下载文档原格式
痰标本临床通常将正常人喉以上部位称之为上呼吸道，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而气管以下包括气管、支气管和肺泡称下呼吸道，通常无菌或仅有少量细菌侵入。
在呼吸道标本细菌学检验中，上呼吸道标本（咽拭子）由于有正常菌群的存在，不易判断出何为与疾病有关的细菌，进行普通培养无特别意义《插入表上呼吸道存在的正常菌群》。
下呼吸道感染是最常见的呼吸道感染症，临床常取痰液标本进行细菌学检验，以明确感染病原及其药敏结果，有助于疾病治疗、流行病学调查和医院感染的监测。
痰标本须经上呼吸道排出，常受该处正常菌群的污染，因此，判断下呼吸道分泌物中是否有病原菌存在，须对上呼吸道的正常菌群有所了解。
上呼吸道的正常菌群有α、γ链球菌、微球菌、拟杆菌、梭杆菌、厌氧球菌、表皮葡萄球菌、奈瑟菌、嗜血杆菌、棒状杆菌。
标本的验收遇有不合格标本，应及时与临床联系，报告不合格标本拒收的具体理由。
拒收标准：a.肉眼观察痰标本呈水样或唾液样。
b.标本涂片白细胞数＜10/低倍镜和鳞状上皮细胞数＞25/低倍镜，表示该标本已污染正常菌群，建议重送标本。
c.容器错误标本容器必须符合规定，溢漏、无盖者拒收。
分离培养1．痰标本培养前处理（均质化）2．分离培养（1）一般细菌培养应同时划区接种（痰半定量原则）痰半定量方法：用接种坏将痰液在血平板和巧克力平板上作三区划线接种标本，进行培养。
痰半定量培养的临床意义三区划线法：首先用无菌棉签挑取痰液的脓或血性部分（或将接种坏通过火焰灭菌，冷却后挑取标本少许，尽量取有脓或血部分）然后将其涂布在平板第一区，并作数次划线，再在二、三区依次用接种环划线，每划一个区域，应将接种环烧灼一次，待冷却后再划下一区域。
1）血平板（5%CO2环境）适用于分离肺炎链球菌和其他细菌。
2）巧克力平板（5%CO2环境）适用于分离嗜血杆菌。
3）麦康凯/中国蓝平板（需氧环境）适用于分离革兰阴性杆菌。
（2）分离培养血平板和巧克力平板置5%CO2环境，麦康凯平板/中国兰平板置普通孵箱，35℃孵育。
临床微生物学检验的标本采集一、血液和骨髓细菌学检验标本的采集（一）适应症菌血症、败血症和感染性骨髓炎等感染菌的培养鉴定和药物敏感试验。
（二）病人准备1．凡怀疑菌血症和败血症的患者，采血培养时，应尽量在未使用抗菌素前采血，如已使用过抗菌素，应尽量选择抗菌素在体内浓度最低时采血，或在病人第二次使用抗菌素之前采集血培养标本。
2．应在病人发热期或寒颤时采集（三）标本采集1．血培养瓶领取：凭医嘱和检验申请单到检验科细菌室领取。
按照实际情况选择相应类型的血培养瓶：如灰色瓶盖为普通成人培养瓶；粉红色盖为儿童需氧菌培养瓶；紫色盖为厌氧菌培养瓶。
2．将患者信息录入相应的血培养瓶条码中，并在作好病人姓名、科别、床号等标识。
2．采集方法：严格消毒病人采血部位和血培养瓶口，抽一定量血液或骨髓后，无菌注入血培养瓶内，轻轻摇匀。
3．标本量：成人每次采血5~10ml，小儿采血3~5ml，骨髓2~3ml，采血量足够则阳性率高，反之阳性率减低。
（四）注意事项1．抽血、抽骨髓和接种时，须严格注意无菌操作，避免污染杂菌。
2．从抽血、抽骨髓到接种入瓶，动作要快，防止血液凝固。
3．成人不明原因发热、怀疑血流细菌感染时宜在不同部位抽血2套，每套2瓶（需氧、厌氧各一瓶）。
4．怀疑伤寒、亚急性细菌性心内膜炎及布鲁氏菌病的病人等，一般一日抽血三次培养，必要时需追加次数。
（五）标本送检和保存1．标本采集后应及时送检，一般不超过1h送交细菌室。
2．送检过程中应注意防止培养瓶打破或其它潜在性污染可能。
二、痰液或下呼吸道分泌物细菌学检验标本的采集（一）适应症肺炎、肺气肿、支气管炎、鼻窦炎、肺结核等感染菌的培养鉴定、药物敏感试验和抗酸菌检查。
（二）病人准备1．尽量在未使用抗菌素前留取标本。
准备好无菌标本容器，贴上条码、标明标识。
2．住院病人应留取清晨起床第一口痰。
为减少正常菌群的污染，嘱患者早上起床后用清水或生理盐水漱口，不要刷牙，除去鼻咽分泌物。
（三）标本采集1．一般病人用力咳出气管深处或肺部痰液，留于无菌标本容器内。
临床细菌常规检验方法1.样本收集：通常采用微生物标本采集套装，如采血培养瓶、骨髓培养瓶、尿培养瓶、分泌物培养瓶等。
不同类型的标本要按照不同的采集方法进行采集，以确保样本的纯度和无污染。
2.样本处理：在获得样本后，要进行适当的处理，如血液样本要进行离心分离，分离出红细胞和血浆/血清。
尿液样本要进行离心去除悬浊物等。
3.细菌培养：将已处理的样本分别接种到含有适当培养基的培养皿中，并在适当温度和湿度下培养一段时间。
通常常规培养采用的培养基包括血浆琼脂、麦康凯琼脂等。
培养时间通常为24-48小时，特殊细菌可能需要更长的培养时间。
4.细菌鉴定：对培养出的菌落进行初步的形态学鉴定，如观察菌落形状、大小、颜色等。
然后进行革兰染色，观察细菌的形态特征，如是否革兰阳性或革兰阴性。
根据初步鉴定的结果，可以选择进一步的生化试验或分子生物学检测，如氧化/发酵试验、羟基酸钠试验、目标序列扩增等。
最终确定细菌的种类和特征。
5.药敏试验：对已鉴定出的细菌进行药敏试验，以确定细菌对各类抗生素的敏感性。
药敏试验通常采用纸片扩散法或肉汤稀释法，通过观察菌落的生长抑制区域大小来判断细菌对抗生素的敏感程度。
6.结果分析和报告：根据细菌培养和鉴定的结果以及药敏试验的结果，进行结果分析和判断。
最后将结果整理成报告，提供给临床医生参考，帮助临床医生做出正确的诊断和治疗决策。
总的来说，临床细菌常规检验方法包括了样本收集、样本处理、细菌培养、细菌鉴定、药敏试验等步骤。
这些步骤的顺序和方法都有一定的规范和标准，以确保检验结果的准确性和可靠性。
临床细菌常规检验在临床诊断和治疗中起着重要的作用，可以帮助医生选择合适的抗生素治疗方案，提高治疗效果。
《医学微生物学》三大常规的微生物学检查从临床标本中分离细菌的目的是为疾病的病原学做诊断，或查找与疾病相关的微生物，以及对抗生素的敏感性，这对于临床诊断、治疗、预后和进行流行病学调查是很有价值的。
因此，对临床标本的处理和检测应掌握以下原则。
1．临床标本的正确采集和处理对于疾病的正确诊断关系很大。
病人标本一般应在应用抗菌药物前采集。
对血液、脑脊液或穿刺液等标本，应严格按照无菌技术进行采集；对鼻咽拭子、肛拭子、粪便等标本，虽无须严格无菌操作，但也应尽量避免杂菌混入。
2．采集容器上应贴好送检号及病人姓名的标签，连同检验单一起尽早送检验室。
若路途较远，应冷藏保存送检；对脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等特殊标本，送检时应35℃～37℃保温。
3．人体很多部位与外界相通，存在有正常菌群，但不致病，故在涂片检查或分离培养时，应区别标本中是常居菌群的污染还是致病菌。
另外，对某些无菌的部位，如血液、骨髓、脑脊液等，如检查出细菌应视为致病菌，但必须要排除采样及操作中的污染。
4．根据标本来源和可能存在的病原菌，选定各种分离培养基和孵育环境。
如痰标本一般选用血平板，用于化脓性链球菌、无乳链球菌、肺炎链球菌、白喉棒状杆菌等的分离。
【血液标本检查】正常人的血液是无菌的。
当细菌侵入血流并在其中生长繁殖，产生毒素等，可引起菌血症或败血症。
细菌学检验对其诊断和治疗具有极其重要的意义。
一、标本采集l．标本采集必须严格遵守无菌操作，即应去除皮肤上的细菌，又应注意空气中的细菌。
穿刺部位以碘酒、酒精棉球消毒，用干燥的灭菌注射器抽取血液，立即注入选定的液体培养基瓶内，充分混匀以防凝固。
2．采血一般应在治疗前，并在高热、寒战时作培养。
伤寒在发病一周内即菌血症期间采血；化脓性脑膜炎，鼠疫应在发热1～2d内采血；亚急性细菌性心内膜炎也宜于发热高峰采血或多次采血，且每隔1～2h采血一次，连续3～4次，可获较高的阳性率。
3．采血量应相当于培养液的1／10，通常是50ml培养液采血5ml，这样可使存在于血液中的补体、抗体、调理素、溶菌酶等抑制因子被稀释，使之减弱或失去抑制作用。
