临床标本细菌培养鉴定常见的15个疑问

微生物检验报告常见疑义解析徐州市第六人民医院检验科李继刚在临床上，常见的致病菌或条件致病菌有很多种类，根据对氧气的需求可以分为需氧菌、微需养菌、兼性需养菌、兼性厌氧菌、厌氧菌；根据对培养基的要求可以分为苛养菌和非苛养菌。

苛养菌对培养条件要求苛刻，例如流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌艰难梭菌等，非苛养菌对培养条件要求不高，一般实验室可以做到。

目前大多数实验室只能针对需氧菌中的非苛养菌进行培养、鉴定及药敏试验，这就引发了一系列的问题，例如细菌涂片镜检报告与细菌培养报告结果矛盾，细菌培养报告与临床不符等。

因此，我科微生物室工作人员特就这些问题做出解答，并提出一些解决方案。

1.问：临床经常发现脑膜炎疑似患者，而脑脊液培养结果常为阴性，为什么？答：引起脑膜炎的常见细菌为脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、大肠杆菌、结核杆菌等等，脑膜炎奈瑟菌的培养需要5%的二氧化碳和巧克力培养皿，流感嗜血杆菌需要特殊的营养因子，结核杆菌需要专用培养基，这些条件多数医院无法做到。

临床在采集脑脊液标本时，可以另外留取一部分做细菌、结核菌和真菌涂片检测，如果确实需要做培养，需要根据培养的种类另外交费，送外院检验，我们医院开展的是普通细菌培养。

2.问：临床常见的脓肿，抽出来的脓液常为恶臭味，但细菌培养结果为无细菌生长，为什么？答：脓肿的原因多种多样，有病毒、肿瘤、寄生虫等引起的无菌性坏死，也有真菌感染或自身免疫原因引起的坏死，但这些一般没有恶臭味，最常见的原因是细菌感染。

厌氧菌和苛养菌培养目前大多数实验室都没有条件开展，建议同时进行细菌涂片检验和细菌培养，如果细菌涂片阳性而细菌培养阴性，则为厌氧菌或其他苛养菌感染，如果细菌涂片阴性而细菌培养阳性，则为污染。

3.问：严重腹泻患者粪便培养大多数为阴性，为什么？答：正常粪便中的菌群多种多样，包括乳酸杆菌、双歧杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌、枯草杆菌、葡萄球菌、链球菌、肠杆菌、酵母菌等，其中主要为革兰阳性杆菌，占80%左右，其次为肠球菌。

痰标本临床通常将正常人喉以上部位称之为上呼吸道，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而气管以下包括气管、支气管和肺泡称下呼吸道，通常无菌或仅有少量细菌侵入。

在呼吸道标本细菌学检验中，上呼吸道标本（咽拭子）由于有正常菌群的存在，不易判断出何为与疾病有关的细菌，进行普通培养无特别意义《插入表上呼吸道存在的正常菌群》。

下呼吸道感染是最常见的呼吸道感染症，临床常取痰液标本进行细菌学检验，以明确感染病原及其药敏结果，有助于疾病治疗、流行病学调查和医院感染的监测。

痰标本须经上呼吸道排出，常受该处正常菌群的污染，因此，判断下呼吸道分泌物中是否有病原菌存在，须对上呼吸道的正常菌群有所了解。

上呼吸道的正常菌群有α、γ链球菌、微球菌、拟杆菌、梭杆菌、厌氧球菌、表皮葡萄球菌、奈瑟菌、嗜血杆菌、棒状杆菌。

标本的验收遇有不合格标本，应及时与临床联系，报告不合格标本拒收的具体理由。

拒收标准：a.肉眼观察痰标本呈水样或唾液样。

b.标本涂片白细胞数＜10/低倍镜和鳞状上皮细胞数＞25/低倍镜，表示该标本已污染正常菌群，建议重送标本。

c.容器错误标本容器必须符合规定，溢漏、无盖者拒收。

分离培养1．痰标本培养前处理（均质化）2．分离培养（1）一般细菌培养应同时划区接种（痰半定量原则）痰半定量方法：用接种坏将痰液在血平板和巧克力平板上作三区划线接种标本，进行培养。

痰半定量培养的临床意义三区划线法：首先用无菌棉签挑取痰液的脓或血性部分（或将接种坏通过火焰灭菌，冷却后挑取标本少许，尽量取有脓或血部分）然后将其涂布在平板第一区，并作数次划线，再在二、三区依次用接种环划线，每划一个区域，应将接种环烧灼一次，待冷却后再划下一区域。

1）血平板（5%CO2环境）适用于分离肺炎链球菌和其他细菌。

2）巧克力平板（5%CO2环境）适用于分离嗜血杆菌。

3）麦康凯/中国蓝平板（需氧环境）适用于分离革兰阴性杆菌。

（2）分离培养血平板和巧克力平板置5%CO2环境，麦康凯平板/中国兰平板置普通孵箱，35℃孵育。

临床医学检验：临床细菌学学习资料1、单选用于霍乱弧菌培养的选择性培养基是()A．SS琼脂B．麦康凯培养基C．LB琼脂D．蛋白胨水E．庆大霉素琼脂正确答案：E2、单选?患者王某某，男，36岁，有肺结（江南博哥）核病史，现持续性膀胱炎，经一般抗菌药物治疗后症状不缓解，怀疑为肾结核。

结核分枝杆菌培养最常用的固体培养基是()A．SS培养B．中国蓝培养基C．MAC培养基D．改良罗氏培养基E．巧克力琼脂正确答案：D3、单选与大肠埃希菌比较，伤寒沙门菌在糖发酵方面的主要差别是伤寒沙门菌不分解()A．葡萄糖B．乳糖C．蔗糖D．麦芽糖E．山梨醇正确答案：B4、问答题简述白喉毒素的致病与免疫机制。

正确答案：白喉棒状杆菌是白喉的病原菌，因患者咽喉部粘膜具有灰白色假膜而名。

传染源为患者和带菌者，以飞沫和玩具等为媒介传染，引起急性呼吸道传染。

本菌不侵人血液，在粘膜局部定植并产生白喉毒素，引起局部炎症和侵入血液形成毒血症，致全身中毒症状。

白喉毒素具有强烈细胞毒作用，可使局部粘膜上皮细胞产生炎症、渗出和坏死反应，渗出的纤维素和局部细菌、炎症细胞、坏死粘膜紧密结合在一起形成假膜，不易拭去。

若假膜延伸并脱落于气管，可致患者于疾病早期窒息死亡。

白喉毒素是一种酶原，经酶蛋白降解后，分成A、B两个多肽片段，B肽链无酶活性，有1个受体结合区和1个转位区，与易感细胞表面受体结合，显示其选择性亲和力；A肽链有酶活性，但不能单独侵入细胞；通常A肽链由B肽链携带，附着于细胞膜受体并转运入胞质内。

A肽链使细胞内延伸因子Ⅱ(EF-2)失活，易感细胞蛋白质合成障碍。

常见的易感细胞有心肌、外周神经、肝、肾、肾上腺等组织，可引起相应的临床症状。

免疫机理：人类对白喉毒素有一定耐受性，足量白喉毒素可激发机体产生充分的免疫应答，故病后可获得以体液免疫为主的牢固免疫力。

5、判断题葡萄糖氧化-发酵试验不能用于鉴别需氧菌和厌氧菌。

()正确答案：对6、单选结核分枝杆菌具有以下特征()A．细胞壁含有大量脂质B．生长缓慢C．专性需氧菌D．传染性免疫E．以上都是正确答案：E7、单选?如图所示为细菌的触酶试验结果，下列对于该图的描述正确的是()A．1和2均为触酶阳性B．1和2均为为触酶阴性C．1为触酶阴性，2为触酶阳性D．1为触酶阳性，2为触酶阴性E．要据细菌的菌落形态综合判断正确答案：D8、单选关于铜绿假单胞菌的培养特性，错误的是()A．需氧生长，生长温度范围广B．营养要求较高C．最适生长温度为35℃D．在血琼脂平板上产生透明溶血环E．能产生水溶性色素正确答案：B9、填空题副溶血性弧菌在含______NaCl的培养基上生长良好。

从临床标本分离、鉴定细菌的基本要领
1．重视标本送检申请单
标本送检申请单上通常均注明标本的来源及患者的主要临床情况，检验者应予以重视。

这样，可有目的的去检出病原菌，避免走弯道。

2．注意选择适宜的培养基
各种标本初分离应选用的培养基类别参见下表。

各种标本初分离细菌应选用的培养基
3．认真识别污染菌
在从标本中分离出细菌时，应特别注意区分是否是人体正常菌群成员。

并且要识别是否是污染菌，其识别法通常有以下几点：
（1）观察菌落是否在划线上。

（2）结合拟培养细菌的生长特点去对照判断（如菌落的形状、大小、边缘、透明度、湿润度、溶血现象等）。

（3）注意观察培养时间。

非致病菌与致病菌的生长速度不同。

例如布鲁菌与结核分枝杆菌生长缓慢。

（4）涂片染色检查，观察是否与目的菌一样。

值得提出的是机体的某些部位通常是无菌的，若检出细菌，应视为致病菌（如血液、骨髓、脑脊液等）。

临床上鉴定病原菌的流程
临床上鉴定病原菌的流程一般包括以下步骤：
1. 临床表现与病史：医生首先对患者的临床表现和病史进行详细的了解和分析，包括症状、体征和患病时间等。

2. 采集临床样本：医生根据患者的症状选择合适的临床样本进行采集，常见的样本包括血液、尿液、呼吸道分泌物、组织活检等。

3. 样本处理和预处理：采集到的样本需要进行处理和预处理，以去除干扰物质，并提高病原菌的浓度和纯度。

常见的预处理方法包括离心、滤液、稀释等。

4. 细菌培养：将处理后的样本接种到含有合适营养物的培养基上进行培养，以创造繁殖菌的适宜环境。

不同病原菌有不同的培养条件和时间，常见的培养方法包括血平板法、McConkey平板法等。

5. 菌落鉴定：根据菌落的外形、颜色、形态等特征进行初步鉴定，通常利用肉眼观察菌落的特征。

6. 生化试验：对初步鉴定的结果进行进一步确认，采用生化试剂进行特异性生化反应，通过观察反应结果来确定菌株的身份。

7. 抗生素敏感性试验：对鉴定出的病原菌株进行抗生素敏感性试验，确定其对不同抗生素的敏感性，以指导临床用药。

8. 分子生物学检测：对部分病原菌，尤其是难以培养或培养时间较长的病原菌，可以采用分子生物学方法进行检测，如PCR、DNA测序等。

9. 结果报告与解读：将实验结果整理并进行报告与解读，为临床医生提供指导性的诊疗意见。

需要注意的是，临床鉴定病原菌的流程会根据临床病情、样本类型、病原菌特性等因素有所差异，上述流程仅为一般步骤的参考。

《医学微生物学》临床常见病原菌的培养与鉴定病原菌的鉴定是将一个未知菌株按其生物学特征，经过与所有已知菌种进行比较后到一个已知菌种的分析过程。

根据感染特性选择合适的培养基，首先要明确被鉴定菌种已获得纯培养。

然后确定革兰氏染色性、形态，再按科、属、种逐步鉴定下来。

应该利用已具备的条件，尽可能地缩小鉴定范围，这是在作实验设计时必须想到的，要用最小数量的试验方法作出鉴定。

基于鉴定菌的特点，选用合适的鉴定体系，力求方法学简单，反应判断明确，价廉的方法。

血清学鉴定由于操作简便、快速、特异性高，给细菌学鉴定提供了快速诊断方法。

对培养困难的病原菌，可考虑应用基因水平的鉴定技术。

最后还要提示，对检测人员应把知识和经验运用到每一鉴定步骤。

【球菌】球菌主要引起化脓性炎症，故又称化脓性球菌。

包括葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌及淋病奈瑟菌等，根据革兰氏染色可将其分为两类，均无鞭毛和芽孢，少数可形成荚膜。

本实验要求了解化脓性球菌的形态特征及染色性、链球菌溶血素“O”试验；葡萄球菌、链球菌及奈瑟球菌的检验程序和主要的鉴定方法；肺炎链球菌Op—tochin敏感试验。

一、葡萄球菌属葡萄球菌属(Staphylococcus)的细菌常堆聚成葡萄串状。

能引起皮肤粘膜、多种组织器官的化脓性炎症，是最常见的化脓性球菌。

有的菌株还可引起食物中毒、烫伤样皮肤综合征、毒性休克综合征等，又是医院内交叉感染的重要传染源。

近年来，耐药性菌株逐年增多。

临床上首先要与其他革兰氏阳性球菌鉴别，然后再作属内种的鉴定及致病性的检测。

[材料]1．菌种：葡萄球菌培养物。

2．培养基：血琼脂平板，普通琼脂平板，甘露醇发酵管，氧化、发酵(OF)管，甲苯胺蓝核酸琼脂。

3．试剂：兔血浆、3％H2O2、致敏胶乳／红细胞制剂。

4．其他：革兰氏染液、玻片、一次性卡片。

[方法]1．形态学观察：取普通琼脂平板上葡萄球菌培养物少许，涂片，革兰氏染色，镜检。

可见到葡萄状排列的革兰氏阳性球菌。

浅谈临床微生物检验中存在的问题及改进措施临床微生物检验是诊断感染性疾病最为直接且有效的方式，但从微生物检验的实践结果来看，因受诸多的影响，导致微生物检验的质量不高，不能够为临床诊疗提供可靠的参考依据。

因此，为了提升微生物检验的质量，本文从分析问题，提出改进措施入手，进行如下分析。

一、微生物检验存在的问题1.人员素质、专业技能问题在基层医院，存在从事微生物检验的人员配备不足，专业技能欠佳的问题，一些医院甚至都没有专职的微生物检验人员。

加上该职业具有一定的暴露风险，使得很多检验人员不愿意从事这项事业，导致自身缺乏责任性。

这在一定程度上影响了微生物检验的专业性，影响了微生物检验流程的规范性，也影响了微生物检验的质量控制。

虽然，现在很多微生物检验依靠自动化仪器，但是每一个步骤仍需要检验人员以扎实的理论知识，专业的操作技能和经验丰富的判断能力，才能确保检验结果的准确，为临床诊断提供科学、客观的依据。

因此，检验人员的专业素养及责任心问题是微生物检验中非常重要的部分2.标本质量问题标本质量的高低是影响检验结果的直接因素，不合格的标本不仅不能准确的检验出患者的实际情况，还会增加误诊率，诱导医生错误诊治，从而增加医疗纠纷。

常见的导致标本质量不合格的原因包括：（1）检验前患者使用了抗生素，（2）采集标本时没有规范化操作，例如：没有做到正确的采集方式、没有严格遵守标本采集的时间、没有用规定的容器保存、没有合理使用防腐剂和抗凝剂、没有按照正确的标本采集量采集、没有在规定的时间内送检、标本运送或采集过程中受到污染等。

3.检验方案设计问题检验方案的设计对于微生物检验十分重要，其直接影响检出率的高低，例如：结核杆菌形态学检查中使用的染色法，有研究指出，荧光染色法和萋尼氏抗酸染色法的检出率有明显的差异性。

还有研究指出，在进行痰液标本采集后，选取直接涂片法、培养检查、集菌检查法和PCR检测，阳性检出率不同，其中以PCR的阳性检出率最高，但受实验室条件限制，大多数基层医院仍选取抗酸染色法和直接涂片法作为结核杆菌的常规检查法。

临床标本的细菌学鉴定实验报告临床标本的细菌学鉴定实验报告一、引言在临床医学中，细菌学鉴定是一项至关重要的实验。

通过对临床标本进行细菌学鉴定, 可以帮助医生准确诊断和治疗感染性疾病。

本实验报告将对临床标本的细菌学鉴定进行评估和讨论，旨在加深我们对该实验方法的理解，并提供有关细菌学鉴定的综合性知识。

二、细菌学鉴定的目的和意义细菌学鉴定作为一种直接、快速、可靠的诊断方法，对临床诊断和治疗起到重要作用。

细菌学鉴定的主要目的是准确确定临床标本中存在的细菌种类，以便为医生提供科学依据。

通过细菌学鉴定，我们能够了解细菌的形态、结构、生物学特性以及对药物的敏感性，从而指导医生选择合适的抗生素进行治疗。

三、细菌学鉴定的方法1. 标本采集：选择适当的临床标本，按照规范采集方法采集标本。

常见的标本包括血液、尿液、呼吸道分泌物等。

2. 标本处理：对采集的标本进行适当的处理，如培养、染色等。

培养可以通过将标本划取于培养基上进行，以便细菌在适宜环境下生长繁殖，从而进行进一步的鉴定。

3. 微生物学特性观察：观察培养基上出现的微生物种类及其生长情况。

根据细菌的形态、结构、染色特性等，可以初步鉴定细菌的属种。

4. 生理生化特性测试：通过一系列生化试剂和培养基，检测微生物的生理特性，如产气、产酸、氧需求等。

根据生化反应的结果，可以进一步缩小细菌的鉴定范围。

5. 抗生素敏感性测试：选取不同类型的抗生素，用其调配成不同浓度的药品，将细菌接种在含有不同药物的培养基上进行培养。

观察细菌的生长情况，以判断其对抗生素的敏感性。

四、个人观点和理解在细菌学鉴定实验中，我认为标本采集的规范性非常重要。

只有正确采集到具有代表性的标本，才能更准确地进行鉴定并提供有效的治疗建议。

由于抗生素耐药性的增加，抗生素敏感性测试也变得越来越重要。

通过该测试，我们可以为医生提供更精确的抗生素选择，避免不必要的药物使用和抗药性的进一步扩散。

总结回顾：本实验报告全面评估了临床标本的细菌学鉴定方法，并深入探讨了如何通过观察微生物学特性、生理生化特性和抗生素敏感性来鉴定细菌种类。

临床标本送检常见问题回答多重耐药菌的监测是感控专职人员的主要日常工作之一，除了对多耐患者进行常规的消毒隔离外按照药敏结果使用抗生素也是我们关注的问题，能否按药敏结果合理使用抗生素对于患者的预后也是非常重要。

但我们在多耐的监测中在涉及要求按药敏使用抗生素时有时候会受到主管医生的抗拒，里面牵扯很多大家心知肚明的问题。

但当主管医生说出自已的理由时，我们（大多感控专职人员非临床医生）有时候也不知道如何回答。

我举些例子，相信大家在监测中都会碰到这种情况：医生：为什么我用的A抗生素你们出的药敏结果里面没有做？下次让细菌室把A 药也给我做上。

专职人员：呃~~~~医生：你看我上次那个病人按药敏单里用了B药，但是就是没有效果，所以药敏结果不是太准，我还是经验用药吧。

专职人员：呃~~~~医生：我明明是取的脓液做培养，结果报无细菌生长，细菌室搞错了吧。

专职人员：呃~~~~本人在从事多耐监测的时候上述问题碰到过，有时候真无法解答，细菌室有自已的道理，临床有自已的道理，于是我就成了最无理取闹的人了。

机缘巧合，当我为这些问题非常困惑的时候有幸参加了一次培训，其中一位非常有名的微生物学教授的课让我豁然开朗。

现在我将这些整理下，分享给大家，希望也能让你豁然开朗，特别是刚从事多耐监测的兄弟姐妹。

问题一：临床想用的药物在药敏试验中没有做，是否能将所用的药都做药敏试验？答：试验的药物代表一类药，而不是一种药。

通过耐药机制和标志性药物可以预测同类抗菌药物的敏感性。

如碳氢酶希类抗生素亚胺培南、美罗培南、比阿培南等。

问题二：培养阳性的细菌都需要抗菌药物治疗吗？答：培养阳性≠感染，可能为污染（血培养），可能为定植（痰培养）；采集来源为无菌部位的标本更有临床意义。

感染部位的清创、引流、换药比使用抗菌药物更加重。

问题三：选择药敏报告敏感的药物，为什么临床治疗无效？答：体外药敏试验结果只能预测体内治疗效果，并不等同，一般来说，耐药＝治疗无效；敏感≠治疗有效；药敏结果中有些药物单独使用无效，但可以与其他药物联合使用。

细菌鉴定中应注意的问题细菌是自然界中数量最大、分布最广、种类最多的病原体，其不仅代谢活力强，繁殖也非常快，并且易于变异，这些特性使得临床进行细菌鉴定时面临着较大的困难。

虽然临床在微生物检验方面不断更新技术、采取各种质量控制措施，但细菌鉴定过程中依然存在许多问题，检验人员若是不加以注意，将很难获得正确的鉴定结果，自然也谈不上对患者病情的准确诊断和有效治疗。

本文试分析阐述细菌鉴定各个环节中应该注意的一些问题。

一、标本采集环节我国有超过8成的医院在细菌标本的采集上存在问题。

以痰液标本为例，大部分痰液标本不合格的原因都是标本中存在除了痰液之外的其他呼吸道分泌物，这些分泌物污染了痰液标本，使其达不到痰液标本要求的质量标准，检验人员不得不将不合格的标本打回，由采集人员再次采集标本，这不仅浪费时间，还会给患者带来不适。

再以尿液标本为例，临床检验要求尿液标本应为患者晨起后的新鲜中段尿，若是刚刚排出的尿液，容易受到膀胱、尿道下段等泌尿器官中其他菌群的污染。

此外，对于术后感染分泌物或外伤分泌物，应采集深部的分泌物，医院要求细菌常规培养不得检出厌氧菌，否则会影响对厌氧菌的诊断准确性，若是采集浅表位置的分泌物，标本将会与空气接触，进而被污染。

此外，细菌标本应确保采集足量，以免需要二次采集。

二、标本送检环节细菌鉴定结果不仅与标本采集质量有关，与送检环节是否合乎规范也有密切联系，送检的过程中若是保存的容器开放，与外界空气和微生物接触，将会导致标本被污染。

此外，尿液标本应在采集后尽快送交实验室进行检验，以免因为尿液营养丰富而在较长的时间内有细菌大量繁殖，导致鉴定结果出现偏差。

血液标本也要尽快送检，若是保存时间过长、保存环境温度过高，血液标本将有可能发生凝血、溶血、变质等问题，也会影响鉴定结果的准确性。

三、分离鉴定环节（一）分离培养环节在进行细菌的分离培养时，应该基于标本的来源、病原菌可能的类型来选择适合的孵育环境和培养基，若有特殊需要，还需要选择特殊的培养基。