果酒有机酸含量的测定方法

高效液相色谱检测葡萄及葡萄酒中7种有机酸方法的建立沈 燕1，张正文1，刘兴凯1，王福成2，邵学东1*（1.君顶酒庄有限公司，山东烟台 265607；2.烟台市蓬莱区葡萄与葡萄酒产业发展服务中心，山东烟台 265699）摘 要：目的：建立了利用高效液相色谱测定葡萄及葡萄酒中7种有机酸的检测方法。

方法：色谱条件为Hi-Plex H色谱柱（300 mm×7.7 mm，8 μm），PL Hi-Plex H保护柱（50 mm×7.7 mm，8 μm）；紫外检测波长210 nm；流动相为0.006 mol·L-1的硫酸；流速0.6 mL·min-1；柱温55 ℃；进样量10 μL。

结果：草酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸、乳酸和乙酸出峰时间均在20 min以内；标准曲线线性关系良好，相关系数（R2）在0.999 9～1.000 0；检出限在0.031 4～0.722 3 mg·L-1；加标回收率在95.24%～102.04%，其相对标准偏差在0.16%～1.87%。

结论：该方法操作简单，检测时间短，具有较高的准确性和精确性。

关键词：有机酸；葡萄；葡萄酒；高效液相色谱；检测方法Establishment the Method of Seven Kinds of OrganicAcids in Grape and Wine by High Performance LiquidChromatographySHEN Yan1, ZHANG Zhengwen1, LIU Xingkai1, WANG Fucheng2, SHAO Xuedong1*(1.Junding Castle Co., Ltd., Yantai 265607, China; 2.Yantai Penglai District Grape and Wine Industry DevelopmentService Center, Yantai 265699, China)Abstract: Objective: To establish a HPLC method for the determination of 7 organic acids in grape and wine. Method: The chromatographic conditions were Hi-Plex H column (300 mm×7.7 mm, 8 μm) and PL Hi-Plex H protective column (50 mm×7.7 mm, 8 μm). UV detection wavelength 210 nm; sulfuric acid with 0.006 mol·L-1 mobile phase; flow rate 0.6 mL·min-1; column temperature 55 ℃. The sample size was 10 μL. Result: The peak time of oxalic acid, citric acid, tartaric acid, malic acid, succinic acid, lactic acid and acetic acid were all within 20 min. The standard curve has a good linear relationship with the correlation coefficient（R2） ranging from 0.999 9 to 1.000 0. The detection limit was 0.031 4～0.722 3 mg·L-1. The recoveries ranged from 95.24% to 102.04%, and the relative standard deviations ranged from 0.16% to 1.87%. Conclusion: The method is simple to operate, short detection time, and has high accuracy and accuracy.Keywords: organic acid; grape; wine; high performance liquid chromatography; detection method有机酸是葡萄果实及葡萄酒中体现风味的主要物质之一，其含量是衡量葡萄果实成熟度和品质的重要参数，在葡萄酒的酿造中发挥着关键作用，对酒的感官质量有一定的影响，与酒的物理化学以及微生物稳定性有着紧密联系[1-4]。

滴定检测葡萄酒有机酸过程的注意事项滴定分析是将已知准确浓度的标准溶液滴入被测物质的溶液中，直到加入的溶液物质的量刚好按化学计量关系反应完全，然后根据加入的标准溶液的浓度和消耗的体积计算出被测物质的含量的分析方法。

因为这种方法是基于测量溶液的体积，所以也称为容量分析法。

一、滴定分析法分类1.直接滴定法（酸碱滴定法）：凡能满足滴定分析要求的反应都可用标准滴定溶液直接滴定被测物质。

例如用NaOH标准滴定溶液可直接滴定HCl、H2SO4等试样。

2.返滴定法（配位滴定法）：返滴定法（又称回滴法）是在待测试液中准确加入适当过量的标准溶液，待反应完全后，再用另一种标准溶液返滴剩余的第一种标准溶液，从而测定待测组分的含量。

这种滴定方式主要用于滴定反应速度较慢或反应物是固体，加入符合计量关系的标准滴定溶液后，反应常常不能立即完成的情况。

例如，铝离子与EDTA（一种配位剂）溶液反应速度慢，不能直接滴定，可采用返滴定。

3.置换滴定法（氧化还原滴定法）：置换滴定法是先加入适当的试剂与待测组分定量反应，生成另一种可滴定的物质，再利用标准溶液滴定反应产物，然后由滴定剂的消耗量，反应生成的物质与待测组分等物质的量的关系计算出待测组分的含量。

这种滴定方式主要用于因滴定反应没有定量关系或伴有副反应而无法直接滴定的测定。

例如，用重铬酸钾标定硫代硫酸钠溶液的浓度时，就是以一定量的重铬酸钾在酸性溶液中与过量的KI作用，析出相当量的碘，以淀粉为指示剂，用硫代硫酸钠溶液滴定析出的碘，进而求得硫代硫酸钠溶液的浓度。

4.间接滴定(沉淀滴定):有些待测组分不能与滴定剂直接反应，但可通过其他化学反应间接测定其含量。

比如溶液中几乎不存在钙离子的氧化还原反应，而草酸钙沉淀是其与草酸根离子相互作用形成的。

过滤清洗后，加入硫酸溶解，用高锰酸钾标准滴定液滴定草酸根离子，从而间接测定钙离子含量。

滴定分析法的优点：操作简单；对仪器要求不高；有足够高的准确度，误差不高于0.2%；方便，快捷；便于普及与推广。

１１１ 前言葡萄酒中的有机酸主要包括酒石酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、乳酸等。

葡萄酒中的酸度主要由有机酸决定，有机酸的种类、浓度与葡萄酒的类型、品质优劣有很大关系，调节着酸碱的平衡，影响葡萄酒的口感、色泽及生物稳定性。

乙酸是葡萄酒酿造、储存过程的“晴雨表”，其含量过高表明已感染细菌病害，是管理不良的标志。

葡萄酒中有机酸和乙酸的测定一般采用化学分析法和纸色谱法，但样品处理复杂、准确度低、重现性差。

本研究提供了一种系统、准确地同时测定葡萄酒中有机酸和乙酸的ＨＰＬＣ法。

本文根据色谱柱的特点优化了分离条件，根据葡萄酒的特性进行了相应的预处理，得出了分离良好的色谱图，各组分相对标准偏差（ｎ＝５）为１．５％～３．３％，平均回收率９３．９％～９８．５％（ｎ＝５），达到了分析方法的要求。

２ 实验部分２．１ 仪器与试剂仪器：　６００Ｅ四元梯度泵（Ｗａｔｅｒｓ），　２４８７紫外检测器（Ｗａｔｅｒｓ），真空在线脱气机（Ｗａｔｅｒｓ），Ｋｃ－８１１柱，３２ＭＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍ液相色谱化学工作站（Ｗａｔｅｒｓ），Ｋｑ３２００超声波清洗仪（江苏昆山超声波仪器厂），ＰＨＳ－３Ｂ型ｐＨ计（上海雷磁仪器厂）试剂：二次蒸馏水、优级纯磷酸；色谱纯级基准样品：柠檬酸、Ｌ－苹果酸、酒石酸、琥珀酸、Ｌ－乳酸和乙酸。

２．２ 色谱条件色谱柱：３００×７．５ｍｍ　Ｂｉｏ－Ｒａｄ　ＨＰ×８７－Ｈ，９μｍ，流动相：０．１％的磷酸水溶液，流速：０．７ｍＬ／ｍｉｎ，柱温：５５℃，检测器波长：１９２ｎｍ，进样量：５μＬ２．３ 标样配制参考相关资料中有机酸及乙酸的含量，准确添加柠檬酸０．０５０５ｇ、苹果酸０．５２５２ｇ、酒石酸０．５０１４ｇ、琥珀酸０．３９４５ｇ、乳酸高效液相色谱法测定葡萄酒的有机酸及乙酸李小刚，张春娅，王树生，俞　然，张美玲，邢　凯（中法合营王朝葡萄酿酒有限公司 天津 ３００４０２）摘要：采用高效液相色谱法同时测定葡萄酒中的有机酸和乙酸。

葡萄酒中的多种有机酸的测定葡萄酒中的多种有机酸的测定摘要：建立了高效液相色谱法测定葡萄酒中的酒石酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、乳酸、乙酸、草酸等几种有机酸的方法。

采用C18柱别离，以磷酸盐为流动相，测定波长为214nm，回收率在88％～96％之间，相对标准偏差RSD%＜5。

方法简单易行，回收率及重复性较好，实用性突出。

关键词：高效液相色谱法；葡萄酒；有机酸有机酸的检测方法有很多种，主要有:酸碱滴定法、分光光度计法、酶法、薄层色谱法、气相色谱法、离子色谱法法、电泳法等，但是这些方法一般要进行预别离、衍生化等繁琐的前处理。

分光光度法是以有机酸和一些特定物质的反响为机理，能够生成在一定波长下有最大吸收峰的有色物质。

但该法易受其他物质的干扰，通常需要将提取液进行沉淀、离子交换树脂等前处理纯化，因此步骤繁冗。

酶法，虽然特异性较强，能够测定有机酸的构型，但是每次只能测定一种有机酸，比拟耗时。

气相色谱法的灵敏度和选择性相对较好，但是由于主要的短链有机酸是非挥发性酸，需要将有机酸衍生化，步骤较为繁琐，且常因为衍生化反响不易定量而直接影响测定结果的准确性【1】，因而使气相色谱法的应用受到限制。

高效液相色谱法是目前普遍采用的分析有机酸的方法，常用的是反相高效液相色谱法 3 结果与讨论3.1 样品前处理葡萄酒机体成分复杂，含有大量天然色素等组分，除糖之外，大局部在紫外区都有吸收，并且会在C18柱上有一定的保存，从保护色谱柱及提高别离效果的目的出发，从提高定量准确度的目的出发，都需要一定的前处理尽量去除这些杂质。

对现在较成熟的各种前处理方法进行实验。

大局部的资料都显示不需要前处理，直接稀释一定倍数直接测定。

本方法先将葡萄酒稀释十倍，再用高速离心机离心，效果较好。

3.2流动相成分的选择分别配制0.1mol/L磷酸二氢氨与0.1mol/L磷酸二氢钾，pH值调至3.0。

充分平衡色谱柱后，对混标进行分析，考察不用的盐溶液对混标别离度的影响。

高效液相色谱法测定黑莓汁和黑莓果酒中常见有机酸作者：梁红云王英董明盛来源：《江苏农业科学》2016年第07期摘要：采用高效液相色谱法测定黑莓汁和黑莓果酒中有机酸含量。

采用美国Agilent SB-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）为分析柱；流动相：0.5%（NH4）2HPO4-H3PO4缓冲液（磷酸调pH值为2.0）；温度：30 ℃；流速：1.0 mL/min；检测波长：214 nm；进样量：20 μL。

建立了检测黑莓果酒中主要的6种有机酸（酒石酸、L-苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、D-苹果酸）的高效液相色谱方法。

该方法的回收率为98.56%；RSD（相对标准偏差）为0.21%。

关键词：高效液相色谱法；黑莓汁；黑莓果酒；有机酸中图分类号： O657.7+2 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2016）07-0327-03黑莓（blackberry）属于蔷薇科（Rosaceae）悬钩子属小灌木Rubus laciniata的果实，是一种具有较强抗氧化能力的小浆果，美国农业部评价结果显示黑莓的抗氧化能力居第二位[1]。

黑莓除含有糖、多种有机酸、膳食纤维、维生素和矿物质外，还含有大量的多酚、花青素、鞣花酸等具有抗氧化功能的成分[2-4]。

我国黑莓的主栽品种有Hull、Chester、Boysen等，江苏、东北、贵州等地是我国主要的黑莓种植地区，总种植面积约1万hm2，全国黑莓年总产量约20万t。

黑莓果实柔嫩多汁，营养丰富，富含锌、硒等多种矿物质，氨基酸种类齐全，且花色苷和总酚含量较高，被誉为第三代“黄金水果”，所含有的多酚类化合物在体内发挥抗氧化作用，可以降低心脏病、癌症和其他慢性病的发生率[3-4]。

糖和有机酸是食品中重要的风味成分。

Türemi瘙塂等研究了9种黑莓的糖酸比，结果发现黑莓最高的糖酸比（可溶性固形物含量/总酸）为9.6[5]。

Wrolstad等采用气相色谱检测美国和英国多种黑莓中的有机酸，包括苹果酸、柠檬酸、莽草酸、异柠檬酸、奎宁酸和磷酸等，其中异柠檬酸是所有黑莓中含量最高的有机酸[6]。

高效液相色谱法测定葡萄酒中11种有机酸含量杨东伟;李晓静;王芬;李永库【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2013(041)003【摘要】建立了固相萃取-高效液相色谱光电二极管阵列检测法测定葡萄酒中草酸、乙酸、丙烯酸、琥珀酸、丙二酸、酒石酸、富马酸、柠檬酸、丙酸、苹果酸和乳酸11种有机酸的方法,并用此方法测定了市售的4种葡萄酒中11种有机酸的含量.试验采用HypersilC18柱(5μm,250 mm×4.6 mmi.d.)分离,以甲醇-0.5％磷酸为流动相,线性梯度洗脱,以保留时间和特征光谱对分离出的组分予以定性确证,用峰面积进行定量.结果表明,11种有机酸组分的质量浓度与其峰面积在一定的范围内有良好的线性关系,相关系数为0.996 2 ～0.9995,11种组分的平均回收率为85.5％～99.5％(相对标准偏差为1.2％～4.3％),检测限为0.4～2.5 mg/L.该方法简便、快速、灵敏,也适用于其他复杂体系中草酸等11种有机酸的成分分析.【总页数】3页(P1286-1287,1290)【作者】杨东伟;李晓静;王芬;李永库【作者单位】沈阳农业大学理学院,辽宁沈阳110161;中州大学实验中心,河南郑州450044;沈阳农业大学理学院,辽宁沈阳110161;沈阳农业大学理学院,辽宁沈阳110161【正文语种】中文【中图分类】S609.9【相关文献】1.高效液相色谱法测定葡萄酒中柠檬酸含量 [J], 张素娟2.毛细管电泳法测定葡萄酒中的有机酸含量 [J], 唐美华;屠春燕;薛亚芳;严励3.毛细管电泳-质谱联用法测定葡萄酒中8种有机酸含量 [J], 李永库;刘衣南;吕琳琳;李晓静;王芬4.超高效液相色谱法测定葡萄酒中柠檬酸含量的不确定度评定 [J], 袁辉;王建玲;远辉5.高效液相色谱法测定猕猴桃酒中4种有机酸含量 [J], 倪慧;李华佳;李可;尚雪娇;朱永清;郭壮因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。