荧光法测定羟基自由基及中草药抗氧化性

理化检验-化学分册P TCA(PAR T B:C H EM.ANAL.)2007年第43卷10工作简报褪色光度法测定羟自由基及常见食物的抗氧化活性张　东,刘志江,高俊杰,余　萍(沈阳理工大学环境与化学工程学院,沈阳110168)摘　要:在用稀硫酸调节至p H4的溶液中,生物染色剂玫瑰桃红R能被由Fento n反应产生的羟自由基(・O H)氧化而褪色。

根据在520nm波长处所测得的吸光度的消褪的程度(ΔA=A0-A1),实现了羟自由基存在量的光度测定,应用此方法还测定了自由基消除率,作为选择清除剂的判据;还测定了几种常见食品的抗氧化活性。

从方法的操作和所测得的结果证明该方法具有操作简单、方便且稳定而经济。

关键词:褪色光度法;羟自由基;抗氧化活性;食品中图分类号:O657.3 文献标识码:A 文章编号:100124020(2007)1020852203Color2F ading Photometric Determination of H ydroxyl Free R adical and Anti2Oxidation Activity of Some Common Foodstuff sZHANG Dong,L IU Zhi2jiang,G AO Jun2jie,YU Ping(College of Envi ronmental and Chemical Engineering,S heny ang Universit y of S cience andEngineering,S heny ang110168,China)Abstract:In a solution of p H4adjusted with dil.H2SO4,bordeaux red was oxidized and decolorized by hydroxyl free radical(・O H)produced by the Fenton reaction.By measuring the magnitude of intensity of color2 fading(ΔA=A0-A1)at the wavelength of520nm,the amount of・O H present was determined photometrically.The proposed method was also used to determined the anti2oxidation activity and used as a method to choose scavenging agents according to thair scavenging rates.The scavenging rates or the anti2oxidation activity of some common foodstuff s were determined by this method,which was proved to be quite simple,stable,convenient and economic.K eyw ords:Color2fading photometry;Hydroxyl f ree radical;Anti2oxidation activity;Foodstuff 羟自由基是一种氧化能力很强的自由基,生物体内的羟自由基可使糖类、氨基酸、蛋白质、核酸和脂肪类发生氧化[123]。

羟自由基清除能力测定原理一、引言羟自由基是一种高活性的化学物质，具有很强的清除能力。

羟自由基清除能力测定是一种常用的方法，用于评估化合物对自由基的抗氧化能力。

本文将介绍羟自由基清除能力测定的原理和相关实验方法。

二、羟自由基的产生羟自由基是一种带有羟基（OH）的自由基，具有很强的氧化能力。

羟自由基可以通过多种途径产生，例如光解水、氧化还原反应以及生物代谢过程中的产生等。

在实验室中，常用的产生羟自由基的方法是通过添加氢过氧化物和过氧化氢催化剂来进行。

三、羟自由基清除能力的评估方法1. 直接测定法直接测定法是最常用的羟自由基清除能力评估方法之一。

该方法利用特定的化学试剂（如5,5-二甲基-1-吡咯烷酮）与羟自由基发生反应，生成稳定的产物，通过测定产物的浓度变化来评估清除能力的强弱。

该方法操作简单、结果可靠。

2. 电子自旋共振法电子自旋共振法是一种基于电子自旋共振谱仪的测定方法。

该方法利用特定的探针与羟自由基反应生成稳定的产物，通过测定产物的电子自旋共振信号强度来评估清除能力的大小。

该方法对样品要求较高，需要配备专业的设备。

3. 化学计量法化学计量法是一种通过测定特定试剂的消耗量来评估羟自由基清除能力的方法。

该方法常用的试剂有抗坏血酸、谷胱甘肽等，通过与羟自由基反应生成稳定的产物，进而测定试剂的消耗量来评估清除能力的强弱。

该方法操作简单，适用于大批量样品的测定。

四、影响羟自由基清除能力的因素羟自由基清除能力受多种因素的影响，包括温度、pH值、浓度、反应时间等。

一般来说，较高的温度、适宜的pH值和较长的反应时间有助于提高羟自由基清除能力。

此外，样品的浓度也是影响清除能力的重要因素，适宜的浓度可以使清除能力得到准确的评估。

五、应用领域羟自由基清除能力测定在抗氧化剂的筛选和评估中具有广泛的应用。

抗氧化剂可以通过清除羟自由基来减轻氧化应激引起的损伤，具有重要的保护作用。

因此，羟自由基清除能力测定可以帮助筛选出具有较强抗氧化能力的化合物，并为新药开发和保健品研究提供依据。

用荧光分光光度法测定中药配方颗粒对自由基的清除作用Measure the Ability of Eliminating the Free Radical by the Prescription Granule of Chinese Traditional Medicine Usingthe Fluorometry张承蔡继文 *（中山大学化学与化学工程学院有机化学研究所。

广州510275）摘要Fe2+－EDTA在弱碱性介质中可以还原溶解氧，最终生成羟自由基。

本实验用荧光分光光度法测定了山茱萸等9种市售的中药配方颗粒对Fe2+－EDTA体系产生的羟基自由基(·OH)的抑制程度，测定了不同浓度的半支莲等三种中药的清除率，并得到了其清除率与其浓度得线性耦合曲线，比较了山茱萸和半支莲对自由基的清除的能力。

关键词中药；羟基自由基；荧光分光光度Abstract: Fe2+-EDTA system in basic condition can reduce O2 that resolved in water to ·OH. We use the Fluorometry to evaluate the extent that the prescription granule of Chinese traditional medicine such as Fructus Corni eliminate the ·OH. We measure the eliminating rate of different concentration., and obtain the linear fit curve to the concentration.We also compare the eliminating ability between Fructus Corni and Herba Scutellariae Barbatae.Key words: Chinese traditional medicine, hydroxy free radical, Fluorometry1 前言自由基是在分子氧、多不饱和链脂肪酸巯基化合物、醌类化合物等的反应和代谢过程中产生或衍生出来的, 是一种外层轨道上含有未配对电子的原子、原子团或呈特殊状态的分子。

(10)申请公布号 (43)申请公布日 2013.06.12C N 103149188 A (21)申请号 201310069048.3(22)申请日 2013.03.05G01N 21/64(2006.01)(71)申请人东华大学地址201620 上海市松江区松江新城区人民北路2999号(72)发明人张煊 司芳 阎克路(74)专利代理机构上海天翔知识产权代理有限公司 31224代理人吕伴(54)发明名称一种荧光定量检测羟基自由基的方法(57)摘要本发明涉及一种荧光定量检测羟基自由基的方法，特别是涉及一种以苯五甲酸为荧光探针的荧光定量检测羟基自由基的方法，具体步骤为：将捕捉剂苯五甲酸加入待测体系中，使其摩尔浓度为羟基自由基产生物摩尔浓度的1倍及1倍以上；检测待测体系荧光强度，由荧光强度计算此时待测体系中羟基自由基的产生量。

苯五甲酸苯环结构仅含一个反应位点，与羟基自由基加成后生成唯一荧光性产物—羟基苯五甲酸，使定量检测更准确。

本发明可在20～98℃对产生羟基自由基的体系(pH ≥5)进行定量检测。

本发明操作简单快速、专一性强、灵敏度高。

有助于探究纺织化学、环境化学、制浆造纸等产生羟基自由基工艺体系的机理，从而更好地指导生态生产工艺。

(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书6页 附图5页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书6页 附图5页(10)申请公布号CN 103149188 A*CN103149188A*1/1页1.一种荧光定量检测羟基自由基的方法，其特征是：所述方法的荧光探针为苯五甲酸，其分子结构式为2.根据权利要求1所述的一种荧光定量检测羟基自由基的方法，其特征在于，具体步骤为：将捕捉剂苯五甲酸加入待测体系中，使其摩尔浓度为羟基自由基产生物摩尔浓度的1倍及1倍以上；捕捉反应结束后调节待测体系pH 为9～10；检测待测体系的荧光强度，根据荧光强度与羟基苯五甲酸浓度的线性关系及羟基自由基与羟基苯五甲酸的一一对应关系，由荧光强度计算出此时待测体系中羟基自由基的产生量。

对苯二甲酸荧光检测羟基自由基原理苯二甲酸荧光检测羟基自由基原理是一种常用的生物化学实验方法，用于研究羟基自由基活性。

该原理是基于苯二甲酸自由基被氟化铈(Ce3+)氧化生成激发态氧化铈离子(Ce4+)，从而产生荧光信号的原理。

首先，苯二甲酸荧光检测羟基自由基的实验中，加入苯二甲酸(1mM)和氟化铈(Ce3+)(0.1mM)在提取样品体系中，制备苯二甲酸自由基(C_6H_4(COO^·)–COO^·)。

接下来，将苯二甲酸自由基与羟基自由基反应，生成荧光产物。

羟基自由基是一种高活性的自由基，具有氧化还原能力。

羟基自由基与苯二甲酸自由基反应时，会将苯二甲酸自由基还原为苯二甲酸。

反应过程如下:C_6H_4(COO^·)–COO^·+·OH-->C_6H_4(COOH)_2反应进行到一定程度时，苯二甲酸的量同时减少，氟化铈(Ce3+)则被氧化为激发态氧化铈离子(Ce4+)。

激发态氧化铈离子(Ce4+)具有发光性质。

当它返回基态时，会发出蓝色荧光。

最后，通过荧光光谱仪检测样品溶液中的荧光信号，荧光信号的强度与羟基自由基的浓度成正比。

苯二甲酸荧光检测羟基自由基的原理可总结为两个部分：首先，苯二甲酸和氟化铈的反应生成苯二甲酸自由基；其次，苯二甲酸自由基与羟基自由基反应生成荧光产物。

该方法有以下优点及应用领域：1.灵敏度高：荧光检测方法可以灵敏地检测到低浓度的羟基自由基。

2.反应选择性强：该方法可以选择性地检测羟基自由基，与其他自由基和化合物不发生反应。

3.操作简单：实验步骤简单，并且不需要复杂的仪器设备。

4.广泛应用：该方法可用于测定生物体内羟基自由基的浓度，研究羟基自由基在生物体内的生成和消除过程等。

综上所述，苯二甲酸荧光检测羟基自由基通过利用苯二甲酸自由基在与羟基自由基反应时产生蓝色荧光的特性，实现了对羟基自由基活性的检测。

该方法在生物化学研究中具有广泛的应用前景。

2009年6月三门峡职业技术学院学报Jun．,2009竺!堂篁!塑!竺竺翌璺!堕量璺璺翌呈璺兰!皇￡竺!!!塑塾望堡!!!：!!堕2圣技术与应用光度法检测适用于环境背景的羟基A由基的研究进展靳慧征(河南建筑职业技术学院，郑州450007)摘要：适用于环境背景中的羟基自由基的检测是研究高级氧化技术在环境治理中应用的关键。

采用光度法检测羟基自由基具有快速、便捷等优点。

通过对比整理羟基自由基的光度法检测方法，介绍了氧化荆显色法、比色法及荧光光度法在近年来的应用。

并指出了各种方法的优点及局限性。

关键词：环境；羟基自由基；光度法：检测中图分类号：X703文献标识码：A文章编号：1671—9123(2009)02-0093—03收稿日期：2009—03—12作者简介：靳慧征(1973一)．女。

河南郑州人，河南建筑职业技术学院讲师。

O引言近年来．高级氧化技术的开发与应用．为环境中高浓度难降解废水的治理及有机废气的处理提供了新的思路。

高级氧化技术最显著的特点是通过不同途径产生羟基自由基．以羟基自由基为主要氧化剂与有机物发生反应。

在各种活性氧自由基中．羟基自由基的反应活性最强．与大多数有机污染物反应的速率常数在106—1010mol一1…L S1．是一种非选择性的氧化剂。

在已知的氧化剂中．．O H的能力仅次于F2，能很容易氧化各种有机物和无机物，氧化效率高。

反应速率快．可诱发一系列的自由基链反应．几乎无可选择地l互接攻击水体和大气中的各种污染物，直至将污染物降解为C O：、H：O和其它矿物盐。

因此．在大气污染治理和废水深度化处理中得到广泛应用。

随着羟基自由基在环境治理中应用研究的深入．人们越来越重视自由基的检测．但是由于自由基是化学反应的中间体．反应活性强、存在浓度低。

大部分自由基寿命极短．所以准确确定O H的绝对浓度是十分困难的。

目前。

检测羟基自由基的方法主要有电子自旋共振法(ESR)、高效液相色谱法(H PL C)、电化学分析法111(P123--128)以及化学发光分析法【21(n阱埘)等。

荧光分光光度法测定两种中药对羟基自由基的清除作用吕永为;郭祥群【期刊名称】《厦门大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2004(043)002【摘要】Fe2+-EDTA在弱碱性介质中还原溶解氧生成超氧阴离子自由基(O-2·),O-2·进一步歧化为H2O2和氧分子,之后Fe2+-EDTA与H2O2反应生成羟基自由基(·OH).·OH进攻对苯二甲酸产生唯一的强荧光羟基化产物2-羟基对苯二甲酸(HOTP).·OH清除剂加入体系后,与对苯二甲酸竞争结合·OH,导致对苯二甲酸的羟基化产物HOTP的生成量减少,从而导致体系荧光强度明显降低.我们首次成功地将以上原理运用于中药对·OH清除作用的研究,并于实验中首次发现中药白头翁和半支莲可以清除·OH,两种中药对·OH的清除具有负协同效应,同时测定了它们对·OH的清除率分别为白头翁IC50=1.80×10-2 mg/mL;半支莲IC50＝1.76×10-2 mg/mL.【总页数】5页(P208-212)【作者】吕永为;郭祥群【作者单位】厦门大学化学系,教育部现代分析科学重点实验室,福建,厦门361005;厦门大学化学系,教育部现代分析科学重点实验室,福建,厦门361005【正文语种】中文【中图分类】O657.3【相关文献】1.荧光动力学分析法测定5种(口山)酮清除超氧自由基和羟基自由基的活性 [J], 赫春香;王杨;曹璨;王世盛2.罗丹明B-Fe2+-H2O2光度法测定两种中药对羟基自由基的清除作用 [J], 王征帆3.荧光分光光度法测定中药对羟自由基的清除率 [J], 陈冠华;田益玲;杨更亮;王晓燕;赵花荣4.一些天然提取物对超氧自由基和羟基自由基的清除作用 [J], 韩强;林惠芬;朱玲莉5.Fenton反应产生的羟基自由基及其清除的分光光度法测定 [J], 宋艳;邹洪;董瑞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

三种中草药抗氧化性研究第26卷,第6期2009年11月光谱实验室ChineseJournalofSpectroscopyLaboratoryV o1.26,NO.6November,2009三种中草药抗氧化性研究①韩明蔺志铎薛福玲吴冬青②(河西学院化学系西部资源环境化学重点实验室甘肃省张掖市甘州区北环路87号734000)摘要微波辅助法提取3种中草药中黄酮类化合物,从还原能力,清除羟基自由基和抗油脂氧化方面,研究其抗氧化活性.结果表明:3种中草药中,总黄酮含量从高到低依次为:老鹤草(132.516mg/g),孺莶草(78.4749mg/g),白花蛇舌草(35.6519mg/g).其提取物具有较好的还原能力,且对羟基自由基均有明显的清除作用,其清除效果随提取物浓度的增加而增强.三种中草药提取物也具有一定的抗油脂氧化能力,它们的抗氧化能力存在差异.实验结果为我们更加合理开发利用这些药用植物提供了很好的科学依据.关键词三种中草药;总黄酮;抗氧化能力中图分类号:R282.71~O657.31文献标识码:A文章编号:1004—8138(2009)06—1480—05l前言黄酮类化合物是一类广泛存在于植物界,具有多种生物活性的多酚类化合物n].它有着广泛的生理活性,具有抗癌防癌,抗衰老,降血脂,免疫调节,抗菌等生物学功效瞳].在医药生产,功能食品开发等领域有着广阔的应用前景.目前有关黄酮类化合物的化学成分,药理药效与应用方面的研究已成为该领域的热点.白花蛇舌草,孺莶草,老鹤草均为我国传统中药品种,白花蛇舌草具有清热利湿,抗肿瘤,抗菌消炎等作用].稀莶草,老鹤草均具有祛风湿,利关节等功效.它们在中医中药领域都具有很高的药用价值.近年来随着对中草药有效成分的不断深入探讨,有必要对我国传统中草药药效功能和在制药和食品工业的进一步开发利用做出细致研究.本文采用微波辅助法提取3种中草药中黄酮类化合物,从还原能力,清除羟基自由基和对油脂抗氧化效果等方面对其抗氧化性进行了研究.此结果有望为中草药黄酮类化合物在制药和食品工业领域的深入开发利用提供实验数据.2实验部分2.1材料白花蛇舌草,孺莶草,老鹤草(购于张掖中药店),猪油(自制).2.2主要试剂芦丁[生化试剂,中国医药(集团)上海化学试剂公司];邻二氮菲,HO,AI(NO.).,NaNO.,①甘肃省教育厅科研资助项目(0509—02);西部资源环境化学重点实验室科研资助项目(xz0603)②联系人,电话:(0936)8282566;手机:(o)130****0331;E-mail:*******************作者简介:韩明(1985一),女,甘肃省金昌市人,研究方向:天然产物活性物质提取与分析吴冬青(1961一)?女,沈阳市人,教授,主要从事无机及分析化学教学工作.收稿日期:2009一o4—23;接受Ft期:2009—05—11第6期韩明等:三种中草药抗氧化性研究FeSO,KI,无水KHzPO,KzHPO,K.Fe(CN)e,95乙醇,NaOH,碘,冰乙酸,三氯甲烷,三氯乙酸,三氯化铁均为国产分析纯.2.3主要仪器WFJ21o0型可见分光光度计(尤尼柯仪器有限公司);I.G烧烤型微波炉[乐金电子(天津)电器有限公司];RE一52型旋转蒸发仪(上海青浦沪西仪器厂);SHB—III循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);国华HH一6数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司).3实验方法3.1黄酮类化合物测定_s]3.1.1黄酮化舍物提取称取样品粉末4.0000g两份,加入95乙醇40mI,室温浸提2h后,用微波低火提取3min,重复3次,抽滤,合并滤液,浓缩定容至100mI容量瓶中,得一定浓度的黄酮备用液.3.1.2校准曲线的绘制准确称取芦丁对照品30rag,用80乙醇微热溶解后,置于50mI容量瓶中,用80%乙醇定容.准确吸取2O.00mI,再以乙醇定容于50mI,摇匀,即得芦丁对照液,浓度为0.24mg/mI.准确吸取芦丁对照液0,0.2,0.4,0.6,1.0,1.2,1.8,2.4,3.0,3.6mL,分别置于10mI容量瓶中,均用80乙醇补至4mI,准确加入50/0NaNOz0.4mL,摇匀,放置6min后,加入10 AI(NO.).0.4mI,摇匀,再放置6min,然后加5NaOH溶液4.0mI,用蒸馏水定容至刻度,放置15min后,在510nm处测定吸光度(以试剂空白为参比),以芦丁浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标作图,绘制校准曲线.绘图,得回归方程:一0.28z+0.0065一0.9998黄酮含量(mg/g)一(z×)/叫式中:——稀释倍数;髓,一一样品重量g.3.2提取物还原能力的测定移取不同体积的提取液,加入pH6.6的磷酸盐缓冲液和1%K.Fe(cN)溶液各2.5mI 并混合均匀,混合液50C保温20min后加入 2.5mI10的三氯乙酸溶液,混合后以3000r/rain离心10min.取上清液0.5mI,加入10.OmI蒸馏水及0.5mI0.1%的FeC1.溶液.测定反应液在700nm处的吸光度值.吸光度的大小表示还原力的强弱.3.3羟自由基清除率的测定口取0.7mI5mmol/I邻二氮菲,加2.OmIpH7.4的磷酸缓冲液,充分摇匀,加0.3mI7.5mmol/IFeSO,每加一管立即摇匀,加2.0ml0.5H:O,最后用HO补至10mI.在37C 水浴下反应1l,然后在536nm波长下测定吸光度A(损伤).同上法,加提取液后加H.0.测定(加药).同上法,不加入HO和提取物,测定AⅢ(未损伤).羟基自由基清除率d计算如下:一≠堕×100%n未损伤一n损伤3.4提取物对油脂抗氧化能力的测定[83.4.1校准曲线的绘制准确移取碘化钾一碘(CI一0.001mol/I)标准溶液0.5,0.6,0.7,0.8,0.9mI置于具塞试管中,加入2.OmI的氯仿一冰醋酸溶液(V/V=2:3)后,再加入1.0mL1%的可溶性淀粉溶液,最后光谱实验室第26卷定容至15mL,摇匀后,取上清液于波长为585nm处,测定其吸光度值(以蒸馏水为参bL).以碘量为横坐标,吸光度值为纵坐标绘制校准曲线.得方程为:一0.652z一0.0604r一0.99663.4.2油脂过氧化值(POV)的测定取30mI猪油,加人一定量的样品提取物于100mL烧杯中,充分混匀后,置于(60+1)℃恒温箱中避光保存,每24h搅拌一次,并交换它们在恒温烘箱中的位置,每隔48h进行取样测定.油脂测定POV方法:称取油样约0.6g于具塞试管中(同时做平行试验与空白试验,以蒸馏水为参比),加人2.0mI的氯仿一冰醋酸溶液,摇匀溶解后加人1.0mL的1O的KI溶液,具塞摇匀30s,并置于暗处反应3min.取出后加入1.0mI1的可溶性淀粉溶液,以后操作同校准曲线.根据其吸光度和校准曲线计算碘的生成量,并计算样品的POV.POV(meq/kg)一.4结果与讨论4.1样品中总黄酮含量准确吸取一定量的样品备用液,根据3.1.2方法测定样品在510nm处吸光度值,代人回归方程,计算出样品中黄酮的含量,结果见表1.表1总黄酮含量(mg/g,Jl=5)由表1可知,三种中草药中老鹤草黄酮含量最高,达到132.516mg/g;白花蛇舌草最低,其黄酮含量为35.6519mg/g.各样品中黄酮含量测定的RSD值在0.11一0.52%之l'~-J,说明测定黄酮类化合物的方法具有一定的可靠性.4.2提取物的还原能力1准确吸取不同体积的样品提取液,按3.2方法测定其还原能力,结果见图1.由图1所示,在测定浓度范围内,3种中草药n均显示出一定的还原能力,且还原能力与提取物浓度呈明显的量效关系.当用量为1.7mI时老鹤草提取物的还原能力趋于平稳,稀莶草和白花蛇舌草的还原能力仍呈上升趋势.当用量超过2.0mI时,其吸光度值超出有效读数范围3种中体积/mL一?一稀莶草一?一白花蛇舌草—.▲一老鹤草图1三种中草药还原能力测定草药提取物具有还原能力,这为其清除?OH等自由基提供了可能.4.3清除羟基自由基的能力按3.3所述方法,精密吸取不同用量样品提取液,测定了提取物对?OH的清除作用(平行3次).结果如图2,图3和图4所示.由图2—4可知,3种中草药提取物对?OH有明显的清除作用,其清除效果随提取物用量的增加而逐渐增强.其中稀莶草,当提取物用量为 2.5mI时,清除效果最好,清除率达到85.19%.超第6期韩明等:三种中草药抗氧化性研究过最佳用量时,清除率趋于平稳.而白花蛇舌草和老鹤草,对?OH的清除能力与提取物浓度呈正相关,其最佳清除率均大于6O.当用量分别超出3.3mI和1.0mL时,吸光度值超出有效测定范围.3种中草药提取物对?OH的清除能力强弱不一,表明清除能力与提取物中黄酮含量,结构有关.7瓣筵3●,,'l010.91.72.53_3体81/mL图2白花蛇舌草对?OH清除作用4.4提取物对油脂的抗氧化效果莲褂篮蜒体积/mL图3稀莶草对?OH清除作用油脂在贮藏期间,由于光,热,空气中的氧以及油脂.中水和酶的作用,常会发生变质腐败的复杂变化,营养谆价值降低,引起酸败.因此,抑制油脂的酸化腐败一直莛4 是油脂工业的研究重点.为研究3种中药材对油脂抗氧化的能力,在30mI猪油中分别加入样品提取液充分混匀后,置于(60+1)C的烘箱中,每隔48h测定其POV,结果如图5所示.由图5可知,3种中草药提取物对猪油均具有抗氧化作用,但抗氧化能力存在差异.在烘箱(60+1C)避光条件下,猪油的POV随着时间的延长而升高.在氧化初期,分别添加有白花蛇舌草和稀莶草提取液的猪油POV一直保持在较低水平,8d后POV急剧升高.而添加有老鹤草提取液的猪油,其POV的变化速率较缓慢.由此表明,对油脂的抗氧化能力与提取物中黄酮的含量,结构有关.5结论2.515乓>0.5体积,mL图4老鹤草对?OH清除作用6时间/d一?一老鹤一一-一白花蛇舌:——-一赫赫'—x-.图53种中草药提取物对猪油的抗氧化效果(1)用微波辅助法提取3种中草药黄酮类化合物.总黄酮含量由高到低依次为:老鹤草(132.516mg/g),稀莶草(78.4749mg/g),白花蛇舌草(35.6519mg/g).其方法省时,节能,能得到较高的提取率,是提取黄酮类物质的有效途径.(2)抗氧化实验中,3种中草药提取物均显示出一定的还原能力,且对?OH有不同程度的清除作用,其清除能力强弱不一,同时对油脂的抗氧化作用也存在差异.由此表明抗氧化活性与提取物中黄酮含量,种类有关.3种中草药具有的抗氧化活性,使其有望作为天然抗氧化剂在医药,食品,化工等领域得到开发应用.对于3种中草药的药效功能,抗氧化活性及其他生物活性还有待于今后进一步研究.1484光谱实验室第26卷参考文献[13郭雪峰,岳永德.黄酮类化合物的提取?分离纯化和含量测定方法的研究进展口].安徽农业科学,2007,35(26):8083--8086.[2]吴茜,李志裕,唐伟方等.黄酮的结构改造与生物活性[J].天然产物研究与开发,2008.20(3):557—562.[33江苏新医学院.中药大辞典(上册)[M].上海:上海科学技术出版社,1985.754—755.[43中华人民共和国卫生部药典委员会编.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社,1977.196,632:[5]吴冬青,安红钢,齐亚娥等.九种药用植物花黄酮类物质提取及对羟自由基清除能力的研究[J].天然产物研究与开发,2008.2O(3):5l4—517,548.[63王丽华,段玉峰.马艳丽等.槐花多糖的提取工艺及抗氧化研究[J],西北农林科技大学,2008,36(8):213—217,228.[7]蔡仲军,陈仕江,尹定华等.不同产地冬虫夏草清除羟自由基作用的研究[J].中草药,2004,35(1):57—59.[8]张蕾,乔旭光,王广贞等.荷叶黄酮提取及对油脂抗氧化作用的研究[J].粮油加工,2008,(O8):53—55.[9]何东平.油脂精炼与加工工艺学[M].北京:化学工业出版社.2005.254. StudyonAntioxidantActivitiesofThreeTypesofChineseHerbalMedicines HANMingIANZhi—DuoXUEFu—IingWuDong—Qing (KeyLaboratoryofResourcesandEnvironmentChemistryofWestChma,DepartmentofCh emistry.HexiUmversity,Zhangye.Gansu734000,P.R.China) AbstractThemicrowareassistedextractiontechniquewasusedtoextractflavonidsfrom GeraniumwilfordiiMaxhn,Siegesbeckiaorientalis.,Oldenlandiadiffusa(Willd.)Razb. Meanwhile,theantioxidativeactivitiesofthreetypesofChineseherba1medicineswerestudi edbydeterminingthereducingcapacity,antioxidativeactivityinlipidandscavengingeffectsonhy droxylradica1.TheflavonoidcontentfromtheirswereGeraniumwilfordiiMaxim(132.516mg/g), Siegesbeckiaorientalis.(78.4749mg/g),Oldenlandiadiffusa(Willd.)Roxb(35.6519mg/g). The extracthadstrongreducingcapacityandscavengingeffectsonhydroxylradical,scavenginge ffectson hydroxylradicalwerepositivecorrelationtoextractconcentration.andalsotheextractionpo ssessedantioxidantactivitiesinlipid.Theirantioxidantactivitieshaddifference.Thisworkoffersthe new scientificdataforthefurtherstudiesofcomprehensiveutilizationoftheHerbresource. KeywordsThreeTypesofChineseHerbalMedicines;TotalFlavonoid;AntioxidantCapacit y关于赠送作者样刊和发放稿酬的通知各有关作者:从2007年第1期起,本刊赠送作者发表自己论文的当期刊物(样刊),均按篇赠送2本样刊,用普通印刷品邮寄给作者联系人,若遗失或被邮局退回,不再补赠.作者另有需要,请在发表之日起2个月之内汇款购买(第1期7o元/本;其余40元/本,免收挂号邮寄费),逾期不再办理.由于普通印刷品邮寄的送达时间不稳定,若作者急需,请预交特快专递费(30元/件).给作者发放的稿酬均邮寄给联系人,请各位联系入接到邮局通知后,务必及时到邮局领取.若2个月未领,被邮局退回,本刊不再补发.特此通知《光谱实验室》编辑部欲购买者请直接通过电子邮件(发到*************)与本编辑部联系.。

测定中草药有效成分和抗氧化作用前言中草药是中医药学的重要组成部分，其疗效主要依赖于有效成分。

同时，中草药中还含有丰富的天然抗氧化物质，具有显著的抗氧化作用。

因此，测定中草药的有效成分和抗氧化作用对于研究中草药的药理作用和保健价值具有重要意义。

本文将介绍测定中草药有效成分和抗氧化作用的相关方法。

测定中草药有效成分的方法中草药的有效成分主要包括生物碱、黄酮类、鞣质、皂苷等。

以下是测定中草药有效成分的方法：1. TLC法TLC法是一种简单、快速的定性和定量分析方法，适用于中草药中各种有效成分的分离和检测。

TLC法的原理是利用物质在不同介质中的迁移速度，对物质进行定性和定量分析。

2. HPLC法HPLC法是一种高效液相色谱分析方法，适用于中草药中各种有效成分的分离和定量。

HPLC法的原理是通过液相流动将混合物中的组分分离，并利用检测器对分离后的组分进行检测和定量。

3. GC-MS法GC-MS法是一种气相色谱-质谱联用分析方法，适用于中草药中挥发性有效成分的检测和定量。

GC-MS法的原理是通过气相流动将混合物中的组分分离，然后利用质谱检测器对分离后的组分进行鉴定和定量。

测定中草药抗氧化作用的方法中草药中可能含有丰富的天然抗氧化物质，这些物质具有显著的抗氧化作用。

以下是测定中草药抗氧化作用的方法：1. DPPH自由基清除法DPPH自由基清除法是一种简单、快速的评价样品抗氧化能力的方法。

该方法的原理是用自由基DPPH检测样品中含有的抗氧化物质。

样品中的抗氧化物质能够捐赠电子给DPPH，使其转变为无色物质，从而评价样品的抗氧化能力。

2. ABTS自由基清除法ABTS自由基清除法是一种常用的抗氧化能力测定方法。

该方法的原理是利用ABTS分子的自由基敏感性，检测样品中的抗氧化物质。

样品中的抗氧化物质能够与自由基结合，使得ABTS颜色由深紫色逐渐转变为浅色。

3. 总多酚含量测定法总多酚含量测定法是一种常用的抗氧化能力测定方法。

化学发光法测定羟自由基及其应用的研究羟基自由基是一类难以检测的氧自由基, 在生物体内起着重要的调节作用。

而且，羟自由基的水平也与人体健康状态密切相关。

为了便于科学研究这种调节作用并评价人体健康状况，目前，应用最多的检测羟自由基的方法是分光光度法和化学发光法。

其中，化学发光法可以快速检测样品中羟自由基的水平，具有良好的灵敏度和准确度，受到了广泛的关注。

化学发光法是一种以光学共振能量传递过程作为检测信号来检测和测定样品中羟基自由基浓度的一种新型技术。

它由发光源、受体系统和检测系统三部分组成。

发光源一般用紫外灯、荧光灯或半导体发光来源，受体系统组成有抗氧化剂和荧光探针，它们可以发生能量转换而具有发散荧光的能力。

检测系统主要由分光光度仪和检测系统组成，它可以实现紫外辐射的能量收集和发散荧光的测量。

这样，样品中的羟基自由基水平就可以通过收集到的发光信号来进行精确测定和评价。

羟自由基的检测和测定不但是人体健康状况的重要评价指标，而且也是环境保护和有机物污染评价的重要手段之一。

由于它具有快速、准确、灵敏度高等优点，因此，化学发光法被广泛应用于重金属污染土壤的检测，有机污染物的检测，桥岸沉积物的检测，城市空气污染控制，地表水质评价等领域。

化学发光法在检测羟自由基水平方面已经取得了一定的成果并受到广泛的应用，但是，由于该技术仍处于发展阶段，存在若干薄弱环节，因此，要突破当前的技术瓶颈，还需要进一步深化研究。

综上所述，化学发光法是一种检测和测定羟自由基水平的新型技术，它可以快速、准确检测样品中羟自由基的水平，所以它被广泛应用于各种领域，但是仍有若干技术瓶颈需要进一步深化研究。

法对天然抗氧化物质抗羟自由基性能的测定闫有禄（云南省红河学院理学院化学系2001级化学教育化教AB班蒙自661100）摘要：为了检测Fenton试剂（H2O2/Fe2+体系）产生的羟自由基（.OH），本文采用了亚甲基蓝和邻二氮菲―Fe2+两种分光光度法对六种天然的野生植物抗氧化剂对羟自由基的作用进行了分析和检测。

两种分光光度法对羟自由基的分析检测及抗氧化剂的抗羟自由基性能检测方法，对研究工作都具有很好的实用性。

从茶叶、黄草、甘草、葛根、姜、枇杷籽中提取的抗氧化物质与羟自由基清除率具有明显的量效关系，具有很好的抗氧化能力及羟自由基清除作用，方法稳定性好，操作简便，测定快速，能简便的筛选抗羟自由基的清除率和有效抗氧化剂药物的方法。

关键词：羟自由基、羟自由基检测、分光光度法、自由基清除率、抗氧化作用、抗氧化剂。

引言：羟自由基是体内最活泼的活性氧，是一种氧化能力很强的自由基，是目前所知活性氧中对生物体毒性最强、危害最大的一种自由基，可导致许多病理变化，它可以通过电子转移、夺取氢原子（加成）和羟基化（脱氢）等反应方式与生物体内的多种分子作用，在生物体内，需氧代谢的氧化还原反应所产生的羟自由基，可以引发不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，并损伤膜结构及功能，使糖类、氨基酸、蛋白质、核酸和脂类等都发生氧化，使物质的氧化性遭受损伤和破坏，造成细胞坏死或突变。

同时羟自由基还与衰老、肿瘤、辐射损伤和细胞吞噬等有关，羟自由基的检测对于自由基的生物作用研究有重要意义。

羟自由基清除率是反映药物抗氧化作用的重要指标，因此，加强对羟自由基作用的研究是很有必要的。

产生羟自由基的方法除经典Fenton反应外，还有Cu+―H2O2、Co2+―H2O2体系也能产生羟自由基，只是它们的最大吸收波长不同。

目前分析检测羟自由基的方法有电子自旋共振法、化学发光法、脉冲辐解法、细胞色素C氧化法、无机荧光法、高效液相色谱法、薄层扫描法等。

采用这些方法时所需仪器特殊，试剂昂贵，因而使其应用受到限制。

羟基自由基定量检测技术的研究进展因此，研究羟基自由基的生成和检测技术对于揭示其在生物体内的作用机制以及相关疾病的预防和治疗具有重要意义。

近年来，研究者们通过不断改进和创新，取得了一系列关于羟基自由基的定量检测技术的研究进展。

一种常用的羟基自由基检测技术是直接检测法，其原理是通过不同的荧光探针对羟基自由基的化学反应，使荧光发生变化，进而间接测定羟基自由基的浓度。

最常用的荧光探针是2',7'-二氟荧光素（DCFH），它可以与羟基自由基发生反应，生成能够产生绿色荧光的DCK荧光素。

该方法简单易行，但对于测定低浓度羟基自由基的能力有限。

随着技术的发展，研究者提出了许多改进的方法来增强羟基自由基的检测灵敏度。

例如，利用共轭聚合物增加荧光探针的敏感性，或者使用放射性同位素标记的探针来实现放射性测量等。

这些方法在一定程度上提高了羟基自由基检测的灵敏度和准确性，并且可以在不同的实验条件下应用。

另外，还有一种非常重要的羟基自由基检测技术是电子顺磁共振（EPR）技术。

该技术基于羟基自由基与顺磁性探针之间的反应，通过测量顺磁探针的共振信号来间接确定羟基自由基的浓度。

EPR技术具有高灵敏度、高特异性和非破坏性的优点，因此广泛应用于羟基自由基研究中。

但是，EPR技术设备昂贵且操作复杂，限制了其在实际应用中的推广。

除了直接和间接检测法之外，还有一些新的技术被用于羟基自由基的定量检测。

例如，近红外光谱法可以通过测量组织或血液样品中近红外波段的光吸收谱，间接估计羟基自由基浓度。

近年来，近红外光谱法已经在动物实验和临床研究中得到了广泛应用。

综上所述，羟基自由基的定量检测技术在研究中发展迅速。

直接检测法、电子顺磁共振技术和近红外光谱法等方法在羟基自由基检测中得到广泛应用，并取得了一定的研究进展。

随着技术的不断革新和发展，相信羟基自由基检测技术将在生物医学领域中发挥越来越重要的作用。