1.可利用分离对象对某种营养物质有“嗜好”的原理，专门在培养基中加入该营养物质，并且使该营养物质成为培养基中某类基本营养物质的唯一供给者，如筛选能分解尿素的细菌，就将尿素作为培养基中的唯一氮源。
2．可利用分离对象对某种抑菌物质的抗性，在混合培养物中加入该抑菌物质，经培养后，其他微生物生长受到抑制，而该分离对象却可大量增殖，在数量上占据优势。
3．显微镜直接计数法本身不能区分细菌的死活，因此一般用来统计总菌数。
但是，通过一定的辅助处理，可以实现活菌计数，如在计数前用台盼蓝染液进行染色，可以通过统计无色细胞的个数来进行活菌数的统计。
4．对照实验中除测试因素(自变量)不同外，其他因素要保证和实验组相同且适宜，并遵循单一变量原则。
5．在培养基制作和保存过程中，都易出现培养基被污染、样品被污染等情况，从而对实验结果造成影响，因此必须要设置空白对照或相互对照。
感悟体会：练一练1.[2019·平遥县第二中学高二月考]在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时，甲组实验用以尿素为唯一氮源的培养基，乙组实验的培养基中的氮源除尿素外还含硝酸盐，其他成分都相同，在相同条件下操作，培养观察，则乙组实验属于()A．空白对照B．条件对照C．相互对照D．标准对照解析：生物实验中的实验可以分为空白对照，条件对照，自身对照，相互对照等。
①空白对照是指不给予对照组任何处理的对照；②条件对照是指虽给对照组施以部分实验因素，但不是所要研究的处理因素；③自身对照是指对照和实验都在同一研究对象上进行。
④标准对照是指生物生理、生化的某些项目也都有相应的标准，将观察测定的实验数值与规定的标准值相比较，以确定其正常与否的对照方法。
理清题目中的实验的相关条件，分析对照实验的类型。
根据以上分析可知，乙组和甲组实验的培养条件不同，形成了条件对照。
综上所述，B正确，A、C、D错误。
答案：B2．[2019·新绛县第二中学高二月考]以下关于分解尿素的细菌的说法，正确的是()A．能分解尿素的原因是能合成分泌蛋白酶B．以尿素作为唯一的碳源C．环境中含有大量的尿素诱导该细菌产生了分解尿素的特性D．以尿素为唯一氮源且添加了酸碱缓冲剂的培养基培养该菌后不会使酚红指示剂变红解析：能分解尿素是因为可以分泌脲酶，A项错误；筛选分解尿素的细菌时以尿素为唯一氮源，B项错误；该细菌分解尿素的特性是基因控制的，C项错误；以尿素为唯一氮源的培养基中，只有能分解尿素的微生物可以生长，该微生物可以分泌脲酶，把尿素分解成氨，但由于酸碱缓冲液的存在，培养基的pH可以维持稳定，故不会使酚红指示剂变红，D项正确。
答案：D3．[2019·贵州省思南中学高二月考]分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是()①加尿素②不加尿素③加琼脂糖④不加琼脂糖⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦加硝酸盐⑧不加硝酸盐A．①③⑤⑦B．②④⑥⑧C．①③⑤⑧D．①④⑥⑦解析：分解尿素的细菌是异养微生物，因此培养基中应该加入有机碳源，如葡萄糖；分离分解尿素的细菌的培养基从功能上属于选择培养基，应该以尿素为唯一氮源；从物理性质上属于固体培养基，因此应加入凝固剂琼脂糖，①③⑤⑧正确；故选C 项。
答案：C考点1 实验原理1.[2019·贵州省铜仁第一中学高二期中]下列关于统计菌落数目的方法的叙述，正确的是()A．采用平板计数法获得的菌落数往往多于实际的活菌数B．当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落C．为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数D．采用平板划线法和稀释涂布平板法都可以对培养基中的菌落进行计数解析：平板划线法不能用于计数，用于计数的是稀释涂布平板法，A项错误；当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落，B项正确；为了保证结果准确，一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，C项错误；稀释涂布平板法又称活菌计数，是由一个单细胞繁殖形成单个菌落这一培养特征设计的计数方法，可对微生物进行计数，而平板划线法不能用于计数，D 项错误。
答案：B2．[2019·四川树德中学高二月考]在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应稀释倍数为106的培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。
产生A同学结果的原因可能有()①土样不同②培养基污染③操作失误④没有设置对照A．①②③④B．②③④C．①③④D．①②③解析：同一稀释浓度下菌落数不同，产生A同学结果的可能的原因可能是土样不同、培养基污染，或者操作失误，未达到相应的稀释倍数。
答案：D3．[2019·广西高二期末]用稀释涂布平板法测定同一土壤样品的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是()A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230B．涂布了两个平板，统计的菌落数分别是251和260，取平均值256C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212、256，取平均值163D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233解析：用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数时，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的进行记数，求其平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数。
答案：D考点2 实验设计4.[2019·四川高二期末]请选出分离土壤细菌的正确操作步骤()①土壤取样②称取10 g土壤，加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中③吸取0.1 mL进行平板涂布④将菌液依次稀释至101、102、103、104、105、106、107倍A．①→②→③→④B．①→③→②→④C．①→②→④→③D．①→④→②→③解析：分离纯化土壤微生物的正确的操作步骤：①土壤取样→②制备土壤溶液：称取10 g土壤，加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中→④制备土壤样品稀释液：将菌液依次稀释至101、102、103、104、105、106、107倍→③涂布平板分离：吸取0.1 mL进行平板涂布。
答案：C5．[2019·贵州省铜仁第一中学高二期中]下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验”的叙述，错误的是() A．该实验需要设置空白对照组，以检验培养基是否受到杂菌污染B．分解尿素的细菌能产生脲酶，脲酶能分解尿素产生氮气和CO2C．统计尿素分解菌的数目时，以菌落数在30～300以内的平板进行计数D．该实验所用培养基应以尿素作唯一氮源、并加有酚红指示剂鉴定尿素分解菌解析：该实验需要设置空白对照组，以检验培养基是否受到杂菌污染，A项正确；分解尿素的细菌能产生脲酶，将尿素分解为氨和CO2，B项错误；统计尿素分解菌的数目时，以菌落数在30～300以上的平板进行计数，求其平均值，C项正确；用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培养基培养尿素分解菌，指示剂变红，D项正确。
答案：B6．[2019·吉林白城一中高二月考]在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是()A．筛选出能分解尿素的细菌B．对分离的菌种作进一步鉴定C．作细菌的营养成分D．如指示剂变蓝就能准确地认定该菌能分解尿素解析：尿素分解菌可以产生脲酶将尿素分解分解为氨，使pH升高，培养基中加入酚红指示剂后，氨可以使指示剂呈红色，据此可以用酚红指示剂鉴别尿素分解菌。
答案：B7．[2019·湖北高二月考]可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是()A．以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂B．以尿素为唯一氮源的培养基中加入伊红—美蓝试剂C．以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂D．以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂解析：在以尿素为唯一氮源的培养基中，不能分解尿素获得氮源的细菌不能生长，而分解尿素的细菌能利用尿素作氮源，将尿素分解为氨，使pH升高。
若培养基中加入酚红指示剂，指示剂将变红，A项正确；伊红美蓝试剂是鉴定大肠杆菌的，不能分离出分解尿素的细菌，B项错误；苏丹III试剂是鉴定脂肪的，不能分离出分解尿素的细菌，C项错误；双缩脲试剂是鉴定蛋白质的，不能分离出分解尿素的细菌，D项错误。
故选A项。
答案：A8．人和哺乳动物的尿中含有尿素，环境中大量尿素的存在会造成污染。
土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。
某研究小组对土壤中的这类细菌进行分离，用以回收氮源，同时可净化环境。
请回答下列相关问题：(1)分离培养细菌时必须进行无菌操作。
配制培养基时，灭菌与调节pH的先后顺序是________。
(2)采用________________法将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养。
在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在________旁进行操作。
(3)用________________培养基筛选获得能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培养基属于________培养基。
若培养基中存在能分泌脲酶的细菌，其菌落周围会出现________，这是由于尿素被分解产生________，遇培养基中加入的酚红指示剂产生的颜色变化，从而证明这一菌株可以尿素为氮源。
变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力________。
解析：(1)配制培养基时，应先调pH，后灭菌，灭菌后再调节pH可能导致培养基的污染。
(2)将样液进行一系列的梯度稀释，应采用稀释涂布平板法接种，然后培养。
在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在酒精灯火焰旁进行操作，以避免污染杂菌。
(3)获得能分泌脲酶的细菌，可以用以尿素为唯一氮源的培养基筛选，从功能上划分该培养基属于选择培养基。
若培养基中存在能分泌脲酶的细菌，尿素被分解后产生氨，可以使培养基中加入的酚红指示剂产生红色，使菌落周围出现红色圆环，从而证明这一菌株可以尿素为氮源。
变色区域越大，表明该菌株分解的尿素越多，利用尿素的能力越强。
答案：(1)先调pH，后灭菌(2)稀释涂布平板酒精灯火焰(3)以尿素为唯一氮源选择红色圆环现象氨越强9．[2019·黑龙江大庆实验中学高二期末]某研究小组从牛的瘤胃中采集样本，进行分解尿素的微生物的分离与计数。
实验基本步骤如下，请回答下列问题：配制培养基→灭菌、倒平板→接种→培养→观察、统计(1)分解尿素的微生物含有________________，因此，配制培养基时以尿素作为唯一氮源，尿素会被分解成________使培养基的碱性增强。
