真菌DNA提取试剂盒使用说明书

真菌DNA提取试剂盒Fungal DNAout货号:M090091产品及特点本产品用于快速提取各种真菌的基因组DNA，其中包括酵母（如：Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pomb、Pichia pastoris）、动物病原真菌（如：Candida albicans、Aspergillus niger）和植物病原真菌（如：Collectotrichum musae、Fusarium oxysporum）。

本产品的主要特点是：1.DNA纯净，OD260/280一般都在1.9左右，可直接用于PCR、酶切、杂交等。

DNA 大小在50 Kb左右。

2.操作简单，整个过程约30分钟左右，比大多数同类产品短。

3.液体培养物处理量在0.1-3 mL 之间，真菌菌丝、孢子、子实体的处理量在0.1-0.5 g之间。

4.价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格便宜。

5.安全无毒，不需要使用氯化苄等有毒物质，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。

规格及成分10次包装成份（CAT：M090091）溶液A 10 mL溶液B 10 mLRNase A溶液150 uL使用手册1份运输及保存常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法1.先将全部RNase A溶液全部加入到50 mL溶液A中，摇匀后再取用，未用完的溶液A最好在4℃保存。

2.称取0.1-0.5g湿的真菌菌丝、孢子、子实体或0.1-3 mL液体培养物离心得到的沉淀，转移到塑料研钵中，液氮研磨成粉后转移到一个干净的1.5 mL 塑料离心管中。

注意：最好避免使用含二氧化硅的玻璃研钵，因为DNA会吸附在表面，影响得率。

如果菌丝或子实体等已经十分干燥，则使用量最好比上面推荐的使用量低5-10倍；如果需要预先从环境中对真菌进行纯化(如从血液病原真菌中提取DNA，则需要先去除红细胞等成份)，请按相关的标准方法先将该真菌预纯化出来，以沉淀物的形式放液氮研磨。

真菌基因组DNA快速提取试剂盒目录号：DN41目录编号包装单位DN4101 50次DN4102 100次DN4103 200次适用范围：适用于快速提取真菌组织细胞基因组DNA试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次RNase A(10mg/ml) -20℃250 μl500 μl 1 ml 缓冲液AP1 室温25 ml 50 ml 100 ml 缓冲液AP2 室温10 ml 20 ml 40 ml缓冲液AP3/E 室温15 ml 25 ml 50 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温15 ml 25ml 50ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15 ml 20 ml 40 ml 吸附柱AC 室温50个100个200个收集管（2ml）室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项:1.裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀，可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解（AP3加入乙醇前可加热，加入乙醇后不可加热），恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从真菌组织细胞中快速简单地提取基因组DNA。

可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的真菌样品DNA的纯化工作。

提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。

新鲜或干燥的真菌组织（细胞）磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 进一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

CTAB法抽提真菌DNA（五篇）第一篇：CTAB法抽提真菌DNA提取液：1M Tris.HClpH8.010ml 0.5M EDTApH8.04ml CTAB2g NaCl8.176g 巯基乙醇2ml（使用时加入）加70ml ddH2O溶解定容至98ml步骤：1.在液氮中研磨菌丝体，直到菌丝体研磨成解决白色细粉2.将菌丝体装入1.5ml离心管中，加入600μlCTAB提取液，于62-65℃水浴中加热1h，间或振荡数次3.加入600μlTris饱和酚：氯仿：异戊醇（25:24：1），【现用现配，按比例混匀后再加入管中】，温和振荡几次，然后在12000rpm 下离心15分钟4.取上清至新的离心管中，然后加入1/10体积的3M/L NaAc，1倍体积的异丙醇，轻柔混匀，在-20℃下静置30-60分钟，在12000rpm下离心5分钟5.离心后去上清，沉淀用70％乙醇润洗2次6.加入适量的TE缓冲液溶解沉淀，7.加入1μl RNase（10mg/ml）37℃水浴1小时8.加入1倍体积的饱和酚：氯仿：异戊醇（25:24：1），【现用现配，按比例混匀后再加入管中】，温和振荡几次，然后在12000rpm下离心15分钟，取上清至新的离心管9.加入1倍体积的氯仿，温和振荡几次，在12000rpm下离心15分钟，取上清至新的离心管中10.加入2倍体积无水乙醇，-20℃静置30分钟以上，8000rpm离心12分钟11.去除上清，沉淀用70％乙醇润洗2次，加入100μl TE缓冲液溶解沉淀，放入-20℃存放，待电泳检测第二篇：血液标本抽提DNA抗凝全血中提取DNA准备：配制80%异丙醇和70%乙醇各1ml备用。

选择2ml的离心管。

血液的体积为2ml。

先向2ml的离心管中加入1ml的血液。

后加入1ml的buffer MG-A，剧烈摇晃20次；10000xg 离心30s，缓慢倒掉上清。

再加入1ml的血液，再加入1ml的buffer MG-A，剧烈摇晃20次；10000xg 离心30s，缓慢倒掉上清。

真菌基因组DNA快速提取试剂盒目录号：DN41目录编号包装单位DN4101 50次DN4102 100次DN4103 200次❖适用范围：适用于快速提取真菌组织细胞基因组DNA❖试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次RNase A(10mg/ml) -20℃250 μl500 μl 1 ml 缓冲液AP1 室温25 ml 50 ml 100 ml 缓冲液AP2 室温10 ml 20 ml 40 ml缓冲液AP3/E 室温15 ml 25 ml 50 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温15 ml 25ml 50ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15 ml 20 ml 40 ml 吸附柱AC 室温50个100个200个收集管（2ml）室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

◆TRIpure Reagent 抽提指南◆目录号RP02◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外◆TRIpure Reagent 抽提指南◆目录号RP02◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外◆TRIpure Reagent 抽提指南◆目录号RP02储存事项:1.裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀，可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解（AP3加入乙醇前可加热，加入乙醇后不可加热），恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

❖产品介绍：该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从真菌组织细胞中快速简单地提取基因组DNA。

可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的真菌样品DNA的纯化工作。

提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。

细菌基因组DNA提取试剂盒使用说明本试剂盒可用于革兰氏阴性和阳性菌的基因组DNA提取，由细菌重悬液、裂解液、蛋白沉淀液以及DNA溶解液组成。

可从1-5ml菌液中提取基因组DNA。

整个提取过程不超过45分钟。

提取过程包括：1菌液离心，重悬。

2裂解菌体，释放基因组DNA。

3盐析沉淀蛋白，分离DNA。

4异丙醇沉淀脱盐并浓缩。

5 70%乙醇清洗，晾干并用DNA溶解液溶解。

本试剂盒采用复合裂解液，其中含有抑制DNA酶的成分，在加热（65°C）状态下，可保证完整的细菌基因组DNA的充分裂解释放，本试剂盒即可提取异丙醇沉淀时，罕见浑浊的蛋白质杂质的共沉淀。

提取的基因组可用于PCR扩增、内切酶消化以及膜杂交等。

一、试剂盒组成（本试剂盒提供的组份, 至少可提取100份1-5ml菌液基因组DNA的纯化，每种组份均有足够的富余量）1．复合裂解液：30ml×1瓶。

2．蛋白沉淀液：300ml×1瓶。

3．DNA溶解液：20ml×1瓶。

4．操作说明书一份。

二、本试剂盒未提供，须用户自备的试剂为：异丙醇，70%乙醇（国产分析纯）。

三、提取操作：1．菌液离心：取革兰氏阴性菌菌液1-2ml；或者革兰氏阳性菌菌液2-5ml，1000rpm离心1分钟。

2．加入细菌重悬液100ul，震荡使菌体重悬。

3．将复合裂解液置65°C水浴加热，使结晶成分溶解，每个细菌重悬液中分别加入300ul的复合裂解液。

4．混璇器震荡混匀10秒，置65°C水浴中反应10分钟（革兰氏阴性菌），20分钟（革兰氏阳性菌）。

5．各管中加入300ul蛋白沉淀液。

上下颠倒5-6次使两者混匀。

6．13000-16000×g, 离心3-5分钟。

7．将上清液转移至新的离心管中（注意：由于有些细菌含有多糖或者脂蛋白成分，离心后会出现细胞成分上浮的情况，此时取漂浮层下的均一透明液体），加入等体积异丙醇，此时可见透明的絮状物，混匀后离心，同步骤5，吸去上清。

一、试剂盒打开后需要准备的工作1、ProteinaseK（蛋白酶K）的溶解①取4.5ml双蒸水加入蛋白酶K粉中使其充分溶解②将溶解好的蛋白酶K溶液分装进小离心管，每管100u l〜200ul③将分装好的ProteinaseK放入-20°C冰箱中保存，使用期限为12个月2、组织抑制剂（InhibitorRemovalbfer）的调配加入20ml无水乙醇（absoluteethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩3、洗液（washbuffer）的调配加入80ml无水乙醇（absoluteethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩二、组织DNA提取（试剂盒）1、组织样品处理与消化①将采集来的样品剪碎（WO.lcm）洗净保存液。

②加入组织破解液Tissue-lysis200ul蛋白酶K40ul然后放入55C水浴锅内3个小时使其充分消化。

2、DNA提取①在消化好的组织样品中加入结合液bindingbuffer200ul然后放入70°水浴锅中10分钟。

②再加异丙醇lOOul混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g—分钟。

③倒掉底液，加500ul组织抑制剂InhibitorRemoval然后离心倒掉底液④加洗液washingbuffer500ul离心（洗液加两次）⑤在70C预热ElutionBuffer，然后将洗好的柱体下部分丢掉，换新的离心管加入ElutionBuffer200ul溶解10分钟离心保留底液放-20C保存。

三、细胞DNA的提取（试剂盒）1、组织样品处理与消化①将带有培养基的样品用PBS清洗干净8000rpm/1min离心，倒掉上清②加PBS200ul振荡摇匀使之样品成为单个细胞的悬浊液③加200ulBindingBuffer，40ul蛋白酶K混合均匀放入70C水浴锅内消化10分钟。

2、DNA提取①加异丙醇lOOul混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g—分钟。

游离DNA提取试剂盒（磁珠法）说明书【产品名称】通用名称：核酸提取或纯化试剂商品名称：游离DNA 提取试剂盒（磁珠法）英文名称：Magbind CFDNA Kit 该试剂盒提供了一种简单、快速、高效的游离DNA (Free circulating / Cell-free DNA)提取方法，适用于从血清、血浆、淋巴液、尿液等无细胞体液中提取游离DNA 。

纯化得到的离DNA 质量稳定、可靠，可用于下游常规实验。

　该试剂盒可与转移液体法的核酸提取仪配套使用，简单、快速地进行大规模提取，大大降低了实验者的工作量和实验中的人为误差。

【预期用途】　样品裂解后，在高盐存在时，DNA 结合于硅基包被的磁珠表面，漂洗后，高纯度DNA 被洗脱于洗脱缓冲液或去离子水中。

DNA 得率与样品的类型、储存条件、时间以及个体间差异有很大关系。

【检验原理】50次/盒；400次/盒【包装规格】版本号：11/2020【样本要求】1．适用标本类型：新鲜或冷冻的全血（用柠檬酸盐、EDTA 或肝素等抗凝剂处理过的血液样品）、血浆、血清、淋巴细胞、无细胞体液等样本。

2．标本处理与保存：血清及血浆样本按常规方法制备，新鲜样本应尽快处理或分装后于-70℃冻存，避免反复冻融。

3．样本运输：应采用冰壶或者泡沫箱加冰或干冰密封运输。

【检验方法】实验前准备：向蛋白酶K 中加入指定用量的蛋白酶K 保存液使其溶解，终浓度为20 mg/ml ，-20℃保存。

1．向1.5 ml 离心管中加入20 μl 蛋白酶K 溶液。

2．向上一步的离心管中加入200 μl 血清/血浆样品。

注意：冻存样品需提前在4℃冰箱中放置使其溶化。

溶化过程中反复颠倒样品储存管使其混匀。

3．向上一步的离心管中加入200 μl 裂解缓冲液，涡旋振荡5秒钟使其充分混匀后将离心管放于56℃、1300 rpm 的Thermomixer 上振荡裂解10分钟。

注意：1）如无Thermomixer ，需将离心管放于56℃水浴锅或金属浴中孵育10分钟，期间每隔2分钟涡旋振荡5秒钟。

提取液：
1M Tris.HCl pH8.0 10ml
0.5M EDTA pH8.0 4ml
CTAB 2g
NaCl 8.176g
巯基乙醇2ml（使用时加入）
加70ml ddH2O溶解定容至98ml
步骤：
1.在液氮中研磨菌丝体，直到菌丝体研磨成解决白色细粉
2.将菌丝体装入1.5ml离心管中，加入600μlCTAB提取液，于62-65℃水浴中加热1h，
间或振荡数次
3.加入600μlTris饱和酚：氯仿：异戊醇（25:24：1），【现用现配，按比例混匀后再加入
管中】，温和振荡几次，然后在12000rpm下离心15分钟
4.取上清至新的离心管中，然后加入1/10体积的3M/L NaAc，1倍体积的异丙醇，轻柔
混匀，在-20℃下静置30-60分钟，在12000rpm下离心5分钟
5.离心后去上清，沉淀用70％乙醇润洗2次
6.加入适量的TE缓冲液溶解沉淀，
7.加入1μl RNase（10mg/ml）37℃水浴1小时
8.加入1倍体积的饱和酚：氯仿：异戊醇（25:24：1），【现用现配，按比例混匀后再加入
管中】，温和振荡几次，然后在12000rpm下离心15分钟，取上清至新的离心管
9.加入1倍体积的氯仿，温和振荡几次，在12000rpm下离心15分钟，取上清至新的离
心管中
10.加入2倍体积无水乙醇，-20℃静置30分钟以上，8000rpm离心12分钟
11.去除上清，沉淀用70％乙醇润洗2次，加入100μl TE缓冲液溶解沉淀，放入-20℃存
放，待电泳检测。

细菌基因组DNA提取试剂盒目录号：DN12目录编号包装单位DN1201 50次DN1202 100次DN1203 200次❖适用范围：适用于快速提取各种细菌基因组DNA❖试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次细胞核裂解液室温30 ml 60 ml 120 ml蛋白沉淀液室温10 ml 20 ml 40 mlDNA溶解液室温10 ml 15ml 30 mlRNase A(10mg/ml) -20℃150μl250μl400μl本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项:1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，轻轻旋摇，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。

2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

❖产品介绍：本试剂盒用于快速的从各种细菌中提取基因组DNA。

细菌样品加入细胞核裂解液(或者通过溶菌酶或者其它一些酶帮助裂解细胞壁后)，首先在强去污剂作用下裂解细胞释放出基因组DNA，接着加入RNase A去除RNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。

❖产品特点：1.不需要使用有毒的苯酚等试剂。

2.快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

3.结果稳定，产量高，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50 kb -150kb，可直接用于构建文库，PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

❖注意事项1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

2.用户需自备异丙醇、70％乙醇、0.5M EDTA和Lysozyme（溶菌酶）(用于革兰氏阳性菌)、lysostaphin(用于某些难裂解的革兰氏阳性菌)、水浴箱。

革兰氏阳性菌基因组DNA提取试剂盒使用说明货号：D1650规格：50T/100T保存：室温(15℃-25℃)干燥保存，复检期12个月，2℃-8℃保存时间更长。

试剂盒内容：D1650-50T D1650-100T溶菌酶3ml 5.5mlRNase A1m11m1×2蛋白酶K1ml1m1×2溶液A10ml20ml溶液B10ml20ml漂洗液15m115ml×2洗脱液15m130m1吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份产品简介：革兰氏阳性菌基因组DNA提取试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取革兰氏阳性菌基因组DNA。

离心吸附柱中采用的硅基质材料，能够高效专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。

提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。

使用革兰氏阳性菌基因组DNA提取试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

操作步骤：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。

所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、取细菌培养液1ml，12000rpm离心1min.，尽量吸除上清。

2、向菌体中加入200ul溶液A，振荡或用移液器吹打使菌体充分悬浮，向悬浮液中加入20ul 的RNase A(10mg/ml)和50ul溶菌酶，充分颠倒混匀，室温放置30min-60min。

3、向管中加入20ul的蛋白酶K(10mg/ml)，充分混匀，55℃消化30-60min，消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止，此时可见菌液呈清亮粘稠状。

4、向管中加入200ul溶液B，充分颠倒混匀，如出现白色沉淀，可于75℃放置15-30min，沉淀即会消失，不影响后续实验。

如果溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可能会导致DNA的提取量以及纯度降低，还可能堵塞吸附柱。

真菌基因组DNA快速抽提试剂盒试剂盒组成组分SK8229，50次SK8230，100次Buffer Digestion24 ml48 mlBuffer PF12 ml24 mlTE Buffer (pH 8.0)10 ml20 ml操作手册1份1份保存方法及注意事项本试剂盒于常温运输，室温（15-25°C）保存，有效期为一年，4°C保存时间更长。

Buffer Digestion中含有刺激性化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。

沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。

产品介绍本试剂盒是生工生物工程（上海）有限公司最新研制成功的一种真菌基因组DNA快速抽提试剂盒。

无需使用苯酚、氯仿等有毒试剂。

从100 mg新鲜大型真菌（如蘑菇）样品中可以获得10-20 µg DNA，OD260/OD280比值一般为1.7-1.9。

抽提获得的DNA可用于酶切、PCR、文库构建、Southern blot等相关实验。

标准抽提步骤自备材料：水浴锅、小型高速离心机（最大离心力 ≥12,000 × g）、1.5 ml离心管、75%乙醇、异丙醇、β-巯基乙醇等。

Buffer Digestion在低温下可能产生沉淀，使用前请检查，如有沉淀，请于65°C溶解后使用。

提前将水浴锅调至65°C备用。

1.取50-100 mg新鲜大型真菌（如蘑菇）或20 mg干燥的子实体或菌丝用液氮研磨成粉末，加入到1.5 ml离心管中。

加入400 µl Buffer Digestion和4 µl β-巯基乙醇，震荡混匀。

65°C水浴1 h至细胞完全裂解。

2.加入200 µl Buffer PF，充分颠倒混匀，-20°C冰箱放置5 min。

3.室温10,000 rpm离心5 min，将上清液（500-550 µl）转移到新的1.5 ml离心管中。

细菌基因组DNA快速提取试剂盒（溶液型）GK1061 50 次GK1062 100次一、试剂盒组成Components GK1061 GK1062Digestion Solution(a)Proteinase K(b)NaCl Solution CTAB/NaCl Solution(c) Boiled RNase A (10mg/ml)TE (pH8.0)Lysozyme（d）SP Buffer 18ml3mg6ml6ml240µl18ml30mg0.5ml36ml6mg12ml12ml480µl36ml60mg1.0ml二、实验前的准备(a) Digestion Solution低温时可能出现沉淀，请于55℃适当加温溶解后使用，不会影响实验结果。

首次使用时，将Boiled RNase A全部加入到Digestion Solution中，充分混匀备用，加完Boiled RNase A的Digestion Solution，请于4℃保存。

(b) Proteinase K使用前加入300µl (GK1061) 、600µl (GK1062)灭菌双蒸水，分装-20℃冻存。

不得将ProteinaseK直接加入到Digestion Solution中，以免酶失活。

(c) CTAB/NaCl Solution使用前需要65℃预热，便于溶解和取液。

(d) Lysozyme使用前加入500µl (GK1061) 或1ml (GK1062) SP Buffer，使Lysozyme全部溶解。

分装后-20℃冻存。

三、试剂盒说明本试剂盒用于快速的从各种细菌中提取基因组DNA。

细菌样品加入细胞核裂解液(或者通过溶菌酶或者其它一些酶帮助裂解细胞壁后)，首先在强去污剂作用下裂解细胞释放出基因组DNA，接着加入RNase A去除RNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重新溶解于DNA溶解液中。

细菌基因组DNA提取试剂盒目录号：DN12DN120150次DN1202100次DN1203200次❖适用范围：适用于快速提取各种细菌基因组DNA❖试剂盒组成、储存、稳定性：细胞核裂解液室温30 ml60 ml120 ml蛋白沉淀液室温10 ml20 ml40 mlDNA溶解液室温10 ml15ml30 mlRNase A(10mg/ml)-20℃150μl250μl400μl本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项:1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，轻轻旋摇，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。

◆TRIpure Reagent 抽提指南◆目录号 RP02◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外◆TRIpure Reagent 抽提指南◆目录号 RP02◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外◆TRIpure Reagent 抽提指南◆目录号 RP022.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

❖产品介绍：本试剂盒用于快速的从各种细菌中提取基因组DNA。

细菌样品加入细胞核裂解液(或者通过溶菌酶或者其它一些酶帮助裂解细胞壁后)，首先在强去污剂作用下裂解细胞释放出基因组DNA，接着加入RNase A去除RNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。

❖产品特点：1.不需要使用有毒的苯酚等试剂。

2.快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

3.结果稳定，产量高，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50 kb -150kb，可直接用于构建文库，PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

真菌基因组DNA提取试剂盒使用说明货号：D2300规格：50T/100T保存：室温(15℃-25℃)干燥保存，复检期12个月，2℃-8℃保存时间更长。

试剂盒内容：50T100T RNase A1ml1ml×2蛋白酶K1ml1ml×2玻璃珠6g11g溶液A10ml20ml溶液B10ml20ml漂洗液15ml15ml×2洗脱液10ml20ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份产品简介：真菌是具有真核和细胞壁的异养生物。

种属很多，已报道的属达1万以上，种超过10万个。

真菌通常又分为三类，即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌）。

对于酵母菌和霉菌，可以用玻璃珠处理，而对于大型真菌，可直接用液氮研磨。

经过前期处理的菌液，用硅质膜吸附，即可得到高纯度的基因组。

提取纯化后的DNA，可以直接用于PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP等下游应用实验。

操作步骤：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。

所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、样品的处理：1）对于酵母菌，取1-2ml培养好的菌液，离心收集，弃上清。

加入200ul 溶液A，加入20ul RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约5-10min。

2）霉菌(孢子也可相同处理)：取50-100mg菌丝，加200ul溶液A，用玻璃研磨器适当研磨分散菌丝，加入20ul RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约30min。

3）大型真菌（如蘑菇等）：称取50-100mg样品，倒入适量的液氮，立即研磨重复3次，使样品研成粉末（如无液氮，可加200ul溶液A后用玻璃研磨器适当研磨），加200ul溶液A，加入20ul RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振荡器上振荡，约5min。

一、SDS法基本原理是研磨的组织细胞用热的SDS裂解后，加入高浓度的KAc，0℃放置以除去蛋白和多糖类杂质，最后用乙醇或异丙醇沉淀。

1、试剂(1)提取缓冲液Tris-HCl 100mmol/L（pH8.0）EDTA 50mmol/L （pH8.0）NaCl 500 mmol/L灭菌后加β-巯基乙醇至10 mmol/L(2)裂解液20%SDS(3)高盐溶液5mol/L KAc(4) RNaseA 10mg/ml(5) 异丙醇(6)灭菌ddH2O或TE2、仪器离心机，恒温水浴, 台式高速离心机，电泳装置3、实验程序（1）、离心菌体，再用灭菌ddH2O冲洗2次，放入经液氮预冷的研钵中，加入液氮研磨至粉末状，用干净的灭菌不锈钢勺转移粉末到加有500μL提取液的离心管中,轻轻混匀。

（2）、向管中加入50μL20%SDS溶液，混匀，不可过于强烈震荡以防基因组DNA断裂，65℃保温10min，并不时摇动。

（3）、加入150μL 5mol/L KAc，混匀，置冰上20-30 min。

（4）、4℃,15 000rpm离心15min,转移上清到另一离心管中，加入0.7V的异丙醇，混匀，-20℃沉淀30 min 。

（5）、12 000rpm离心10min回收基因组DNA沉淀，吹干后加入适量的灭菌ddH2O或TE 溶解DNA。

（6）、加入1/10体积的RNaseA，37℃保温20min，除去RNA。

（7）、C：I抽提后，加2V乙醇，-20℃沉淀30 min 。

12 000rpm离心10min回收基因组DNA沉淀。

（8）、用400μL 70%乙醇洗一次后，吹干，加入适量的灭菌ddH2 O或TE溶解DNA。

（9）、电泳检测完整性。

二、lysed cells directly by phenol（一）、试剂：1、STE Buffer (100 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0)2、TE buffer (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0)（二）、实验程序1、。