Waters_LC-MS_日常维护参考手册
- 格式:pdf
- 大小:4.75 MB
- 文档页数:66
LC-MS日常使用规范一、开机1、开机前应观察液氮罐的分压表的压力在0.5-0.7 MPa间,氩气在0.05-0.1MPa间。
2、开机顺序:电脑-进样器电源(连续使用时可以不关电源)-进入工作站Masslynx-其它部分电源。
(特别注意:质谱电源短期内不关)。
3、打开氮气-press for operate,设定Source Temp和Desolvation Temp,等待DesolvationTemp达到300℃后-开UPLC泵,平衡系统。
4、分别编辑UPLC(Inlet)和MS(MS Tune和MS Method)方法。
5、设定流动相为梯度的初始比例(新换流动相时,要将相应的管路prime),增加流速至0.1 mL/min,待压力稳定后,增加流速到0.2 mL/min,加载Inlet Method,平衡色谱柱,一般5 min即可。
(使用APCI源时,流速要缓慢增加到0.8 ml/min。
)6、创建样品表:要确认样品盘和样品瓶的位置正确(用手拉托盘,位置正确时,托盘拉不动),样品瓶的必须盖盖。
自动进样时,不要开启进样门。
7、应注意的系统参数:UPLC:柱压≤15000 psi;TUV检测器:选择波长,扫描次数(single模式时一般为10点/second)。
MS:真空度:开Ar前,1.0×10-4;开Ar后,3.0-5.0×10-4。
8、Source Temp, Desolvation Temp和柱温达到设定值,柱压波动小于20 psi,可以进样。
二、关机1、清洗源:缓慢停止UPLC泵,然后将流动相改为90 %的乙腈,缓慢增加流速至0.2 ml/min,冲洗20 min。
2、冲洗色谱柱:断开UPLC和MS,用乙腈(A1)0.2 ml/min冲洗10 min。
3、冲洗色谱柱过程中:关闭Ar-关闭高压(Press for standby)-设定Source Temp为60℃-待Desolvation Temp将到50℃下后-关闭N2-关闭液氮瓶上的增压阀。
液质联用系统安全操作及保养规程液质联用系统(LC/MS)是一种结合液相色谱和质谱分析技术的分析仪器,对于分析化学领域有着极其重要的作用。
LC/MS具有高灵敏度、高分辨率、高准确性和高特异性等优点,广泛应用于食品、医药、环保等行业。
然而,对于使用者而言,操作和保养LC/MS也是十分必要和重要的,以确保仪器的正常工作并保证分析结果的准确性和可靠性。
安全操作须知1.实验前的准备在进行实验分析前,必须仔细阅读LC/MS使用手册中的所有安全注意事项,并作好以下准备工作:•将仪器电源连线插入接地插座,确保电源线接合可靠。
•确保分析样品和化学品处理过程符合实验室安全标准以及实验室规定的相关操作规程。
•向仪器中注入液相色谱用毒性和危险性低的试剂前,要对管路进行完全清洗以去掉残留的有机物和其它污染物。
•准备好实验用品,包括气源、溶剂等。
2.操作仪器时应注意的事项•在操作仪器时,必须先开启抽风设备,确保仪器内部是真空状态。
•在液相色谱柱加入样品前,必须紧闭阀门,待离子阱内压力达到最大值时再进行开启。
•操作仪器时,生产出的气体或化学品蒸气对人体有毒性或危害的,应留意防护政策。
3. 不良事件的处理在使用LC/MS操作过程中,可能会出现仪器故障或抽真空失败等问题,需及时采取相应的应急措施,避免对仪器使用和操作人员安全造成影响。
保养规程为了保证LC/MS正常运行并提高仪器的寿命,需要对仪器进行定期的保养和维护。
1. 液相色谱柱保养液相色谱柱是LC/MS系统中最重要的部分,定期清洗液相色谱柱可以提高柱寿命和GC/MS分析的准确性。
•长时间不使用柱的情况下,应该清理柱上涂层。
•对应用多次的液相色谱柱,可以使用高压水洗清洗柱体。
•不要过度使用柱,超出要求使用寿命,会降低仪器的灵敏度和分辨率,产生干扰物。
2. 真空泵保养真空泵是LC/MS中主要的工作部件之一,维护真空泵的正常工作状态十分重要。
•定期清理真空泵上的减压单元,以保证泵的稳定性和抽取气体的速度。
目录I. II. III.IV. 入门指南 a.处理要求b.为氨基酸分析设置自动移液平台c.准备Tecan Freedom EVO 100/4d.试剂制备e.校准品、质量控制标准品、内标和 AccQ•Tag 复溶说明f.试剂布局g.样品分发和条形码h.执行自动样品制备脚本V. 推荐的分析方法VI. 工作流程概述VII.订购信息I. 简介收货后请核对试剂盒清单,如果包装被打开、损坏,内容物缺失或超出有效期,请勿使用本产品。
如需订购替换试剂盒或部件,请联系当地的销售代表。
订购时请提供所需产品的产品部件号和批号。
Waters Kairos 氨基酸试剂盒 - 自动Waters AccQ•Tag 试剂。
NNO NH OOO简介保存和稳定性使用Kairos氨基酸分析试剂盒a.Kairos 氨基酸LC 分析方法b.Kairos 氨基酸MS 分析方法非常感谢您购买Waters™ Kairos™氨基酸试剂盒,此试剂盒仅供研究使用。
本文将介绍Kairos 氨基酸试剂盒(仅供研究使用)的常规维护和使用信息,以期协助您精准测定血浆和尿液样品中的氨基酸。
本文中的方法已经使用AccQ•Tag™衍生化试剂、ACQUITY™ UPLC™ I-Class PLUS 系统、Xevo™ TQ-S micro 和ACQUITY QDa™质谱检测器进行了验证,但我们仍建议您根据具体样品优化分析条件并确认分析结果是否准确,尤其是当样品不完全符合工作站及脚本要求时。
为了确保通用性,该试剂盒中所有试剂的量都经过相应扩大,可适应不同自动移液工作站的残留体积要求。
沃特世不提供有关自动化的咨询服务。
如果需要根据特定工作站的要求进行任何调整,建议您直接联系移液工作站供应商寻求帮助。
如果偏离了脚本或工作站要求,用户应自行确保结果准确度得到确认。
本维护和使用手册针对该方案的实施提供了十分详细的分步操作说明。
如需观看该方案的完整培训视频,请访问:/Kairos 。
第章 安装培训SOP©2008 Waters Corporation步骤内容一、新建或打开项目 二、灌注排气UPLC系统 三、打开MS 四、建立MS Tune File 五、建立MS File 六、建立Inlet File 七、进样 八、查看色谱图 九、数据处理 十、基本维护(建立LC-MS/MS方法后, 方法后,日常仪器使用则无需四、 日常仪器使用则无需四、五、六步骤) 六步骤)©2008 Waters Corporation 2一、新建项目©2008 Waters Corporation3如下步骤进行项目名称,自定义©2008 Waters Corporation4选择Default为模板©2008 Waters Corporation5如此例建立了新项目“Training”, 自动生成 “Untitled”的进样序列表项目名称序列表还未保存©2008 Waters Corporation6附:打开已有项目注:对已经建好的项目, 对已经建好的项目,直接打开使用, 直接打开使用,在Masslynx主窗口 选择——File—— Open Project——Yes——左侧选择想要 打开的项目名称——OK©2008 Waters Corporation7二、灌注排气UPLC系统1、首先请准备流动相,需要更换的更换,需要添加的添加。
2、如果水相中添加了盐类添加剂,需要用干净的抽滤瓶过0.22um滤膜。
3、水相使用不超过2天。
©2008 Waters Corporation8注意选择红色方框区域此区域任意空白处点右键,选择“Startup System”©2008 Waters Corporation 9BSM and SM QSM and FTNQSM:A、B、C、D、seal wash=3min FTN:Wash Solvent=15 s,Purch Solvent=5 cyclesOptional:Characterce Volume中选项均不选择 Equilibrate to Method中将流速设为 0,柱温和样品温度设为off整体灌注排气结束后, 整体灌注排气结束后,进样器和液相泵仪器上的第二个灯均处于熄灭状态©2008 Waters Corporation 10三、打开MS首先请输入将要调谐物质的分 子式,计算其同位素分子量。
lc维护保养简明手册一、lc设备概述 (1)1.1 lc设备的基本结构 (1)1.2 lc设备的工作原理 (2)二、日常检查 (2)2.1 外观检查 (2)2.2 系统压力检查 (2)三、流动相管理 (2)3.1 流动相的选择 (3)3.2 流动相的制备与储存 (3)四、色谱柱维护 (3)4.1 色谱柱的安装与拆卸 (3)4.2 色谱柱的清洗与保存 (3)五、进样器维护 (4)5.1 进样针的维护 (4)5.2 进样器的整体清洁 (4)六、检测系统维护 (4)6.1 检测器的清洁 (4)6.2 检测信号的校准 (5)七、数据处理系统维护 (5)7.1 数据备份 (5)7.2 软件更新与维护 (5)八、故障排除 (6)8.1 常见故障现象及原因 (6)8.2 故障解决方法 (6)lc维护保养简明手册一、lc设备概述1.1 lc设备的基本结构lc设备由多个重要部件组成,包括进样系统、分离系统、检测系统和数据处理系统等。
进样系统负责将样品准确引入设备,其结构设计保证了样品的定量和稳定注入。
分离系统中的色谱柱是核心部件,不同类型的色谱柱适用于不同性质的样品分离。
检测系统能够对分离后的组分进行检测,常见的有紫外检测器等,其具有高灵敏度和选择性。
数据处理系统则对检测到的信号进行采集、分析和存储,为用户提供直观的结果呈现。
这些部件协同工作,使得lc设备能够有效地对复杂混合物进行分离和分析。
1.2 lc设备的工作原理lc设备基于液相色谱原理工作。
当样品被注入流动相后,流动相带着样品通过色谱柱。
由于样品中各组分在固定相和流动相之间的分配系数不同,它们在色谱柱中的移动速度也不同,从而实现分离。
例如,极性较强的组分与固定相的相互作用较强,在柱中的移动速度相对较慢;而极性较弱的组分则更容易流动相快速移动。
经过一定的柱长后,各组分依次流出色谱柱进入检测系统,检测系统根据不同组分的特性产生相应的信号,进而完成整个分析过程。
LC/MS/MS操作规程及维护一、3Q 仪器开关机步骤(一)开机顺序:1.打开机械泵上的电源开关。
2.机械泵继续工作至少15分钟。
3.打开仪器电源主开关。
4.等系统真空到达1-2 x 10-5 Torr 后才可以正常操作仪器扫描。
API-150/165 2-4 x 10-5. Q-Trap 检查低/中/高设定在2/3/4 x 10-5。
5、打开电脑开关,进入Windows 桌面,双击Analyst ,进入Analyst分析界面。
(二)关机顺序1.关掉仪器电源主开关停止真空泵系统。
2.机械泵继续工作至少15分钟。
3.关掉机械泵上的电源开关。
4.等至少10分钟让仪器“自然”卸真空。
5.通过仪器后部真空管的接口卸掉全部真空。
API-2000/3200 & Q-Trap经放气口卸真空。
注意:以上操作程序适用于停机时间少于24-48小时的仪器或配置TW700分子泵的API4000在仪器安装或TW700分子泵更换后的首次开机操作。
对于API3000及配置TV801分子泵的API4000在仪器安装或TV801 或V550plus / V551分子泵更换后的首次开机操作,必须首先进行相应的分子泵软启动操作程序。
I. PPG质量校准1手动质量校准1-1 开软件,连机,进入手动调谐状态,调用己有的质量校准方法1-2 进质量校准溶液,调离子源喷雾针位置1-3 采集PPG标准品质谱数据1-4 质量校准数据计算1-5 手动调整分辨率1-6 质量校准2自动质量校准2-1 自动质量校准的设定2-2 自动优化结果II A.针泵进样ESI源MS-MS 方法手动优化1. 先确定母离子: Q1 单级质谱实验(Q1全扫描)2.Product Ion Scan(碎片离子扫描)3. 碎片离子扫描之CE单参数寻优4. Precursor Ion Scan(母离子扫描)5. Neutral Loss Experiment(中性丢失扫描)II B. 针泵进样ESI源MRM定量方法手动优化1.先确定母离子: Q1 单级质谱实验(Q1全扫描)2. 检查信号稳定性3确定子离子Product Ion Scan(碎片离子扫描)4优化MRM 定量分析质谱参数4-1 优化Q1参数使灵敏度最高及稳定性良好4-2 继续优化MRM离子对的CE 及CXPIII. 针泵进样ESI源MRM定量方法参数自动优化1.先确定母离子: Q1 单级质谱实验(Q1全扫描)2. 检查信号稳定性3. 定量参数自动优化3-1 MRM自动优化的设置3-2 MRM 参数自动优化的过程3-3 IIII. 带液相条件质谱采集方法和批文件的建立和使用1-1 调节离子源位置1-2.建立Acquisition Method采集方法1-3. 建立Acquisition Batch采集批文件V. 定量分析方法的建立和数据分析1A: 用Wizard导航器建立一个定量数据分析方法(手动方式)1B: 用已建立的定量数据分析方法分析数据2 查看和编辑定量结果表2-1查看和编辑结果列表中的各列,如何取消Audit trail(稽核跟踪)原因设定2-2查看校准曲线。
Waters Quattro Premier液质联用仪的使用与维护保养标准操作规程(SOP)2004-11-09目录1.简述 (1)1.1样品入口 (2)1.2真空系统 (2)1.3数据系统 (2)2.环境要求 (3)3.仪器使用 (3)3.1开机步骤 (3)3.2质谱调谐窗口各项参数设定 (5)3.3创建项目 (6)3.4质量校正 (7)3.5调谐(Tuning) (14)3.6信号采集 (15)3.7 2695型液相色谱(Inlet Method) (19)3.8创建质谱方法 (25)3.9创建样品列表 (27)3.10 运行样品列表( Sample List) (30)3.11 QuanLynx来编辑定量方法 (39)3.12 用QuanLynx进行批处理 (44)3.13 查看QuanLynx定量结果 (47)3.14关机 (52)4.注意事项 (53)5.维护与保养 (54)1. 简述Quattro Premier (Figure 1-1 )是一台高效串联四极杆质谱仪,用于常规LC/MS/MS分析。
Figure 1-1 Quattro Premier Mass Spectrometer样品的离子化发生在处于大气压状态下的离子源中。
离子通过取样锥孔进入真空系统,然后穿过源travelling-wave(T-Wave TM)进入第一级四极杆,在此按照质/荷比(m/z)过滤(Figure 1-2 )。
按照质量数分开的离子进入T-Wave碰撞室,进一步发生碰撞诱导裂解(CID)或者直接进入第二级四极杆。
碎片离子通过第二级四极杆进行质量分析。
离子最后经过倍增电极,phosphor和光电倍增器检测系统检测。
输出信号被放大,数字化后传给信号系统。
Figure 1-2 Quattro Premier Schematic1.1 样品入口该仪器可以与下列两种进样方式组合:a. HPLC系统,可以提供LC流出组分的分子量信息,进行目标分析和定量。
液质联用日常维护项!质谱仪具有很高的灵敏度和分辨率,在定性和定量方面有很有优势,所以现在配置质谱仪的实验室越来越多。
相对色谱仪来说,质谱仪除了对环境的要求更高,操作和维护也更加繁琐。
每个品牌不同系列的质谱仪,维护要求也不同,但它们都有些基本的维护操作。
接下来,我们就来总结下质谱仪日常需要做到的维护,基本适用大部分的液质联用仪哦~质谱仪工作环境①周围无强烈震荡源及电磁感应装置②电源要求接地交流电③室温要求15~28℃④相对湿度要求20%~80%可见质谱仪在使用过程中,要特别注意室内温度和湿度的控制。
一般没有外置飞行管的飞行时间质谱对环境的要求更严格,外部环境会直接影响质量轴的准确性。
质谱仪通常采用两级抽气结构,前级为机械泵,后级为分子涡轮泵工作时先由前级泵,将真空腔内的压强降低几个数量级,再由后级泵降至工作所需压强。
液质原理、分类、特点1、LC-MS原理概述液质联用以液相色谱作为分离系统,质谱为检测系统。
样品在质谱部分和流动相分离,被离子化后,经质谱的质量分析器将离子碎片按荷质比分开,经检测器得到质谱图。
体现了色谱和质谱优势的互补,将色谱对复杂样品的高分离能力,与MS具有高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构信息的优点结合起来,在药物分析、食品分析和环境分析等许多领域得到了广泛的应用。
2、常用的两大分类系统一种是从质谱的离子源角度来划分,包括电喷雾离子源(ESI),大气压化学电离源(APCI),大气压光电离源(APPI)和基质辅助激光解吸电离源(MALDI)等。
另一种是从质谱的质量分析器角度来划分,包括四极杆、离子阱、飞行时间(TOF)和傅立叶变换质谱等。
ESI、APCI和APPI三种离子源大多与四极杆和离子阱质谱联用,是目前应用最广泛的几种液质联用仪。
3、主要分析特点LC-MS除了可以分析气质联用所不能分析的强极性、难挥发、热不稳定性的化合物之外,还具有以下几个方面的优点:•分析范围广,MS几乎可以检测所有的化合物,比较容易地解决了分析热不稳定化合物的难题;•分离能力强,即使被分析混合物在色谱上没有完全分离开,但通过MS的特征离子质量色谱图也能分别给出它们各自的色谱图来进行定性定量;•定性分析结果可靠,可以同时给出每一个组分的分子量和丰富的结构信息;•检测限低,MS具备高灵敏度,通过选择离子(SIM)检测方式,其检测能力还可以提高一个数量级以上;•分析时间快,LC-MS使用的液相色谱柱为窄径柱,缩短了分析时间,提高了分离效果;•自动化程度高,LC-MS具有高度的自动化。
2489检测器维护保养1. 更换灯。
检测器的灯仅在4小时以上不用时,才需关灯,频繁开关灯也会影响灯寿命。
如果在开机时发现灯故障,不一定时灯本身的问题,有可能是流动通池污染造成的,可按上一节清洗流通池流程冲洗后在开灯。
如果灯连续多次无法点亮或检测器无法校正,建议您更换检测器灯。
自购买之日起一年或使用2000 个小时以内(以先到期限者为准),Waters 保证灯能够点亮并且通过启动诊断测试。
拆卸灯。
流程如下:(1)通过按 <Shift> <Lamp>,然后再按 <Shift> <Lamp>,使用小键盘熄灭灯。
提示:因为仪器冷却风扇将保持运行,所以使用小键盘熄灭灯可让灯冷却得更快。
要使用定时事件关闭灯的电源,请参阅 Empower 或 MassLynx “帮助”中的说明。
(2)关闭检测器的电源并拔下电源线。
(3)熄灭灯后,使其冷却至少 30 分钟。
(4)取下左前面板盖。
这里要注意,灯罩在运行期间非常热。
为防止灼伤, 请在拆卸灯之前让其冷却 30 分钟。
操作灯时,使灯处在灯罩中,为避免接触到紫外线而使眼睛受伤,在更换灯之前关闭检测器的电源,佩戴可过滤紫外线的护目镜。
操作期间使灯处在灯罩中。
(5)关闭灯的电源,并断开电源线。
(6)拧松灯座中的两个装配螺钉。
(7) 从灯室中取出灯装置。
注意:灯气体处于微负压状态下。
为防止玻璃碎片飞溅,在处理灯时应谨慎。
在处理旧灯之前将其置于新灯的包装材料中以使其得到合适的缓冲。
2. 安装新灯为避免眼睛受到有害的紫外线辐射,请勿在灯位于仪器之外或未正确固定到位时点亮灯。
不要触摸新灯的玻璃灯泡。
灯泡上的污垢或指纹会对检测器运行产生不良影响。
如果灯需要清洗,请用乙醇和镜头薄纸轻轻擦拭。
不要使用粗糙的纸或施加过大压力。
在开始之前,从包装材料中取出灯,检查新灯是否有颗粒或污垢。
如有必要,请用气体除尘器或擦镜纸清洁灯。
记录序列号(位于灯连接器线附加的标签上)。
LC/MS液质联用经验手册液质使用经验与禁忌一、酸性物质适合做负离子检测,所以流动相偏碱性较合适,促使其解离,碱性物质适合做正离子检测,流动相中适当的加入酸,促使其形成正离子,流动相中适当加一些醋酸钠(或者醋酸铵),可形成加钠的正离子或加铵的正离子。
液质分析中推荐使用的流动相和添加剂推荐使用不使用/尽量不使用有机溶剂反相:乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇、四氢呋喃、二氯甲烷正相:吐仑、己烷、苯、环己烷、四氯化碳四氢呋喃缓冲液乙酸铵、甲酸铵磷酸盐、柠檬酸盐、碳酸盐酸乙酸、甲酸、三氟乙酸(正离子)硫酸、高氯酸、磷酸、盐酸、磺酸碱氨水季铵、强碱、三乙胺其它清洁剂、表面活性剂、离子对试剂、不挥发盐二、糖苷类的物质在做FAB和ESI+时,[M+Na]峰往往比[M+H]峰要强,此为经验,原因只是推测可能和天然产物的提取过程有关;盐类化合物如盐酸盐、硫酸盐在质谱中酸的部分一般不会出现;二羧酸盐(esi 负离子模式)除了分子离子峰外,会出现连续掉44的两个峰,为失去羧酸根的离子,这三个峰非常特征,但是会受锥孔电压的影响,调低电压谱图会更漂亮。
三、胺类物质做ESI质谱时要注意进样量要少,因为很容易离子化,不易冲洗干净,会影响后面样品的测定。
像三乙胺在液质联用时不能用于调节流动相pH值。
若不慎引入三乙胺,在正离子检测时总会出现很强的102峰(三乙胺的[M+H])。
四、质谱用水一般用娃哈哈纯净水之类的就很好;质谱用甲醇和乙腈,换用了很多品牌,发现Merck的还是稍微好一些;Finnigan用的氮气不一定要用到液氮瓶,用普通的钢瓶气就可以了,可能还省钱些;建议大家买一个好一点的手电筒和一个放大镜,手电筒用来看源里面,放大镜看你割的毛细管平整。
五、质谱的基线其实跟液相的紫外检测器和荧光检测器一样,基线高的原因不外乎内部和外部的原因。
①你选择的流动相在质谱的响应比较高,比如水相比较多的时候,噪音比较大些;还有如果盐含量比较大的时候,噪音更大些。
第章 安装培训SOP©2008 Waters Corporation步骤内容一、新建或打开项目 二、灌注排气UPLC系统 三、打开MS 四、建立MS Tune File 五、建立MS File 六、建立Inlet File 七、进样 八、查看色谱图 九、数据处理 十、基本维护(建立LC-MS/MS方法后, 方法后,日常仪器使用则无需四、 日常仪器使用则无需四、五、六步骤) 六步骤)©2008 Waters Corporation 2一、新建项目©2008 Waters Corporation3如下步骤进行项目名称,自定义©2008 Waters Corporation4选择Default为模板©2008 Waters Corporation5如此例建立了新项目“Training”, 自动生成 “Untitled”的进样序列表项目名称序列表还未保存©2008 Waters Corporation6附:打开已有项目注:对已经建好的项目, 对已经建好的项目,直接打开使用, 直接打开使用,在Masslynx主窗口 选择——File—— Open Project——Yes——左侧选择想要 打开的项目名称——OK©2008 Waters Corporation7二、灌注排气UPLC系统1、首先请准备流动相,需要更换的更换,需要添加的添加。
2、如果水相中添加了盐类添加剂,需要用干净的抽滤瓶过0.22um滤膜。
3、水相使用不超过2天。
©2008 Waters Corporation8注意选择红色方框区域此区域任意空白处点右键,选择“Startup System”©2008 Waters Corporation 9BSM and SM QSM and FTNQSM:A、B、C、D、seal wash=3min FTN:Wash Solvent=15 s,Purch Solvent=5 cyclesOptional:Characterce Volume中选项均不选择 Equilibrate to Method中将流速设为 0,柱温和样品温度设为off整体灌注排气结束后, 整体灌注排气结束后,进样器和液相泵仪器上的第二个灯均处于熄灭状态©2008 Waters Corporation 10三、打开MS首先请输入将要调谐物质的分 子式,计算其同位素分子量。
TargetLynx™首先,大家请看这里。
(点击)是不是有人一看到这些光谱就感觉头疼?与UV 相比,MS分析更加灵敏。
由于其具有高灵敏度的特点,因此经常能看到许多不想看到的东西。
也就是说,除了峰值外,污染也更加明显。
另外,是不是有人正在使用这样的离子源来进行检测?MS分析不会像LC那样产生废液。
通过离子源喷雾的样本,全部会进入MS的内部。
这样势必会造成污染。
离子源受到污染后会有什么后果呢?具有代表性的结果就是导致灵敏度下降。
虽然MS是高灵敏度的分析方法,但如果管理与使用方法不当,会产生适得其反的效果。
虽说今天应该将焦点放在<熟练使用LC/MS的方法>这一课题上,但还是有必要说一下熟练使用所需的注意事项。
以下列举3点。
保持仪器环境条件处于良好状态。
减少故障。
发生故障时,能迅速妥善处理。
以上就是这3点。
其中重要的内容是(点击)日常维护。
接下来,这里所说的维护指的是什么维护内容呢?为确保仪器持续正常运作的保养、点检作业,(点击)建议客户实施日常维护。
客户也可实施日常维护。
既然建议客户实施维护作业,对于至今尚未实施过的各位,需要注意哪些要点呢?又该怎么执行呢?有哪些复杂的操作呢?这些问题将造成您心中的疑问与不安。
(点击)其实,并没有必要担心。
LC/MS是一套系统,所以看上去可能很复杂。
但如果能够区分各功能模块,并理解其功能要点,绝对不难。
接下来,(点击)将对日常维护的内容,进行相关说明。
首先,在此,先按照LC、MS、附属设备这3大类,对LC/MS系统进行分类。
然后,将HPLC细分为泵与自动进样器,将MS细分为离子源、Probe、分析器,将附属设备细分为真空泵、氮气发生仪器、数据系统。
接下来说明一下各模块的功能。
如果能理解其功能,就自然而然能理解注意要点,理解了注意要点后,应该就能理解维护的内容了。
LC/MS是一套系统。
正如您所知,它是由各种设备与模块组成。
首先,我个人认为,逐个理解各设备与模块,是理解LC/MS系统攻略的捷径。
请想象一幅拼图。
一般是不能一下子完成的。
经过从各部分着手,逐步完成,最终绘成一幅画面。
我认为其实是一个道理。
下面,我们从HPLC的功能开始进行说明。
首先(点击)、这就是LC泵。
泵的功能是输送液体。
但不仅仅是输送液体,还应保持稳定输送。
然后(点击)、这是自动进样器,自动进样器的功能是准确注射检测样本。
每次都必须准确注射指定的量。
同时,不能有污染。
泵的功能是稳定输送液体。
因此,泵的注意要点中,首先应确认压力。
如压力发生变化,基线与保留时间将会出错,因此,请用稳定的速度输送液体,并确认其压力有无定期变动。
以下是流动相的注意要点,请使用符合HPLC 要求等级与LC/MS 要求等级的流动相。
但是,即使达到了HPLC 要求等级与LC/MS 要求等级,也不意味着可以完全放心。
还需要定期更换新鲜的流动相。
同时,更换时,请按各泵管路逐个更换。
残留溶剂请勿继续使用。
残留品不能用于更换新鲜的流动相。
接下来是泵的维护方法。
在对LC实施维护时,也会造成污染。
必须定期进行清洗。
执行清洗方法时,请将水、乙腈、甲醇、异丙醇等量混合。
(此时,如添加甲酸至0.2 %,则清洗效果更佳。
)拆卸色谱柱后输送液体1L左右即可。
清洗后,将水与甲醇等量混合,同样拆卸色谱柱,然后请输送液体。
同时,虽然此处并未记述,请定期更换溶剂瓶内的溶剂过滤器。
接下来是自动进样器的注意要点。
自动进样器的首要问题是污染。
由于MS比一般的UV更加灵敏,污染也比UV检测仪更加明显。
因此,确保针阀的充分清洗就成了重要的环节。
其要点在于必须针对样本选择清洗溶剂。
是否易溶于有机溶剂?是否易溶于水?高极性?低极性?这些请仔细参照样本的性质。
维护时仍需要注意污染问题。
污染问题得不到改善时,或许也可尝试更换进样针来解决。
有些样本可能易于吸附于左侧的peek针,或右侧的不锈钢针。
污染问题无法解决时,尝试更换材质也可作为不错的解决方法。
也就是说,上述针可采用本公司UPLC-Acquity的制品。
至此,已说明了LC各模块相关的功能、注意要点及维护方法。
接下来将开始说明MS的部分。
现在,我们把MS分成Probe、离子源、分析器、检测器,共4个部分。
首先,先说明一下MS的整体流程。
由自动进样器注射的样本,经过色谱柱后先进入Probe。
在这里,离子化的样本被进行喷雾。
喷雾后的样本从离子源样本锥孔(口)进入MS内部。
这个样本锥孔(口)可提供大气压与真空环境。
样本锥孔的内部为真空环境。
此图中蓝色的部分即为真空环境。
进入MS内部的样本在分析器处依据m/z进行分离,然后通过检测器进行检测。
上述信号将通过数据系统的软件进行显示。
接下来讲述Probe的相关内容。
Probe的功能主要分为2点。
通过对输送的流动相与样本施加高电压(毛细压力),使其离子化。
将该样本转换为细微的液滴,并进行喷雾。
上述Probe为ESIProbe。
样本喷雾是Probe的功能,所以,注意要点应集中于其喷雾运作能否顺畅进行。
首先请确认出自Probe的喷雾。
必须确认Probe前端的喷雾是否顺畅。
如果存在断断续续的现象,可能存在不锈钢毛细管的堵塞。
发生堵塞后,压力即会升高。
如将从色谱柱连接至Probe的线管拆下后压力明显下降,则毛细管存在堵塞。
如毛细管发生堵塞,则只能进行更换,防止其发生堵塞的要点在于保持毛细管内部的清洁。
在样本流过后,请输送流动相,清洗毛细管。
Probe的主要维护与更换部件包括2点。
建议客户实施该项作业。
保持稳定喷雾是Probe的功能。
在不锈钢毛细管发生堵塞时,必须实施毛细管的更换。
另一个导致喷雾不稳定的原因在于Probe的吸头。
就是这个部分。
喷雾不稳定时,请实施更换。
接下来讲一下离子源的功能。
离子化的样本经过离子源(样本锥孔、口),进入MS内部的分析器。
这部分如受到污染,将会影响灵敏度。
这就是离子源,但是很容易受到污染。
注射样本时,仅注射作业就会导致污染。
污染导致灵敏度低下后,只能对离子源进行清洗,但真的不希望经常进行清洗操作。
这方面还是要请大家多多留意。
首先,不可注射极高浓度的样本。
这里所说的高浓度样本是指浓度在10ppm~100ppm的样本。
作为简便选择,请使用浓度为1ppm左右的样本。
XevoTQ, XevoTQs建议使用<100ppb第二点是使用切换阀。
使用切换阀对流路进行切换。
如设定切换阀仅将目标样本导入离子源,在其他时间将通道切换至离子源外,应该可以避免对离子源造成不必要的污染。
虽然是维护作业,离子源注射样本后,仅注射作业就会导致污染。
由于离子源在受到污染后会引起灵敏度低下,因此必须实施清洗作业。
其中要点在于清洗方法。
选择清洗溶剂时请参考检测样本的性质,然后实施超声波清洗。
一般情况下,通过超声波清洗都可恢复畅通,偶尔也可能由于样本锥孔(口)的表面覆盖有绝缘膜等物质,有时需要用细颗粒磨砂纸进行打磨。
以上就是Probe、离子源的说明。
接下来是质量分离部·分析器的说明。
分析器的作用是依据m/z分离离子化的样本。
同时,实施MRM检测与SIM检测时,仅允许目标样本通过。
分析器的注意要点中,首先第一个是确认真空度。
由于分析器处于真空环境下,所以请确认其真空度。
通过监测真空度,可以实现每日对仪器环境的确认。
就如同对人而言,它或许就像是人的体温。
第二个是仪器周围的温度。
由于温度变化会导致质量发生偏差,因此请定期监测仪器设置场所的温度。
作为质量分离部的维护,需要实施定期的校准。
什么样的情况下必须校准呢?但是通过实施校准,可修正质量轴。
另外,目前实施的校准是在当前环境下对仪器的质量轴进行修正。
例如,刚刚抽真空后与抽真孔后过了一段时间,真空度有所不同。
也即是仪器的环境条件不同。
实际的检测作业,应在真空状态稳定后实施。
以下将说明附属设备。
作为主要组成部分,包括有真空泵、氮气发生仪器、数据系统。
真空泵的作用是维持仪器的真空环境。
氮气发生仪器可以提供样本喷雾所必需的氮气。
因客户不同,氮气供给的方法各不相同,因此,有些客户的仪器构成中可能不包含有氮气发生仪器。
数据系统能够控制LC/MS的系统,并进行数据分析。
进行回转泵的维护时,首先请观察润滑油的量、颜色、并确认泵机的声音。
润滑有最初应该是无色透明,使用后逐渐变成茶色,进而变成黑色。
由于各泵机都有自己会专用的润滑油,更换润滑油时请务必注意。
接下来讲述过滤器的更换。
上述过滤器会圈住润滑油,因此,如果不定期进行更换,将导致润滑油大量混入排气中。
另外,请不要忘记实施气体震气。
接下来讲述涡旋泵的相关内容。
维护内容与回转泵相同。
其中有一个注意要点,无油涡旋泵虽然无油,但不代表其无需维护。
作为氮气发生仪器,客户自身实施的维护作业大致包括更换过滤器。
生产商不同,维护的内容也不同,因此,详细内容请确认操作手册。
同时,依据运转时间,维护内容会发生变化,因此不进行分析时,将氮气发生仪器设置成OFF后,会延长仪器的使用寿命。
就如同这里所显示的内容,请注意设置环境。
下面将说明数据系统。
首先是数据操作的相关事项。
硬盘可能会在某一天突然崩溃。
PC状态异常的相关联络基本上是1周一次。
因此,建议您务必定期进行备份。
碎片整理与定期重新启动可确保数据系统稳定运作,因此请务必确认。
自此(点击)我们将开始讲解故障对应。
面对故障时首先,建议确认的内容包括以下3点。
第一,确认已选择的方法。
例如,MS的检测条件、LC的检测条件、注入量与之前是否相同?变更条件时,由于名称相同而会覆盖,可能条件已发生改变。
首先,建议确认与之前的条件是否相同。
第二,确认流动相·样本的调整方法。
以前,曾有客户将流动相A与B设置相反。
样本的浓度出错,可能导致灵敏度下降。
溶解有样本的溶剂出错、灵敏度变化后,峰值的形状可能会不理想。
第三,确认流动相的调整日期。
以前,有客户报告流动相瓶产生藻类生物。
如有咨询,我们将根据客户的信息采取措施。
因此,以仪器异常为前提,采取对应措施,这3点发生问题时,故障解决前的时间可能会出现延长。
请确认上述3点内容。
LC/MS是一套系统。
LC与MS任何一侧发生故障,都将导致在灵敏度与再现性方面难以获取良好的数据。
为了快速解决故障,区分LC的原因或是MS的原因非常重要。
现在,就简便区分的方法,我们说明以下2点。
第一项的确认方法。
首先,连接UV检测器。
为了能够在UV上确认峰值,需准备1ppm左右的样本准备了1ppm左右的样本后,UV检测器应该可进行确认。
(点击)如UV检测器的结果正常,则问题应在于MS侧。
(点击)如UV检测器结果中未明确显示峰值,则问题应在LC侧。
如问题在MS侧,则表现如下。
(点击)UV检测器结果可见峰值(点击)MS结果中未见峰值(点击)(点击)即故障在MS侧接下来说明问题在LC侧的情况。
(点击)UV检测器结果中未见峰值,(点击)同时,MS的结果中也未见峰值。