高效液相色谱仪分析样品时常见的预处理方法
高效液相色谱仪分析样品的预处理方法有过滤、离心、加速溶剂萃取、超临界流体萃取、固相萃取、固相微萃取、液相微萃取和衍生化等。
一、过滤
常用的滤膜材质有纤维素、聚四氟乙烯和聚酰胺。其中聚酰胺应用最广，是亲水材料，适合水溶液的过滤，不被HPLC常用溶剂所腐蚀，不含添加剂。
加速溶剂萃取
1、原理：
加速溶剂萃取是在提高温度（50～200℃）和压力（10.3～20.6MPa）下，用溶剂萃取固体或半固体样品。
2、特点：
与传统萃取方式相比，加速溶剂萃取具有溶剂用量少、快速、对不同基体可用相同的萃取条件、萃取效率高、选择性好、使用方便、安全性好和自动化程度高等特点。
二、超临界流体萃取
超临界流体萃取是利用超临界流体对物质的特殊溶解性能原理而建
立的萃取方法。超临界二氧化碳作为常用的萃取剂已被广泛应用于天然药物中非极性和弱极性有效成分的提取。
三、固相萃取
1、原理：
固相萃取是通过采用选择性吸附和选择性洗脱对样品进行富集、分离
和净化，可以将其近似地看作一种简单的液固色谱过程。
2、固相萃取方法：
（1）使液体样品溶液通过吸附剂，保留其中被测物质，然后选用适当强度溶剂冲去杂质，再用少量溶剂迅速洗脱被测物质，从而达到快速分离净化和浓缩的目的。
（2）可选择性吸附干扰杂质，让被测物质流出。
（3）可同时吸附杂质和被测物质，再使用合适的溶剂选择性洗脱被测物质。
四、固相微萃取
1、原理：
固相微萃取是基于涂敷在纤维上的高分子涂层或吸附剂和样品之间
的吸附－解吸平衡原理，集采样、萃取、浓缩和进样于一体的无溶剂的样品微萃取方法。
2、常用固相微萃取方法：
（1）直接固相微萃取：适用于气体基质和干净的水基质。
（2）顶空固相微萃取：适用于任何基质，尤其是直接固相微萃取无法处理的脏水、油脂、血液、污泥和土壤等。
（3）膜固相微萃取：通过选择性高分子渗透膜将样品与萃取头分离，进行间接萃取。渗透膜的作用是使萃取头不被基质污染，提高萃取的选择性。但由于样品中待分析物必须通过渗透膜才可以接触到萃取涂层，因此会延长萃取平衡时间。可用于悬浊液等较脏基质中非挥发性有机物的监测。
（4）毛细管固相微萃取：将气体或液体样品通过内壁键合萃取剂的石英毛细管，使待分离组分从样品中萃取出来，具有富集倍数高和萃取平衡时间短等特点。
3、优点：
（1）集采样、萃取、浓缩和进样于一体，操作方便，测定快速高效。（2）克服了固相萃取回收率低，吸附剂孔道易堵塞的缺点。
（3）无需任何有机溶剂，是真正意义上的固相萃取，避免了对环境的二次污染。
（4）操作费用更加低廉。
（5）仪器简单，适合现场分析。
4、缺点：
（1）纤维头价格较贵且易碎，使用寿命较短。
（2）涂敷在纤维上的高分子涂层或吸附剂在使用过程中会有部分丢失。
（3）纤维头具有记忆效应，存在交叉污染。
（4）固相微萃取与HPLC联用时，需要专门的解吸装置，分析物解吸完全需要相当长的时间。
五、液相微萃取
液相微萃取是基于样品和微升级甚至纳升级有机溶剂之间的分配平
衡原理，集采样、萃取和浓缩于一体的环境友好的样品微萃取方法，特别适合环境样品中痕量和超痕量污染物的分析。
1、直接液相微萃取：
（1）原理：
利用悬挂在色谱微量进样器针头上的有机溶剂对样品溶液中的分析
物直接进行萃取。
（2）特点：
直接液相微萃取是微型化的液液萃取，克服了传统液液萃取的诸多不足，仅使用微升级甚至纳升级的有机溶剂进行萃取，适应现代分析科学微型化发展的要求，属于绿色分析技术。但是存在许多缺点。
2、中空纤维液相微萃取：
（1）原理：以多孔的中空纤维为萃取溶剂的载体而进行微萃取。（2）特点：1）成本低，装置简单，易与GC、HPLC和CE联用；2）由于中空纤维的多孔性，增加了溶剂与样品的接触面积，提高了萃取率；3）由于微萃取是在纤维孔中进行，避免了直接液相微萃取中溶剂易损失的缺点；4）由于大分子和杂质等不能进入纤维孔，有固相微萃取和直接液相微萃取不具备的净化功能；5）中空纤维是一次性使用的，避免了固相微萃取中可能存在的交叉污染问题。
3、顶空液相微萃取：
（1）原理：把有机溶剂悬于样品溶液上方而进行微萃取。
（2）特点：
a.顶空液相微萃取中有样品溶液、有机溶剂和顶空相三相，分析物
在三相中的化学势是推动分析物从样品溶液进入有机溶剂液滴的驱动力，可以通过不断搅拌样品溶液产生连续的新表面来增强这种驱动力。由于挥发性化合物从样品溶液到顶空相再到有机溶剂，
比从样品溶液直接到有机溶剂的传质速度快的多，所以对于水中的挥发性有机物，项空液相微萃取比直接液相微萃取更快捷。b.直接液相微萃取在萃取样品时，不可避免的会在有机溶剂液滴外
成一层稳定的扩散层，这样会阻碍分析物向有机溶剂液滴的扩散，而顶空液相微萃取克服了这一局限，且由于分析物在气相中的扩散系数是其在液相中的104倍，对于扩散系数较大的挥发性有机物，项空液相微萃取大大缩短了到达平衡所需的时间，同时还可以极其有效地消除样品基质的干扰，因此，一般情况下被优先采用。
c.应用：适用于分析物容易进入样品溶液上方空间的挥发性和半挥
发性有机物。
六、衍生化
1、紫外衍生化：为使没有紫外吸收或紫外吸收很弱的化合物能被紫外检测器检测，往往通过衍生化反应在这些化合物的分子中引入强紫外吸收的基团。
2、荧光衍生化：荧光衍生化已广泛应用于醇、酸、糖、雌激素和生物碱等检测，其中在氨基酸样品检测中应用最多。
3、电化学衍生化：使样品组分与衍生化试剂反应，生成具有电化学活性的衍生物，以便对电化学检测有较灵敏的响应。
高效液相色谱使用常见问题 症状： (一)保留时间变化 可能的原因: 解决方法 1.柱温变化 : 柱恒温 2.等度与梯度间未能充分平衡: 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱 3.缓冲液容量不够: 用>25mmol/L的缓冲液 4.柱污染: 每天冲洗柱 5.柱条件变化: 稳定进样条件,调节流动相 6.柱快达到寿命: 采用保护柱 (二)保留时间缩短 可能的原因: 解决方法 1.流速增加: 检查泵,重新设定流速 2.样品超载: 降低样品量 3.键合相流失: 流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向 4.流动相组成变化: 防止流动相蒸发或沉淀 5.温度增加: 柱恒温 (三)保留时间延长 可能的原因 : 解决方法 1.流速下降: 管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵气泡 2.硅胶柱上活性点变化: 用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱
3.键合相流失: 同前(二)3 4.流动相组成变化: 同前(二)4 5.温度降低: 同前(二)5 (四)出现肩峰或分叉 可能的原因 : 解决方法 1.样品体积过大: 用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15% 2.样品溶剂过强: 采用较弱的样品溶剂 3.柱塌陷或形成短路通道: 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件 4.柱烧结不锈钢失效: 更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品 5.进样器损坏: 更换进样器转子 (五)鬼峰 可能的原因 : 解决方法 1.进样阀残余峰: 每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗 2.样品中未知物: 处理样品 3.柱未平衡: 重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱) 4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) : 每天新配,用抗氧化剂 5.水污染(反相) : 通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水 (六)基线噪声 可能的原因 : 解决方法 1.气泡(尖锐峰) : 流动相脱气,加柱后背压 2.污染(随机噪声) : 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂 3.检测器灯连续噪声: 更换氘灯
高效液相色谱样品预处理步骤 1. 样品准备 在准备高效液相色谱样品时，需要确保样品的稳定性，防止样品在分析过程中发生变化。因此，在样品准备过程中需要注意以下几点： （1）选择合适的样品存储容器，避免样品被污染或发生变化； （2）确保样品在分析前达到室温，以避免样品在注射到色谱柱时产生气泡； （3）注射适量的样品，以避免色谱柱被过度磨损或样品过载。 2. 样品过滤 在进行高效液相色谱分析前，需要将样品通过过滤器进行过滤，以去除样品中的固体杂质或悬浮物，从而防止其对色谱柱的堵塞或损坏。通常使用的过滤器有不同规格的筛网或滤膜。 3. 样品衍生化 在一些情况下，需要对样品进行衍生化处理，以便更好地进行高效液相色谱分析。衍生化处理可以将样品中的某些化合物转化为更易分析的形式，例如将某些极性化合物转化为非极性化合
物，使其更适合用有机溶剂进行洗脱。 4. 样品稀释 在某些情况下，需要将样品进行稀释，以便更好地进行高效液相色谱分析。过浓的样品可能会导致色谱峰过宽或重叠，影响分析结果的准确性。通常使用的的是溶剂或水进行稀释。 5. 样品进样 在进行高效液相色谱分析时，需要将样品通过进样针注入到色谱柱中。在进行进样时，需要注意以下几点： （1）注射适量的样品，以避免色谱柱被过度磨损或样品过载； （2）确保进样针的清洁和干燥，以避免对分析结果产生干扰。 6. 样品分离 在将样品注入到色谱柱后，需要对其进行分离。通常使用的的是高压泵将流动相通过色谱柱，将样品中的各个化合物进行分离。在进行分离时，需要注意以下几点： （1）选择合适的流动相，以便将样品中的各个化合物进行分离； （2）调整流动相的流速和比例，以便获得更好的分离效果。 7. 检测器检测
高效液相色谱仪分析样品时常见的预处理方法 高效液相色谱仪分析样品的预处理方法有过滤、离心、加速溶剂萃取、超临界流体萃取、固相萃取、固相微萃取、液相微萃取和衍生化等。 一、过滤 常用的滤膜材质有纤维素、聚四氟乙烯和聚酰胺。其中聚酰胺应用最广，是亲水材料，适合水溶液的过滤，不被HPLC常用溶剂所腐蚀，不含添加剂。 加速溶剂萃取 1、原理： 加速溶剂萃取是在提高温度（50～200℃）和压力（10.3～20.6MPa）下，用溶剂萃取固体或半固体样品。 2、特点： 与传统萃取方式相比，加速溶剂萃取具有溶剂用量少、快速、对不同基体可用相同的萃取条件、萃取效率高、选择性好、使用方便、安全性好和自动化程度高等特点。 二、超临界流体萃取 超临界流体萃取是利用超临界流体对物质的特殊溶解性能原理而建 立的萃取方法。超临界二氧化碳作为常用的萃取剂已被广泛应用于天然药物中非极性和弱极性有效成分的提取。 三、固相萃取 1、原理： 固相萃取是通过采用选择性吸附和选择性洗脱对样品进行富集、分离
和净化，可以将其近似地看作一种简单的液固色谱过程。 2、固相萃取方法： （1）使液体样品溶液通过吸附剂，保留其中被测物质，然后选用适当强度溶剂冲去杂质，再用少量溶剂迅速洗脱被测物质，从而达到快速分离净化和浓缩的目的。 （2）可选择性吸附干扰杂质，让被测物质流出。 （3）可同时吸附杂质和被测物质，再使用合适的溶剂选择性洗脱被测物质。 四、固相微萃取 1、原理： 固相微萃取是基于涂敷在纤维上的高分子涂层或吸附剂和样品之间 的吸附－解吸平衡原理，集采样、萃取、浓缩和进样于一体的无溶剂的样品微萃取方法。 2、常用固相微萃取方法： （1）直接固相微萃取：适用于气体基质和干净的水基质。 （2）顶空固相微萃取：适用于任何基质，尤其是直接固相微萃取无法处理的脏水、油脂、血液、污泥和土壤等。 （3）膜固相微萃取：通过选择性高分子渗透膜将样品与萃取头分离，进行间接萃取。渗透膜的作用是使萃取头不被基质污染，提高萃取的选择性。但由于样品中待分析物必须通过渗透膜才可以接触到萃取涂层，因此会延长萃取平衡时间。可用于悬浊液等较脏基质中非挥发性有机物的监测。
高效液相色谱仪分析样品的预处理 高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种分离、定量分析化学成分的有效手段，在药品、食品、环境、化工等行业都有广泛应用。但在HPLC分析过程中，如果样品预处理不充分，就会对后期的分离和检测造成很大影响，因此，样品的预处理技术显得极为重要。下面，我们将介绍关于HPLC分析样品预处理的相关内容。 样品的采集与处理 对于不同的样品，我们需要进行不同的采集与处理，以提高分析精度和准确性。具体做法如下： 液体样品的采集与处理 在液体样品（如饮料、药剂等）中，我们一般采用稀释、过滤或析出等方法， 来提高样品的一致性和稳定性，减少杂质和干扰物的含量。 •稀释法：将样品与纯水或乙醇按一定比例混合，使样品浓度适宜，从而保证HPLC检测的精确度和稳定性。 •过滤法：将样品过滤，去除其中的颗粒、悬浮物等杂质，在HPLC分析前对样品进行预处理，可以减少后期的误差。 •析出法：利用化学方法将目标成分从样品中分离出来，以便HPLC分析。例如，对于含蛋白质的样品，我们可以用盐酸进行酸性加热，将蛋白质析出，然后用纯水进行冲洗，得到用于HPLC分析的样品。 固体样品的采集与处理 在采集固体样品（如土壤、植物等）时，我们需要进行粉碎、提取和纯化等预 处理步骤，以便后期的HPLC分析。具体做法如下： •粉碎法：将样品磨成均匀粉末状，以利于化合物的释放和提取。 •提取法：用合适的溶剂将目标化合物提取出来。例如，我们可以用氯仿等有机溶剂提取样品中的脂肪和植物色素等目标化合物。 •纯化法：将提取出来的目标化合物进行纯化，以去除杂质和提高样品的纯度。纯化方法比较多样，可以根据目标化合物的特性进行选择。 样品的保护与处理 在样品预处理过程中，我们需要注意以下几点，以保证处理后的样品能够在HPLC分析中表现出较好的分离、检测结果。
高效液相色谱法分析中的常见问题与解决方 案 高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种现 代化的分析方法，广泛应用于药物、食品、环境等领域。然而，在实际应用过程中，常常会遇到一些问题。本文将探讨高效液相色谱法分析中的常见问题，并提供解决方案。 1. 色谱峰分离不良 在进行高效液相色谱分析时，首要问题就是色谱峰的分离不良。造成这个问题 的原因可能是样品组分过于复杂，或是色谱柱选择不当。解决的方法包括：（1）优化样品前处理方法，如提取、净化等，以减少样品的复杂性； （2）调整流动相的组成和流速，或试用其他类型的色谱柱，以提高色谱峰的 分离度。 2. 流动相持续泵出问题 在HPLC分析过程中，流动相持续泵出是关键步骤之一。当出现流量不稳定或 持续泵出不工作的情况时，可以尝试以下解决方法： （1）检查管路是否有漏气现象，尤其是连接件的密封性； （2）清洗或更换柱子和过滤器，以防止堵塞； （3）检查、更换流量检测器，并校正流量计。 3. 柱寿命较短
柱寿命的短暂是高效液相色谱法分析中常见的问题之一，主要原因是样品残留 物的堆积、色谱柱废液的积累、和流动相的不合适。针对这个问题可以采取以下措施： （1）对样品进行预处理，减少残留物的堆积； （2）定期清洗和维护色谱柱，保持柱的表面状况； （3）使用适当的流动相，避免酸性或碱性物质损害色谱柱。 4. 波峰畸变问题 波峰畸变是指在色谱图上观察到的峰形呈现为不对称的情况，这可能是由于柱 床不均匀、流量不稳定或是组分浓度过高引起。解决这个问题的方法包括：（1）更换新的色谱柱，确保柱床的均匀性； （2）检查各部分的流量是否稳定，尤其是溶液的泵出和进样流速的稳定性； （3）适当稀释样品，以降低组分浓度。 5. 某些组分无法检测到 当分析物无法检测到时，可以考虑以下解决方法： （1）确认所使用的检测器是否适用于分析物的检测，并检查检测器的灵敏度； （2）尝试使用其他检测器或改变检测器条件，如波长或电流； （3）检查样品制备方法是否完整，是否包含了分析物。 总结起来，高效液相色谱法在分析中常常遇到色谱峰分离不良、流动相持续泵 出问题、柱寿命较短、波峰畸变以及某些组分无法检测到等常见问题。通过优化样品前处理、调整流动相的组成和流速、检查和清洁柱子等方法，可以有效解决这些问题，提高高效液相色谱法的分析准确性和效率。
液相色谱中样品前处理技术综述 在复杂基体中低浓度甚至是痕量的有机化合物的分离和测定是分析化学所面临的一个挑战。在样品前处理方面,现代色谱分析样品制备技术的发展趋势是使处理样品的过程要简单、处理速度快、使用装置小、引进的误差小,对欲测组分的选择性和回收率高。 目前国际上液相色谱通常采用的样品处理技术有:固相萃取(MXPD)、超临界萃取(SFE)、固相微萃取技术。而我国目前主要采用传统的溶剂萃取,液液分配、柱层析净化,前处理方法自动化程度低,提取净化的效率不高,速度慢,环境污染严重。新开发的前处理技术其目的和结果就是要实现快速、有效、简单和自动化的完成分析样品制备过程。 下以就简单介绍几个主要的样品处理技术: 1.溶剂萃取 在色谱分析样品制备中,溶剂萃取方法主要有液-液萃取、液-固萃取和液-气萃取,它们都是属于两相间的传质过程,即物质从一相转入另一相的过程。 溶剂萃取技术在我们液相色谱分析的样品制备过程中,是用到最为广泛的一种技术。关于其原理和方法,在此不再赘述。 在液-液萃取中非常重要的操作是急速的振动样品,这样可以确保两相的完全接触,有助于质量传递。由于物质剧烈的振动,使得乳化现象经常发生,特别是那些含有表面活性剂和脂肪的样品。为了防止乳化形成,常采用加热或加盐的方法破乳。通过改变K D值,改变溶剂或化学平衡作用的添加剂,如使用缓冲剂调节PH,盐调节离子强度等。 常用于破乳的技术有:
(1)加盐; (2)使用加热-冷却萃取容器; (3)通过玻璃棉塞过滤乳化液样品; (4)通过相过滤纸过滤乳化液样品 (5)通过离心作用; (6)加少量的不同的有机溶剂。 溶剂萃取的方式在现代水产品检测技中应用十分广泛,因其实验器材简便,经济,容易操作。在鱼体的孔雀石绿,环丙沙星等药物残留的检测中,都有用到溶剂萃取的方式。在孔雀石绿残留的检测中,为了防止乳化现象的产生,也用到了二甘醇这进行破乳。 2.固相萃取(solid phase extraction SPE) 1 固相萃取(SPE)是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附,与样品的基体和干扰化合物分离。然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附,达到分离和富集目标化合物的目的。 与液液萃取相比固相萃取有很多优点:固相萃取不需要大量互不相深的溶剂,处理过程中不会产生乳化现象,它采用高效、高选择性的吸附剂(固定相),能显著减少溶剂的用量,简化样品的预处理过程,同时所需费用也有所减少。一般来说固相萃取,费用为液液萃取的五分之一,但其缺点是目标化合物的回收率和精密度要略低于液液萃取。
液相色谱使用中样品预处理注意的几个环节液相色谱（Liquid Chromatography, LC）是一种常用的分离和分析 技术，广泛应用于化学、药物、食品、环境等领域。在进行液相色谱分析 之前，需要对样品进行预处理，以提高分离效果和检测灵敏度。以下是液 相色谱使用中样品预处理注意的几个环节： 1.样品收集与保存： 在进行液相色谱分析之前，首先需要确保样品的完整性和准确性。正 确收集样品，并妥善保管，避免暴露在高温、阳光直射或污染物的环境中。如果样品需要保存一段时间再进行分析，需要选择合适的保存方式（如冷藏、冷冻等），避免样品的降解和污染。 2.样品预处理的目的： 样品预处理的目的有很多，主要是为了提高液相色谱分析的灵敏度、 分离效果和准确性，同时还可以去除样品中的干扰物质、减少毛刺、消除 背景噪声等。样品预处理可以采取物理方法（如固体相萃取、液液萃取、 固相微萃取等）和化学方法（如酸碱处理、酶解、结合剂去除等）。 3.样品处理前的样品前处理： 样品在进行液相色谱前处理之前，通常需要进行一些基本处理，以消 除其它成分对目标分析物的干扰。常见的样品前处理方法有固相萃取、液 液萃取、蒸馏、浓缩等。这些方法可以有效地去除样品中的杂质、减少背 景干扰，提高目标物的浓度。 4.样品的提取和富集：
有时候液相色谱的灵敏度不足以直接进行分析，需要对样品进行提取 和富集。常见的提取和富集方法有固相萃取、液相萃取、吸附剂富集、双 相萃取等。这些方法可以提高目标分析物的浓度，并去除样品中的干扰物质，从而提高分析灵敏度。 5.样品的预处理方法： 样品预处理方法选择的时候需要根据具体的目的和样品特性进行。常 见的样品预处理方法有：蛋白质沉淀、过滤、离心、稀释、酶解、水解等。对于复杂样品，可能需要多种预处理方法的组合使用。 6.样品的稳定性： 样品在进行液相色谱分析之前，需要评估其稳定性。有些样品可能在 储存过程中发生化学反应、分解或降解，导致分析结果的误差。在进行液 相色谱分析之前，需要对样品的稳定性进行评估，并选择合适的处理方法，以确保样品的稳定性。 7.样品的柱寿命： 样品预处理过程中，需要注意避免样品中杂质对柱的污染和损坏。使 用前，要充分准备好柱，如洗涤和平衡柱。此外，定期对柱进行维护、保 养和更换，避免因柱老化或使用不当导致的分离效果和柱寿命的下降。 总之，样品预处理是液相色谱分析中的重要一环，直接关系到分析结 果的准确性和灵敏度。在进行液相色谱分析之前，需要认真选择合适的预 处理方法和条件，以充分发挥液相色谱分析的效益。并且，样品预处理的 环节需要严格控制操作条件，以确保样品的安全和可靠性。
沃特斯高效液相色谱仪数据处理流程 一、数据采集 数据采集是沃特斯高效液相色谱仪数据处理的首要步骤。色谱图中，每个色谱峰都代表某种特定的化合物。为了获得这些数据，我们需要对色谱图进行数字化处理。通常，沃特斯高效液相色谱仪配备自动进样器，能够连续不断地将样品引入色谱柱，并在设定的时间间隔内进行数据采集。 二、数据预处理 数据预处理是对原始数据进行整理、编辑和初步筛选的过程，以便于后续的基线校正、峰识别与分割等步骤。数据预处理可能包括以下操作：去除噪声、平滑处理、填充缺失值、归一化处理等。通过这些处理，可以使得数据更易于分析和理解。 三、基线校正 基线校正是色谱数据处理中重要的一步，它可以消除仪器背景信号的影响，提高峰识别的准确性。基线校正通常采用以下几种方法：多项式拟合、样条插值、迭代算法等。在校正过程中，需要注意避免过度校正导致基线漂移的问题。 四、峰识别与分割 峰识别与分割的目的是确定每个色谱峰的起始和结束位置，以便于定量和定性分析。沃特斯高效液相色谱仪通常采用自动峰识别和分割算法。这些算法基于色谱峰的形状和大小来识别峰的位置，如基于梯度变化的分割算法、基于阈值的分割算法等。在峰识别与分割过程
中，可能需要手动调整，以确保准确性。 五、定量与定性分析 定量和定性分析是在确定色谱峰的位置后进行的。定量分析是通过对每个色谱峰的面积进行积分，然后根据标准品的浓度和响应因子计算待测物的浓度。定性分析则是通过比较已知标准品的保留时间和光谱信息来确定未知样品的成分。 在进行定量和定性分析时，需要注意以下几点： 1.必须使用标准品进行准确校准，以确保结果的准确性； 2.应选择响应因子已知的标准品进行定量分析，以减小误差； 3.对于定性分析，应尽量获取多种类型的标准品以确定未知样品的成分； 4.考虑到不同批次间的差异，应该采用内控样以增加结果的可靠性。 六、数据存储与备份 在数据处理完成后，应该将原始数据和分析结果存储并进行备份。备份的数据可以用于以后的分析和复查，避免数据的丢失。备份数据可以保存在硬盘、云端或其他存储介质中，只要保证数据的安全性即可。另外，最好定期检查备份数据是否完整可用，以防数据丢失或损坏。 七、数据分析报告 最后，根据实际需要，将分析结果整理成数据分析报告。报告中应包含以下内容：实验目的、实验过程（包括数据处理流程）、实验
高效液相样品前处理的注意事项 以下为正文： 1、样品预处理方法 样品预处理应包括进样前的一切操作。除了称重、溶解、稀 释等步骤外,样品需要: ①过滤; ②萃取; ③衍生化(柱前衍生) ; ④液相色谱(低压柱层析) 。这些操作可以是手工进行或实行自 动化操作。样品预处理的目的是除去干扰物、增加检测器灵敏度(富集) 、保护色谱柱等。样品预处理同时也是为了避免色谱分 离故障,其中样品萃取是关键的一步,要从大量的干扰物中萃取出 微量组分难度极大。 有些样品经预处理后还不能作进样分析,需进行衍生化处理,使一 些无紫外吸收或无荧光的组分,经过衍生化后能用紫外和荧光检 测器检测,这样既提高了灵敏度,又改善了分离度(质量变化) 。 样品预处理的同时也会带来一些问题,如样品损失、样品被污 染、衍生化反映不完全或多种反应物生成等。衍生反应常会影响 试验的精确度,或者在整个样品预处理过程中带来误差。 用于液相色谱分析的样品溶液必须均匀而无颗粒,有颗粒会损坏 进样器并阻塞柱头。处理好的样品在准备上柱前应对准光线摇动,
检查样品溶液中有无颗粒。只要看到颗粒、混浊或乳化,就应过滤一下,过滤膜要能截留住015μm 以上的颗粒,样品过滤的过程中可能引起:样品被污染,因过滤吸附降低样品组分的含量,样品溶剂挥发引起误差。萃取的目的是从共溶的样品介质中分离出被分析的组分,或者减少损坏柱的物质(如蛋白质等)和干扰物。一般采用有机溶剂萃取,要求萃取用的溶剂毒性低、挥发性好、杂质少、对待测样品有良好的溶解度且又与水不相混溶。常用的有乙醚、醋酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯或者两种以上的混合溶剂。萃取后一般可直接进样,有时需要浓缩或吹干浓缩,再用定体积的液体或流动相溶解进样。这样增加了样品浓度,提高了灵敏度,同时避免了溶剂峰对样品峰的干扰。在萃取是要考虑样品分子的溶解能力。除了脂溶性和水溶性组分外,还有用脂溶性的组分制成水溶性的盐。萃取方法如下: 1.1水溶性样品 (1) 酸性组分及生成的盐萃取方法:有机溶剂萃取杂质后调成酸性,再加有机溶剂萃取或进样,或在N2 流下吹干,用适当的溶剂解后进样。 (2) 碱性组分及生成的盐萃取方法:有机溶剂萃取杂质后调成碱性,再加有机溶剂萃取或进样,或在N2 流下吹干,用适当的溶剂溶解后进样。 (3) 中性组分萃取方法:有机溶剂萃取杂质后,直接用反相色谱法分析。 1.2脂溶性组分萃取方法:
高效液相色谱法中样品预处理与柱温控制的 优化方法 高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分析技术，用于物质的分离和定量分析。在HPLC分析中，样品预处理和柱温控制是非常重要的步骤，对于提高分析 效率和准确性至关重要。本文将探讨HPLC中样品预处理和柱温控制的优化方法。 一、样品预处理的优化方法 在HPLC分析中，样品预处理旨在去除样品中的杂质，减少背景干扰，提高分 析信号峰的清晰度和分离度。以下是几种常见的样品预处理优化方法： 1. 选择合适的提取溶剂 提取溶剂的选择应根据待测物的性质和样品的特点来确定。常用的提取溶剂有 有机溶剂（如甲醇、乙腈）、水、乙醚等。对于水溶性物质，可以选择水作为提取溶剂；对于脂溶性物质，可以选择有机溶剂作为提取溶剂。 2. 优化样品的萃取方法 样品的萃取方法有很多种，如固相萃取、液液萃取、超声波萃取等。优化萃取 方法可以通过改变溶剂的种类和浓度、萃取时间和温度等因素来实现。萃取方法应使得待测物充分溶解并尽量减少干扰物质的萃取。 3. 降低样品中的盐类含量 盐类的存在会影响HPLC分析的灵敏度和分辨率。可以通过离心沉淀、滤膜处 理等方法来降低样品中的盐类含量。此外，还可以选择掺入缓冲液以稀释盐类的影响。 4. 选择合适的固相萃取柱或色谱柱
固相萃取柱或色谱柱的选择应根据待测物的性质和样品的特点来确定。固相萃取柱和色谱柱的材料、尺寸、填充物和流动相等参数都会影响分析结果。可根据需要进行更换和优化。 5. 注射溶剂的优化 注射溶剂的选择应与流动相相容，并且要尽量选择无杂质的溶剂，以避免干扰分析结果。此外，注射溶剂的体积也需要进行优化，以确保足够的样品量被注射进色谱柱。 二、柱温控制的优化方法 柱温控制是HPLC分析中常用的方法之一，通过控制柱温可以改变样品的保留时间、峰形和分离度，从而优化分析过程。以下是几种常见的柱温控制优化方法： 1. 选择合适的柱温 不同的化合物具有不同的热稳定性，因此柱温的选择应根据待测物的性质和分析要求来确定。一般来说，较高的柱温可提高分析速度，但可能引起一些化合物的分解；较低的柱温可提高分离度，但可能导致分析时间延长。应根据实际情况进行调节。 2. 优化柱温程序 柱温程序是指在HPLC分析过程中，按照一定的温度梯度来改变柱温。优化柱温程序可以通过以下方法来实现：根据样品的热稳定性和分离度要求，选择合适的温度梯度和持续时间；通过试验和优化，确定最佳的柱温程序。 3. 考虑流动相和柱温的相容性 柱温的选择应与流动相相容，避免流动相因温度变化而发生相分离或析出。一般来说，乙腈和甲醇可以在较高温度下使用，水的使用温度较低。应根据流动相的组成和样品的性质选择合适的柱温。
使用液相色谱的流程 简介 液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是一种常用的分析技术，广泛 应用于化学、生物、药学等领域。它利用移动相在固定相上的吸附、分配或离子交换作用，将混合物中的组分逐个分离，通过检测器进行检测和定量分析。 流程步骤 使用液相色谱进行分析通常包括以下几个步骤： 1.样品准备 –将待分析的样品按照一定的方法进行预处理，如溶解、稀释、提取等，获得适合进行液相色谱分析的样品溶液。样品的准备对于分析 结果的准确性和重现性至关重要，需要严格控制实验条件和样品处理过 程。 2.选择色谱柱 –根据样品特性和分析目的，选择合适的色谱柱。液相色谱常用的色谱柱种类包括反相色谱柱、离子交换色谱柱、凝胶柱等，每种色谱 柱都有其特定的分离机理和适用范围。在选择色谱柱时，需要考虑样品 特性、分析目的、分离效果和分析时间等因素。 3.确定移动相 –根据样品特性和色谱柱类型，选择合适的移动相。移动相通常由溶剂和缓冲液组成，其成分和比例会影响到色谱分离效果。在确定移 动相时，需要考虑流动性、溶解度、选择性等因素，优化移动相条件以 提高分离效果。 4.进样与分离 –将样品溶液通过进样器引入液相色谱仪，进入色谱柱进行分离。 在进样过程中，需要控制进样量和进样速度，避免样品堵塞色谱柱或超 出检测器的线性范围。随后，色谱柱会根据样品特性，将组分逐个分离， 并进入检测器进行检测。 5.检测与分析 –在色谱柱出口处设置检测器，根据样品特性选择合适的检测器进行检测。常用的液相色谱检测器包括紫外-可见吸收光谱检测器、荧 光检测器、质谱检测器等。检测器将检测到的信号转换为电信号，并通 过计算机进行数据采集和分析。 6.结果解释
简述样品的预处理方法 在科学研究和工业生产中，样品的预处理是非常重要的环节。样品预处理的目的是将样品中的有用成分分离出来，去除干扰物，提高分析的精度和准确性。样品预处理的方法有很多种，下面将简要介绍一些常见的样品预处理方法。 1. 溶解 溶解是样品预处理的基本方法之一。它适用于固体样品和粘稠样品。固体样品一般需要用溶剂将其溶解，然后进行分离和分析。粘稠样品一般需要加热或添加溶剂，使其变得稀薄，然后进行分离和分析。 2. 水解 水解是将有机物或无机物分解成其组成部分的一种方法。水解可以通过加热、酸化或碱化等方式进行。水解后的样品可以更方便地进行分离和分析。 3. 萃取 萃取是将有机物或无机物从样品中分离出来的一种方法。萃取可以通过溶剂萃取、固相萃取、离子交换萃取等方式进行。萃取后的样品可以更方便地进行分析。 4. 离子交换 离子交换是将样品中的离子与固定在离子交换树脂上的离子进 行交换的一种方法。离子交换可以通过弱酸性树脂、强酸性树脂、弱碱性树脂、强碱性树脂等方式进行。离子交换后的样品可以更方便地进行分析。
5. 色谱分离 色谱分离是将样品中的化合物分离出来的一种方法。色谱分离可以通过气相色谱、液相色谱、超高效液相色谱等方式进行。色谱分离后的样品可以更方便地进行分析。 6. 精确称量 精确称量是将样品按照一定比例称取的一种方法。精确称量可以通过电子天平、分析天平等方式进行。精确称量后的样品可以更准确地进行分析。 综上所述，样品预处理是分析化学中非常重要的环节。不同的样品需要采用不同的预处理方法，以达到更好的分离和分析效果。在样品预处理过程中，需要注意保持样品的纯度和完整性，并避免在预处理过程中引入干扰物。
【理化】常用的样品预处理方法，你都了解吗？ 样品预处理的目的分为以下几个：除去微粒、减少干扰杂质、浓缩微量组分、提高检测灵敏度及选择性、改善分离效果、有利于色谱柱和仪器的保护等。 样品预处理有其必要性及重要性，由于样品种类繁多，其组成、浓度、物理形态等均是色谱分析测定的重要影响因素。样品处理技术就成为提高分析测定效率、改善和优化色谱分析的重要环节喽！总的来说，分为以下几种： 溶剂提取法 同一溶剂中，不同物质具有不同的溶解度。利用混合物中各物质溶解度的不同将混合物组分完全或部分分离的过程称为萃取，也称提取，常用方法有以下几种： 1、浸提法 浸提法又称浸泡法。用于从固体混合物或有机体中提取某种物质，所采用的提取剂，应既能大量溶解被提取的物质，又要不破坏被提取物质的性质。为了提高物质在
溶剂中的溶解度，往往在浸提时加热。如用索氏抽提法提取脂肪。提取剂是此类方法中重要因素，可以用单一溶剂，也可以用混合溶剂。 2、溶剂萃取法 溶剂萃取法用于从溶液中提取某一组分，利用该组分在两种互不相溶的试剂中分配系数的不同，使其从一种溶液中转移至另一种溶剂中，从而与其他组分分离，达到分离和富集的目的。通常可用分液漏斗多次提取达到目的。若被转移的成分是有色化合物，可用有机相直接进行比色测定，即萃取比色法。萃取比色法具有较高的灵敏度和选择性，如，双硫腙法测定食品中的铅含量。此法设备简单、操作迅速、分离效果好，但是，成批试样分析时工作量大。同时，萃取溶剂常易挥发，易烧，且有毒性，操作时应加以注意。 盐析法 向溶液中加入某种无机盐，使溶质在原溶剂中的溶解度大大降低，而从溶液中沉淀析出，这种方法叫做盐析。如在蛋白质溶液中加入大量的盐类(硫酸铵)，特别是加入重金属盐，使蛋白质从溶液中沉淀出来。 在进行盐析工作时，应注意溶液中所加入的物质的选择。它应是不会破坏溶液中所要析出的物质，否则达不到盐析提取的目的。 化学分离法
样品的6种预处理方法 样品预处理是化学分析的重要步骤之一，其目的是去除干扰物质，提 高分析结果的准确性和可靠性。常见的样品预处理方法包括溶解、萃取、分离、浓缩、净化和衍生化等。本文将对这些方法进行详细介绍。 一、溶解 溶解是将样品中的固体或液体物质转化为溶液的过程。常用的溶剂有水、乙醇、甲醇、丙酮等。在进行化学分析时，通常需要将固体样品 先进行研磨或粉碎，然后加入适量的溶剂进行搅拌或超声处理，使其 完全溶解。 二、萃取 萃取是利用不同物质在不同溶剂中的亲疏性差异，将目标物质从混合 物中提取出来的过程。常用的萃取方法包括液液萃取和固相萃取。其中，液液萃取是指利用两种不相容的溶剂，在两相界面上形成分离层，使目标物质从混合物中转移到另一相中；固相萃取则是利用具有亲疏 性的固相材料，将目标物质从混合物中吸附到固相材料表面上，再用 适当的溶剂洗脱。
三、分离 分离是将混合物中不同成分进行分离的过程。常用的分离方法包括蒸馏、萃取、结晶、凝胶电泳等。其中，蒸馏是利用不同物质在不同温度下汽化和冷凝的差异，将混合物中的成分进行分离；结晶则是利用不同物质在溶液中溶解度的差异，通过溶剂挥发或加热冷却等方法使目标物质结晶出来；凝胶电泳则是利用电场作用，使混合物中带电粒子在凝胶介质中移动并分离。 四、浓缩 浓缩是将稀溶液或稀气体中目标成分浓缩到一定程度的过程。常用的浓缩方法包括蒸发、萃取和吸附等。其中，蒸发是利用加热使溶液中水份汽化而达到浓缩目的；萃取则是通过多次提取和洗脱过程，将目标物质从大量的混合物中提取出来；吸附则是利用吸附剂对目标物质进行选择性吸附，再用适当的洗脱剂将其洗脱。 五、净化 净化是将混合物中的杂质或干扰物质去除，使目标成分纯化的过程。常用的净化方法包括过滤、蒸馏、萃取和色谱等。其中，色谱是一种高效的净化方法，可根据不同物质在固定相和流动相中的亲疏性差异进行分离和净化。
液相色谱检测前处理方法
织 取10g草莓样品于 50mLPPTE离心管中，加入 10mL乙腈，振荡器上以 200rpm的转速振荡30min 后, 加入3g氯化钠和5g无水硫 酸镁，剧烈手摇30s。然后将 盛装样品的离心管在离心机离 心5mi n（离心力 RCF=1006g），取1.5mL 上 清液转入含有50mg PSA+50mgC i8+150mgMg SO4的2mL离心管。充分振 荡混匀后将混合液离心3mi n （离心力RCF=7155g ）， 吸取上清液0.5mL过0.22卩 m有机滤膜后进UPLC- MS/MS 检测。 ［QuEChERS-超咼效液相 色谱-串联质谱法同时测定 草莓中85种农药残留］ 2、加速溶剂萃取技确称取均质后的样品 2.50g于50mL塑料离心 管中，加入3 mL水涡旋 混合1min，再加入 5 mL 5 %（v/v ）甲酸乙腈 涡旋混合1 min，超声提 取10min。加入 Won dapokQuEChERS 多兽残专用提取包4 g，剧烈振摇1 min，于 10 C 以 8000r/mi n 下离心10 min。取1 mL上清液转 移至 Won dapokQuEChERS 多兽残专用净化包中， 涡旋混合 1 min ,12000 r/min下离心5min。取上 清液，过0.22呵微孔滤 膜，取滤液进行 LC-MS/MS 分析。［分 散固相萃取-液相色 谱—串联质谱法测定常 见动物源性食品中 42种兽药残留］ 称取5.00 g样品于 50 mL玻璃离心管中， 力廿20 mL乙酸乙酯， 涡旋，超声提取 15 min，5000 r / min 离心5 min，移岀上清 液至100 mL旋转蒸发 瓶中，剩余残渣再加入 20 mL乙酸乙酯，重复 提取1次，合并上清 液，旋转蒸发至近干。 加入1 mL 甲醇水溶液 （80: 20，V / V），涡 旋30 s，过Captiva ND Lipids 小柱净化，收集 液体，上机检测。［超 高效液相色谱一四极 杆/静电场轨道阱高分 辨质谱筛查水产品中 21种环境激素］ 术（ASE ）:①样品经匀浆，于4C避光保存备用。加速溶剂萃取操作如下：在33 m L 萃取池底部附上一层垫片（直径16.2 mm），然后装入0.5 g 硅藻土防止萃取杂质进入到收集瓶，准确称取10 g 样品和5 g硅藻土，混匀后装入33 mL的萃取池中，上层覆盖0.5 g硅藻土。丙酮/甲醇（1:4, v/v,盐酸调 pH=3.0）为萃取溶剂，温度70 C，压强为 10.3 MPa，淋洗体积为40%，静态萃取5 min，循环2次。氮气吹扫收集全部提取液，室温下以10000 r min - 1的速度离心10 min，得到上清液，将上清液转移到50 mL梨系:①提取液的配制：称取4. 3g的草酸和 3.7 gEDTA，用500 mL 水溶解，氨水调pH至3. 0; 100mmol/L ②草酸缓冲液的配制：称 取0. 9 g草酸，用90mL 水溶解，氨水调pH至 5. 0，加水至100 mL。 ③称取5. 00 g样品，加入5 mL提取液和15 mL乙腈，振荡5 min，4500 r /min 下离心5 min;取岀上清液，加入1g硫酸铵，振荡5 min,4500 r /min 下离 心
样品前处理是一项极其耗时、繁琐且容易引入分析测定误差的过程。常见样品前处理方法对样品的分析起着至关重要的作用，某种程度上来说，前处理决定了分析测试的结果， 固相萃取SPE 1 简介 固相萃取（Solid-Phase Extraction，简称SPE）是近年发展起来一种样品预处理技术，由液固萃取和柱液相色谱技术相结合发展而来，主要用于样品的分离，纯化和富集，降低样品基质干扰，提高检测灵敏度,与传统的液液萃取法相比较可以提高分析物的回收率，更有效的将分析物与干扰组分分离，减少样品预处理过程，操作简单、省时、省力。广泛的应用在医药、食品、环境、商检、化工等领域。 2 基本原理
SPE技术基于液-固相色谱理论，采用选择性吸附、选择性洗脱的方式对样品进行富集、分离、净化，是一种包括液相和固相的物理萃取过程；也可以将其近似地看作一种简单的色谱过程。 SPE是利用选择性吸附与选择性洗脱的液相色谱法分离原理。较常用的方法是使液体样品溶液通过吸附剂，保留其中被测物质，再选用适当强度溶剂冲去杂质，然后用少量溶剂迅速洗脱被测物质，从而达到快速分离净化与浓缩的目的。也可选择性吸附干扰杂质，而让被测物质流出；或同时吸附杂质和被测物质，再使用合适的溶剂选择性洗脱被测物质。固相萃取法的萃取剂是固体，其工作原理基于：水样中待测组分与共存干扰组分在固相萃取剂上作用力强弱不同，使它们彼此分离。固相萃取剂是含C18或C8、腈基、氨基等基团的特殊填料。 3 操作步骤 针对填料保留机理的不同（填料保留目标化合物或保留杂质），操作稍有不同。 1、填料保留目标化合物(固相萃取操作一般有四步) 活化----除去小柱内的杂质并创造一定的溶剂环境。 上样----将样品用一定的溶剂溶解，转移入柱并使组分保留在柱上。 淋洗----最大程度除去干扰物。