液相色谱使用中样品预处理注意的几个环节
高效液相色谱具有分离效率高、分析速度快和应用范围广等特点,特别适合于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分离分析。目前高效液相色谱已成为化学、生化、医学、工业、农业、环保、商检和法检等学科领域中重要的分离技术,是分析化学家和生物化学家手中用于解决他们面临的各种实际分析和分离课题必不可少的工具之一。虽然在检测分析中使用了昂贵的、性能优越的高档精密仪器,但是由于在样品的前处理,标准溶液的制备,样品液的测定,分析中的污染,仪器常见故障等等问题上的不注意,而引起大的系统误差,使整个测定分析失败。现就液相色谱分析的应用中样品预处理注意的几个环节,作简要分析,以达到更好的检测效果。
1 样品预处理方法
样品预处理应包括进样前的一切操作。除了称重、溶解、稀释等步骤外,样品需要: ①过滤; ②萃取; ③衍生化(柱前衍生) ; ④液相色谱(低压柱层析) 。这些操作可以是手工进行或实行自动化操作。样品预处理的目的是除去干扰物、增加检测器灵敏度(富集) 、保护色谱柱等。样品预处理同时也是为了避免色谱分离故障,其中样品萃取是关键的一步,要从大量的干扰物中萃取出微量组分难度极大。
有些样品经预处理后还不能作进样分析,需进行衍生化处理,使一些无紫外吸收或无荧光的组分,经过衍生化后能用紫外和荧光检测器检测,这样既提高了灵敏度,又改善了分离度(质量变化) 。样品预处理的同时也会带来一些问题,如样品损失、样品被污染、衍生化反映不完全或多种反应物生成等。衍生反应常会影响试验的精确度,或者在整个样品预处理过程中带来误差。
用于液相色谱分析的样品溶液必须均匀而无颗粒,有颗粒会损坏进样器并阻塞柱头。处理好的样品在准备上柱前应对准光线摇动,检查样品溶液中有无颗粒。只要看到颗粒、混浊或乳化,就应过滤一下,过滤膜要能截留住015μm 以上的颗粒,样品过滤的过程中可能引起:样品被污染,因过滤吸附降低样品组分的含量,样品溶剂挥发引起误差。萃取的目的是从共溶的样品介质中分离出被分析的组分,或者减少损坏柱的物质(如蛋白质等)和干扰物。一般采用有机溶剂萃取,要求萃取用的溶剂毒性低、挥发性好、杂质少、对待测样品有良好的溶解度且又与水不相混溶。常用的有乙醚、醋酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯或者两种以上的混合溶剂。萃取后一般可直接进样,有时需要浓缩或吹干浓缩,再用定体积的液体或流动相溶解进样。这样增加了样品浓度,提高了灵敏度,同时避免了溶剂峰对样品峰的干扰。在萃取是要考虑样品分子的溶解能力。除了脂溶性和水溶性组分外,还有用脂溶性的组分制成水溶性的盐。萃取方法如下:
1.1 水溶性样品
(1) 酸性组分及生成的盐萃取方法:有机溶剂萃取杂质后调成酸性,再加有机溶剂萃取或进样,或在N2 流下吹干,用适当的溶剂解后进样。
(2) 碱性组分及生成的盐萃取方法:有机溶剂萃取杂质后调成碱性,再加有机溶剂萃取或进样,或在N2 流下吹干,用适当的溶剂溶解后进样。
(3) 中性组分萃取方法:有机溶剂萃取杂质后,直接用反相色谱法分析。
1.2 脂溶性组分萃取方法:有机溶剂萃取或进样,或在N2 流下吹干,用适当的溶剂溶解后进样。
2 分析中的污染
一般检测的环境、容器、试剂都是影响测定结果的因素。
2.1 环境污染
仪器室的有害气体、气溶液、灰尘等等都能造成污染,影响检测结果,这种污染很难校正。因此,仪器室与其他实验室应隔离,保持清洁,仪器室内应安装空调,注意防潮、防腐、防震、空气相对湿度应小于70 %为宜。
2.2 容器
实验室常用的器皿有玻璃类、瓷类、石英类、塑料类等,在进行分析时,应按照待则样品的要求来选则器皿,不管使用哪种器皿,容器的洗条清洁都是很重要的,也是取得好的检测结果的基本保证。
2.3 试剂
在液相色谱分析中,所选用的试剂必须是色谱纯、优级纯或分析纯,如果用含量有杂质的试剂,则会出现杂峰而影响测定结果。
3 标准溶液的配置
在配置标准溶液时,先要配置现定浓度的内标溶液,在标准溶液和样品溶液中最好使用同一批次配制的内标溶液以减少误差。
(1) 配制标准溶液的物质应当是色谱纯的、性质稳定。
(2) 常用的标准溶液应存放在棕色溶液瓶中低温保存。
(3) 在配制维生素类标准品时,要放置在棕色容量瓶中或避光放置以免分解。
4 样品预处理过程中的主要故障与解决办法
(1) 色谱图中出现无关的峰,原因有可能是样品过滤器带来污染,解决方法如下:
①将过滤器浸泡在样品溶剂中并进样试验; ②改变过滤器类型; ③采用交替清洗技术。
(2) 一些或全部化合物的峰比预期的小,尤其是低浓度的样品,原因可能是样品过滤器表面吸附下降,解决方法如下:①改变过滤器类型; ②严格按相同条件处理所用样品; ③采用交替清洗技术。
(3) 回收率太低或差,原因可能是萃取不完全,解决方法如下:①增加萃取时间,使用热溶剂; ②修改清洗方法。
(4) 色谱峰变宽,柱寿命缩短,原因可能是样品带来的干扰与污染,应改进清洗方法。
(5) 精度差,原因可能是回收不完全,解决方法如下:①改进或替换衍生化、分离、萃取或其他条件; ②用自动化处理装置提高精度。
总之,对分析仪器来说,避免故障的最主要的做法是正确的操作和调节,切忌盲目操作,对核心部位如离子室、微电流放大器等减少震动和碰撞,保证绝缘,并减少各种系统误差要注意以上要点,但还要注意日常的仪器保养,色谱柱子的维护,仪器室保持清洁,这样才能使液相色谱处于最佳工作状态,在分析中发挥其重要的作用。
液相色谱流动相的性质要求
一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
选好填料（固定相）后，强溶剂使溶质在填料表面的吸附减少，相应的容量因子k降低；而较弱的溶剂使溶质在填料表面吸附增加，相应的容量因子k升高。因此，k值是流动相组成的函数。塔板数N一般与流动相的粘度成反比。所以选择流动相时应考虑以下几个方面：
①流动相应不改变填料的任何性质。低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。
②纯度。色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。
③必须与检测器匹配。使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。
④粘度要低（应<2cp）。高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。最好选择沸点在100℃以下的流动相。
⑤对样品的溶解度要适宜。如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。
⑥样品易于回收。应选用挥发性溶剂。
高效液相色谱柱的使用与维护
高效液相色谱(HPLC)是20世纪60年代后期发展起来的分离分析技术，是现代分离测定的重要手段。问世以来，因其具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度好、能分析高沸点但不能气化的热不稳定生理活性物质的特点而被广泛应用于生物化学、药物及临床分析。高效液相色谱是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂，缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入待测样品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后依次进入检测器，色谱信号由记录仪、积分仪或色谱工作站记录。
色谱柱是高效液相色谱的心脏，在高效液相色谱仪的使用中，保持色谱柱的柱效、容量和渗透粉性，延长柱子的使用寿命非常重要。因此对高效液相色谱柱的维护是关键。
1 色谱柱的构造
色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。柱管多用不锈钢制成，压力不高于70㎏/㎝2时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。为提高柱效，减小管壁效应，不锈钢柱内壁多经过抛光。还有使用熔融硅或玻璃衬里的，用于细管柱。色谱柱两端的柱接头内装有筛板，
是烧结不锈钢或钦合金，孔径0.2-20 μm(5-10μm)，取决于填料粒度，目的是防止填料漏出。
色谱柱按用途可分为分析型和制备型两类，尺寸规格也不同:
(I)常规分析柱(常量柱)，内径2-5mm(常用4.6mm，国内有4mm和5mm )，柱长10-30cm ;
(2)窄径柱，又称细管径柱、半微柱，内径1 -2mm ,柱长10-20cm;
(3)毛细管柱(又称微柱)，内径0.2-0.5mm;
(4)半制备柱，内径>5mm;
(5)实验室制备柱，内径20-40rnm，柱长10-30cm;
(6)生产制备柱内径可达几十厘米。柱内径一般是根据柱长、填料粒径和折合流速来确定，目的是为了避免管壁效应。
2色谱柱的使用和维护
在日常分离分析工作中，色谱柱的正确使用和维护十分重要，色谱柱使用是否得当，直接影响色谱柱的寿命，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。
(1)柱子在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度。必须防止较强的机械振动，以免柱床产生空隙。
(2)如果仪器用来做常规分析，样品种类有限，但分析次数多，则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱，这样有助于延长柱子的寿命。
(3)避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。
(4)应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。
(5)如使用柱温控制装置时，应注意在通人流动相后才能升温。
(6)一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。
(7)选择使用适宜的流动相，以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一个预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。
液相色谱柱再生
1、色谱柱的使用说明：
（1）色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。
（2）流动相：流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。如果将所配得流动相再经过0.45μm 的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0，BDS C18适合
于碱性化合物，PH值适用范围为2.0-10.0。当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
（3）样品：样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。
2、色谱柱的保存
（1）反相色谱柱每天实验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。（2）长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度最好是室温。
3、色谱柱的再生
因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。
（1）反相柱的再生：依次采用20-30倍的色谱柱体积的甲醇：水=10：90 （V/V），乙腈，异丙醇作为流动相冲洗色谱柱，完成后再以相反顺序冲洗色谱柱。
（2）正相柱的再生：依次以20-30倍色谱柱的体积的正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇作为流动相冲洗色谱柱，然后再以相反的顺序冲洗色谱柱。要注意上述溶剂必须严格脱水。
4、色谱柱在使用过程中易出现的问题和解决办法
色谱柱在使用中最常见的问题就是柱压升高，如果柱压是在长时间使用过程中缓慢增加，属于正常现象。但柱压在使用过程中突然升高（系统管路堵塞及压力传感器故障除外），以下列举了部分常见原因及解决办法：
（1）色谱柱头的过滤筛板堵塞或污染；
解决方法：如确定是色谱柱头的过滤筛板被污染，可以将色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力，或者卸下色谱柱头，将其放在10％的稀硝酸内超声清洗10分钟，后再用纯水超声10分钟，重新装入色谱柱。
（2）色谱柱头的填料被样品污染；
解决方法：如确定色谱柱头的填料被污染，将柱头螺丝卸下，挖出柱内前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔细修复后，重新安装上柱头螺丝。（3）色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他有机溶剂，形成结晶析出；解决方法：如确定定是盐结晶，用10%的甲醇/水冲洗色谱柱使柱内盐全部溶解，再换高浓度甲醇。
（4）流动相PH值过大或过小使固定相结构破坏或溶解。解决方法：如果因PH 值使用不当，很难恢复 .
高效液相色谱样品预处理步骤 1. 样品准备 在准备高效液相色谱样品时，需要确保样品的稳定性，防止样品在分析过程中发生变化。因此，在样品准备过程中需要注意以下几点： （1）选择合适的样品存储容器，避免样品被污染或发生变化； （2）确保样品在分析前达到室温，以避免样品在注射到色谱柱时产生气泡； （3）注射适量的样品，以避免色谱柱被过度磨损或样品过载。 2. 样品过滤 在进行高效液相色谱分析前，需要将样品通过过滤器进行过滤，以去除样品中的固体杂质或悬浮物，从而防止其对色谱柱的堵塞或损坏。通常使用的过滤器有不同规格的筛网或滤膜。 3. 样品衍生化 在一些情况下，需要对样品进行衍生化处理，以便更好地进行高效液相色谱分析。衍生化处理可以将样品中的某些化合物转化为更易分析的形式，例如将某些极性化合物转化为非极性化合
物，使其更适合用有机溶剂进行洗脱。 4. 样品稀释 在某些情况下，需要将样品进行稀释，以便更好地进行高效液相色谱分析。过浓的样品可能会导致色谱峰过宽或重叠，影响分析结果的准确性。通常使用的的是溶剂或水进行稀释。 5. 样品进样 在进行高效液相色谱分析时，需要将样品通过进样针注入到色谱柱中。在进行进样时，需要注意以下几点： （1）注射适量的样品，以避免色谱柱被过度磨损或样品过载； （2）确保进样针的清洁和干燥，以避免对分析结果产生干扰。 6. 样品分离 在将样品注入到色谱柱后，需要对其进行分离。通常使用的的是高压泵将流动相通过色谱柱，将样品中的各个化合物进行分离。在进行分离时，需要注意以下几点： （1）选择合适的流动相，以便将样品中的各个化合物进行分离； （2）调整流动相的流速和比例，以便获得更好的分离效果。 7. 检测器检测
高效液相色谱仪分析样品时常见的预处理方法 高效液相色谱仪分析样品的预处理方法有过滤、离心、加速溶剂萃取、超临界流体萃取、固相萃取、固相微萃取、液相微萃取和衍生化等。 一、过滤 常用的滤膜材质有纤维素、聚四氟乙烯和聚酰胺。其中聚酰胺应用最广，是亲水材料，适合水溶液的过滤，不被HPLC常用溶剂所腐蚀，不含添加剂。 加速溶剂萃取 1、原理： 加速溶剂萃取是在提高温度（50～200℃）和压力（10.3～20.6MPa）下，用溶剂萃取固体或半固体样品。 2、特点： 与传统萃取方式相比，加速溶剂萃取具有溶剂用量少、快速、对不同基体可用相同的萃取条件、萃取效率高、选择性好、使用方便、安全性好和自动化程度高等特点。 二、超临界流体萃取 超临界流体萃取是利用超临界流体对物质的特殊溶解性能原理而建 立的萃取方法。超临界二氧化碳作为常用的萃取剂已被广泛应用于天然药物中非极性和弱极性有效成分的提取。 三、固相萃取 1、原理： 固相萃取是通过采用选择性吸附和选择性洗脱对样品进行富集、分离
和净化，可以将其近似地看作一种简单的液固色谱过程。 2、固相萃取方法： （1）使液体样品溶液通过吸附剂，保留其中被测物质，然后选用适当强度溶剂冲去杂质，再用少量溶剂迅速洗脱被测物质，从而达到快速分离净化和浓缩的目的。 （2）可选择性吸附干扰杂质，让被测物质流出。 （3）可同时吸附杂质和被测物质，再使用合适的溶剂选择性洗脱被测物质。 四、固相微萃取 1、原理： 固相微萃取是基于涂敷在纤维上的高分子涂层或吸附剂和样品之间 的吸附－解吸平衡原理，集采样、萃取、浓缩和进样于一体的无溶剂的样品微萃取方法。 2、常用固相微萃取方法： （1）直接固相微萃取：适用于气体基质和干净的水基质。 （2）顶空固相微萃取：适用于任何基质，尤其是直接固相微萃取无法处理的脏水、油脂、血液、污泥和土壤等。 （3）膜固相微萃取：通过选择性高分子渗透膜将样品与萃取头分离，进行间接萃取。渗透膜的作用是使萃取头不被基质污染，提高萃取的选择性。但由于样品中待分析物必须通过渗透膜才可以接触到萃取涂层，因此会延长萃取平衡时间。可用于悬浊液等较脏基质中非挥发性有机物的监测。
液相色谱的样品前处理部分和液相色谱使用注意事项 刘鹏1233351 环境工程 一、样品的前处理 液体样品的前处理技术 液液萃取法：利用溶液中各组分在所选用的萃取剂中的溶解度差异，用液相萃取剂从溶液中提取出某种组分。 顶空法（静态顶空，吹扫捕集法）：利用待测物的易挥发性，静态顶空法直接抽取样品顶空气体进行色谱分析，吹捕法利用载气尽量吹出样品中待测物后，用冷冻捕集或吸附剂捕集的方法来收集待测物。 超临界流体萃取法：利用超临界流体密度高、黏度小、对压力变化敏感的特性，在超临界状态下萃取待测样品，通过减压、降温或吸附收集后分析。 膜萃取：膜对待测物的吸附作用，先由高分子膜萃取样品中的待测物，再用气体或液体萃取高分子膜中的待测物。 固相萃取：先用固相吸附剂吸附待测物，再用溶剂洗脱待测物。 固相微萃取技术：利用待测物在样品及萃取涂层之间的分配平衡，将萃取纤维暴露在样品或其顶空真中萃取。 液相微萃取法：包括大体积的水溶液及小体积的不溶于水的有机液液萃取，将疏水性的目标有机物转移到一滴有机溶剂中。 气体样品的前处理技术 （1）样品衍生化：将样品制成衍生物，不仅可以提高从样品基体中萃取和预分离待测化合物的能力，而且可以通过降低样品的极性或改变样品组分的选择性来改善液相色谱分离，还可以改变样品中不同化合物的相对检测器响应，因而可在有谱带重叠的情况下，检测和定量待测组分中的某些组分。分为紫外衍生化、荧光衍生化、电化学衍生化、柱后或柱前衍生化。固相萃取：先用固相吸附剂吸附待测物，再用溶剂洗脱待测物。 膜萃取：膜对待测物的吸附作用，先由高分子膜萃取样品中的待测物，再用气体或液体萃取高分子膜中的待测物。 液相微萃取法：包括大体积的水溶液及小体积的不溶于水的有机液液萃取，将疏水性的目标有机物转移到一滴有机溶剂中。 液液萃取法：利用气体样品中各组分在所选用的萃取剂中的溶解度差异，用液相萃取剂从溶液中提取出某种组分。 超临界流体萃取法：利用超临界流体密度高、黏度小、对压力变化敏感的特性，在超临界状态下萃取待测样品，通过减压、降温或吸附收集后分析。 固体样品的前处理技术 索氏提取法：利用溶剂回流及虹吸原理，使固体样品中目标物连续不断地被纯溶剂萃取，既节约溶剂，又提高萃取效率。萃取前先将固体物质研碎（100-200目），以增加固液接触的面积。然后将固体样品放在滤纸套内，置于提取器中，提取器的下端与盛有提取溶剂的圆底烧瓶相连，上面接回流冷凝管。加热圆底烧瓶，使溶剂沸腾，蒸汽通过提取器的支管上升，被冷凝后滴入提取器中，溶剂和固体接触进行萃取，当溶剂液面超过虹吸管的最高处时，含有萃取物的溶剂虹吸回烧瓶，因而萃取出一部分物质，如此重复，使固体样品中目标物质不断为纯的溶剂所萃取，将萃取出的物质富集在烧瓶中。 微波辅助萃取法：将微波技术和萃取技术相结合，利用极性分子可以迅速吸收微波能量的原理来加热一些极性溶剂，达到萃取样品中目标化合物、分离杂质的目的。微波是指波长
高效液相色谱仪操作使用过程中的注意事项 一，高效液相色谱仪操作过程： 1、开机操作： （1）、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server（一般启动时已打开）； （2）、自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符），打开工作站（先打开On line）； （3）、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关（需用针捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量为准； （4）、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液； （5）、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。 2、先以所用流动相冲洗系统一定时间（如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相），正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命； 3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果； 4、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡； 5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤； 6、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。冲洗过程中关闭D灯、W灯； 7、关机时，先关闭泵、检测器等，再关闭工作站，然后关机，最后自下而上关闭色谱仪各组件，关闭洗泵溶液的开关； 8、使用者须认真履行仪器使用登记制度，出现问题及时向老师报告，不要擅自拆卸仪器。 （续） 1、操作过程若发现压力很小，则可能管件连接有漏，注意检查。当出现错误警告（各组件指示灯均为红色），一般为漏液，其中一个感应器中已有溶剂，漏液故障排除后，擦干，点击On line操作界面中的Instrument/System Off，然后再点击操作界面中的Instrument/System On即可。 2、连接柱子与管线时，应注意拧紧螺丝的力度，过度用力可导致连接螺丝断裂。柱接头处易发生漏液，可能情况为接头Fittings中间的管子未和接口处贴紧。不同厂家的管线及色谱柱头结构有差异，最好不要混用，必要时可使用PEEK管及活动接头； 3、操作过程若发现压力非常高，则可能管路已堵，应先卸下色谱柱，然后用分段排除法检查，确定何处堵塞后解决。若是保护柱或色谱柱堵塞，可用小流量流动相或以小流量异丙醇冲洗，还可采用小流量反冲的办法（新柱不提倡），若还是无法通畅，则需换柱； 4、运行过程中自动停泵，可能为压力超过上限或流动相用完； 5、样品瓶中样品较少，自动进样器进样针无法到达液面，可采用调低进样针进样高度的办法，注
液相色谱使用中样品预处理注意的几个环节 高效液相色谱具有分离效率高、分析速度快和应用范围广等特点,特别适合于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分离分析。目前高效液相色谱已成为化学、生化、医学、工业、农业、环保、商检和法检等学科领域中重要的分离技术,是分析化学家和生物化学家手中用于解决他们面临的各种实际分析和分离课题必不可少的工具之一。虽然在检测分析中使用了昂贵的、性能优越的高档精密仪器,但是由于在样品的前处理,标准溶液的制备,样品液的测定,分析中的污染,仪器常见故障等等问题上的不注意,而引起大的系统误差,使整个测定分析失败。现就液相色谱分析的应用中样品预处理注意的几个环节,作简要分析,以达到更好的检测效果。 1 样品预处理方法 样品预处理应包括进样前的一切操作。除了称重、溶解、稀释等步骤外,样品需要: ①过滤; ②萃取; ③衍生化(柱前衍生) ; ④液相色谱(低压柱层析) 。这些操作可以是手工进行或实行自动化操作。样品预处理的目的是除去干扰物、增加检测器灵敏度(富集) 、保护色谱柱等。样品预处理同时也是为了避免色谱分离故障,其中样品萃取是关键的一步,要从大量的干扰物中萃取出微量组分难度极大。 有些样品经预处理后还不能作进样分析,需进行衍生化处理,使一些无紫外吸收或无荧光的组分,经过衍生化后能用紫外和荧光检测器检测,这样既提高了灵敏度,又改善了分离度(质量变化) 。样品预处理的同时也会带来一些问题,如样品损失、样品被污染、衍生化反映不完全或多种反应物生成等。衍生反应常会影响试验的精确度,或者在整个样品预处理过程中带来误差。 用于液相色谱分析的样品溶液必须均匀而无颗粒,有颗粒会损坏进样器并阻塞柱头。处理好的样品在准备上柱前应对准光线摇动,检查样品溶液中有无颗粒。只要看到颗粒、混浊或乳化,就应过滤一下,过滤膜要能截留住015μm 以上的颗粒,样品过滤的过程中可能引起:样品被污染,因过滤吸附降低样品组分的含量,样品溶剂挥发引起误差。萃取的目的是从共溶的样品介质中分离出被分析的组分,或者减少损坏柱的物质(如蛋白质等)和干扰物。一般采用有机溶剂萃取,要求萃取用的溶剂毒性低、挥发性好、杂质少、对待测样品有良好的溶解度且又与水不相混溶。常用的有乙醚、醋酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯或者两种以上的混合溶剂。萃取后一般可直接进样,有时需要浓缩或吹干浓缩,再用定体积的液体或流动相溶解进样。这样增加了样品浓度,提高了灵敏度,同时避免了溶剂峰对样品峰的干扰。在萃取是要考虑样品分子的溶解能力。除了脂溶性和水溶性组分外,还有用脂溶性的组分制成水溶性的盐。萃取方法如下: 1.1 水溶性样品 (1) 酸性组分及生成的盐萃取方法:有机溶剂萃取杂质后调成酸性,再加有机溶剂萃取或进样,或在N2 流下吹干,用适当的溶剂解后进样。 (2) 碱性组分及生成的盐萃取方法:有机溶剂萃取杂质后调成碱性,再加有机溶剂萃取或进样,或在N2 流下吹干,用适当的溶剂溶解后进样。 (3) 中性组分萃取方法:有机溶剂萃取杂质后,直接用反相色谱法分析。
高效液相色谱仪分析样品的预处理 高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种分离、定量分析化学成分的有效手段，在药品、食品、环境、化工等行业都有广泛应用。但在HPLC分析过程中，如果样品预处理不充分，就会对后期的分离和检测造成很大影响，因此，样品的预处理技术显得极为重要。下面，我们将介绍关于HPLC分析样品预处理的相关内容。 样品的采集与处理 对于不同的样品，我们需要进行不同的采集与处理，以提高分析精度和准确性。具体做法如下： 液体样品的采集与处理 在液体样品（如饮料、药剂等）中，我们一般采用稀释、过滤或析出等方法， 来提高样品的一致性和稳定性，减少杂质和干扰物的含量。 •稀释法：将样品与纯水或乙醇按一定比例混合，使样品浓度适宜，从而保证HPLC检测的精确度和稳定性。 •过滤法：将样品过滤，去除其中的颗粒、悬浮物等杂质，在HPLC分析前对样品进行预处理，可以减少后期的误差。 •析出法：利用化学方法将目标成分从样品中分离出来，以便HPLC分析。例如，对于含蛋白质的样品，我们可以用盐酸进行酸性加热，将蛋白质析出，然后用纯水进行冲洗，得到用于HPLC分析的样品。 固体样品的采集与处理 在采集固体样品（如土壤、植物等）时，我们需要进行粉碎、提取和纯化等预 处理步骤，以便后期的HPLC分析。具体做法如下： •粉碎法：将样品磨成均匀粉末状，以利于化合物的释放和提取。 •提取法：用合适的溶剂将目标化合物提取出来。例如，我们可以用氯仿等有机溶剂提取样品中的脂肪和植物色素等目标化合物。 •纯化法：将提取出来的目标化合物进行纯化，以去除杂质和提高样品的纯度。纯化方法比较多样，可以根据目标化合物的特性进行选择。 样品的保护与处理 在样品预处理过程中，我们需要注意以下几点，以保证处理后的样品能够在HPLC分析中表现出较好的分离、检测结果。
液相色谱仪操作注意事项 1.实验前准备： -检查液相色谱仪的仪器和设备是否正常运行，并及时维护和保养。 -确保所使用的溶剂和试剂是纯净的，避免杂质对实验结果的干扰。 -根据实验需要准备样品，并对样品进行适当的预处理。 2.样品注射： -在注射样品之前，应使用适当的过滤器或离心管对样品进行净化和 处理，以去除固体颗粒和未溶解的物质。 -控制样品的浓度，并确保注射量合适，避免样品浓度过高或过低。 -注意避免在采样时引入气泡，以免影响分析的准确性。 3.溶剂系统和柱箱： -检查溶剂系统的压力是否稳定，并确保溶剂的流动速度和比例准确。 -定期检查柱箱的温度控制系统，以确保温度控制的准确性和稳定性。 -避免溶剂泄漏和混合，定期清洁和更换系统中的管路和连接件。 4.柱子选择： -根据样品的性质和要求选择适当的柱子材料和分离模式（正相、反 相等）。 -注重柱子的使用寿命和保养，定期进行柱子的清洗和再生。 5.检测器设置：
-根据样品的性质和测定要求选择适当的检测器（紫外可见、荧光、电化学等）。 -根据检测器的灵敏度和响应范围调整检测器的参数，以获得最佳的测定结果。 6.数据处理： -定期校准仪器，包括检测器的灵敏度和漂移。 -使用适当的软件进行数据采集和分析，确保数据的准确和可靠。 -定期备份所得到的数据，以防止数据丢失和损坏。 7.安全操作： -液相色谱仪使用大量的有机溶剂和化学试剂，应注意防止溶剂的泄漏、挥发和接触皮肤和眼睛。 -在操作前佩戴个人防护装备，包括实验手套、护目镜和实验衣。 -控制溶剂的使用量和浓度，避免使用过多的溶剂，同时避免溶剂的浓度过高。 以上是使用液相色谱仪时需要注意的一些操作事项，通过正确的操作和维护，可以获得准确、可靠的分析结果，并确保实验的安全性。
液相色谱中样品前处理技术综述 在复杂基体中低浓度甚至是痕量的有机化合物的分离和测定是分析化学所面临的一个挑战。在样品前处理方面,现代色谱分析样品制备技术的发展趋势是使处理样品的过程要简单、处理速度快、使用装置小、引进的误差小,对欲测组分的选择性和回收率高。 目前国际上液相色谱通常采用的样品处理技术有:固相萃取(MXPD)、超临界萃取(SFE)、固相微萃取技术。而我国目前主要采用传统的溶剂萃取,液液分配、柱层析净化,前处理方法自动化程度低,提取净化的效率不高,速度慢,环境污染严重。新开发的前处理技术其目的和结果就是要实现快速、有效、简单和自动化的完成分析样品制备过程。 下以就简单介绍几个主要的样品处理技术: 1.溶剂萃取 在色谱分析样品制备中,溶剂萃取方法主要有液-液萃取、液-固萃取和液-气萃取,它们都是属于两相间的传质过程,即物质从一相转入另一相的过程。 溶剂萃取技术在我们液相色谱分析的样品制备过程中,是用到最为广泛的一种技术。关于其原理和方法,在此不再赘述。 在液-液萃取中非常重要的操作是急速的振动样品,这样可以确保两相的完全接触,有助于质量传递。由于物质剧烈的振动,使得乳化现象经常发生,特别是那些含有表面活性剂和脂肪的样品。为了防止乳化形成,常采用加热或加盐的方法破乳。通过改变K D值,改变溶剂或化学平衡作用的添加剂,如使用缓冲剂调节PH,盐调节离子强度等。 常用于破乳的技术有:
(1)加盐; (2)使用加热-冷却萃取容器; (3)通过玻璃棉塞过滤乳化液样品; (4)通过相过滤纸过滤乳化液样品 (5)通过离心作用; (6)加少量的不同的有机溶剂。 溶剂萃取的方式在现代水产品检测技中应用十分广泛,因其实验器材简便,经济,容易操作。在鱼体的孔雀石绿,环丙沙星等药物残留的检测中,都有用到溶剂萃取的方式。在孔雀石绿残留的检测中,为了防止乳化现象的产生,也用到了二甘醇这进行破乳。 2.固相萃取(solid phase extraction SPE) 1 固相萃取(SPE)是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附,与样品的基体和干扰化合物分离。然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附,达到分离和富集目标化合物的目的。 与液液萃取相比固相萃取有很多优点:固相萃取不需要大量互不相深的溶剂,处理过程中不会产生乳化现象,它采用高效、高选择性的吸附剂(固定相),能显著减少溶剂的用量,简化样品的预处理过程,同时所需费用也有所减少。一般来说固相萃取,费用为液液萃取的五分之一,但其缺点是目标化合物的回收率和精密度要略低于液液萃取。
液相色谱使用中样品预处理注意的几个环节液相色谱（Liquid Chromatography, LC）是一种常用的分离和分析 技术，广泛应用于化学、药物、食品、环境等领域。在进行液相色谱分析 之前，需要对样品进行预处理，以提高分离效果和检测灵敏度。以下是液 相色谱使用中样品预处理注意的几个环节： 1.样品收集与保存： 在进行液相色谱分析之前，首先需要确保样品的完整性和准确性。正 确收集样品，并妥善保管，避免暴露在高温、阳光直射或污染物的环境中。如果样品需要保存一段时间再进行分析，需要选择合适的保存方式（如冷藏、冷冻等），避免样品的降解和污染。 2.样品预处理的目的： 样品预处理的目的有很多，主要是为了提高液相色谱分析的灵敏度、 分离效果和准确性，同时还可以去除样品中的干扰物质、减少毛刺、消除 背景噪声等。样品预处理可以采取物理方法（如固体相萃取、液液萃取、 固相微萃取等）和化学方法（如酸碱处理、酶解、结合剂去除等）。 3.样品处理前的样品前处理： 样品在进行液相色谱前处理之前，通常需要进行一些基本处理，以消 除其它成分对目标分析物的干扰。常见的样品前处理方法有固相萃取、液 液萃取、蒸馏、浓缩等。这些方法可以有效地去除样品中的杂质、减少背 景干扰，提高目标物的浓度。 4.样品的提取和富集：
有时候液相色谱的灵敏度不足以直接进行分析，需要对样品进行提取 和富集。常见的提取和富集方法有固相萃取、液相萃取、吸附剂富集、双 相萃取等。这些方法可以提高目标分析物的浓度，并去除样品中的干扰物质，从而提高分析灵敏度。 5.样品的预处理方法： 样品预处理方法选择的时候需要根据具体的目的和样品特性进行。常 见的样品预处理方法有：蛋白质沉淀、过滤、离心、稀释、酶解、水解等。对于复杂样品，可能需要多种预处理方法的组合使用。 6.样品的稳定性： 样品在进行液相色谱分析之前，需要评估其稳定性。有些样品可能在 储存过程中发生化学反应、分解或降解，导致分析结果的误差。在进行液 相色谱分析之前，需要对样品的稳定性进行评估，并选择合适的处理方法，以确保样品的稳定性。 7.样品的柱寿命： 样品预处理过程中，需要注意避免样品中杂质对柱的污染和损坏。使 用前，要充分准备好柱，如洗涤和平衡柱。此外，定期对柱进行维护、保 养和更换，避免因柱老化或使用不当导致的分离效果和柱寿命的下降。 总之，样品预处理是液相色谱分析中的重要一环，直接关系到分析结 果的准确性和灵敏度。在进行液相色谱分析之前，需要认真选择合适的预 处理方法和条件，以充分发挥液相色谱分析的效益。并且，样品预处理的 环节需要严格控制操作条件，以确保样品的安全和可靠性。
样品预处理的基本要求 1. 引言 在科学研究、实验室测试、质量控制等领域中，样品预处理是一个非常重要的环节。样品预处理的目的是在分析前对样品进行处理，以消除干扰物、提高分析准确性和灵敏度。本文将介绍样品预处理的基本要求，并对其流程、方法和注意事项进行详细说明。 2. 样品预处理的流程 样品预处理的流程包括样品采集、样品保存、样品处理和样品分析四个主要步骤。 2.1 样品采集 样品采集是样品预处理的第一步，其目的是获取代表性的样品。在采集过程中，需要注意以下几点： •选择合适的采样设备和容器，保证采样不受外界污染。 •根据实验要求确定采样点位和采样数量，保证样品的代表性。 •采集样品时要注意避免样品的氧化、光照和温度变化。 2.2 样品保存 样品保存是为了保持样品的原样性和稳定性，以便后续的处理和分析。在样品保存过程中，需要注意以下几点： •根据样品的性质和分析要求选择合适的保存方式，如冷藏、冷冻、干燥等。•使用合适的容器和密封材料，防止样品受到污染和损坏。 •记录样品的保存时间和条件，以便后续的数据分析和解释。 2.3 样品处理 样品处理是样品预处理的核心步骤，其目的是去除样品中的干扰物，提高分析准确性和灵敏度。样品处理的方法多种多样，常见的包括： •溶解：将固体样品溶解于适当的溶剂中，以便后续的分析。 •萃取：利用溶剂的选择性提取目标物质，去除干扰物。 •过滤：通过滤膜或滤纸去除悬浮颗粒和固体颗粒。 •浓缩：将稀溶液浓缩至一定体积，以提高分析的灵敏度。
2.4 样品分析 样品分析是样品预处理的最后一步，其目的是对样品进行定性和定量分析。样品分析的方法和仪器多种多样，常见的包括： •光谱分析：利用样品对光的吸收、发射、散射等特性进行分析。 •色谱分析：利用样品在固体或液体载体上的分配行为进行分析。 •电化学分析：利用样品中的化学反应产生的电流或电势进行分析。 3. 样品预处理的基本要求 样品预处理是一项复杂的工作，要求细致、准确、可重复。以下是样品预处理的基本要求： 3.1 代表性 样品预处理的结果应能代表整个样品的特性。在采样和处理过程中，应尽量避免因外界因素导致样品的非代表性。 3.2 准确性 样品预处理的结果应准确可靠，与真实值尽可能接近。在样品处理和分析过程中，应严格控制各种误差，如仪器误差、操作误差等。 3.3 灵敏度 样品预处理的方法应具有较高的灵敏度，能够检测到目标物质的微量存在。在样品处理和分析过程中，应注意提高分析仪器的灵敏度，并优化样品处理方法，以提高分析的准确性和灵敏度。 3.4 可重复性 样品预处理的方法应具有良好的可重复性，即在相同条件下，能够得到一致的结果。在样品处理和分析过程中，应注意控制各种变量，如温度、pH值、反应时间等。 4. 注意事项 在进行样品预处理时，还需要注意以下几点： •了解样品的性质和分析要求，选择合适的预处理方法和仪器设备。 •严格按照操作规程和实验室安全要求进行操作，避免发生事故和样品污染。•定期检查和维护仪器设备，确保其正常工作和准确度。 •记录样品预处理的详细步骤和操作条件，以便后续的数据分析和解释。
液相色谱仪注意事项 液相色谱仪（Liquid Chromatography, LC）是化学分析领域中的一种常用仪器，广泛应用于食品、化妆品、医药以及环保等领域。但是，使用液相色谱仪也存在一些注意事项，本文将从以下几个方面介绍这些注意事项。 一、操作前准备 1. 校准仪器：在使用液相色谱仪之前，需要进行校准，以保证仪器的准确性和可靠性。校准应该由专业人员进行，并根据仪器说明书对仪器进行校准使其能够满足实验的需求。 2. 选择合适的移相剂和溶剂：移相剂和溶剂在色谱分离过程中发挥着重要的作用。选择合适的移相剂和溶剂能够提高分离效率和拓展仪器使用范围。 3. 检查仪器连接：检查仪器连接是否牢固，如进样器、柱接口等。 二、样品处理 1. 样品准备：样品的准备应该根据实验要求和样品性质进行，如使用前需要进一步处理、去杂质等。 2. 样品过滤：样品过滤可以避免柱塞、进样器堵塞等问题，并且提高峰形和仪器运行的稳定性。
3. 样品浓度：样品的浓度也要考虑到仪器的灵敏度，一般来说，样品在1至10mg/mL之间，最好不要高于 20mg/mL。 三、仪器操作 1. 流速选择：根据柱的特性以及样品性质等因素选择合适的流速，一般来说，越宽的柱越适合高流速，而窄的柱适合低流速。 2. 运行条件：运行条件需要根据实验要求进行调整，如温度、运行时间、梯度和压力等参数需要进行适当调整。 3. 进样量：进样量与柱的容积有关，一般来说，柱的容积越大，进样量越大。 4. 保养维护：注意检查泵的抗堵塞能力，检查液股的半径，以及各种零部件的磨损情况，必要时进行更换。 5. 数据分析：合理解决数据处理不准确的问题，根据柱之间的物理和化学性质来解释清楚产生的数据。 四、安全注意事项 1. 检查工作环境：确保工作环境良好，如空气流通、光线充足等。 2. 注意化学品储存：涉及到化学品的储存，应遵守有关法规，放置需避光和防潮的地方。
液相色谱使用的流程 介绍 液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于化学、生物、环境等多个领域。本文将介绍液相色谱使用的基本流程和注意事项。 流程 液相色谱使用的流程主要包括以下几个步骤： 1.样品准备 –将待分析的样品制备成适合液相色谱测试的溶液。 –使用适当的溶剂和方法进行样品的预处理，如稀释、提取等，以保证样品能够被注射进液相色谱系统。 2.仪器设置 –打开液相色谱系统，并进行相关的准备工作，如冲洗流路、校准仪器等。 –设置合适的流速、温度和检测波长等参数，以确保实验的准确性和重复性。 3.标样注射 –使用自动进样器或手动注射器将样品溶液注入液相色谱系统的进样口。 –控制注射量并记录注射时间，以保证实验的可重复性。 4.色谱分离 –开始样品的色谱分离过程。 –根据化合物的特性，选择合适的色谱柱和流动相，以实现样品的分离。 –监测色谱图的峰形和峰面积，根据需要进行优化。 5.数据分析 –根据色谱图的结果，对样品中的目标化合物进行定性和定量分析。 –通过标准曲线、保留时间和峰面积等参数进行定量计算。 6.结果记录 –将实验结果进行记录，包括样品信息、色谱条件、分析结果等。 –保留原始数据和处理数据。 7.仪器保养
–完成实验后，对液相色谱系统进行清洗和保养。 –检查仪器的状态，及时更换损坏的部件，并进行标定和验证。 注意事项 液相色谱实验中，还需要注意以下几点： •样品的选择：合适的样品溶解度和化学性质对分析结果至关重要。 •色谱柱的选择：根据分析项目和样品性质选择合适的色谱柱。 •流动相的选择：根据样品性质和分离要求选择合适的流动相。 •流速的控制：过高的流速可能导致分离不完全或峰形失真。 •温度的控制：合适的温度对分离效果和信号峰形有直接影响。 •校准的进行：定期进行仪器的校准，确保结果的准确性和可靠性。 •废液处理：根据实验室规定，正确处理废液和废弃物。 总结：液相色谱使用的流程包括样品准备、仪器设置、标样注射、色谱分离、数据分析、结果记录和仪器保养等步骤。在实验中需要注意样品的选择、色谱柱和流动相的选择、流速和温度的控制，以及校准和废液处理等问题。准确掌握和操作液相色谱的步骤和注意事项，将能够帮助实验人员获得准确、可靠的分析结果。
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血液样品预处理的标准操作 一、目的 规范色谱分析中血液样品预处理的操作。 二、职责 1. 实验室分析测试人员对本规程的实施负责。 2. 对于每一项具体的研究课题，具体的操作步骤应由实验室负责人负责制定，并由实验室分析测试人员严格实施。 3. 实验室负责人负责对本规程的修订。 三、血液样品预处理的标准操作 1. 实验仪器与设备的准备 试管一般采用有盖子和刻度的尖底试管，要求密封性好，编号清楚准确，并摆放整齐。 EP管一般采用的规格有1ml、、2 ml。要求密封性好，编号清楚准确，并摆放整齐。移液器要求定量准确，重复性好。 其它涡流混合器、离心机、真空泵、烧杯、量筒、记号笔、试管架、标签纸等。 2. 样品的均匀化 将装有血浆（血清）样品的EP管放置在冰箱冷藏室内，缓慢解冻为血浆（血清）溶液。 然后取出放置至室温，置涡流混合器上混匀或往复振摇亦可到达均匀的目的。 3. 液－液提取 提取溶剂的准备 常用的溶剂有乙酸乙酯，乙醚，环己烷等。 提取溶剂可以是一种也可以是几种溶剂的混合溶液，目的是调整提取溶液的剂性，既保证待测样品被充分萃取进入提取溶剂，同时又有很好的选择性。 根据待测样品的需要用移液器（移液枪）定量吸取血浆（血清）至试管中。 必要时调整血浆（血清）溶液的pH值，根据待测样品的性质加入酸、碱或缓冲溶液，然后涡旋混匀。 用移液器定量吸取提取溶液至装有血浆（血清）的试管中，盖好试管塞。 溶液的混匀 涡流混匀将试管置于涡流混合器上进行旋涡，并保证样品溶液旋涡充分混匀，旋涡时间一般为2-3分钟。 样品的离心将试管置于离心机中，分离过程中一般采用4000r/min。离心之前注意要平衡，加速时应注意缓慢逐步加速，以防加速过快试管炸裂，离心时间一般为10分钟。离心分离后试管中样品分为上下两层，用移液器吸取上层有机相，转移至另一试管中。溶剂的挥发 自然挥发将样品溶液放置在室温下挥发，有时还可适当加热，加速溶液挥发。 氮气吹干氮气流能防止发生氧化，为了加快挥散速度，将样品溶液置于氮气流下吹干。
液相色谱仪操作步骤 液相色谱仪是一种分离分析技术，广泛用于各种样品的分离和纯化。液相色谱仪的操作需要注意一些步骤和细节，本文将详细介绍液相色谱仪的操作步骤和注意事项。 1. 准备试样 首先需要准备好待检测的样品，并将样品中的分离物质溶解到相应的溶液中。为了保证分离效果和高灵敏度，需要尽可能去除样品中的杂质和异常物质。 2. 准备移液管和样品注射器 在进行液相色谱分析之前，需要准备好准确可靠的移液管和样品注射器。移液管和样品注射器需要事先洗涤，以避免对后续分离过程的干扰。 3. 准备色谱柱 在安装色谱柱时，需要用气动压缩机清洗色谱柱和色谱柱的连接管道。确保色谱柱处于水平状态，并将色谱柱与色谱仪相连接。在安装色谱柱时需要特别注意色谱柱的品牌和型号，以便正确设置仪器参数。 4. 准备流动相 在准备流动相时，需要特别注意调整流速和流动相溶液的配比。根据实验要求，选择合适的流量和合适的流动相溶液浓度。 5. 预处理系统 在液相色谱仪的操作中，预处理系统是非常重要的一个环节。一定要确保预处理问题的正确性，例如加热系统，冷却系统和气体过滤系统等。 6. 进行实验 在进行实验之前，需要设置仪器参数，例如流速、采集时间、泵的流量、检测器灵敏度等等。根据实验设计，注入样品并进行分离。在过程中需要实时记录所有数据，以备后续分析和处理。 7. 分析结果 分析后，需要对封闭柱进行清洗和回收，并对数据进行分析和处理。通过对数据的分析和比较，可以得出结论并进行相应的校正和措施。 液相色谱仪的注意事项
1. 在操作液相色谱仪之前要充分了解仪器的性能和操作规程，避免出现误操作等不 良后果。 2. 色谱柱必须严格按照使用说明书的要求来装配和操作，避免出现故障。 3. 在样品处理过程中，要保持实验环境清洁，并尽可能去除样品中的杂质和异常物质。 4. 在制备流动相时，必须准确配合所有的药剂量，并严格控制药剂量的稳定性和浓度。 5. 操作液相色谱仪时，要避免因操作不当带来的高压、漏液等危险事件。 6. 在样品注射之前确保移液管和样品注射器的清洁和准确性，避免对实验结果的干扰。 7. 制备样品时，保持实验环境干燥和交叉感染的壁垒，在处理过程中切勿流出样 品。 8. 操作液相色谱仪时，在实验数据得到结果之前，需要充分验证分离物质的结构和 性质，并进行相应的纯化和修饰。 总结：液相色谱仪是化学分析领域的重要仪器，它可以用于各种化合物的分离、检测 和定量分析，包括生化样品、环境样品和药物分析等。在不同的实验目的下，液相色谱仪 的操作步骤和注意事项会有所不同。 在生化领域中，液相色谱仪通常用于分离和检测蛋白质、核酸、多肽和其他生物分子。在生物样品的分析中，常常需要把样品溶解在缓冲液中，以保证分离分析的准确性和稳定性。生物样品中可能还会存在其他杂质，需要使用功能化柱进行纯化。液相色谱仪可以使 用不同类型和尺寸的柱来分离分子，如C18、C8、氨基酸、离子交换和大小排除柱。液相 色谱仪中的检测器可用于检测氨基酸、蛋白质和寡糖等生物分子。 在环境领域中，液相色谱仪通常用于检测水、土壤和空气中的污染物。在这些应用中，常用的检测器包括紫外检测器、荧光检测器和电化学检测器等。一些环境污染物可能需要 化学前处理，如提取、萃取和预测等，以保证分离分析的准确性和稳定性。 在药物领域中，液相色谱仪通常用于药物分析和质量控制，以保证药品符合严格的标 准和要求。在药物分析中，液相色谱仪通常用于分离和检测药物中的各种成分和杂质。药 物分析通常需要非常高的检测灵敏度和分离效果，为此，液相色谱仪常常使用高效液相色 谱和串联质谱技术等。 在液相色谱仪的日常维护中，需要注意清洗和保养仪器，以保证其最佳性能和稳定性。在清洗色谱柱时，需要用纯化水和其它液体对柱进行循环清洗，确保柱的表面干净无污染。
液相色谱进样前分析的几个问题液相色谱常 见问题解决方法 液相色谱进样是很精准明确的一个过程，关系分别的效果，所以确定要当心进样，以下是舜星为你分析的进样试验总结：应当注意以下几个问题：（1）样品在流动相中可以是可溶的，假如可能的话，应当用流动相溶解样 液相色谱进样是很精准明确的一个过程，关系分别的效果，所以确定要当心进样，以下是舜星为你分析的进样试验总结：应当注意以下几个问题： （1）样品在流动相中可以是可溶的，假如可能的话，应当用流动相溶解样品，它可使色谱图中低k段的虚假峰尽可能削减。 （2）选择合适的进样阀或注射器。一般说来只要选择适当，都能获得很好的重复性。在选择进样阀时，要考虑它应有较好的清洗条件，并能削减而不是加剧近样过程中通过柱和检测器的紊乱状态。无论使用进样阎还是注射器，部应当尽可能地减小结构和死体积。 （3）为了位监控严密，应当尽可能地选用一种内标，尤其是在碰到多而杂样品时，更应如此。 —专业分析仪器服务平台,试验室仪器设备交易网,仪器行业专
业网络宣扬媒体。 相关热词： 等离子清洗机,反应釜,旋转蒸发仪,高精度温湿度计,露点仪,高效液相色谱仪价格,霉菌试验箱,跌落试验台,离子色谱仪价格,噪声计,高压灭菌器,集菌仪,接地电阻测试仪型号,柱温箱,旋涡混合仪,电热套,场强仪万能材料试验机价格,洗瓶机,匀浆机,耐候试验箱,熔融指数仪,透射电子显微镜。 1、旧 色谱 柱柱效低，分别不好，柱入口床层塌陷 原因：填料被
流动 相溶蚀而流失。 解决方法：用同型填料填补柱效可部分恢复。对硅胶质填料，流动相PH值在2—7范围内，否则可能被溶蚀。 2、柱使用—段时间后，柱效下降，显现峰拖尾 原因：柱入口床层被污染。
高效液相色谱分析技术的使用注意事项引言： 高效液相色谱（High-performance liquid chromatography，简称HPLC）是一种广泛应用于药物分析、食品检测、环境监测等领域 的分析技术。作为一种高精密、高灵敏度的分析方法，HPLC在科研实验室和工业生产中得到了广泛的应用。然而，正确使用 HPLC技术需要注意一些关键的使用注意事项，以确保分析结果的准确性和可靠性。 一、样品制备 在进行高效液相色谱分析之前，样品制备是必不可少的步骤。 优质的样品制备是保证分析结果准确性的前提。正确的样品制备 过程可以包括样品的预处理、提取、净化等步骤。在样品制备过 程中，务必遵循标准化的操作流程和使用适当的试剂和溶剂。 二、仪器设置 正确设置HPLC仪器是保证高效液相色谱分析效果的关键。在 设置仪器的过程中，需要注意以下几个方面： 1. 流动相：选择合适的流动相液体以及其比例是一项重要任务。适当的流动相选择可以提高分析分离的效果和分辨率。
2. 柱温：保持柱温稳定是确保分析结果准确的重要因素。高温容易导致柱效果变差，低温则可能导致柱内压力过高。因此，需要根据分析物的性质选择适宜的柱温。 3. 检测器：要正确选择和设置检测器，以确保能够准确测量样品的峰面积、保证检测的灵敏度和可靠性。 4. 注射体积：确定合适的样品注射体积以及注入速度是确保高效液相色谱分析准确性的另一个关键因素。 三、质量控制 为了确保分析结果的准确性和可靠性，在使用高效液相色谱分析技术时需要进行质量控制。质量控制可以包括以下几个方面： 1. 标准曲线：建立合适的标准曲线是定量分析的基础。通过使用一系列浓度已知的标准溶液，构建样品分析物浓度与峰面积之间的线性关系，以便后续样品的定量分析。 2. 内标法：使用内标物进行定量分析可以提高结果的准确性。内标物应该与目标分析物性质相似，但不会干扰样品中其他化合物的检测。 3. 干扰物的去除：在样品制备过程中，一些杂质和干扰物可能会影响分析结果的准确性。因此，需要注意采取适当的措施，如预处理、提取和净化等方法，去除或减少这些干扰物的影响。