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培训教程(H-Class 系统)摘要ACQUITY UPLC H-Class 系统原理及特点 开机顺序及使用注意事项摘要ACQUITY UPLC H-Class 系统原理及特点 开机顺序及注意事项ACQUITY UPLC H-Class 系统ACQUITY UPLC H-Class 系统核心系统四元溶剂管理器(QSM)样品管理器–Flow Through Needle (SM-FTN) 柱温箱(CH-A)支持所有现在的ACQUITY 检测器–PDA and PDAeλ–TUV–FLR–ELSD–QDa and TQDACQUITY UPLC H-Class 四元溶剂管理器操作特点–最大流速= 2mL/min–最大操作压力= 15,000 psi四元溶剂混合自动混合功能H-Class QSM (四元溶剂管理器)流路QSM With Optional Solvent Select ValveTo SystemVent Valve Filter/MixerOptional SolventSelect ValveIndividual Gradient Proportioning Valves (4)ManifoldIn-Line Filters (4)Primary Accumulatori 2ValveSolvent Solvent SolventACQUITY UPLC H Class硬件简介四元溶剂管理器_Quaternary Solvent Management System （QSM）–脱气机–泵–GPV (比例阀)–Inlet manifold–溶剂处理单元ACQUITY UPLC H Class 溶剂脱气机QSM 脱气/ GPV 流路3-GPV 出口与低压入口混合SM处清除溶剂的脱气包管理器相连2-脱气包连向GPV入口1-溶剂瓶连向脱气包入口QSM 流路初级泵泵头蓄积泵泵头排液阀100 µL 混合器一对梯度比例阀低压混合管理器脱气包Seal Wash 泵QSM 泵头流路初级泵压力传感器到蓄积泵单向阀蓄积泵压力传感器到排液阀低压入口管理器到初级泵的I 2VGPV 出口到低压入口管理器I 2V 主动阀入口管理器滚花式不锈钢接头支架入口管理器侧视图俯视图柱塞相对运动速度图主柱塞蓄积柱塞送液(+)柱塞与流速方向相同进样点主柱塞传递溶液预压缩两柱塞之差送向系统(0.4)蓄积柱塞送液(0.4)过滤器/混合器集成装置位置废液管理器来自于检测器的废液来自于进样器的废液来自于密封清洗的废液QSM 控制面板菜单自动混合（AutoBlend技术）Water AcetonitrileAlcohol ConcentratedModifier95%0%45%50%自动混合梯度Water1%TFAIsopropanolAcetonitrileWater1%TFAIsopropanolAcetonitrile0%5%0%5%100%Water0%Acetonitrile 0.05%TFA 50%Water50%Acetonitrile 0.05%TFA肽图谱方法开发TFA 浓度变化-%DA U0.000.050.100.150.200.250.05% TFA –5% D0.025% TFA –2.5% DU样品管理器-FTN可变进样体积–标配进样体积可达10uL–最大扩展至250uL 进样进样针在流路中的设计–全体积样品进样–更低的交叉污染覆盖全范围的进样盘和样品瓶支持预加载样品和定量环离线功能样品管理器-FTNWash SolventPurge Solvent样品加载样品进样样品管理器（FTN ）正面流路一览至定量注射阀的管路连接单向阀单元进样阀管路连接清洗溶剂入口管路(没有脱气)漏液传感器连接处样品注射器内部流路针驱动装置SS Needle针密封清洗集Needle Lug Latch成装置R-Carriage End Plate针密封清洗装置针进样的位置进样针的类型标配的不锈钢针，15 µL–作为标配安装在样品管理器中不锈钢针包, 30 µL–最耐用的针选配的扩展环 50 µL扩展环 100 µL扩展环 250 µL扩展环样品管理器FTN (flow through needle)样品管理器FTN (flow through needle)色谱柱温控制温度范围: 室温+5 到90°C2.1 到4.6 mm, 最长可达150 mm 色谱柱接在线过滤器或预柱 标配主动预热装置主动预热确保温度控制的一致性消除环境对色谱柱温度带来的影响减小系统体积以减少额外的色谱柱谱带展宽 兼容之前的被动预加热装置主动预加热器ACQUITY UPLC®光电二极管矩阵(PDA)和可调紫外可见(TUV)检测器ACQUITY UPLC® PDA和TUV检测器提高的灵敏度优异的噪音抑制性能光引导流通池设计–两种流通池选件能够满足更广泛的应用范围低电子噪音–高亮度灯宽动态线性范围支持最大80 Hz的采集速率–独立的数据采集速率和滤波常数全控制台软件控制为何使用UPLC®专用检测器?更快的洗脱峰需要更高的数据采集速率–降低样品谱带在流通池中的扩展时间更小的峰需要最大的信噪比S/N–高光通量/传输–更快的数字滤波时间常数UPLC分离需要低扩散体积的流通池–保持峰形–不产生高反压ACQUITY UPLC® PDA 检测器Waters’ ACQUITY UPLC®PDA检测器–最大采集速率80 Hz–最小化的噪音o10 µAU–最大化的光谱分辨率–最大化的线性范围o为杂质和痕量分析提供更宽的动态范围o用更短的分析时间获得更好的数据o高可信度的数据结果–流通池o新颖的光引流通池设计o更长的激发光路能够给出更好的吸光度和灵敏度ACQUITY UPLC® TUV 检测器Waters’ ACQUITY UPLC®TUV 检测器–80 Hz 最大采集速率–最小化的噪音o 6 µAU–最大化的线性范围o 2.5 AUo为杂质和痕量分析提供更宽的动态范围o用更短的分析时间获得更好的数据o高可信度的数据结果–流通池o新颖的光导流通池设计o更长的激发光路能够给出更好的吸光度和灵敏度ACQUITY UPLC® 高亮度灯高亮度氘灯– 低噪音特性 – 能够输出近两倍于普通氘灯的亮度 （能量）好处– 低噪音 – 更高的灵敏度灯的保证寿命– 2000 小时前面板拆装 软件对灯的固件控制– 运行时间 – 点灯 – 序列号©2014 Waters Corporation41ACQUITY UPLC® 吸光度流通池 – 光引导方法光路TeflonAFα流动相TeflonAF光引导流通池实质上就是中间材料为液体的光纤 进入流通池的液芯中的光线在照射到Teflon® AF壁上时会发生全反射, 即全内反射(Total Internal Reflection, TIR) 理论上讲,在AF管的圆柱表面上的每一点上都会发生全反射,这样除了由 于样品的吸收,入射光就会以接近100% 的效率透射过流通池©2014 Waters Corporation 42PDA 流通池选件高灵敏分析型25 mm 2400 nL10 mm 500 nL©2014 Waters Corporation43TUV 流通池 高灵敏 分析型25 mm 光程 2400 nL 体积©2014 Waters Corporation10 mm 光程 500 nL 体积44反压调节器反压调整器能确保溶解在流动相中的气体不会产生气泡,从而保证基线平稳 不受气泡噪音的干扰 如果UV检测器是系统中的最后一个检测器，一定要装配反压调整器 如果在PDA/TUV后面还连接有质谱或其它检测器，则无需装配反压调整器©2014 Waters Corporation45ACQUITY UPLC® 检测器 -快速数据采集速率0.50 0.45 UPLC 条件 色谱系统: ACQUITY UPLC (BSM, SM, TUV) 色谱柱: 2.1 X 50 mm BEH C18, 1.7 µm 流动相: 50% of A: 10 mMol Ammonium Bicarbonate pH=10 50% of B: Acetonitrile 流速: 1.2 mL/min 进样体积: 1 µL (5 uL Loop, 30 uL PEEK Needle, PLUNO, 1 uL air gaps) 强洗 = 75% ACN/25% Water (250 uL) 弱洗 = 50% ACN/25%Water (1000 uL) 样品室温度: 15 °C 柱温箱温度: 45 °C 检测器: ACQUITY TUV @ 301 nm, Various data rates, FTC=Off 样品 = ~ 0.05 mg/mL Benzocaine, Butamben, and Tetracaine in 1:1 Buffer/ACN 数据: Empower 20.400.350.30AU0.250.20 1 Point per Second 2 Points per Second 5 Points per Second 10 Points per Second 20 Points per Second 40 Points per Second 80 Points per Second0.150.100.050.00 0.12 0.14 0.16 0.18 0.20 0.22 0.24 0.26 0.28 0.30 0.32 Minutes 0.34 0.36 0.38 0.40 0.42 0.44 0.46 0.48对于UPLC, 检测器的采集速率必须足够大，以确保完整检测到狭窄的 UPLC峰 ACQUITY UPLC 检测器支持从1到80Hz的各种采集速率,以满足任何 UPLC应用中的需要 有效的积分算法和独立的时间常数，确保了精确的和可重现的积分©2014 Waters Corporation 46ACQUITY UPLC® 独立的采集速率和滤波常数采集频率和滤波常数的单独优化，使得在确保分辨率和灵敏度最优的 条件下，找到最佳的检测参数©2014 Waters Corporation47PDA 通用(General)界面©2014 Waters Corporation482D 通道吸光度 基线补偿 (MBF) 最大吸收值绘图（Maxplot） 波长差减 波长叠加 比率(Ratio)波长©2014 Waters Corporation49摘要ACQUITY UPLC H-Class 系统原理及特点 运行准备及注意事项©2014 Waters Corporation50。
求助，waters 液相2795型，报错“plunger homing fault”如何处理？关机重启还是不能解决仪器有灰尘，除尘泵控板积灰腐蚀除尘应该是仪器用时间长了，带动柱塞运动的电动机无法确定初始位置了，可能是积灰挡住光敏电子元件了。
我们是反复重启几次有时能恢复，实在不行请工程师来清洗检查一下，看要不要换什么部件。
11、2695出现“solvent trantion h/w faultly”则是马达驱动主板上的保险烧了“plunger homing faulty(0)”则是主泵有故障，拆下鱼雷转动一下的马达的轴承，如果转不动，只能更换，如果能转动，还有可能继续使用，“please cycle power:unable to continue due to error in uvtxtask……”则是主板电池没电了，需要更换电池waters 液相报错“plunger homing over press”如何处理？对，就是在线过滤器脏了，拆下来超声一下。
就是图中标记的部分。
仪器型号：waters2996 PDA检测器，故障现象：检测器启动后，状态灯一直闪烁，不能通过自检。
可能的故障原因：可能流动池污染；流动相中有汽泡。
解决方法：拆下色谱柱，用一个“两通”直接连接仪器主机跟检测器，然后流动相调为纯甲醇，大容量流速，如4ml/min，冲洗1小时左右。
然后重新启动检测器，恢复正常。
仪器型号：2690/5 ；仪器现象：开机自检后出现“Plunger homing over pressure” 或者“系统异常高压，取下色谱柱后压力仍然较高”可能的故障原因：在线过滤器堵塞污染。
解决方法：取下在线过滤器，再取出过滤器里的滤芯，先用纯水超声清洗10分钟，再用甲醇超声清洗10分钟，重新安装滤芯及在线过滤器，注意出入口的方向不能接反。
然后设定流速，检查有无渗漏，仪器正常。
仪器型号：waters2995故障现象：自动进样器在进行进样动作过程中，当注射器抽动时，可听到较大的噪声，可能的故障原因：主机内自动进样器立柱表面脏，不够润滑所致。
各种液相色谱检测器介绍各种液相色谱检测器介绍液色迷人/紫外吸收检测器ultraviolet absorption detector紫外吸收检测器ultraviolet absorption detector 简称紫外检测器（UV），是基于溶质分子吸收紫外光的原理设计的检测器。
因为大部分常见有机物质和部分无机物质都具有紫外吸收性质，所以该检测器是液相色谱中应用最广泛的检测器，几乎所有液相色谱仪都配置了这种检测器。
它不仅有较好的选择性和较高的灵敏度，而且对环境温度、流动相组成变化和流速波动不太敏感，因此既可用于等度洗脱，也可用于梯度洗脱。
其检测灵敏度在mg/L至mg/L范围。
可见光检测器visible light detector可见光检测器visible light detector 又称分光光度检测器，是基于溶质分子吸收可见光的原理设计的检测器。
能够直接采用可见光检测的溶质不是很多，而且多数灵敏度也不高，但采用具有高摩尔吸光系数的有机试剂（配位体和螯合剂）作为衍生化试剂进行柱前或柱后衍生操作的衍生化光度检测法是相当有用的，特别是在金属离子配合物液相色谱中的应用是相当成功的。
低压梯度low-pressure gradient低压梯度low-pressure gradient 又称外梯度，是在低压状态下完成流动相强度调整的梯度装置。
只需一个高压泵，与等度洗脱输液系统相比，就是在泵前安装了一个比例阀，混合就在比例阀中完成。
因为比例阀是在泵之前，所以是在常压（低压）下混合之后再增压输送到色谱柱的。
蒸发光散射检测器克服常见的HPLC检测难题虽然阵法光散射检测器(Evaportive light Scattering,ELSD)已经开发生产15年，但是对于许多色谱工作者来说，它仍是一个新产品。
第一台ELSD是由澳大利亚的Union Carbide研究实验室的科学家研制开发的，并在八十年代初转化为商品，八十年代以激光为光源的第二代ELSD面世。
WATERS液相，可调UV (TUV) 检测器为双波长紫外/可见光(UV/Vis)检测器。
光电二极管阵列检测器，简称PDA( Photo-Diode Array)，是80年代发展起来的一种新型紫外检测器，其工作原理如下:光源经一系列光学反射镜进人流动池，从流动池出来的光再经分光系统、狭缝照射到一组光电二极管上，数据收集系统实时记录下组分的光谱吸收，得到三维的立体谱图。
安捷伦也有紫外可调.和DAD两种.waters称为PDA.其他厂家一般称为DAD.DAD相对于普通紫外检测器的优点,在于可以通过光电二极管得到三维的谱图.可以用来鉴别峰形内是否包含其他杂质峰,准确定性的作用.但对于单一物质的灵敏度而言,可调的紫外检测器的灵敏度要高于DAD.DAD检测器也要比可调的紫外检测器贵出很多.一般是其2倍的价格紫外光度检测器是液相色谱法广泛使用的检测器，它可分为固定波长和可变波长两类。
短时间中断液流快速扫描（停泵扫描），以得到紫外吸收光谱，为定性提供信息，或据此选择最佳检测波长。
光电二极管阵列检测器是紫外-可见光度检测器的一个重要进程。
由于扫描速度快远远超过色谱流出峰的速度，因此无需停泵扫描而观察色谱柱流出物的各个瞬间的动态光谱吸收谱。
经计算机处理后可得到三维色谱-光谱图。
光电二极管阵列检测器，简称PDA( Photo-Diode Array)检测器或DAD(Diode Array Detector)检测器，是80年代发展起来的一种新型紫外检测器，其工作原理如下:光源经一系列光学反射镜进人流动池，从流动池出来的光再经分光系统、狭缝照射到一组光电二极管上，数据收集系统实时记录下组分的光谱吸收，得到三维的立体谱图。
用一组光电二极管同时检测透过样品的所有波长紫外光，而不是某一个或几个波长，和普通的紫外-可见分光检测器不同的是进人流动池的光不再是单色光。
它具有以下优点:(1)可得任意波长的色谱图，极为方便;(2)可得任意时间的光谱图，相当于与紫外联用;(3)色谱峰纯度鉴定、光谱图检索等功能，可提供组分的定性信息。
液相色谱仪操作规程仪器名称：液相色谱仪Waters2695型（带光电二极管阵列PDA 2998、蒸发光散射ELS 2424检测器）光电二极管阵列一般可用5mg/L来试条件。
第一步：准备工作（1）把水和有机相分别加入各瓶中。
(纯水一周一换，换溶剂时需小心，不要用手触摸管道)。
有机相必须为进口色谱级纯度。
（2）开机顺序：电脑→泵→检测器→工作站1）泵的开启，在2695主机界面上直接操作。
待仪器自检完毕，显示Idle后，选择Menu status进行各项操作：a.仪器长久不用，管路干了，应使用Dry prime功能。
b.每次开机，都要用Wet prime功能，将要用的各个通道冲洗一遍（A为甲醇，C为乙腈，D为纯水），排除气泡。
此过程流动相不通过柱子。
具体操作为：用方向键选择一个通道，比例调成100%，其余通道为0%，在direct function 中选择wet prime，按默认值进行。
冲洗完成后，进行下一个通道的冲洗，直到完成。
仪器使用过程中，如果哪个通道更换或增加了溶剂，都要用Wet prime将此通道冲洗一遍。
c.温度设置：直接将柱温设置成所需温度，一般为30℃。
d.Purge injection：在direct function中选择Purge injection，按默认值进行。
e.Equilibrium：将流量从0调至1mL/min，如果长久不用，不能直接调，而应逐渐将流速调至1mL/min。
将通道比例调成所需比例，注意此过程流动相通过柱子，所以切记不能出现纯水通道100%的情况，纯水比例最大为95%。
在direct function中选择Equilibrium，按默认值进行。
注意：每一步操作都应在仪器显示Idle状态后再进行。
2）检测器的开启绿灯状态为自检；灯为黄色、不闪并听见提示音，为启动完成。
3）工作站的开启Empower登陆：用户名为system，密码为manager窗口左边选择项目，窗口右边选择系统（检测器）。
美国Waters公司高效液相色谱仪技术参数1四元梯度输液泵（最先进的Alliance 2695型之输液部分）1.1*工作模式：相互独立、电子控制的双柱塞直线驱动装置，双压力传感器反馈回路，无需混合器和阻尼器1.2溶剂数：四元1.3流速范围：0.010～10.000mL/min，以0.001递增1.4*流速精度：≤0.075%RSD1.5流速准确度：±1.0%1.6*延迟体积：<650µL（包括进样器扩散体积），并且不随反压变化1.7最大耐受压力：345bar（5000psi）1.8混合范围：0.0—100.0% 以0.1% 增量1.9*梯度准确度：± 0.5%，不随反压变化1.10*梯度精度：0.15%RSD ，不随反压变化1.11压缩补偿：自动，连续1.12梯度曲线：11种，包括线性、步进（2）、凸线（4）和凹线（4）1.13控制器：内置程序控制器，液晶显示，按键操作，E2PROM程序存储器1.14*延迟体积、梯度准确度和梯度精度指标不随反压变化2自动进样器（最先进的Alliance 2695型之进样部分）2.1样品瓶数：120位，由5个样品盘组成，每盘中有24个2mL样品瓶2.2进样次数：每个样品1～99次进样2.3进样精度：≤0.5%RSD2.4进样范围：0.1—100µL2.5进样线性度：>0.9992.6*进样针清洗：针内外每次进样后通过专用流路自动清洗3光电二极管阵列检测器（2998型）3.1波长扫描范围：190～800nm3.2测量范围：0.0001～2.0000AUFS3.3流通池体积：9.3uL3.4流通池池长：10mm3.5*光源：全程氘灯（190～800nm），不需要转换钨灯3.6*光路：光程尽可能短，仅使用两个椭球形反光镜聚光及消色差光栅3.7波长准确度：±1nm3.8光谱分辨率：1.2nm，始终保持不变3.9噪音值：1.0x10-5AU，在254nm、1.2nm光学分辨率、10mm流通池下测定3.10漂移：1 x 10-3AU/hour3.11*光路狭缝1.2nm，保证在最高分辨率下的最高灵敏度3.12*反相梯型光束，从光路上消除示差折光效应，软件不需要设定“参比波长”4荧光检测器（2475型）4.1 灯：150W 氙灯，连续弧光4.2检测限：水的拉曼光谱≥10004.3激发波长：200—890nm4.4发射波长：210—900nm4.5波长重现性：±0.25nm4.6波长准确度：±3nm4.7流通池：8uL4.8具有操作面板，可以独立设定工作参数、显示运行状态5柱温箱5.1温度范围：室温+5℃至65℃5.2可以放置300mm长的色谱柱及保护柱6色谱软件（Empower 2型）6.1可以双向连接（仪器控制和数据采集）本厂的各种泵和检测器（紫外、示差、二极管阵列、蒸发光散射、荧光、电化学、电导、单级质谱），也可以采集其它生产厂的气相和液相系统数据。
美国Waters公司2695系列高效液相色谱仪1四元梯度输液泵1.1*工作模式：相互独立、电子控制的双柱塞直线驱动装置，双压力传感器反馈回路，无需混合器和阻尼器1.2溶剂数：四元1.3流速范围：0.050～10.000mL/min，以0.001递增1.4*流速精度：≤0.075%RSD1.5流速准确度：±1.0%1.6*延迟体积：<650µL（包括进样器扩散体积），并且不随反压变化1.7最大耐受压力：345bar（5000psi）1.8混合范围：0.0—100.0% 以0.1% 增量1.9*梯度准确度：± 0.5%，不随反压变化1.10*梯度精度：0.15%RSD ，不随反压变化1.11压缩补偿：自动，连续1.12*梯度曲线：11种，包括线性、步进（2）、凸线（4）和凹线（4）1.13控制器：内置程序控制器，液晶显示，按键操作，E2PROM程序存储器1.14*延迟体积、梯度准确度和梯度精度指标不随反压变化2自动进样器2.1样品瓶数：120位，由5个样品盘组成，每盘中有24个2mL样品瓶2.2进样次数：每个样品1～99次进样2.3进样精度：≤0.5%RSD2.4进样范围：0.1—100µL2.5进样线性度：>0.9992.6*进样针清洗：针内外每次进样后通过专用流路自动清洗3紫外可见检测器3.1*波长、极性和灯源开关均可时间编程控制3.2内置硝酸铒滤光片用于波长校准及校正，紫外光、可见光都可以校正。
用256.7nm、379.0nm、521.5nm及656.1nm共四个波长校正。
开机时校准，随时可以进行校正3.3*可变波长范围：190～700nm3.4*检测通道：2个3.5*光源：氘灯3.6*波长准确度：±1nm3.7*光谱带宽：5nm3.8*测量范围：0.0001～4.0000AUFS3.9基线噪音：<5x10-6AU3.10漂移：1 x 10-4AU/hour3.11*梯形狭缝的光路设计，从硬件上消除示差折光效应3.12具有操作面板，可以独立设定工作参数、显示运行状态3.13流通池：池体积：10uL；池长：10mm；耐压：1000psi3.14采样速率：80Hz4柱温箱4.1温度范围：室温+5℃至60℃4.2可以放置250mm长的色谱柱及保护柱5色谱软件（Empower型）5.1*是在最新Windows 7操作系统下编写和测试。
美国Waters公司高效液相色谱仪技术参数1四元梯度输液泵（Alliance 2695型）1.1工作模式：相互独立、电子控制的双柱塞直线驱动装置，双压力传感器反馈回路，无需混合器和阻尼器1.2溶剂数：1—41.3流速范围：0.010—10.000ml/min, 以0.001ml/min 为增量1.4流速精度：≤0.075%RSD1.5流速准确度：±1.0%1.6*延迟体积：<650µL，不随反压变化1.7混合范围：0.0—100.0% 以0.1% 增量1.8*梯度准确度：± 0.5%，不随反压变化1.9*梯度精度：±0.15%，不随反压变化1.10压缩补偿：自动，连续1.11*梯度曲线：多种梯度曲线，线性、步进、凸线和凹线1.12控制器：内置程序控制器，液晶显示，按键操作，E2PROM程序存储器1.13*延迟体积、梯度准确度和梯度精度指标不随反压变化2进样器（Alliance 2695型）2.1自动进样方式2.2*样品瓶数：120位，由5个样品盘组成，24个2mL样品瓶/盘2.3进样次数：每个样品1—99次进样2.4进样精度：≤0.5%RSD2.5样品污染度：<0.1%，最少程度的交叉污染，保证热不稳定样品的完整性2.6进样准确度：±1uL2.7进样范围：0.1—2000µL2.8进样线性度：>0.9992.9*进样针清洗：针内外每次进样后通过专用流路自动清洗3紫外可见检测器（2489型）3.1波长、极性和灯源开关均可时间编程控制3.2内置硝酸铒滤光片，紫外光、可见光都可以校正。
3.3可变波长范围：190～700nm3.4*检测通道：2个3.5光源：氘灯3.6波长准确度：±1nm3.7带宽：5nm3.8测量范围：0.0001～4.0000AUFS3.9基线噪音：±0.25x10-5AU，230nm，10Hz，1.0s3.10漂移：1 x 10-4AU/hour，254nm在1mL/min（甲醇）3.11梯形狭缝的光路设计，从硬件上消除示差折光效应3.12*具有操作面板，可以独立设定工作参数、显示运行状态4色谱软件（2011年版Empower3型）4.1是在最新Windows 7操作系统下编写和测试，支持多窗口、多任务的操作模式。
Waters Alliance 高效液相色谱仪操作规程一、概述1.设备使用范围：主要用于样品中食品添加剂、农药残留、兽药残留、毒素、污染物、非法添加物测定。
2.设备主要技术/性能指标：四元溶剂混合支持等度和梯度应用，具有11个独特的梯度曲线。
自动混合持术能够以任何比例混合四种溶剂。
先进的溶剂分配功能。
串联流路具有无脉冲溶剂分配，无需使用湿润器。
在线溶剂脱气和溶剂自动压缩实现准确的流路。
集成的密封清洗实现稳定操作，并且所有溶剂类型均符合规格。
检测器包括光电二极管阵列、示差折光检测器。
二、使用要求1.存放环境温度10～30℃，湿度≤80%，电压220V。
2.流动相和纯水应用微孔滤膜过滤（纯有机相或含一定比例有机相的用有机系的滤膜，水相或缓冲盐的用水系滤膜）。
一次制得的纯水或缓冲盐流动相应在连续24小时内使用完，如未使用完也应弃去不用，并重新配制新鲜的流动相。
如需使用，应重新过滤。
流动相的pH值应在色谱柱填料允许的范围内。
该泵带有真空脱气机，可不超声，但要在泵电源开启后，等脱气机停止工作后（约需5分钟）再进行泵的其它操作。
3.流动相禁止使用氯仿、三氯（代）苯、亚甲基氯、四氢呋喃、甲苯等；慎重使用四氯化碳、乙醚、异丙醚、酮、甲基环己胺等，以免造成对柱塞密封圈的腐蚀。
三、操作程序A：开机步骤1.打开计算机，进入Windows界面。
2.打开仪器电源，待仪器各部分自检完成。
3.将2695泵密封垫清洗管路、洗针管路以及ABCD管路分别放入适当的溶剂。
4.Prime seal wash：按2695面板Diag键，选择Prime SealWash，清洗泵头，直至出口管有液滴流出，按Halt，停止Prime，再按close关闭界面。
5.Prime needle wash：再选择Prime NdlWash，清洗进样针1-2次,直至黄管有液体喷出。
Close并Exit，退出Diag界面。
6.Dry Prime：按2695面板Menu/Status键,再按Direct Function键做Dry Prime (注: 此操作仅在管路中没有液体时执行,否则直接进入步骤6)。
美国Waters公司2695系列高效液相色谱仪1四元梯度输液泵1.1*工作模式：相互独立、电子控制的双柱塞直线驱动装置，双压力传感器反馈回路，无需混合器和阻尼器1.2溶剂数：四元1.3流速范围：0.050～10.000mL/min，以0.001递增1.4*流速精度：≤0.075%RSD1.5流速准确度：±1.0%1.6*延迟体积：<650µL（包括进样器扩散体积），并且不随反压变化1.7最大耐受压力：345bar（5000psi）1.8混合范围：0.0—100.0% 以0.1% 增量1.9*梯度准确度：± 0.5%，不随反压变化1.10*梯度精度：0.15%RSD ，不随反压变化1.11压缩补偿：自动，连续1.12*梯度曲线：11种，包括线性、步进（2）、凸线（4）和凹线（4）1.13控制器：内置程序控制器，液晶显示，按键操作，E2PROM程序存储器1.14*延迟体积、梯度准确度和梯度精度指标不随反压变化2自动进样器2.1样品瓶数：120位，由5个样品盘组成，每盘中有24个2mL样品瓶2.2进样次数：每个样品1～99次进样2.3进样精度：≤0.5%RSD2.4进样范围：0.1—100µL2.5进样线性度：>0.9992.6*进样针清洗：针内外每次进样后通过专用流路自动清洗3紫外可见检测器3.1*波长、极性和灯源开关均可时间编程控制3.2内置硝酸铒滤光片用于波长校准及校正，紫外光、可见光都可以校正。
用256.7nm、379.0nm、521.5nm及656.1nm共四个波长校正。
开机时校准，随时可以进行校正3.3*可变波长范围：190～700nm3.4*检测通道：2个3.5*光源：氘灯3.6*波长准确度：±1nm3.7*光谱带宽：5nm3.8*测量范围：0.0001～4.0000AUFS3.9基线噪音：<5x10-6AU3.10漂移：1 x 10-4AU/hour3.11*梯形狭缝的光路设计，从硬件上消除示差折光效应3.12具有操作面板，可以独立设定工作参数、显示运行状态3.13流通池：池体积：10uL；池长：10mm；耐压：1000psi3.14采样速率：80Hz4柱温箱4.1温度范围：室温+5℃至60℃4.2可以放置250mm长的色谱柱及保护柱5色谱软件（Empower型）5.1*是在最新Windows 7操作系统下编写和测试。
器测检阵矩管极二6 9 9 2 s r e t a W概述z硬件简介2996的特点操作原理z方法开发时的考虑zM a s s L y n x 控制器测检A D P 6 9 9 2 s r e t a Wz2996 二极管矩阵检测器指标 波长范围: 190 t o 800 n m 灯: 氘灯 二极管: 512 光谱分辨率: 1.2 n m 流动池:标准配置: 10 m m 池长, 8 u L 体积半制备池: 3 m m 池长, 2.5 u L 体积微径池: 3 m m 池长, 2.5 u L 体积惰性池: 10 m m 池长, 8 u L 体积高压池: 10 m m 池长, 8 u L 体积I E E E -488 接口: 通过M a s s L y n x 软件控制z2996 二极管矩阵检测器的开启过程点灯, 指示灯点亮诊断, 检查校准状态灯点亮,处于准备状态稳定1小时后可用于收集数据2996 P D A 检测器的光路zL a m p o p t i c s (灯光学部件): 将氘光源发出的光聚焦通过分光器到达流池.zB e a m s p l i t t e r a n d r e f e r e n c e d i o d e (分光器和参比二极管): 将一部分光反射到参比二极管,它用于测量氘灯发出的光强度,检测器用此测量值保证灯能量输出是一个常数.zF l o w c e l l a s s e m b l y (流动池): 是流路的一部分,多色光束通过流动池.zS p e c t r o g r a p h i c m i r r o r a n d m a s k (光谱仪面镜和挡板):面镜将穿过流动池的光聚焦到位于光谱仪光学部件入口处的狭缝.面镜挡板确定聚焦于光谱仪面镜上的光束.zA p e r t u r e (狭缝): 控制到达光电二极管的光强度和波长分辨率.狭缝宽度为50 u m .zS h u t t e r a s s e m b l y (快门): 防止采样和校正期间以外的到达光电二极管的光进入.zG r a t i n g (光栅): 将多色光分散成为谱带并将其聚焦到光电二极管矩阵的平面上.zS e c o n d -o r d e r f i l t e r (二次滤波器): 降低二级反射的紫外光(低于350 n m ) 对观察的可见光(高于350 n m )强度的贡献.zP h o t o d i o d e a r r a y (光电二极管矩阵): 线性排列的512个二极管矩阵. 二极管的宽度和间隔提供1.2n m 的单波长分辨率.L a m pS h u t t e r F l o w C e l lS l i tG r a t i n gP h o t o d i o d e A r r a yP h o t o d i o d e A r r a y O p t i c sz每个光电二极管作为一个保留固定量电荷的电容器. z当光撞击光电二极管时它就会放电. 放电量取决于到达光电二极管的光量. z光电二极管于是重新充电,充电所需的电量与在一定的时间间隔(由二极管曝光时间指定)内穿过流动池的光量成正比.z每次进样都进行以下程序: 快门关闭, 阻挡到达光电二极管的光并记录暗电流, 即,没有光到达时光电二极管的能量损失. 打开快门, 核对仅有流动相时光电二极管的光能量并记录参比光谱. 由色谱柱分离出的样品进入流动池,会阻挡一部分到达光电二极管的光.被阻挡的光越多,吸光度越大. 吸光度可由下式计算: A = -l o g [(S n -D n )/(R n -D n )] 其中 S = 分析样品期间得到的信号 D = 暗电流测定期间得到的信号 R = 由参比光谱得到的信号 n = 二极管的数目L a m pS h u t t e r F l o w C e l lS l i tG r a t i n gP h o t o d i o d e A r r a yP h o t o d i o d e A r r a y O p t i c sz 什么是曝光时间?2996 对每个二极管再充电而且一次只读取一个二极管的再充电电流. 读取两个单独二极管的时间间隔就是曝光时间. 2996连续读取全部二极管最少需要11毫秒. 曝光时间的范围是11 到500 毫秒. 下面是一个关于曝光时间怎样起作用的例子,假定曝光时间设定为50 毫秒:对1号二极管再充电并读取再充电电流. 对2号二极管再充电并读取再充电电流. 连续对其余全部二极管再充电并读取再充电电流. 这一序列需要11 毫秒. 检测器要等候39 毫秒(50-11) 然后再对1号二极管再充电并读取再充电电流.L a m pS h u t t e r F l o w C e l lS l i tG r a t i n gP h o t o d i o d e A r r a yP h o t o d i o d e A r r a y O p t i c sz 如何设定曝光时间?仪器方法中的自动曝光参数允许2996根据灯能量、氘光谱、流动相吸光率及所选的波长范围,计算再充电全部二极管所需的最佳曝光时间.曝光时间被调整到氘光谱在230 n m 处的最大值为满刻度量程的85 %. A u t o E x p o s u r e 可确保光电二极管不会由于感光过度而饱和,确保光电二极管在正常的,暗电流放电的范围之上运转.z 曝光时间和采样速率之间的关系是什么? 采样速率是报给M a s s L y n x 的每秒数据点的数目. 在采样速率间隔期间读取光电二极管的次数取决于曝光时间. 例如,若曝光时间是25毫秒而采样速率是1个点/秒,则每个数据点的读取次数为: 1000 m s e c /25 m s e c = 40, 这些读取被平均化并被报告为一个数据点.分辨率z色谱分辨率z二极管分辨率z光学分辨率z光谱分辨率z色谱分辨率: 色谱峰分离程度的一种量度.z二极管分辨率: 检测器的波长范围是190 到800 n m 而二极管矩阵中有512个二极管.因此, 610n m 除以512 大约等于1.2 n m /每个二极管.z光学分辨率: 狭缝宽度决定光学分辨率, 996的光学分辨率是1.2 n m . 光学分辨率影响光谱分辨率.z光谱分辨率:光谱分辨率是指在采集光谱数据时数据点之间的波长间隔(n m ), 2996的光谱分辨率最高是1.2 n m .苯的紫外光谱230.00250.00270.00n mA b s o r b a n cez 分辨率对于苯的紫外光谱的影响上面的光谱是用3.6 n m 的分辨率收集的.下面的光谱是用1.2 n m 的分辨率收集的.注意光谱分辨率的差别, 即, 下面的光谱表现出的精细结构.概述z硬件简介2996的特点操作原理z方法开发时的考虑zM a s s L y n x 控制方法开发要考虑的因素z波长范围190 t o 800 n mz采样速率20, 10, 5, 2, 1, 0.5, 0.25, 0.1, 0.05, 0.017 光谱/秒z分辨率1.2 t o 24.0 n m , 以1.2的倍数增加B e e r ’s 定律A b s o r b a n c eC o n c e n t r a t i o n21I d e a lA c t u a lz U V /V i s 检测器的线性, B e e r ’s 定律到达光电二极管的某个波长的光通量与通过流动池的样品浓度的关系可用下式表达:A = εb c , 式中A = 吸光度, ε= 摩尔吸光系数, b = 光路长度及c = 摩尔浓度B e e r ’s 定律仅仅适用于充分平衡的稀溶液.在满足下述几个假设条件下它才成立: 样品的折射率为常数, 入射光为单色光,及没有杂散光到达检测元件. 由于样品浓度的增加, 会破坏B e e r ’s 定律所要求的化学和仪器条件,因而导致偏离线性.B e e r ’s 定律A c t u a lC o n c e n t r a t i o nI d e a lA b s o r b a n c e210B a c k g r o u n d A b s o r b a n c e10z 背景吸收的影响背景吸收降低线性曲线的工作范围.大部分流动相是有吸收的.改变背景吸收的程度取决于流动相的U V 截止波长和用户所选择的监测波长.流动相的吸光度n m 200240280A U0.40.00.81.21.62.0A c e t o n i t r i l eM e t h a n o l 254 n m1 A Un m2002402800.00.40.81.21.62.02.40.1% P h o s p h o r i c A c i d1% A c e t i c A c i d 254 n m1 A Uz 设定波长范围时需重点考虑以下几点H P L C 级的水没有明显的紫外吸收.H P L C 级的溶剂,如甲醇,乙腈有各自的紫外截止波长,即,在某一特殊波长它们具有较强的紫外吸收. H P L C 用的缓冲盐也具有紫外截止波长. 最终流动相,例如40% 水和60% 甲醇具有某个截止波长 流动相是否新鲜配制和脱气好坏会产生差异! 对于一个化合物来说,观察到的光谱是该化合物的吸收和流动相的吸收在波长范围内的叠加.在低波长处观察到的吸收可能会超出检测器的范围U V 光谱2A b s o r b a n c eW a v e l e n g t h 190350C o m p o u n d M o b i l e p h a s eO b s e r v e d概述z硬件简介996的特点操作原理z方法开发时的考虑zM a s s L y n x 控制访问I n l e t 编辑器检测器参数(1)P DAz S t a r ta n d E n d W a v e l e n g t h (起止波长): 欲监测的波长范围.z R e s o l u t i o n (分辨率): 设定光谱分辨率. 其范围是1.2 t o 24.0 n m ,以1.2 n m 的倍数递增z S a m p l i n g r a t e (采样速率): 每秒采集的光谱数目.通过下拉滚动框可选0, 0.016666,0.05, 0.1,0.25, 0.5, 1, 2, 5, 10 或20等值.z A u t o E x p o s u r e (自动曝光): 选此项则允许检测器自动设定灯能量和曝光时间.z I n t e r p o l a t e (插入): 选择此对话框以忽略氘灯在656 n m 的发射并插入一个值与相临的二极管构成排列. 仅当选用了A u t o E x p o s u r e 选项时才可应用此项.z E x p o s u r e T i m e (曝光时间):如果想设定不同的曝光时间须确定没有选中A u t o E x p o s u r e 对话框, 输入所需的时间(毫秒).z U s e P u m p S t o p T i m e (使用泵停止时间): 选中此对话框可设定用于L C 的运行时间.z S t o p T i m e (停止时间):如果想指定另外的采样停止时间,需确定没有选中U s e P u m P S t o p T i m e 对话框,输入P D A 停止采集数据的时间(分钟).z F i l t e r R e s p o n s e (滤波器响应): 确定过滤采集数据的响应时间. 范围为0 到3 秒. 缺省值为1.z N o t e :当你想得到M a s s L y n x 中所设定的P D A 采集分辨率,文件的大小将不会改变. M a s s L y n x 将填写n m 分辨率数值.检测器参数(2)模拟输出通道zO u t p u t M o d e (输出方式): 吸光度或比例输出两种zF i l t e r T y p e (滤波器类型): H a m m i n g 或S i n g l e P o l e .zF i l t e r R e s p o n s e (滤波器响应): 范围0 到5,缺省值为0.zW a v e l e n g t h (波长):监测波长用吸光度输出,计数器用比例输出.zR a t i o D e n o m i n a t o r W a v e l e n g t h (比例分母波长): 用于比例输出. 缺省值为254 n m .zO f f s e t (偏置): 范围为-0.1 到1.0 A U ,缺省值为0.0 A U .zB a n d w i d t h (带宽): 范围为1.2 t o 24.0 n m ,缺省值为2.4 n m .zT h r e s h o l d (阈值): 用于R a t i o 输出, 当比例超过此设定值,输出为有效数据.其范围为-0.1 t o 2.0 A U ,缺省值为0.1 A U .Q u e s t i o n s。
