高效液相色谱仪分析样品的预处理
高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种分离、定量分析化学成分的有效手段，在药品、食品、环境、化工等行业都有广泛应用。但在HPLC分析过程中，如果样品预处理不充分，就会对后期的分离和检测造成很大影响，因此，样品的预处理技术显得极为重要。下面，我们将介绍关于HPLC分析样品预处理的相关内容。
样品的采集与处理
对于不同的样品，我们需要进行不同的采集与处理，以提高分析精度和准确性。具体做法如下：
液体样品的采集与处理
在液体样品（如饮料、药剂等）中，我们一般采用稀释、过滤或析出等方法，
来提高样品的一致性和稳定性，减少杂质和干扰物的含量。
•稀释法：将样品与纯水或乙醇按一定比例混合，使样品浓度适宜，从而保证HPLC检测的精确度和稳定性。
•过滤法：将样品过滤，去除其中的颗粒、悬浮物等杂质，在HPLC分析前对样品进行预处理，可以减少后期的误差。
•析出法：利用化学方法将目标成分从样品中分离出来，以便HPLC分析。例如，对于含蛋白质的样品，我们可以用盐酸进行酸性加热，将蛋白质析出，然后用纯水进行冲洗，得到用于HPLC分析的样品。
固体样品的采集与处理
在采集固体样品（如土壤、植物等）时，我们需要进行粉碎、提取和纯化等预
处理步骤，以便后期的HPLC分析。具体做法如下：
•粉碎法：将样品磨成均匀粉末状，以利于化合物的释放和提取。
•提取法：用合适的溶剂将目标化合物提取出来。例如，我们可以用氯仿等有机溶剂提取样品中的脂肪和植物色素等目标化合物。
•纯化法：将提取出来的目标化合物进行纯化，以去除杂质和提高样品的纯度。纯化方法比较多样，可以根据目标化合物的特性进行选择。
样品的保护与处理
在样品预处理过程中，我们需要注意以下几点，以保证处理后的样品能够在HPLC分析中表现出较好的分离、检测结果。
样品的保护
对于一些容易分解、挥发或氧化的化合物，我们需要为样品进行保护，以防止它们在样品处理的过程中出现变化。具体方法如下：
•惰性气体保护法：例如，对于一些挥发性化合物，我们可以借助惰性气体（如氮气）的保护，以防止其在分析过程中挥发或分解。
•光照保护法：例如，对于一些容易受光照影响的样品，我们可以在处理时避光，以维持样品的稳定性。
样品的处理
在样品预处理过程中，我们可以根据不同的化学组成和分离方式对样品进行处理，以提高后期分析的准确性和精度。具体方法如下：
•pH 调整法：针对一些易受 pH 限制的化合物，我们可以通过改变 pH 具体数值来改变其离子状态，从而影响分离效果。
•溶剂调整法：通过向样品中加入一些多种极性溶剂，达到改变样品中组分的相对溶解性的效果，以改变反相色谱的分离效果。
•分子筛滤除法：针对一些分子量较大的杂质（如蛋白质），我们可以选择加入分子筛进行过滤，以去除这些杂质。
处理后的样品贮存和运输
根据不同的样品特点和处理方法，我们需要对处理后的样品进行不同的存贮和运输方式，以保证样品在分析过程中的质量不受影响，保障分析准确性和稳定性。
•气体保护方法：对于挥发性化合物，我们可以用氮气气体保护，以保留化学组分的稳定性和精确性。
•冷冻贮存方法：对于一些易于分解或变质的化学组分，我们可以通过将样品在-20°C 或更低的温度下冷冻贮藏，确保样品在分析时近似于未变质状态。
•干燥法：对于某些含水分的样品，我们可以采用干燥法将样品中水分蒸发掉，以延长样品的保存时间。
结论
高效液相色谱仪是一种分离、定量分析化学成分的有效手段，而样品的预处理则显得尤为重要。在样品的采集、处理、保护及贮存和运输等方面，在保证分析精确性和准确性的基础上，我们需要选择合适的方法，以提高分析效率和准确度。不同的样品需要不同的预处理方法，我们需要根据具体情况进行选择。
岛津高效液相色谱仪LC-20A 操作规程 一、 目的：为了安全、规范、正确使用岛津LC-20A 型高效液相色谱仪，特制订本操作规程。 二、 范围：仅适用于岛津LC-20A 型高效液相色谱仪。 三、 环境要求：温度4 ～35℃，相对湿度为40～80% ，最好是恒温、恒湿，远离高电干扰、高振动设备。 四、 L C-20A 高效液相色谱仪工作原理： 高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到工作软件,数据以图谱形式表现出来。 开机顺序：A 泵→B 泵→柱温箱→自动进样器→检测器→系统控制器后→电脑显示器→主机（注：仪器各单元的开关均在左下角） 五、样品准备： 5.1开机之前，准备好所用的流动相和样品，检查储液器的吸滤头是否在液面以下。流动相和样品必须通过0.45um 过滤器过滤。 5.2 流动相：必须使用HPLC 级或相当于该级别的流动相，并通过0.45um 过滤器过滤。过滤后的流动相必须经过充分脱气，以除去其中溶解的气体O 2等，如不脱气易产生气泡、基线噪声增加、灵敏度下降，甚至无法分析。 5.3 查看仪器使用记录，了解仪器当前状况。 5.4 样品前处理：样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE ）对样品进行预处理。 图4 样品前处理
高效液相色谱仪分析样品时常见的预处理方法 高效液相色谱仪分析样品的预处理方法有过滤、离心、加速溶剂萃取、超临界流体萃取、固相萃取、固相微萃取、液相微萃取和衍生化等。 一、过滤 常用的滤膜材质有纤维素、聚四氟乙烯和聚酰胺。其中聚酰胺应用最广，是亲水材料，适合水溶液的过滤，不被HPLC常用溶剂所腐蚀，不含添加剂。 加速溶剂萃取 1、原理： 加速溶剂萃取是在提高温度（50～200℃）和压力（10.3～20.6MPa）下，用溶剂萃取固体或半固体样品。 2、特点： 与传统萃取方式相比，加速溶剂萃取具有溶剂用量少、快速、对不同基体可用相同的萃取条件、萃取效率高、选择性好、使用方便、安全性好和自动化程度高等特点。 二、超临界流体萃取 超临界流体萃取是利用超临界流体对物质的特殊溶解性能原理而建 立的萃取方法。超临界二氧化碳作为常用的萃取剂已被广泛应用于天然药物中非极性和弱极性有效成分的提取。 三、固相萃取 1、原理： 固相萃取是通过采用选择性吸附和选择性洗脱对样品进行富集、分离
和净化，可以将其近似地看作一种简单的液固色谱过程。 2、固相萃取方法： （1）使液体样品溶液通过吸附剂，保留其中被测物质，然后选用适当强度溶剂冲去杂质，再用少量溶剂迅速洗脱被测物质，从而达到快速分离净化和浓缩的目的。 （2）可选择性吸附干扰杂质，让被测物质流出。 （3）可同时吸附杂质和被测物质，再使用合适的溶剂选择性洗脱被测物质。 四、固相微萃取 1、原理： 固相微萃取是基于涂敷在纤维上的高分子涂层或吸附剂和样品之间 的吸附－解吸平衡原理，集采样、萃取、浓缩和进样于一体的无溶剂的样品微萃取方法。 2、常用固相微萃取方法： （1）直接固相微萃取：适用于气体基质和干净的水基质。 （2）顶空固相微萃取：适用于任何基质，尤其是直接固相微萃取无法处理的脏水、油脂、血液、污泥和土壤等。 （3）膜固相微萃取：通过选择性高分子渗透膜将样品与萃取头分离，进行间接萃取。渗透膜的作用是使萃取头不被基质污染，提高萃取的选择性。但由于样品中待分析物必须通过渗透膜才可以接触到萃取涂层，因此会延长萃取平衡时间。可用于悬浊液等较脏基质中非挥发性有机物的监测。
体内药物分析是药物分析的重要分支，是一门研究生物机体中药物及其代谢物和内源性物质的质与量变化规律的分析方法学。它是通过分析人或动物体液及各组织器官中药物及其代谢物浓度，了解药物在体内数量和质量的变化，获得药物代谢动力学的各种参数和转变，以及代谢的方式、途径等信息，从而有助于药物的研究、临床合理应用等。体内药物分析特点是样品成分复杂，被测组分含量低，因此，测定前要对样品进行处理，适当处理之后进行测定。 1 体内药物分析中的样品预处理 在体内药物分析中，生物样品成分复杂，除被测组分外，往往含有大量内源性物质、代谢产物及共存药物等干扰物质，且被测组分的含量很低，要准确地测定生物样品中的药物浓度，必须除去妨碍测定的杂质，对样品进行预处理。生物样品中的药物必须经过分离、纯化、富集，必要时还需对待测组分进行化学改性处理。根据生物样品的种类、所用的测定手段、被测药物的种类及浓度等不同，预处理方法各异。传统的生物样品处理方法有沉淀蛋白、离心和过滤、液液萃取等，这些方法虽还在广泛使用，但它们不利于在线处理、实现自动化，或需要消耗大量有毒试剂，不利于环保和操作人员的身体健康。近年来，随着固相萃取技术(SPE)、固相微萃取技术(SPME)、微透析取样技术(MD)、柱切换(column switching，cs)等多种新技术新方法的采用，使得生物样品的处理技术向着低污染、低用量、高选择、高通量、自动化、在线化方向发展。 1.1固相萃取技术(SPE) 固相萃取技术自上世纪70年代诞生以来，以其高效、高选择性、高度自动化的特点，被广泛应用于各种生物样品的分离和纯化。固相萃取技术以选择性吸附与选择性洗脱的液相色谱分离原理，对样品进行分离和纯化。按照所采用固相萃取剂的种类，可将固相萃取法分为3类：正相、反相和离子交换固相萃取。固相萃取一般有4个步骤：活化、上样、淋洗和洗脱。新一代的聚合物吸附剂，如Waters的0asis HLB，不需活化，也不怕溶剂流干，简化了样品制备过程，而且有很宽的pH范围，能萃取亲水、疏水、酸性、碱性或中性组分，特别适用于血浆、尿液等生物样品的制备。 1.2固相微萃取技术(SPME) 固相微萃取(solid-phase microextraction，SPME)是以固相萃取(solid phase extraction，SPE)为基础发展起来的一种新型前处理方法，其利用了SPE吸附的几何效应，同时克服了SPE需要柱填充物和使用有机
高效液相色谱仪操作规程 1.目的 规范高效液相色谱分析仪的使用和维护。 2.范围 高效液相色谱的使用和维护。 3.系统组成 本系统由2487检测器（2414检测器），1515输液泵（1525输液泵），717自动进样器及EMPOWER系统组成。 4.程序 4.1 流动相和样液制备 4.1.1 过滤溶剂 溶剂在使用前一定要用0.45μm的过滤器过滤。 4.1.2 保持储液瓶的清洁 普通的溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子。 应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。 4.1.3 保证溶剂的质量 一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲液。 将流动相过滤、脱气后，用封口膜及时封好待用。 将待测的液体样品经0.45μm的水相滤膜过滤后，滤液备用。 4.2 开机 按照检测器、柱温箱、自动采样器、泵、计算机的顺序，依次接通电源。
每次使用示差折光检测器进行样品分析时，需要提前打开，预热稳定。 4.3 高压输液泵的操作 4.3.1 液相色谱系统泵的流速在0.1-10.0ml/min之间，要保持泵的良好操作性能，必须维护系统的清洁，保证溶剂和试剂的质量，流动相的过滤和流动相的脱气。下面列出预防泵故障的注意事项：（1）用高质量的试剂和HPLC级溶剂；（2）过滤流动相和溶剂；（3）脱气；（4）工作时使用泵头的排水孔不停的用10%甲醇/水的混合溶剂冲洗柱塞杆；（5）不让水和腐蚀性溶剂滞留在泵中；（6）定期更换垫圈；（7）加润滑油。处于良好操作状态的泵，应该使色谱图上的基线平稳，保留时间的重复性良好。等度洗脱时压力波动小于±2%。梯度洗脱时压力变化应是缓慢和平稳的。 4.3.2 常规准备工作包括：开通电源，溶剂脱气，泵头及溶剂管路除气泡及泵的启动。 4.3.3 接通系统电源，仪器各单元进行自检，数秒后通过，接受操作指令。 4.3.4 流动相脱气方式：超声波脱气10min。 4.3.5 系统中气泡的排除,泵启动时，调节所需要的通道流速为1ml/min，该通道调节为100%。将抽液阀旋至draw位，用针筒抽液10ml，将抽液阀旋至inject位，并推出针筒中的液体，将抽液阀旋至run位。此时参比阀排出的液体应连续，如不连续则重复以上抽液排液操作。将流速减小至0.2ml/min，将参比阀关闭。柱前气泡如不能排除，则管路在不与色谱柱连接的情况下，提高流速至9ml/min，数分钟后将流速减至1ml/min。 4.3.6等度操作按direct键，进入isocratic菜单。依次设定流路配比，流动相流速，柱温。设定方法如下：按光标移动键，至闪烁光标出现在所需设定位
液相色谱使用中样品预处理注意的几个环节 高效液相色谱具有分离效率高、分析速度快和应用范围广等特点,特别适合于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分离分析。目前高效液相色谱已成为化学、生化、医学、工业、农业、环保、商检和法检等学科领域中重要的分离技术,是分析化学家和生物化学家手中用于解决他们面临的各种实际分析和分离课题必不可少的工具之一。虽然在检测分析中使用了昂贵的、性能优越的高档精密仪器,但是由于在样品的前处理,标准溶液的制备,样品液的测定,分析中的污染,仪器常见故障等等问题上的不注意,而引起大的系统误差,使整个测定分析失败。现就液相色谱分析的应用中样品预处理注意的几个环节,作简要分析,以达到更好的检测效果。 1 样品预处理方法 样品预处理应包括进样前的一切操作。除了称重、溶解、稀释等步骤外,样品需要: ①过滤; ②萃取; ③衍生化(柱前衍生) ; ④液相色谱(低压柱层析) 。这些操作可以是手工进行或实行自动化操作。样品预处理的目的是除去干扰物、增加检测器灵敏度(富集) 、保护色谱柱等。样品预处理同时也是为了避免色谱分离故障,其中样品萃取是关键的一步,要从大量的干扰物中萃取出微量组分难度极大。 有些样品经预处理后还不能作进样分析,需进行衍生化处理,使一些无紫外吸收或无荧光的组分,经过衍生化后能用紫外和荧光检测器检测,这样既提高了灵敏度,又改善了分离度(质量变化) 。样品预处理的同时也会带来一些问题,如样品损失、样品被污染、衍生化反映不完全或多种反应物生成等。衍生反应常会影响试验的精确度,或者在整个样品预处理过程中带来误差。 用于液相色谱分析的样品溶液必须均匀而无颗粒,有颗粒会损坏进样器并阻塞柱头。处理好的样品在准备上柱前应对准光线摇动,检查样品溶液中有无颗粒。只要看到颗粒、混浊或乳化,就应过滤一下,过滤膜要能截留住015μm 以上的颗粒,样品过滤的过程中可能引起:样品被污染,因过滤吸附降低样品组分的含量,样品溶剂挥发引起误差。萃取的目的是从共溶的样品介质中分离出被分析的组分,或者减少损坏柱的物质(如蛋白质等)和干扰物。一般采用有机溶剂萃取,要求萃取用的溶剂毒性低、挥发性好、杂质少、对待测样品有良好的溶解度且又与水不相混溶。常用的有乙醚、醋酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯或者两种以上的混合溶剂。萃取后一般可直接进样,有时需要浓缩或吹干浓缩,再用定体积的液体或流动相溶解进样。这样增加了样品浓度,提高了灵敏度,同时避免了溶剂峰对样品峰的干扰。在萃取是要考虑样品分子的溶解能力。除了脂溶性和水溶性组分外,还有用脂溶性的组分制成水溶性的盐。萃取方法如下: 1.1 水溶性样品 (1) 酸性组分及生成的盐萃取方法:有机溶剂萃取杂质后调成酸性,再加有机溶剂萃取或进样,或在N2 流下吹干,用适当的溶剂解后进样。 (2) 碱性组分及生成的盐萃取方法:有机溶剂萃取杂质后调成碱性,再加有机溶剂萃取或进样,或在N2 流下吹干,用适当的溶剂溶解后进样。 (3) 中性组分萃取方法:有机溶剂萃取杂质后,直接用反相色谱法分析。
高效液相色谱-荧光法测定人尿液中氧氟沙星的浓度【实验目的】 1．掌握氧氟沙星尿液样品的收集、处理方法和尿药累积排泄率的计算方法。 2．熟悉氧氟沙星尿液样品的预处理方法好测定步骤。 【实验原理】 氧氟沙星为喹诺酮类抗菌药，化学名(+/-)-9-氟-2,3-二氢-3-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪基)-7-氧代-7H-吡啶并[1,2,3-de]-[1,4]苯并恶嗪-6-羧酸。本品为白色或微黄色结晶性粉末；无臭、味苦；遇光渐变色；在三氯甲烷中略溶，在水或甲醇中微溶或极微溶解，在冰醋酸或氢氧化钠试液中易溶，在0.1mol/L盐酸溶液中溶解。 （C18H20FN3O4 361.38） 环丙沙星（内标），化学名1-环丙基-6-氟-4-氧代-1，4-二氢-7-（1-哌嗪基）-3-喹啉甲酸。 （C17H18FN3O3331.35） 1．尿液中药物浓度的测定可以计算药物的排泄量及排泄率，在某些缺乏严密医护条件不便于对给药对象多次采血情况下，尿药排泄数据可以用来求算药动学参数；一般抗菌药物很容易通过尿液以原形药物形式排出体外，可以表征当时体内的药量。 2．氧氟沙星具有长共轭刚性结构，可以采用荧光检测器检测，由于体内内源性物质能够产生荧光的可能性很小，因此，荧光检测可以有效地减小内源性物质的干扰，同时增加检测灵敏度，满足了体内药物分析干扰多、含量低的特点。 3．氧氟沙星具有酸碱两性，在水溶液中发生解离，因此选择偏酸性的色谱条件可以有效地抑制其拖尾或者色谱峰对称性差的缺点，获得较好的色谱分离效果；由于尿液中浓度较大，可以采用直接稀释后离心的前处理手段，以获得适合于色谱分析的样品。 【仪器与试药】
高效液相色谱仪在使用过程中需要注意的事项 液相色谱是实验室使用频率非常高的仪器设备，在使用过程中会有许多小技巧，小的注意事项，今天就按照LC组成部分：流动相溶剂瓶→高压泵→进样器→色谱柱→检测器→废液，此顺序来一一说明如何做保养？ 一、流动相溶剂瓶的保养 溶剂瓶是流动相的起点，通常是盛放水相溶液或是有机相溶液。 1、水相溶液，对于水相溶液来说，首要的问题是防止污染。对于溶剂瓶我们要做的非常重要的工作就是勤换流动相，常换常新。就单纯的水来说，放置一天之后，在色谱图中会出现很多的杂峰，影响有关物质的检测。因此，建议水相，特别是纯水，每天进行更换。 2、有机相溶液，对于有机相溶液，可以不用担心细菌繁殖的问题。但是有机相容易发生聚合，特别是乙腈在适宜的光照条件下极易发生聚合，瓶子里就会出现一些絮状的聚合沉淀物。为了防止聚合过程的发生，装乙腈时要用棕色的溶剂瓶，避免阳光直射，更换乙腈时应当弃去瓶底剩余的溶液。 3、清洗过滤，溶剂瓶里的过滤头，其作用是为了防止溶液瓶中的颗粒杂质进入到仪器的流路系统中，它的材质通常分为玻璃烧结石英和不锈钢，如果不慎堵塞会造成流动相吸液不畅，因此必须进行清洗，玻璃材质的通常是用稀硝酸泡，而不锈钢材质的可以直接进行超声清洗。
二、高压泵的保养 泵是液相色谱的核心，泵将流动相从溶剂瓶输送到液相流路系统中，并要在高压下保持流量和压力的稳定。状态正常的高压泵是液相色谱准确分析的基础，所以平日一定要重视对泵的维护。 1、泵压力波动，很多情况下，泵的问题反映在压力上，压力波动又是常见的一类问题。通常我们可以通过重新清洗流路和再次脱气流动相加以解决。 2、过滤白头保养，在泵的维护里还有一项常做的工作就是更换清洗阀上的过滤白头，通常判断的标准是纯水以5mL/min流速清洗的时候，如果压力超过1MPa则考虑更换。 三、进样器的保养 进样器分手动和自动两大类，虽然两者工作模式不同，但使用的要点是基本一致的。 1、防止交叉污染，自动进样器常见的问题是交叉污染，交叉污染产生的原因很直接，样品残留在进样针内外表面，并随下一次进样进入色谱系统。要解决交叉污染，主要靠清洗。 2、精细操作，手动进样器的操作要点大致相同，应使用液相色谱LC 专用进样针，进样时插针应插到底，不使用时将针头留在进样器内，使用前后都要及时清洗。 四、色谱柱的保养
高效液相色谱仪分析样品的预处理 高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种分离、定量分析化学成分的有效手段，在药品、食品、环境、化工等行业都有广泛应用。但在HPLC分析过程中，如果样品预处理不充分，就会对后期的分离和检测造成很大影响，因此，样品的预处理技术显得极为重要。下面，我们将介绍关于HPLC分析样品预处理的相关内容。 样品的采集与处理 对于不同的样品，我们需要进行不同的采集与处理，以提高分析精度和准确性。具体做法如下： 液体样品的采集与处理 在液体样品（如饮料、药剂等）中，我们一般采用稀释、过滤或析出等方法， 来提高样品的一致性和稳定性，减少杂质和干扰物的含量。 •稀释法：将样品与纯水或乙醇按一定比例混合，使样品浓度适宜，从而保证HPLC检测的精确度和稳定性。 •过滤法：将样品过滤，去除其中的颗粒、悬浮物等杂质，在HPLC分析前对样品进行预处理，可以减少后期的误差。 •析出法：利用化学方法将目标成分从样品中分离出来，以便HPLC分析。例如，对于含蛋白质的样品，我们可以用盐酸进行酸性加热，将蛋白质析出，然后用纯水进行冲洗，得到用于HPLC分析的样品。 固体样品的采集与处理 在采集固体样品（如土壤、植物等）时，我们需要进行粉碎、提取和纯化等预 处理步骤，以便后期的HPLC分析。具体做法如下： •粉碎法：将样品磨成均匀粉末状，以利于化合物的释放和提取。 •提取法：用合适的溶剂将目标化合物提取出来。例如，我们可以用氯仿等有机溶剂提取样品中的脂肪和植物色素等目标化合物。 •纯化法：将提取出来的目标化合物进行纯化，以去除杂质和提高样品的纯度。纯化方法比较多样，可以根据目标化合物的特性进行选择。 样品的保护与处理 在样品预处理过程中，我们需要注意以下几点，以保证处理后的样品能够在HPLC分析中表现出较好的分离、检测结果。
高效液相色谱仪的操作步骤 高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和分析技术。它利用液体流动相和固定相之间的相 互作用，将样品中的混合物分离出来，并通过检测器进行定量分析。 本文将介绍高效液相色谱仪的具体操作步骤。 1. 准备工作 在进行高效液相色谱仪的操作之前，首先需要进行一些准备工作。 检查色谱柱是否安装正确，确保色谱柱是干净的，并检查流动相的配 制是否准确。 2. 样品制备 根据需要分析的物质，准备好待测样品。样品制备可以包括溶解样品、过滤样品等步骤，以确保样品的纯净度和稳定性。 3. 仪器开机 将高效液相色谱仪接通电源，打开仪器的电源开关。等待仪器初始化，并确保仪器各个部分正常工作。 4. 设置参数 在仪器上设置分析所需的参数。包括选择适当的检测器类型和检测 波长、设置流量、温度等。 5. 启动系统
启动高效液相色谱仪系统，等待系统稳定。通常需要一段时间使得 流动相在管路中充分平衡，并确保流量稳定。 6. 校正 进行色谱柱的校正。校正过程包括流量校正、波长校正等。通过校 正可以保证仪器输出结果的准确性和可靠性。 7. 注射样品 将样品通过注射器引入色谱柱中，控制样品的注射量，通常在微升 至毫升的量级。确保样品的注射量稳定和准确。 8. 分离分析 开始运行高效液相色谱仪系统，进行样品的分离与分析。在此期间，流动相通过色谱柱，将样品中的化合物根据它们与固定相之间的相互 作用进行分离。 9. 监测结果 通过检测器对分离后的化合物进行监测。根据检测器的信号，可以 得到每个化合物的峰面积、保留时间等数据。 10. 数据处理 将监测到的信号输入到数据处理软件中，进行结果的计算和分析。 通常可以得到各个化合物的峰高、峰面积等数据，从而实现对样品的 定量分析。 11. 关机
沃特斯高效液相色谱仪数据处理流程 一、数据采集 数据采集是沃特斯高效液相色谱仪数据处理的首要步骤。色谱图中，每个色谱峰都代表某种特定的化合物。为了获得这些数据，我们需要对色谱图进行数字化处理。通常，沃特斯高效液相色谱仪配备自动进样器，能够连续不断地将样品引入色谱柱，并在设定的时间间隔内进行数据采集。 二、数据预处理 数据预处理是对原始数据进行整理、编辑和初步筛选的过程，以便于后续的基线校正、峰识别与分割等步骤。数据预处理可能包括以下操作：去除噪声、平滑处理、填充缺失值、归一化处理等。通过这些处理，可以使得数据更易于分析和理解。 三、基线校正 基线校正是色谱数据处理中重要的一步，它可以消除仪器背景信号的影响，提高峰识别的准确性。基线校正通常采用以下几种方法：多项式拟合、样条插值、迭代算法等。在校正过程中，需要注意避免过度校正导致基线漂移的问题。 四、峰识别与分割 峰识别与分割的目的是确定每个色谱峰的起始和结束位置，以便于定量和定性分析。沃特斯高效液相色谱仪通常采用自动峰识别和分割算法。这些算法基于色谱峰的形状和大小来识别峰的位置，如基于梯度变化的分割算法、基于阈值的分割算法等。在峰识别与分割过程
中，可能需要手动调整，以确保准确性。 五、定量与定性分析 定量和定性分析是在确定色谱峰的位置后进行的。定量分析是通过对每个色谱峰的面积进行积分，然后根据标准品的浓度和响应因子计算待测物的浓度。定性分析则是通过比较已知标准品的保留时间和光谱信息来确定未知样品的成分。 在进行定量和定性分析时，需要注意以下几点： 1.必须使用标准品进行准确校准，以确保结果的准确性； 2.应选择响应因子已知的标准品进行定量分析，以减小误差； 3.对于定性分析，应尽量获取多种类型的标准品以确定未知样品的成分； 4.考虑到不同批次间的差异，应该采用内控样以增加结果的可靠性。 六、数据存储与备份 在数据处理完成后，应该将原始数据和分析结果存储并进行备份。备份的数据可以用于以后的分析和复查，避免数据的丢失。备份数据可以保存在硬盘、云端或其他存储介质中，只要保证数据的安全性即可。另外，最好定期检查备份数据是否完整可用，以防数据丢失或损坏。 七、数据分析报告 最后，根据实际需要，将分析结果整理成数据分析报告。报告中应包含以下内容：实验目的、实验过程（包括数据处理流程）、实验
高效液相色谱法分析中的常见问题与解决方 案 高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种现 代化的分析方法，广泛应用于药物、食品、环境等领域。然而，在实际应用过程中，常常会遇到一些问题。本文将探讨高效液相色谱法分析中的常见问题，并提供解决方案。 1. 色谱峰分离不良 在进行高效液相色谱分析时，首要问题就是色谱峰的分离不良。造成这个问题 的原因可能是样品组分过于复杂，或是色谱柱选择不当。解决的方法包括：（1）优化样品前处理方法，如提取、净化等，以减少样品的复杂性； （2）调整流动相的组成和流速，或试用其他类型的色谱柱，以提高色谱峰的 分离度。 2. 流动相持续泵出问题 在HPLC分析过程中，流动相持续泵出是关键步骤之一。当出现流量不稳定或 持续泵出不工作的情况时，可以尝试以下解决方法： （1）检查管路是否有漏气现象，尤其是连接件的密封性； （2）清洗或更换柱子和过滤器，以防止堵塞； （3）检查、更换流量检测器，并校正流量计。 3. 柱寿命较短
柱寿命的短暂是高效液相色谱法分析中常见的问题之一，主要原因是样品残留 物的堆积、色谱柱废液的积累、和流动相的不合适。针对这个问题可以采取以下措施： （1）对样品进行预处理，减少残留物的堆积； （2）定期清洗和维护色谱柱，保持柱的表面状况； （3）使用适当的流动相，避免酸性或碱性物质损害色谱柱。 4. 波峰畸变问题 波峰畸变是指在色谱图上观察到的峰形呈现为不对称的情况，这可能是由于柱 床不均匀、流量不稳定或是组分浓度过高引起。解决这个问题的方法包括：（1）更换新的色谱柱，确保柱床的均匀性； （2）检查各部分的流量是否稳定，尤其是溶液的泵出和进样流速的稳定性； （3）适当稀释样品，以降低组分浓度。 5. 某些组分无法检测到 当分析物无法检测到时，可以考虑以下解决方法： （1）确认所使用的检测器是否适用于分析物的检测，并检查检测器的灵敏度； （2）尝试使用其他检测器或改变检测器条件，如波长或电流； （3）检查样品制备方法是否完整，是否包含了分析物。 总结起来，高效液相色谱法在分析中常常遇到色谱峰分离不良、流动相持续泵 出问题、柱寿命较短、波峰畸变以及某些组分无法检测到等常见问题。通过优化样品前处理、调整流动相的组成和流速、检查和清洁柱子等方法，可以有效解决这些问题，提高高效液相色谱法的分析准确性和效率。
高效液相色谱仪操作步骤 1. 过滤流动相,根据需要选择不同的滤膜。 2. 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。 3. 打开HPLC工作站(包括计算机软件和色谱仪),连接好流动相管道,连接检 测系统。 4. 进入HPLC控制界面主菜单,点击manual,进入手动菜单。 5. 有一段时间没用,或者换了新的流动相,需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵, 直接在泵的出水口,用针头抽取。冲洗进样阀,需要在manual菜单下,先点击purge,再点击start,冲洗时速度不要超过10ml/min。 6. 调节流量,初次使用新的流动相,可以先试一下压力,流速越大,压力越大, 一般不要超过2000。点击injure,选用合适的流速,点击on,走基线,观察基线的情况。 7. 设计走样方法。点击file,选取select users and methods,可以选取现 有的各种走样方法。若需建立一个新的方法,点击new method。选取需要的配件, 包括进样阀,泵,检测器等,根据需要而不同。选完后,点击protocol。一个完整的 走样方法需要包括:a.进样前的稳流,一般2-5分钟;b.基线归零;c.进样阀的loading-inject转换;d.走样时间,随不同的样品而不同。 8. 进样和进样后操作。选定走样方法,点击start。进样,所有的样品均需过滤。方法走完后,点击postrun,可记录数据和做标记等。全部样品走完后,再用上 面的方法走一段基线,洗掉剩余物。 9. 关机时,先关计算机,再关液相色谱。
10. 登记。 一、问:用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移,有时发生快速变化,原因何在? 如何解决? 答:关于漂移问题: 1.温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定 2.流动相发生变化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等 3.柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡 关于快速变化问题 1.流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定 2.泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出。 3.流动相不合适,解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合 二、问:液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么? 答: 1.筛板堵塞或柱失效,解决办法是反向冲洗柱子,替换筛板或更换柱子。 2.存在干扰峰,解决办法为使用较长的柱子,改换流动相或更换选择性好的柱子 三、问:HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法 答: 1.样品量不足,解决办法为增加样品量
高效液相色谱仪操作注意事项 流动相： 1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围； 2、水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质； 3、使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相，B、C（进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相； A、B、C、D四个储液器中其中一个为棕色瓶，用于存放水相流动相。 样品： 1、采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含固体颗粒； 2、用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂制备样品溶液，尽量用流动相制备样品液； 手动进样时，进样量尽量小，使用定量管定量时，进样体积应为定量管的3～5倍； 色谱柱： 1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相类型等； 2、使用符合要求的流动相； 3、使用保护柱； 4、如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。 5、色谱柱在不使用时，应用甲醇冲洗，取下后紧密封闭两端保存； 6、不要高压冲洗柱子； 7、不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱； 使用过程中注意轻拿轻放。 操作过程： 1、开机操作：（1）、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server （一般启动时已打开）；
（2）、自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符），打开工作站（先打开O n line）； （3）、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关（需用针捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量为准； （4）、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液； （5）、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。 2、先以所用流动相冲洗系统一定时间（如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相），正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命； 3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果； 4、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡； 5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤； 6、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。冲洗过程中关闭D灯、W灯； 7、关机时，先关闭泵、检测器等，再关闭工作站，然后关机，最后自下而上关闭色谱仪各组件，关闭洗泵溶液的开关； 8、使用者须认真履行仪器使用登记制度，出现问题及时向老师报告，不要擅自拆卸仪器。 (续) 1、操作过程若发现压力很小，则可能管件连接有漏，注意检查。当出现错误警告（各组件指示灯均为红色），一般为漏液，其中一个感应器中已有溶剂，漏液故障排除后，擦干，点击On line操作界面中的In strument/System Off，然后再点击操作界面中的Instrument/System On即可。 2、连接柱子与管线时，应注意拧紧螺丝的力度，过度用力可导致连接螺丝断裂。柱接头处易发生漏液，可能情况为接头Fittings中间的管子未和接口处贴紧。不同厂家的管线及色谱柱头结构有差异，最好不要混用，必要时可使用PEEK管及活动接头； 3、操作过程若发现压力非常高，则可能管路已堵，应先卸下色谱柱，然后用分段排除法检查，确定何处
乐果检测标准 一、样品采集 1.采集方法：使用专业的采集设备，按照乐果的特性进行采集。 2.采集部位：根据需要检测的目标物，选择合适的部位进行采集。 3.采集数量：每个采样点应至少采集3个样品，以保证检测结果的代表性。 二、样品处理 1.样品保存：采集的样品应立即放入干燥、密封的容器中保存，并标记清楚 采样地点和时间。 2.样品运输：样品应按照规定的条件和程序进行运输，防止在运输过程中损 坏或变质。 3.样品预处理：在进行检测前，应对样品进行必要的预处理，如粉碎、混合 等，以便于后续的检测操作。 三、检测方法 1.气相色谱法：使用气相色谱仪对样品中的乐果进行分离和分析。 2.高效液相色谱法：使用高效液相色谱仪对样品中的乐果进行分离和分析。 3.紫外可见分光光度法：使用紫外可见分光光度计对样品中的乐果进行定量 分析。 四、结果分析 1.数据处理：对检测到的数据进行处理，计算出乐果的含量和浓度。 2.结果判定：根据检测结果，对照判定标准进行判定，确定样品中是否含有 乐果及其含量是否超标。 五、判定标准 1.乐果含量是否超过规定的限量标准。 2.是否符合相关的安全卫生标准。 3.是否对环境和人体健康造成影响。 六、检测报告 1.报告内容：包括采样点信息、采样时间、检测方法、检测结果、判定结论 等。 2.报告审核：由专业人员进行审核，确保报告的准确性和可靠性。 3.报告发放：按照相关规定和要求，向有关部门和人员发放检测报告。 七、安全防护 1.操作人员应经过专业培训，熟悉乐果的特性和检测方法，掌握安全操作规 程。 2.在检测过程中，应穿戴防护服、手套、口罩等防护用品，以防止乐果对人 体的危害。
2020药典关于0512 高效液相色谱法标准公示稿 一、引言 本标准规定了采用高效液相色谱法对某物质进行检测的方法。本标准适用于药品、食品和化妆品等领域的物质分析。本标准是在2020药典的基础上制定的，旨在提高检测的准确性和可靠性，为相关行业提供更加精确的检测依据。 二、仪器和试剂 1. 仪器：高效液相色谱仪，配备有紫外检测器。 2. 试剂：甲醇、乙腈、水等色谱纯度试剂，以及其他所需试剂。 三、实验步骤 1. 样品准备：将待测样品进行预处理，使其符合高效液相色谱分析的要求。 2. 流动相制备：根据需要选择合适的流动相，并进行过滤和脱气处理。 3. 色谱柱选择：根据待测物质的性质选择适宜的色谱柱。 4. 检测条件设定：根据待测物质的性质，设定合适的流速、检测波长等参数。 5. 进样：将处理好的样品注入高效液相色谱仪中进行分析。 6. 数据处理：采集色谱图，并使用相关软件进行数据分析和处理。 四、结果计算和表示 根据高效液相色谱图，对峰面积进行积分，并计算待测物质的含量。结果表示应符合相关规定，如单位、有效数字等。 五、精密度和准确度 1. 精密度：在同一实验条件下，对标准品进行多次测定，计算其相对标准偏差。 2. 准确度：采用已知纯度的对照品进行加标回收实验，计算回收率。 六、溶液稳定性 考察待测物质在一定时间内的稳定性，以确保检测结果的可靠性。可对放置不同时间的样品进行测定，观察其含量变化情况。 七、对照品纯度要求 用于本方法检测的对照品应符合一定的纯度要求，以确保结果的准确性。建议使用高纯度对照品进行测试和分析。
八、测试数据及图谱 1. 测试数据：记录每次测定的峰面积、浓度等数据，以便后续数据处理和分析。 2. 图谱：记录色谱图，并注明各峰对应的物质。 九、检验规则 1. 检验批次：同一批次样品应作为一个检验批次，按照相同的检测方法进行检测。 2. 异常值的处理：对于异常值，应进行复核或重新测定，以确保结果的准确性。 3. 检验报告：检验报告应包括样品信息、检测方法、结果数据等内容，并由检验人员签字或盖章。 本标准适用于药品、食品和化妆品等领域的物质分析，为相关行业提供更加精确的检测依据。使用本标准时，应注意其适用范围和限制条件，以确保结果的准确性和可靠性。本标准将在公示期间接受社会的监督和意见反馈，并在公示结束后正式发布实施。
附件2： 化妆品中甲醛的检测方法 1 范围 本方法规定了采用柱前衍生化液相色谱-紫外检测法测定化妆品中甲醛（CAS ：50-00-0）的方法。 本方法适用于化妆品中甲醛含量的测定。 2 方法提要 甲醛测定采用柱前衍生化法，甲醛与2,4-二硝基苯肼反应生成黄色的2，4-二硝基苯腙（见图1），经高效液相色谱分离，紫外检测器在355 nm波长下检测，根据保留时间定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法对甲醛的检出限为0.01 µg，定量下限为0.052 µg。取0.2 g样品时，本方法对甲醛的检出浓度为0.001%，最低定量浓度为0.0052%。 NO2 O2N NHNH2+HCHO NO2 O2N NHN CH2 C6H6N4O4 198.14 C7H6N4O4 210.15图1 甲醛衍生化反应式 3 试剂 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为实验室用一级水。 3.1 甲醛标准物质水溶液。 3.2 2,4-二硝基苯肼，纯度≥ 99.0%。 3.3 三氯甲烷，色谱纯，含量≥ 99.9%。 3.4 盐酸( 20 =1.19 g/mL)。 3.5 氢氧化钠。 3.6 磷酸氢二钠（Na2HPO4•12H2O）。 3.7 磷酸二氢钠（NaH2PO4•2H2O）。
3.8 乙腈，色谱纯。 3.9 甲醇，色谱纯。 3.10 去离子水。 3.11 2，4-二硝基苯肼盐酸溶液：称取2，4-二硝基苯肼（3.2）0.20 g，置于锥形瓶中，先加浓盐酸（3.4）40 mL使溶解，必要时可超声助溶，再加去离子水（3.10）60 mL，摇匀，即得。 3.12 氢氧化钠溶液[c（NaOH）= 1 mol/L]：称取NaOH（3.5）10 g，加水适量溶解后，转移到250 mL量瓶中，用去离子水（3.10）稀释并定容至刻度，摇匀，即得。 3.13 磷酸缓冲溶液[c（PO43-）0.5 mol/L]：精密称定NaH2PO4•2H2O（3.7）2.28 g 和Na2HPO4•12H2O（3.6）12.67 g，加水适量溶解后，转移到100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。 3.14 乙腈水溶液（9+1）：量取乙腈（3.8）180 mL，置锥形瓶中，加水20 mL，摇匀，即得。 3.15甲醛系列标准溶液：精密量取适量甲醛标准物质水溶液（3.1）置于10 mL 量瓶中，加乙腈水溶液（3.14）稀释至刻度，摇匀，得质量浓度约为1.04 mg/mL 的甲醛储备液，然后按照表1进行标准溶液的配制。 表1 甲醛系列标准溶液配制1） 工作溶液溶液初始浓度量取体积定容终体积标准工作溶液终浓度储备溶液10.4 mg/mL 1 mL 10 mL 1.04 mg/mL 标准溶液1 1.04 mg/mL 2.5 mL 10 mL 260 μg/mL 标准溶液2 1.04 mg/mL 2 mL 10 mL 208 μg/mL 标准溶液3 1.04 mg/mL 1 mL 10 mL 104 μg/mL 标准溶液4 104 μg/mL 5 mL 10 mL 52.0 μg/mL 标准溶液5 104 μg/mL 1 mL 10 mL 10.4 μg/mL 标准溶液6 10.4 μg/mL 5 mL 10 mL 5.2 μg/mL 注1）：甲醛储备溶液的初始浓度应以甲醛准物质水溶液的标示量计算。
高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项 一、操作步骤： 1.开机前先将流动相过滤和超声：水流动相用混合滤膜（0.2μm）过滤,有机流动相用有机滤膜过滤，之后超声脱气15-20分钟。（过滤的目的是除去流动相里的杂质，以免杂质进入色谱柱堵塞色谱柱；超声的目的是排除流动相里面的气体，以防气体进入色谱柱损害色谱柱，影响柱效能） 注：试验过程中由于只有0.45μm的混合滤膜，第一次使用时感觉效果不好，于是过滤水时同时使用两张混合滤膜过滤水流动相。 2.超声结束后，将流动相放置到规定位置（1号泵接水流动相，2号泵接有机流动相），开机逐个排气（先启动泵，排气结束后再打开检测器）。 3.排气结束后，关闭所有排气阀。先用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，基线走稳之后，再打开水流动相（注意：水流动相和有机流动相流速之和为1ml/min），继续走基线，直到基线平稳。 注意：实验结束后，再用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，冲出色谱柱内残留的样品物质，预防长时间不使用仪器样品的残留物质沉积在色谱柱内，导致下次使用难以冲出，色谱柱柱压偏高，基线不稳，出现大量鬼峰。（不同规格的色谱柱其所允许的最大流速之和不同） 4.走基线时，应将进样阀处于Load状态，用注射器进样时应快速进样，进样后将进样阀立即扳回到Inject状态，此时液相系统开始进入采样状态。采样结束后，可在数据分析里面查看分析结果并可进行编辑，也可以在脱机状态下查看样品的分析结果并编辑。 二、使用中常见的问题及注意事项 1.过滤时有时会出现流动相漏液。可能的原因是滤膜放置不正确（有点偏）和接头有点错位，导致流动相从缝隙中漏出。 注意：操作时，应先向滤瓶内倒入少量流动相，观察是否漏液并开始过滤，若未漏液，再向滤瓶中添加流动相。 2.超声时，瓶外液体的液面应高于瓶内流动相的液面，否则流动相内的气体可能无法排出液体，气体仍然残留在流动相内，以致开机排气时无气泡排出。
流动相: 1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水,酸碱液及缓冲液需经过滤后使用,过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围; 2、水相流动相需经常更换(一般不超过2天),防止长菌变质; 3、使用双泵时,A、B、C、D四相中,若所用流动相中有含盐流动相,则A、D (进液口位于混合器下方)放置含盐流动相,B、C(进液口位于混合器上方)放置不含盐流动相; A、B、C、D四个储液器中其中一个为棕色瓶,用于存放水相流动相。 样品: 1、采用过滤或离心方法处理样品,确保样品中不含固体颗粒; 2、用流动相或比流动相弱(若为反相柱,则极性比流动相大;若为正相柱,则极性比流动相小)的溶剂制备样品溶液,尽量用流动相制备样品液;手动进样时,进样量尽量小,使用定量管定量时,进样体积应为定量管的3~5倍; 色谱柱: 1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书,注意适用范围,如pH值范围、流动相类型等; 2、使用符合要求的流动相; 3、使用保护柱; 4、如所用流动相为含盐流动相,反相色谱柱使用后,先用水或低浓度甲醇水(如5%甲醇水溶液),再用甲醇冲洗。 5、色谱柱在不使用时,应用甲醇冲洗,取下后紧密封闭两端保存;
6、不要高压冲洗柱子; 7、不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱; 使用过程中注意轻拿轻放。 操作过程: 1、开机操作:(1)、打开电源,用Harb相连接时,注意Harb电源,打开计算机,打开Bootp Server(一般启动时已打开); (2)、自上而下打开个组件电源,Bootp Server里显示有信号时(有六行字符),打开工作站(先打开On line); (3)、打开冲洗泵头的10%异丙醇溶液的开关(需用针捅抽),控制流量大小,以能流出的最小流量为准; (4)、注意各流动相所剩溶液的容积设定,若设定的容积低于最低限会自动停泵,注意洗泵溶液的体积,及时加液; (5)、使用过程中要经常观察仪器工作状态,及时正确处理各种突发事件。 2、先以所用流动相冲洗系统一定时间(如所用流动相为含盐流动相,必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相),正式进样分析前30min 左右开启D灯或W 灯,以延长灯的使用寿命; 3、建立色谱操作方法,注意保存为自己命名的Method,勿覆盖或删除他人的 方法及实验结果;