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肿瘤细胞培养ppt课件

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肿瘤培训ppt课件

肿瘤培训ppt课件

组织学检查
穿刺活检、切取活检等 ，用于明确肿瘤的性质
和类型
鉴别诊断思路和方法
01
详细询问病史和仔细查 体，了解症状的特点和 变化规律
02
结合影像学和实验室检 查结果，分析肿瘤的可 能性和类型
03
排除其他相似疾病的可 能性，如炎症、结核等
04
对于难以确诊的病例， 可组织多学科会诊或寻 求上级医院的帮助
生物因素
某些病毒、细菌、寄生虫感染 与肿瘤发生相关，如EB病毒与 鼻咽癌、人乳头瘤病毒与宫颈 癌等。
生活习惯
不良生活习惯如吸烟、酗酒、 缺乏运动、不健康饮食等，增
加患癌风险。
免疫系统异常与肿瘤发生关系
免疫系统监视功能减弱
肿瘤免疫逃逸机制
免疫系统对异常细胞的识别和清除能 力下降，导致肿瘤细胞逃脱免疫监视 而生长。
肿瘤细胞具有自主性 生长、侵袭性和转移 性。
良性肿瘤与恶性肿瘤区别
01
02
03
组织分化程度
良性肿瘤分化好，异型性 小；恶性肿瘤分化差，异 型性大。
生长速度
良性肿瘤生长缓慢；恶性 肿瘤生长快。
生长方式
良性肿瘤多为膨胀性生长 ；恶性肿瘤多为浸润性或 外生性生长。
良性肿瘤与恶性肿瘤区别
继发改变
良性肿瘤很少发生坏死和出血；恶性肿瘤常发生坏死、出 血和溃疡形成。
术后护理与观察
加强术后护理，密切观察患者病情变化，及时发现并处理并发症 。
放化疗并发症应对策略
放化疗前评估
根据患者肿瘤类型和身体状况， 制定合适的放化疗方案。
放化疗中监测
密切关注患者放化疗反应，及时调 整治疗方案，减轻并发症。
放化疗后处理
针对可能出现的并发症，制定相应 处理措施，如抗感染治疗、营养支 持等。

肿瘤细胞培养

肿瘤细胞培养

和培养。
30
癌细胞系的建立
注意：
当肿瘤组织标本很小，不能用酶消化获取癌细
胞时，可以用组织块法进行原代培养。
癌组织中不可避免有已耗竭和坏死的细胞，在
酶消化前，应尽可能清除，以免接种后很快溶
解破坏，释放出影响癌细胞生长的有害物。
31
癌细胞系的建立
3、接种细胞
消化后制备的癌细胞，培养时应有足够的细胞
肿瘤细胞的培养
安徽医科大学微生物学教研室
1
内容纲要
肿瘤细胞体外培养的重要性和应用 体外培养肿瘤细胞的特征
肿瘤细胞系的建立
癌细胞系的建立
转化细胞系的建立
癌细胞系和转化细胞系的鉴定
2
一、肿瘤细胞体外培养的重要性和应用
肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置，当前
建立的细胞系中癌细胞系是最多的。

用Hanks洗涤处理一次后，更换新培养液，继续培养，
可获纯净肿瘤细胞。如成纤维细胞未被除净，可再次 重复。
38
癌细胞系的建立
（5）其它方法
聚丙烯酰胺抑制成纤维细胞生长 密度梯度离心等

39
癌细胞系的建立
5、选择性培养基
选择性培养基是针对特殊细胞生长的营养要求
设计的。
在癌细胞建系中，选择性培养基的应用是提高
9
1、形态
培养中癌细胞无光学显微镜下特异形态，大多
数镜下观察比二倍体细胞清晰，核膜、核仁轮 廓明显，核浆比例大。
电镜观察癌细胞表面的微绒毛多而细密，微丝
走行不如正常细胞规则。
10
2、生长增殖（不受控增殖性）
失去接触抑制，细胞能相互重叠向三维空间发展，
形成堆积物。

肿瘤基本知识培训ppt课件

肿瘤基本知识培训ppt课件
持续数天、数周甚至数月 间隙性方案：疗程之间间隔1、2、3或4周
肿瘤基本知识
24
化疗的周期
l 从注射化疗药物的第1天算起，至21天或28天，即 3-4周称之为一个周期。
l 在一个周期中不是每天都用化疗药，通常是前1~ 2周用药，后1~2周休息，其目的是使病人得以短 时休整，待骨髓功能恢复正常水平，但有的化疗 药物抑制骨髓的时间较迟，恢复较慢，所以个别 方案需6周才算一个周期。
一般状况
90-100
正常生活，完全不受限制
70-80
剧烈活动受限，无需卧床
50-60 无需卧床,生活可自理,不能工
作，占非睡眠时间50%以上
30-40 生活自理受限,非睡眠时间的50%以
上卧床或半卧床
4
10-20
全丧失活动能力；生活不能自理
肿瘤基本知识
30
常用简写
静脉注射(iv) 腹腔注射(ip) 皮下注射(sc) 肌肉注射(im)
跃式转移；当淋巴引流受阻，肿瘤细胞还可以通过侧枝循
环形成逆行或交叉转移。
血道转移 癌细胞侵入血管，沿血流到达远处器官继
续生长，形成转移灶的过程，称为血道转移。
种植性转移 有些内脏肿瘤侵入脏器浆膜面后瘤细胞脱
落，黏附邻近器官的表面继续生长，形成转移病灶，这成
为种植性转移。
肿瘤基本知识
13
肿瘤的临床表现
l 髓样癌： 质地软，好发于乳腺、胃、甲状腺
l 畸胎瘤： 主要来源于性腺，卵巢、子宫
l 黑色素瘤： 产生黑色素的高度恶性肿瘤。多见 30岁以上成年人，好发于面部、外阴及肛周。 预后灰常差。
肿瘤基本知识
7
肿瘤的一般类型
l 良性和恶性肿瘤 恶性肿瘤：细胞在组织学分化程度与起源组织有

外科学教学-肿瘤PPT课件

外科学教学-肿瘤PPT课件
病因研究
研究肿瘤的发病原因，为预防和控制肿瘤提供科学依据。
干预研究
通过干预措施，评估预防和控制肿瘤的效果，为制定有效的预防 策略提供依据。
05
肿瘤病例分享与讨论
病例一：肺癌的诊断与治疗
诊断方法
肺癌的诊断通常采用影像学检查、内 窥镜检查和病理学检查等方法，其中 病理学检查是确诊肺癌的金标准。
治疗方法
中晚期症状
随着肿瘤的发展，症状逐 渐加重，可能出现全身症 状，如消瘦、乏力、发热 等。
体征
肿瘤体征主要包括肿块、 溃疡、结节等，不同部位 肿瘤的体征也有所不同。
02
肿瘤的诊断
肿瘤的病理诊断
肿瘤的病理诊断是确诊肿瘤性质的金标准，通过组织病理学检查，可以确定肿瘤的 良恶性、组织来源和分化程度。
病理诊断的方法包括活检、细胞学检查和术中冰冻切片检查等，其中活检是最常用 和可靠的方法。
瘤的目的。
靶向治疗
利用针对特定基因或蛋白质的药 物，对肿瘤进行精确打击，提高
治疗效果。
免疫治疗
通过调节人体免疫系统，增强其 对肿瘤细胞的识别和攻击能力。
肿瘤的放疗与化疗
放疗
利用放射线对肿瘤进行照射，破坏肿瘤细胞的DNA，抑制其生长 和繁殖。
化疗
通过全身或局部注射化学药物，对肿瘤进行广泛的治疗。
放疗与化疗的联合治疗
肿瘤的发病机制
01
02
03
基因突变
肿瘤的发生与基因突变密 切相关，基因突变可以导 致细胞生长失控，形成肿 瘤。
免疫逃逸
肿瘤细胞可以通过多种机 制逃避免疫系统的识别和 攻击，从而在体内生长和 扩散。
慢性炎症
慢性炎症可以刺激组织细 胞发生异常增生，增加肿 瘤发生的风险。

第三课-肿瘤ppt课件

第三课-肿瘤ppt课件
（2）核的多形性 瘤细胞核的大小，形态，染色不一致
a、细胞核体积增大 b、核大小、形态、数目不一 c、核染色质凝集成块，分布不均 d、核仁肥大、数目增多。 e、核分裂像多，病理性核分裂像， （3）胞浆的改变
嗜碱性，染色偏兰。
第四节 肿瘤的生长与扩散
一、肿瘤的生长 1、肿瘤的生长速度 2、肿瘤的生长方式，如下三种： （1）膨胀性生长(expansile growth) （2）浸润性生长(invasive growth) （3）外生性生长(exophytic growth)
1、结缔组织染色法
区分肌纤维和胶原纤维 Van Gieson、Masso
网织纤维 银染色
弹力纤维 Schmorl染色
2、组织细胞中特殊成分染色
显示糖原和粘液
PAS
显示脂肪 油红O、苏丹III
骨髓增生性疾病
Giemsa
显示神经内分泌细胞
浸银染色
（二）肿瘤标记物(tumor marker) 由肿瘤细胞产生、与肿瘤的性质相关的物质，这些物质存在于肿瘤细胞或体液中，
肿瘤
tumor
第一节 肿瘤的概念 一、定义
肿瘤是机体的细胞异常增殖形成的新生物 ,表现为局部肿块。
在各种致瘤因素的作用下，局部组织的细 胞在基因水平上失去对其生长和分化的正常 调控，导致克隆性异常增生而形成的新生物
tumor 拉丁语 neoplasm 希腊语
二、特点： 正常细胞转化而来的 成体干细胞/祖细胞
分期：描述肿瘤的生长范围和播散程度
根据肿瘤大小及浸润深度（T），范围
淋巴结转移情况（N），远处脏器转移 情况（M），TNM分期，要结合临床综 合考虑。
第五节 肿瘤对机体的影响
一、良性肿瘤 对机体的影响小，局部压迫和阻塞 内分泌腺的良性肿瘤

肿瘤培训ppt课件

肿瘤培训ppt课件
4பைடு நூலகம்
医疗机构报告过程
❖ 1、医院门诊部、住院部、肿瘤诊断有关科室（病理、检验 、内窥镜、放射、超声波、同位素）的医生对当日确诊的肿 瘤病例（户籍在收集范围内）及时填写肿瘤报告卡，并在患 者病历上注明“肿瘤已报”。
❖ 2、有关各科设专人负责每日肿瘤报告卡的收集、整理和质 量检查，在科内登记后送交院内疾病报告部门（保健科、公 共卫生科、信息科等）的肿瘤报告负责人。
ICD-10 编码：＿＿（上系统后填） ❖ ICD-O-3编码：＿＿门诊号：＿＿住院号：＿
❖ 身份证号：□□□□□□□□□□□□□□□□□□（必填 项目）
❖ 患者姓名：＿＿（与身份证一致）性别：男 □ 女 □ （必勾）
❖ 实足年龄：＿＿岁 （“实足年龄”即诊断时的年龄。可通过 以肿瘤确诊日期减去出生日期得到诊断时的实足年龄。在
❖ 病理学类型：＿＿＿（详细标明癌细胞的形态学名 称及分化程度，如高分化的鳞状细胞癌，梭形细 胞。） ＿ 病理号：
❖ （如果是继发肿瘤请尽可能注明原发部位） ❖ 确诊时期别：T＿ N＿ M＿ ❖ 临床分期： 0-Ⅰ期 Ⅱ期 Ⅲ期 Ⅳ期
10
❖ 首次诊断日期：＿＿＿年＿＿月＿＿日（第 一次就诊或确诊时诊断的时间）
肿瘤知识培训
慢 病科
1
目的
❖ （一）建立我县肿瘤新发病例监测系统； ❖ （二）了解我县高、中、低发地区的肿瘤新
发病例的流行趋势和分布特征； ❖ （三）评价和考核肿瘤防治效果； ❖ （四）为肿瘤病因和防治研究提供基础资料
和线索。
2
工作内容及要求
❖ （一）填报单位 填写肿瘤发病报告卡单位 为全县各级医疗卫生单位，包括县级综合医 院、专科医院，企业医院，镇卫生院，村卫 生室。

肿瘤细胞生物学完整版PPT课件

肿瘤细胞生物学完整版PPT课件

二.自然疗法
导肿瘤细胞趋向终末分化， 恢复细胞正常功能。
负离子不仅对癌症有良好改善效果，而且还可从根本 上预防癌症的发生，是一种标本兼治的进行 的治疗方式。
放射治疗简称放疗，它是利用高能电磁辐射线作用于 生命体，使生物分子结构改变，达到破坏癌细胞目的
七.生物反应调节剂治疗
的一种治疗方法。
这一类物质主要通过免疫系
四.化学治疗
统直接或间接增强机体的抗 免疫效应
化学疗法是将药物经血管带到全身，对身体所有细胞
都有影响。这种疗法有时也称为“胞毒疗法”，因 为
所用药物都是有害，甚至是带毒性的，体内细胞，无
9论是否恶性细胞，都受到破坏。 上一页 下一页 封 面 封 底
大致分为五类： •癌胚蛋白 •肿瘤抗原 •酶类标志物 •激素 •血浆蛋白
5
上一页 下一页 封 面 封 底
食道癌
胃癌
6
上一页 下一页 封 面 封 底
鼻咽癌
肺癌
7
上一页 下一页 封 面 封 底
大肠癌
肝 癌
8
上一页 下一页 封 面 封 底
一.手术治疗
五.细胞分化治疗
通常包括根治性手术，姑息性手术，探查性手术。 在分化诱导剂的作用下，诱
迁移性上一页下一页?核形态不一并可出现巨核双核或者多核现象?线粒体表现为不同的多形性肿胀增生?细胞骨架紊乱某些成分减少骨架组装不正常?细胞形态大小不一上一页下一页上一页下一页55肿瘤标志物tumormarker是反映肿瘤存在的化学类物质
——————PBL讨论
肿瘤（Tumor） 是机体在各种致癌因素作用下，局部 组织的某一个细胞在基因水平上失去对其生长的正常 调控，导致其克隆性异常增生而形成的异常病变。学 界一般将肿瘤分为良性和恶性两大类。

《肿瘤及免疫细胞课件(含PPT)》

《肿瘤及免疫细胞课件(含PPT)》

癌症的分型
癌症可以被分为不同类型，如乳腺癌、肺癌和结直肠癌。理解各种癌症的分类有助于制定更有效的治疗策略和预防 措施。
癌症的发病原因
癌症的发病原因多种多样，包括遗传因素、环境暴露和生活方式等。通过了 解这些因素，我们可以采取相应的措施来降低患癌风险。
癌症的预防
预防是管理癌症最重要的措施之一。通过健康的生活方式、预防接种和定期 筛查，我们可以有效减少癌症的发病率。
肿瘤及免疫细胞课件（含 PPT）
探索肿瘤及免疫细胞的奥秘。通过本课件，了解癌症的发病原因、预防方法 以及各种治疗手段，包括化学治疗、放射治疗、手术治疗和免疫治疗。
什么是癌症
癌症是一种复杂而多样化的疾病，它由异常增殖的细胞组成，会不断侵袭身 体的健康组织。通过探索其形成原因，可以更好地了解它的特点。
癌症的早期诊断
早期诊断对于癌症患者的治疗和康复至关重要。通过了解早期诊断的方法和 技术，可以提高治疗的成功率和患者本原则是个体化治疗。了解各种治疗手段，如化学治疗、放射治疗、手术治疗和免疫治疗，有助于选 择最合适的治疗方案。
化学治疗
化学治疗使用化学药物来杀死癌细胞。这是一种常见的治疗方法，但也会产生一些副作用。了解化学治疗的原理和 应用范围，可以帮助患者做出明智的决策。

肿瘤(病理学) ppt课件

肿瘤(病理学) ppt课件

▪ 3.胞浆呈嗜碱性
ppt课件
24
ppt课件
25
三、肿瘤细胞的代谢特点
▪ 1.糖代谢—糖酵解为主
▪ 2.蛋白质代谢—合成多于分解,合成肿瘤蛋 白
▪ ①掠夺正常细胞蛋白致恶液(病)质 ▪ ②肿瘤相关抗原 ▪ 3.核酸代谢—DNA、RNA合成代谢增强 ▪ 4.酶系统改变—酶含量与活性改变 ▪ 肝癌—碱性磷酸酶增加和AFP(+)骨肉瘤—碱
ppt课件
20
纤维组织 纤维瘤 纤维肉瘤
ppt课件
21
▪ （二）肿瘤细胞的异型性
▪ 1.肿瘤细胞的多形性 恶性肿瘤细胞一般比来源 细胞大，且大小不一,形 态各异,有瘤巨细胞。
▪
ppt课瘤件细胞排列紊乱，层次增多
22
正常核分裂像
ppt课件
23
▪ 2.核的多形性
▪ 核大、可出现双核、多核、分叶核、巨核、 奇异核、核大小不一，核染色质粗颗粒状、核染 色加深、核膜增厚、核仁增大、数目增多，有病 理性核分裂(如不对称核分裂、三极、四级核分 裂)，核浆比例增大接近1:1(正常1:4至1:6)
▪ 部位：腺、柱、立上皮
▪ 类型：①囊腺瘤②纤维腺瘤
▪
③多形性腺瘤④息肉状腺瘤
乳腺 纤维 腺瘤
ppt课件
58
▪ （二）恶性上皮性肿瘤 ▪ 1.鳞状细胞癌 ▪ 部位：原有鳞状上皮覆盖部位皮肤、 ▪ 唇、喉、子宫颈、阴道、食管、阴茎及鳞 ▪ 化上皮等 ▪ 大体---菜花，溃疡。 ▪ 镜下---巢状 条索状 间、实质清楚 ▪ 2.腺上皮癌 ▪ 胃肠 胆囊 子宫体 ▪ 大小、形状不一，腺样、细胞排列紊乱
肉瘤多见 肝 肺多见
原发瘤 血管
转移瘤
V/Cap) 肺、肝

细胞培养PPT

细胞培养PPT

长需要。
整理版ppt
34
人工合成培养基只能维持细胞生存，
要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量
的天然培养基（如血清）。
整理版ppt
35
血清中含有：
①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等） ②多种金属离子 ； ③激素；
④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。 ⑤各种生长因子 ⑥转移蛋白 ⑦不明成分
1悬浮生长细胞传代
离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新培养
液后再混匀传代。
直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除l／
2一2／3，然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。
2 半悬浮生长细胞传代（Hela细胞）
此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹
打法使纫胞从瓶壁脱落下来，进行传代。
整理版ppt
20
滤器
整理版ppt
21
整理版ppt
22
CO2培养箱
CO2培养箱设定的条件为37 ℃ ，5％CO2 。 使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题：
①用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖 微松，以保证通气。
②保持培养箱内空气干净。定期消毒
（90 ℃ ，14 h)。
③箱内火菌蒸馏水3000毫升蒸馏水槽中 以保持箱内湿度，避兔培养液蒸发。
在生长因子、蛋白质工程、基因表达调控等研究领域，迫切需要 用无血清培养基培养细胞．
整理版ppt
37
无血清培养基的主要研制策略：在基础培养基中补充各种必需因 子，如激素、生长因子 、结合蛋白 、贴壁和扩展因子 等。
无血清培养基由基础培养基和替代血清的补充成分组成。
1975年，Sato首次成功地用无血清培养基培养了垂体细胞株，近 20多年来已报道了几十种细胞系在无血清培养基中成功地生长和 增殖。
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肿瘤细胞培养
4
一、肿瘤细胞培养技术
2、分离
剪切分离法:在进行组织块移植培养时，可以采用剪切发，即将组织剪或 切成小块然后分离培养。
步骤：1、首先将经修整和冲洗过的组织块放入小烧杯中，用剪刀反复剪 切组织至似糊状。
2、用吸管吸取缓冲液或无血清培养液加入烧杯中，反复轻轻吹打， 低速离心去上清剩下的组织小块即可用于培养。
步骤：1、按消化分离法收获细胞。 2、待组织已分散成细胞团或单个细胞，则终止消化，过筛200目 过掉组织块，大块组织继续消化。 3、收集过滤消化液离心1000rpm/min，5min，去上清加含血清 培养液，轻轻吹打形成细胞悬液，计数后接种到培养瓶，置 CO2培养箱培养。
肿瘤细胞培养
10
二、肿瘤细胞的培养
1、取材修剪冲洗 2、剪成1mm3小块 3、移入培养瓶 4、分布组织小块间距5cm 5、翻转培养瓶并加入适量培养液，
37℃静置2-4h 6、翻正培养瓶进行培养 7、原代细胞生长
肿瘤细胞培养
9
二、肿瘤细胞的培养
1、原代培养
这种方法采用前述的组织消化分散法，将妨碍细胞生长的细胞间质包括基质、纤维等 去除，使细胞分散，形成悬液，易于从外界吸收养分和排出代谢产物，可以很快得到 大量活细胞，细胞也可能在短时间内生长成片。适用于培养大量组织，原代细胞产量 高；但步骤繁琐、易污染，一些消化酶价格昂贵，实验成本高。
肿瘤细胞的培养
肿瘤细胞培养
1
一、肿瘤细胞培养技术 二、肿瘤细胞的培养 三、体外培养肿瘤细胞的生物学检测 四、肿瘤细胞的冻存、复苏与运输 五、总结
肿瘤细胞培养
2
一、肿瘤细胞培养技术
1、取材
肿瘤细胞培养材料主要来源于外科手术或活检的瘤组织。取材部位非常重要体积较大的肿 瘤组织中央常有退变或坏死区，取材时应去掉坏死组织，故应去瘤体的周围瘤组织做培养， 癌性转移的淋巴结或癌性胸腹水是较好的培养材料。取材后应尽快进行培养，如因故不能 立即培养，可按正常组织储存方法保存，将组织剪成1mm3左右的小块，放入培养液中， 置4℃保存，但存放时间不宜超过24h。取材时应注意无菌操作。
热 消
3、过筛200目
化
4、必要时重复
5、加入胰蛋白酶冷消化6-24h
冷
6、沉淀去上清
消 化
7、加新的胰蛋白酶37℃消化30min 8、过筛
9、离心去上清
共 10、加入血清培养基吹打
同 步 骤
11、计数 12、接种瓶培养
肿瘤细胞培养
7
二、肿瘤细胞的培养
1、原代培养
我们为何要进行原代培养？ 1、建立各种细胞系的第一步 2、是获取细胞的主要手段 3、组织和细胞刚刚离体，生物学特性未发生大变化 4、最接近和反映体内生长特性，适合做药物测试、细胞分化等试验
2、传代培养
2、悬浮型细胞传代 步骤：1、选取生长良好的细胞一瓶，轻轻加入适量生长液。 2、用无菌吸管轻轻吹打，使细胞悬浮，吸出一半的细胞悬液， 加入到新的培养瓶中。 3、37℃，5%CO2 培养箱中培养24-48h。 4、如细胞浓度较高，可按1:3进行传代。
1、原代培养
器官培养是指从供体取得器官或器官组织块后，不进行组织分离，保持其原有器官的 结构和连接，直接将器官或器官的一部分在体外培养，在培养过程中保持器官或其一部 分组织的结构和功能。器官培养主要强调器官组织的相对完整性，重点观察细胞正常联 系和排列情况下，它们之间的相互影响，和局部环境的失物调节作用等。
原代培养方法有组织块法、消化培养法、器官培养法等。最基本和最常用的是组织块法 和消化培养法。
肿瘤细胞培养
8
二、肿瘤细胞的培养
1、原代培养
组织块培养法是一种简便易行且成功率较高的常用原代培养方法。即将组织剪切成小 块后，接种于培养瓶。培养瓶可根据不同细胞生长的需要作适当处理。例如预先涂以 胶原薄层，以利于上皮样细胞等的生长，涂以多聚赖氨酸培养需旺细胞等，适用于组 织量少的原代培养。
不要急于传代。
2、不同的细胞有不同的消化时间
，因而要根据需要注意观察
及时处理。
3、吹打细胞时动作要轻巧尽可能减少对细胞的损伤。
4、首次传代时细胞接种数量要多一些，使细胞尽可能适应新环
境利于细胞生存和增殖。
肿瘤细胞培养
12
二、肿瘤细胞的培养
2、传代培养
1、贴壁型细胞的传代 步骤：1、选取生长良好的细胞一瓶，轻轻摇晃培养瓶，倒掉培养液， 缓冲液洗一遍。 2、从无细胞侧加入0.25%的胰蛋白酶，翻转培养瓶，使消化液 浸没细胞1min左右。 3、翻转培养瓶，放置5-10min，观察细胞出现布纹孔状为止。 4、倒掉消化液。 5、沿细胞面加入适量生长液,洗下细胞，吹散，按1:2或1:3传 代培养。 6、37℃培养，接种后30min可贴壁。48h换液一次，3-4d形 成单层细胞。
类固醇细胞瘤
肿瘤细胞培养
3
一、肿瘤细胞培养技术
2、分离
培养液中1mm3的组织块，仅有少量处于周围的细胞可能生存和生长。若要获得大量生长良 好的细胞，须将组织分散开，使细胞解离出来。目前分散组织的方法有机械和化学两种，要 根据组织种类所需和培养要求，采用适宜的手段。
机械法：机械分散发、剪切分离法
消化分离法：胰蛋白酶消化法、胶原酶法
肿瘤细胞培养
13
二、肿瘤细胞的培养
2、传代培养
CHO贴壁细胞
开始培养
肿瘤细胞培养
48h形成致密单层
14
二、肿瘤细胞的培养
2、传代培养
加入0.25%胰酶
皱缩边缘、间隙增大、不再致密
肿瘤细胞培养
15
二、肿瘤细胞的培养
2、传代培养
基本皱缩变圆
完全皱缩变圆，弃去胰酶，将细胞洗下
肿瘤细胞培养
16
二、肿瘤细胞的培养
肿瘤细胞培养
5
一、肿瘤细胞培养技术
2、分离
胰蛋白酶消化法：适用于消化细胞间质较少的软组织，如胚胎、上皮、肝等 组织。对传代细胞效果也很好，胰蛋白酶消化效果主要与 PH值、温度、浓度、组织块大小和硬度有关。
肿瘤细胞培养
6
一、肿瘤细胞培养技术
2、分离
1、将组织块剪切成1~2mm3
2、加入胰蛋白酶37℃热消化
肿瘤细胞培养
11
二、肿瘤细胞的培养
2、传代培养
肿瘤细胞的传代是人们利用培养肿瘤细胞作为进一步研究的靶材料。细胞性状的好坏直 接影响研究的结果。常见肿瘤细胞的传代多指细胞系的传代，大致分为两种：一种是贴 壁型细胞传代；另一种是悬浮型细胞传代。
注意事项：1、细胞没有生长到足以覆盖瓶底壁的大部分表面以前（80%），