甲基紫分光光度法测定羟基自由基含量

福建分析测试　Fujian Analysis &Testing 2006,15(3)收稿日期:2006-2-22作者简介:朱琳娜(1981～),女,在读硕士研究生,主要研究方向为水污染控制理论与技术。

E -mail:lina .a manda@NR 光度法测定Fent on 试剂所生成的羟基自由基朱琳娜　何争光　吴超(1、郑州大学环境与水利学院,郑州　450002;2、河南神火集团,永城　476613)摘　要:要提高Fent on 试剂在废水处理中的效率,关键就是要提高羟自由基的生成率和利用率。

本文提出了检测Fent on 试剂反应产生羟自由基的新方法,羟自由基氧化中性红使其褪色,用分光光度法测定其△A 值的变化,可间接测定羟自由基的产生量。

并考查了FeS O 4投加量、H 2O 2投加量、酸度、反应时间等影响羟自由基生成量的主要因素,为Fent on 试剂在废水处理中的应用提供了参数依据。

另外,该法稳定性好,操作简单,测定快速。

关键词:光度法;中性红(NR );羟自由基;Fent on 试剂;废水处理中图分类号:O657.32　文献标识码:A 文章编号:1009-8143(2006)03-0010-03Photom etr i c D eterm i n a ti on of Hydroxyl Free Rad i ca l Produced i n Fen ton ’s Reagen t Reacti on System by Toluylene Red D ecoloura ti onZhu L i n na He Zhengguang W u Chao(1.School of Envir on ment and W ater Conservancy,Zhengzhou University,Zhengzhou,450002,China;2.Shenhuo Gr oup,Henan,Yongcheng,476613,China )Abstract:The key t o enhance the efficiency of Fent on’s reagent in waste water treat m ent is t o enhance the p r oductivity and utilizati on rati o of hydr oxyl radicals in the syste m.I n this paper,for the deter m inati on of the hydr oxyl free radical p r oduced by Fent on reacti on,a ne w phot ometric method based on its oxidati on reacti on with t oluylene red is put f or ward .The col or intensity of t oluylene red will be changed after the oxidati on reacti on,the change of △A is measured phot ometrically,and the a mount of the hydr oxyl free radical can be deter m ined indirectly .The leading fact ors influencing the p r oductivity of the hydr oxyl free radical in the system such as the a mounts of FeS O 4and H 2O 2,reacti on ti m e and reacti on temperature were tested .The useful para meters for Fent on’s reagent in waste water treat m ent were offered .I n additi on,the stability of thismethod is good,its operati on is convenient,and its deter m inati on is fast .Key words:phot ometry;t oluylene red;hydr oxyl free radical;Fent on’s reagent;waste water treat m ent Fent on 试剂在废水处理中的应用主要是利用H 2O 2在Fe 2+的催化作用下所生成的具有强氧化性的・OH 的作用,通过其强氧化性对废水进行预处理以提高废水可生化性,利于其后续处理。

分光光度法测定茶叶对羟基自由基的清除率发布时间：2021-07-06T09:34:10.120Z 来源：《教育学》2021年5月总第249期作者：薛云尹俊泉[导读] 生物化和生物医学等领域中的重要研究课题。

与此同时，·OH测定方法的研究也备受关注。

甘肃省陇南市武都区莲湖小学746000摘要：邻二氮菲在紫外光区有强烈吸收，加入H2O2产生羟基自由基，茶叶提取液会使其中的羟基自由基减少，此时，溶液的吸光度值也随之减小，据此原理可以计算茶叶提取液对羟基自由基的清除率。

体系最佳实验条件为pH=7.00，缓冲溶液体积用量1.00mL，邻二氮菲浓度3×10-4mol/L，Fe2+浓度5×10-3mol/L，1%H2O2用量1.00mL，茶叶提取液用量20.00mL，按照邻二氮菲-Fe2+-H2O2顺序加入反应4min。

在以上实验条件下，测得羟基自由基的清除率为44.1%。

关键词：分光光度法邻二氮菲羟基自由基茶叶提取液机体的疾病与衰老是一个复杂的生物过程。

对此，学者们有各种解释，如自由基学说、传学说、交联学说、免疫学说等，其中自由基学说是目前国内外较普遍认同的一种。

自由基是一类外层轨道含有未配对电子的原子团或特殊状态分子，与人体关系最为密切的是氧自由基，如超氧自由基(·O2-)、羟基自由基(·OH)、脂自由基(ROO·)等，其中以·OH作用最强。

它可以通过电子转移、加成以及脱氢等方式与生物体内的多种分子作用，造成糖类、氨基酸、蛋白质、核酸和脂类等物质的氧化性损伤，使细胞坏死或突变。

·OH还与衰老、肿瘤、辐射损伤和细胞吞噬等有关，羟自由基清除率是反映药物抗氧化作用的重要指标。

因此，·OH参与的各种研究已成为生物学、生物化和生物医学等领域中的重要研究课题。

与此同时，·OH测定方法的研究也备受关注。

近年来，国内外文献报道了检测羟自由基的主要方法有：电子自旋共振法、高效液相色谱法、化学发光法、光度法等。

混合均匀度1、背景饲料工业是用变异系数来衡量饲料混合机混合物料的均匀程度。

根据国家标准，生产配合饲料、浓缩饲料的变异系数应控制在10%以下。

若变异系数过高，成品饲料中各种营养成份分布均匀性较差，可导致饲喂动物生长不一，饲料报酬下降，严重时可造成重大损失，给企业带来信誉危机，因此，混合均匀度是饲料加工的重要指标。

通过成品各组分质量差异性的测定，不仅可以反映饲料成品质量，也是用来评价混合设备加工工艺的重要指标，同时也是确定合理的混合时间的依据，被誉为饲料工业的心脏。

2、技术(1)甲基紫法是以甲基紫色素作为示踪物，将其与添加剂一道加入，预先混合于饲料中，然后以比色法测定样品中甲基紫含量，作为反映饲料混合均匀度的依据。

（2）沉淀法本法是利用比重为1.59以上的四氯化碳处理样品，使沉于底部的矿物质等成分与饲料中的有机组分分开，然后将沉淀的无机物收回、烘干、称重，以各样品中沉淀物含量的差异来反映饲料的混合均匀度。

（3）粗灰分法饲料中的有机物质在高温下（550±20℃）烧灼或，将所剩残渣冷却后称重，根据各个样品含量差异，得出饲料混合均匀度。

（4）钙测定法饲料经高温灰化或浓酸处理后，其有机物被破坏，钙变成溶于水的离子，用草酸铵定量沉淀，用高锰酸钾法间接测定钙的含量，从各个样品中钙含量的差异，求出饲料的变异系数。

（5）磷的测定法磷的测定在钙测定的试样中，用钒钼酸铵处理，生成黄色（NH4）3PO4,NH4VO3 16M0O3，在波长420nm下进行比色测定。

计算出各个样品的含量，根据含量的差异反映饲料的混合均匀度。

（6）粒度法饲料原料经粉碎后，会形成各种不同规格大小的颗粒，数种原料混合后，各颗粒之间通过物理、化学及其他作用，各不同成分规律性地分布在各物料堆中。

因此，用某一规格的筛子，对样品进行测定，把筛上残留物进行称重，根据各样品间残留物的重量，可求出混合均匀度。

（7）粗蛋白分析法饲料在催化剂与浓硫酸作用下，其中的氮生成硫酸铵。

mb检测羟基自由基原理
羟基自由基是生物体内最常见的自由基之一，它们对细胞膜、DNA和蛋白质等生物大分子的氧化损伤相当严重。

MB（Methylene Blue）是一种常用的羟基自由基捕捉剂，其原理是利用MB的亚甲基（CH2）与羟基自由基发生反应，形成蓝色的还原型MB。

在实验中，使用MB可以测定样品中羟基自由基的水平。

首先，将样品与MB混合，然后加入还原剂（如维生素C），使MB还原为无色的亚甲基蓝（Leucomethylene Blue）。

羟基自由基会与亚甲基蓝发生反应，使其氧化还原为蓝色的还原型MB。

通过测量样品中还原型MB的吸光度，可以计算出羟基自由基的浓度。

MB检测羟基自由基的方法简单、灵敏，不需要昂贵的仪器设备，因此被广泛应用于生物体内羟基自由基的检测。

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mb检测羟基自由基原理
MB检测羟基自由基原理
MB（甲基蓝）是一种常用的化学试剂，它可以用来检测羟基自由基。

羟基自由基是一种高度反应性的分子，它在生物体内起着重要的作用，但也会对细胞造成损伤。

因此，了解羟基自由基的生成和检测方法对于研究生物体的生理和病理过程具有重要意义。

羟基自由基的生成与氧化还原反应有关。

在生物体内，氧化还原反应是一种常见的化学反应，它可以产生自由基。

羟基自由基是一种含有氢原子和氧原子的自由基，它的化学式为OH。

在氧化还原反应中，羟基自由基可以通过氧化还原反应生成。

例如，当氧分子与水分子反应时，可以生成两个羟基自由基：
O2 + 2H2O → 4OH
MB可以用来检测羟基自由基的生成。

MB是一种有机染料，它的分子中含有两个苯环和一个甲基基团。

当MB与羟基自由基反应时，甲基基团会被羟基自由基氧化，产生一个自由基中间体。

这个自由基中间体可以与另一个MB分子反应，形成一个蓝色的产物。

这个产物可以通过光谱分析来检测。

MB检测羟基自由基的原理是利用MB的氧化还原性质和羟基自由基的高度反应性。

当羟基自由基存在时，它会与MB反应，产生一个蓝色的产物。

这个产物可以通过光谱分析来检测羟基自由基的生
成量。

因此，MB可以用来研究生物体内羟基自由基的生成和消除过程。

MB检测羟基自由基的原理是利用MB的氧化还原性质和羟基自由基的高度反应性。

通过检测羟基自由基的生成量，可以了解生物体内氧化还原反应的过程和羟基自由基的生理和病理作用。

这对于研究生物体的生理和病理过程具有重要意义。

羟自由基是氧化能力极强的自由基,能很容易地氧化各种有机物和无机物。

它可以与活细胞中任何分子(包括糖类、有机酸、核苷等)发生反应造成损害[1]。

为了降低这种损伤,可选择一些抗氧化效果的食品食用,或者使用抗氧化剂[2]。

硒是一种微量元素,对人体的正常代谢是不可缺少的。

它可以有效地对体内的自由基起到清除效果,又可以起到抗衰老的作用[3-5]。

硒能与包括多糖、蛋白、核酸等在内的物质结合,形成含硒多糖、含硒蛋白、含硒核酸等,构成了生物体内主要的含硒生物大分子物质[6]。

笔者利用甲基紫-Fe 2+-H 2O 2体系研究了富硒金针菇中硒蛋白对羟自由基的清除作用。

1材料与方法1.1仪器与试剂HZQ-Q 全温震荡器;冷冻离心机;7500c 型ICP-MS ;Cary 50紫外—可见分光光度计;考马斯亮蓝G250;硫酸铵;甲基紫溶液(2×10-3mol/L );过氧化氢溶液(0.12%);Fe 2+溶液(1×10-3mol/L );缓冲溶液Tris-HCl :pH 值3.5~7.5。

1.2试验方法1.2.1富硒金针菇硒蛋白的制备。

称富硒金针菇干样1.0g ,加20mL 二次水,在全温振荡器搅拌提取2.0h ,抽滤至干。

重复1次,合并滤液。

根据结合溶液的体积准确量取一定体积的硫酸铵,要一边搅拌,一边慢慢向烧杯内部加入,直到硫酸铵的饱和度达到95%,经过透析后,进行硒含量C 硒以及蛋白浓度C 蛋白的测定,方法分别选择ICP-MS 法和考马斯亮蓝染色法。

1.2.2羟自由基的测定。

在比色管(10mL )中分别加入浓度为2×10-4mol/L 的甲基紫溶液1.4mL 、浓度为0.1mol/L 的pH 值为3.5的Tris-HCl 0.1mL 、浓度为1×10-3mol/L 的Fe2+溶液1.2mL ,浓度为0.12%的H 2O 2溶液1mL ,最终体积定容到10.0mL ,不足部分用离子水补足,并混合均匀。

第29卷,第4期 光谱学与光谱分析Vol 129,No 14,pp1093-10992009年4月 Spectro sco py and Spectr al AnalysisA pril,2009羟基和超氧自由基的检测研究进展张 昊,任发政*中国农业大学食品科学与营养工程学院,教育部-北京市功能乳品实验室,北京 100083摘 要 活细胞在必需的新陈代谢过程中会产生自由基,越来越多的研究证据表明,这些自由基涉及到许多体内调控系统,然而一旦有过多的自由基生成便会氧化细胞脂膜、蛋白质、DN A 和酶,进而对细胞造成致命性的损伤。

此外,研究还表明许多疾病与自由基密切相关,例如,有研究报道海氏默症病人脑中生物分子的氧化损伤程度明显高于正常值,另外癌症可能也是DN A 受到氧化损伤的结果。

因此,测定自由基的方法就显得十分必需和重要。

文章重点对羟基和超氧自由基检测技术的发展情况进行了讨论,涉及的自由基检测技术主要有分光光度法、荧光法、化学发光法和电子自旋共振技术,并评价了各种方法的优缺点。

关键词 羟基自由基;超氧自由基;检测技术;评述中图分类号:O 65713 文献标识码:A DOI :1013964/j 1issn 11000-0593(2009)04-1093-07收稿日期:2007-11-28,修订日期:2008-03-06基金项目:国家/十一五0科技支撑项目(2006BAD05A16)资助作者简介:张 昊,1984年生,中国农业大学食品科学与营养工程学院硕士研究生 e -mail:david1hao@sina 1com*通讯联系人 e -mail:r enfaz heng@2631n et引 言羟基自由基(O H #)和超氧自由基(O 2-#)是生物体内活性氧代谢产生的物质,其中O 2-#经一系列反应最终会生成OH #,而OH #是一种氧化性很强的自由基,可以引发不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应,使糖类、蛋白质、核酸及脂类等发生氧化损伤。

双光束分光光度计测试羟基
摘要：
I.引言
- 介绍双光束分光光度计
- 说明羟基检测的重要性
II.测试方法
- 简要介绍测试原理
- 详细说明操作步骤
III.结果与分析
- 展示测试结果
- 对结果进行解读和分析
IV.结论
- 总结测试结果
- 提出可能的改进措施
正文：
双光束分光光度计是一种实验室常用的分析仪器，它可以用于测量样品的吸光度、浓度等参数，广泛应用于化学、医药、环保等领域。

在众多应用中，检测羟基是一个重要的应用之一。

羟基是一种官能团，广泛存在于生物分子和许多化合物中。

在生物化学、药物化学等研究中，准确检测羟基的含量对于理解生物过程和药物作用机制具有重要意义。

双光束分光光度计测试羟基的方法已经被广泛应用，准确性和重
复性都得到了很好的验证。

测试方法如下：
1.准备样品：首先需要准备待测样品，然后将其溶解在适量的溶剂中，使得羟基浓度在双光束分光光度计的测量范围内。

2.设置仪器：开启双光束分光光度计，调整仪器至工作状态，设置测量范围和波长。

3.测量样品：将样品溶液倒入比色皿中，放入仪器中进行测量。

根据样品的吸光度，可以计算出羟基的浓度。

在实际应用中，双光束分光光度计测试羟基的结果准确性和重复性都很好。

通过对结果进行解读和分析，可以得到关于样品中羟基含量的准确信息。

在某些情况下，还可以通过比较不同样品中羟基含量的差异，揭示其内在的规律和联系。

综上所述，双光束分光光度计测试羟基是一种准确、可靠的方法，对于许多领域的科学研究和应用具有重要意义。

羟基测定法一.需要的试剂1.乙酸酐的乙酸乙酯溶液（2M）2.甲酚红(0.1%aq)3.百里酚蓝(0.1%aq)3.75%吡啶水溶液4.0.5N的KOH（aq）5.PTSA6.乙酸乙酯7.水—丙酮溶液二.仪器设备：250ml锥形瓶4个滴管碱式滴定管精确移液管5ml,10ml水浴加热装置电磁搅拌装置电子天平（起码精确到0.0001g）三.实验步骤1.称取2—5g（精确到0.0001g）样品加入250ml锥形瓶。

重复操作。

准确移取5ml 2M乙酸酐的乙酸乙酯溶液到每一个锥形瓶并同样移取到2个干净的250ml锥形瓶。

这2个锥形瓶是作为空白样。

覆盖或密封锥形瓶于50℃水浴，保证水位高过锥形瓶中的溶液位。

同样地，锥形瓶可以放置在68℃的水浴上加热。

这2个方法的目的都是在不蒸发乙酸乙酯的前提下加热样品。

乙酸乙酯的沸点是77℃。

2.加热5分钟后，将锥形瓶移开热源。

小心的晃动以溶解脂类物。

将锥形瓶返回热源继续加热25分钟。

3.将样品移开热源并加入5ml水—丙酮溶液到每一个锥形瓶。

有力的晃动，但确保不损失一滴溶液。

加入10ml吡啶水溶液并且混合。

使得锥形瓶在室温下放置至少5分钟。

4.加入10滴混合指示剂到每一个锥形瓶并且用KOH溶液滴定直到溶液颜色由黄色转变到紫罗兰色。

使用电磁搅拌器和搅拌磁子以提供适当的稳定的搅拌。

用剩下的空白样和样品重复操作。

空白样应该用去KOH溶液60ml。

四.计算羟基数={（A—B）（N）（56）/（W）（F）}+AV其中：A=空白样所用去KOH溶液的平均毫升数B=每一个样品用去的KOH毫升数N=KOH溶液的当量数W=所用样品的克数F=样品的固含量A V=样品的酸值。

工作简报亚甲蓝光度法测定羟自由基王金刚1,2,王西奎23,国伟林2,郭培全2,顾忠茂1(1.中国原子能科学研究院,北京102413;　2.济南大学,济南250022)摘　要:利用亚甲蓝被氧化后褪色的机理,使用Fenton试剂与亚甲蓝作用,验证了体系中起氧化作用的是羟自由基,从而建立了亚甲蓝光度法检验羟自由基的方法。

试验结果表明,在过氧化氢与亚甲蓝的摩尔比为1～20范围内,亚甲蓝吸光度的降低值与Fenton试剂的加入量呈直线关系,因而可在660nm处测定亚甲蓝的褪色程度(ΔA)对羟自由基作间接光度测定。

试验同时对超声法产生的羟自由基进行了测定,表明羟自由基的生成量与超声时间成正比。

关键词:光度法;亚甲蓝;Fenton反应;羟自由基;超声处理法中图分类号:O657.3 文献标识码:A 文章编号:100124020(2007)0620495203Photometric Determination of H ydroxyl Free R adical byIts R eaction with Methylene B lueWANG Jin2gang1,2,WANG Xi2kui23,GU O Wei2lin2,GU O Pei2quan2,GU Zhong2mao1(1.China Research I nstitute of A tomic Energy,B ei j ing102413,China;　2.J i′nan Universit y,J in′an250022,China)Abstract:Based on the fact that methylene blue(MB)was decolorized by oxidants,the color2fading of MB in its reaction with the fenton reagent proved that the hydroxyl f ree radical produced in the reaction was an oxidant.Furthermore,it was found that the decrease of color intensity of MB was directly proportional to the concentration of hydroxyl f ree radical and that the linearity between the decrease of color intensity of MB and the amount of fenton reagent added kept quite well when the mole ratio between H2O2and MB varied in the range1to20.An indirect method of photometric determination of hydroxyl free radical,by measuring the decrease of color intensity(ΔA)of MB at660nm,was proposed.This method was also applied to the determination of hydroxyl f ree radical produced during the process of ultrasonic treatment.It was found that the amounts of hydroxyl f ree radical produced were directly proportional with the time of ultrasonic treatement.K eyw ords:Photometry;Methylene blue;Fenton reaction;Hydroxyl f ree radical;Ultrasonic treatment 活性氧在生命科学和环境科学中都扮演着重要角色,其中羟自由基既是人体某些器官病变和衰老的重要因素,又是Fenton试剂、超声方法降解废水中有机物的主要氧化基团。

亚甲蓝光度法测定羟自由基
亚甲蓝光度法是一种测定羟自由基（即自由基氧）浓度的方法。

羟自由基是一种比较活跃的自由基，具有较强的氧化性。

它的浓度可以反映氧化还原反应的平衡情况，对于研究和检测环境、生物体内的氧化损伤以及相关的保护机制等方面具有重要意义。

亚甲蓝光度法测定羟自由基的原理是：羟自由基可以氧化亚甲蓝（即2,2’-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid,
ABTS），使其转变为深蓝色的亚甲蓝超氧化物（ABTS+）。

通过测量亚甲蓝超氧化物的吸光度，可以间接推算出羟自由基的浓度。

通常，在pH值为7.4的生理盐溶液中，亚甲蓝的吸光度在420
nm处达到最大值，因此通常采用420
nm处的吸光度来测定羟自由基的浓度。

亚甲蓝光度法测定羟自由基的方法大致如下：
1.准备样品：将样品中的羟自由基转化为亚甲蓝超氧化物。

2.准备标准曲线：制备一组已知浓度的羟自由基标准溶液
，并进行亚甲蓝光度测定。

3.计算羟自由
基浓度：将样品中的亚甲蓝超氧化物吸光度与标准曲线进行比较，由此可以推算出样品中羟自由基的浓度。

一般来说，亚甲蓝光度法测定羟自由基的准确度较高，可以用于研究羟自由基的生物学效应和氧化损伤过程。

但是，这种方法也有一些局限性，如它只能测定自由基氧，而不能测定其他种类的自由基。

同时，样品中其他物质（如蛋白质、小分子抗氧化剂）也会对测定结果产生干扰。

羟基含量测定方法
羟基含量测定的方法主要有以下几种：
1. 羧甲基纤维素测定法：将待测样品加入到钠氢碳酸缓冲液中，加入羟胺盐酸盐后，在沸水浴中加热反应至一定时间，停止反应，加入异丙醇使其沉淀。

将沉淀洗涤、过滤、干燥后，用酚-硫酸比色法测定其中的羟基含量。

2. 容量法：羟基首先与过量的甲苯二异氰酸酯（TDI）反应，剩余的TDI 与过量的二乙基胺反应，再用HCl标准液滴定剩余二乙基胺。

羟基含量按照公式计算：其中V1为实验组HCl标准溶液滴定的体积，V0为空白组HCl标准溶液滴定的体积，c为HCl标准溶液的浓度，m为称取的羟基硅油样品的质量。

请注意，具体使用哪种方法要根据实际的应用场景和需求来决定。

同时，实验操作时要遵守实验室安全规范，防止对自身造成危害。