高效液相色谱样品前处理
1.高效液相色谱法分析样品为什么要进行样品前处理
(1)样品浓度调节：某些待测组分在样品中的浓度过低或过高，造成仪器检测困
难，因此需要提前对样品进行浓缩或稀释。
(2)避免污染，保护仪器：某些样品的酸碱度、离子强度等易造成系统污染和缩
短仪器使用寿命
(3)消除干扰：基体或共存物质的干扰
(4)介质置换：样品介质不适合后续的分离和检测，需要提前进行介质置换。
2.高效液相色谱法分析样品前处理的遵循原则
(1)去除基体杂质，消除干扰因素；
(2)完整保留待测组分，处理过程中尽可能避免待测组分发生化学反应或被污
染；
(3)方法简单易行、重现性好、成本低。
3.高效液相色谱法分析样品前处理技术
干扰物质，然后用洗脱液将待测组分
分离出来。
染分析
微波辅助萃取利用高频电磁波的作用，使样品中待
测组分从胞内释放出来，并在低温下
溶解于萃取溶剂中，过滤，达到分离
的目的。
天然药物、农药残留、有
机金属化合物等物质的提
取
超声波辅助萃取利用超声波的机械效应、空化作用以
及热效应等，破坏样品细胞组织，加
大细胞内的传质效率，从而促进待测
组分的释放和提取。
蛋白质、多糖、烟碱等物
质的提取
超临界流体萃取采用二氧化碳作为流体，在超临界条
件下，二氧化碳使样品的各组分依次
萃取出来，当恢复常温和常压时，溶
解在二氧化碳中的待测组分立即以液
体状态与气态流体分离。
多用于天然物质的提取
迪信泰检测平台以液相/气相为依托，采用HPLC/GC及LC-MS等检测平台，致力
于为各科研院所，高校，药企，生物工程类企业提供生物、食品、药物、环境等多领域的物质检测服务。
高效液相色谱样品前处理 1.高效液相色谱法分析样品为什么要进行样品前处理 (1)样品浓度调节：某些待测组分在样品中的浓度过低或过高，造成仪器检测困 难，因此需要提前对样品进行浓缩或稀释。 (2)避免污染，保护仪器：某些样品的酸碱度、离子强度等易造成系统污染和缩 短仪器使用寿命 (3)消除干扰：基体或共存物质的干扰 (4)介质置换：样品介质不适合后续的分离和检测，需要提前进行介质置换。 2.高效液相色谱法分析样品前处理的遵循原则 (1)去除基体杂质，消除干扰因素； (2)完整保留待测组分，处理过程中尽可能避免待测组分发生化学反应或被污 染； (3)方法简单易行、重现性好、成本低。 3.高效液相色谱法分析样品前处理技术 干扰物质，然后用洗脱液将待测组分 分离出来。 染分析 微波辅助萃取利用高频电磁波的作用，使样品中待 测组分从胞内释放出来，并在低温下 溶解于萃取溶剂中，过滤，达到分离 的目的。 天然药物、农药残留、有 机金属化合物等物质的提 取 超声波辅助萃取利用超声波的机械效应、空化作用以 及热效应等，破坏样品细胞组织，加 大细胞内的传质效率，从而促进待测 组分的释放和提取。 蛋白质、多糖、烟碱等物 质的提取 超临界流体萃取采用二氧化碳作为流体，在超临界条 件下，二氧化碳使样品的各组分依次 萃取出来，当恢复常温和常压时，溶 解在二氧化碳中的待测组分立即以液 体状态与气态流体分离。 多用于天然物质的提取 迪信泰检测平台以液相/气相为依托，采用HPLC/GC及LC-MS等检测平台，致力
于为各科研院所，高校，药企，生物工程类企业提供生物、食品、药物、环境等多领域的物质检测服务。
高效液相色谱样品预处理步骤 1. 样品准备 在准备高效液相色谱样品时，需要确保样品的稳定性，防止样品在分析过程中发生变化。因此，在样品准备过程中需要注意以下几点： （1）选择合适的样品存储容器，避免样品被污染或发生变化； （2）确保样品在分析前达到室温，以避免样品在注射到色谱柱时产生气泡； （3）注射适量的样品，以避免色谱柱被过度磨损或样品过载。 2. 样品过滤 在进行高效液相色谱分析前，需要将样品通过过滤器进行过滤，以去除样品中的固体杂质或悬浮物，从而防止其对色谱柱的堵塞或损坏。通常使用的过滤器有不同规格的筛网或滤膜。 3. 样品衍生化 在一些情况下，需要对样品进行衍生化处理，以便更好地进行高效液相色谱分析。衍生化处理可以将样品中的某些化合物转化为更易分析的形式，例如将某些极性化合物转化为非极性化合
物，使其更适合用有机溶剂进行洗脱。 4. 样品稀释 在某些情况下，需要将样品进行稀释，以便更好地进行高效液相色谱分析。过浓的样品可能会导致色谱峰过宽或重叠，影响分析结果的准确性。通常使用的的是溶剂或水进行稀释。 5. 样品进样 在进行高效液相色谱分析时，需要将样品通过进样针注入到色谱柱中。在进行进样时，需要注意以下几点： （1）注射适量的样品，以避免色谱柱被过度磨损或样品过载； （2）确保进样针的清洁和干燥，以避免对分析结果产生干扰。 6. 样品分离 在将样品注入到色谱柱后，需要对其进行分离。通常使用的的是高压泵将流动相通过色谱柱，将样品中的各个化合物进行分离。在进行分离时，需要注意以下几点： （1）选择合适的流动相，以便将样品中的各个化合物进行分离； （2）调整流动相的流速和比例，以便获得更好的分离效果。 7. 检测器检测
高效液相色谱定量分析过程可分为样品的前处理、标准品的配制、进样、色谱分离、检测及数据处理等七个步骤。 一误差的主要来源随着现在市场销售仪器自动化程度的提高，进样、色谱分离、检测及数据处理等实验环节对实验结果产生的误差越来越小，尤其在高效液相色谱定量分析中，实验结果的误差可能主要来源于样品的前处理及标准品的配制。 1、样品的前处理样品的萃取率是样品前处理时存在的主要问题。当固- 液萃取（含柱分离的前处理方法），液- 液萃取时，存在萃取率不高且不稳定的问题。尤其在除去蛋白质时，存在变性蛋白质会吸附一些被测组分，导致萃取率降低的情况。通常，萃取率是通过在式样中添加被测成分在萃取的方法评价的。也就是说，被测成分的增加量和液相色谱中的峰面增大成比例关系，通过这种方法可以确定溶液中被测成分的变化趋势。如果存在萃取率不稳定的问题，就有必要改变萃取的方法，要预先添加内标，然后萃取。这种情况采用的内标，必须与被测物质的化学结构类似，萃取的萃取率才可能相近。如果回收率不但接近100%而且较为稳定，可以证明这种前处理方法较为可靠。在分析中如果能充分考虑以上误差产生的各种原因，才有可能得到精确的分析结果。 2、标准品的配制 本帖中讨论的问题带有普遍性，影响高效液相色谱分析结果准确性的因素较多，仅在标准溶液的配置过程中，可以分为标准物质的称量，溶液的配制和溶液的储存三个环节。作为标准溶液使用的标准物质其纯度要求很高，应避免使用纯度不符合要求的试剂，作为标准溶液使用的标准物质具有不
可替代性，现在市场有销售的HPLC专用的溶剂及各种标准试剂可供实验选择；其次选择与样品浓度要求相适应的天平，应该尽可能使用高精度的天平，这样才能把由于天平使用带来的称量操作误差降至最低。 二消除误差的方法 要提高分析结果的准确度，必须考虑在分析过程中可能产生的各种误差，采取有效措施，将这些误差减到最小。 1、选择合适的分析方法各种分析方法的准确度是不同的。化学分析法对高含量组分的测定能获得准确和较满意的结果，相对误差一般在千分之几。而对低含量组分的测定，化学分析法就达不到这个要求。仪器分析法虽然误差较大，但是由于灵敏度高，可以测出低含量组分。在选择分析方法时，一定要根据组分含量及对准确度的要求，在可能条件下选最佳分析方法。 2、增加平行测定的次数如前所述增加测定次数可以减少随机误差。在一般分析工作中，测定次数为2—4 次。如果没有意外误差发生，基本上可以得到比较准确的分析结果。 3、消除测定中的系统误差消除测定中系统误差可采取以下措施：其一是做空白实验，即在不加试样的情况下，按试样分析规程在同样操作条件下进行的分析。所得结果的数值称为空白值。然后从试样结果中扣除空白值就得到比较可靠的分析结果。其二是注意仪器校正，具有准确体积的和质量的仪器，如滴定管、移液管、容量瓶和分析天平，都应进行校正，以消除仪器不准所引起的系统误差。因为这些测量数据都是参加分析结果计算的。其三是作对照试验，对照试验就是用同样的分析方法在同样的条件
氨基酸检测方法 引言 氨基酸是构成蛋白质的基本单元，研究氨基酸含量和组成对于生物化学、营养学以及医学研究具有重要意义。因此，发展准确、快速、经济高效的氨基酸检测方法对于科学研究和工业应用具有重要意义。本文将对目前常用的氨基酸检测方法进行全面、详细、完整地探讨。 二级标题1：高效液相色谱法 高效液相色谱法（HPLC）是目前最常用的氨基酸检测方法之一。其主要步骤包括样品前处理、色谱条件选择、氨基酸分析等。 三级标题1.1：样品前处理 样品前处理是HPLC分析的重要步骤。常见的样品前处理方法包括去蛋白、去盐处理等。 三级标题1.2：色谱条件选择 色谱柱的选择、流动相的配制以及流动相pH值等条件对HPLC分析结果具有重要影响。正确选择色谱柱和优化流动相可以提高检测灵敏度和分离度。 三级标题1.3：氨基酸分析 氨基酸分析是HPLC的核心步骤。根据氨基酸的特性和分离要求，选择合适的检测器和检测方法可以实现准确测定氨基酸含量和组成。 二级标题2：毛细管电泳法 毛细管电泳法（CE）是一种基于电泳原理的氨基酸检测方法。相比于HPLC，毛细管电泳法具有分离效率高、分析速度快、耗样量小等优点。
三级标题2.1：毛细管电泳原理 毛细管电泳的原理基于物质在电场中的迁移速率与电荷大小、大小形状等相关。通过调节电场强度和控制毛细管表面特性，可以实现氨基酸的分离和检测。 三级标题2.2：毛细管电泳操作步骤 毛细管电泳操作步骤包括毛细管填充、条件优化和毛细管后处理等。正确操作可以提高毛细管电泳的分离效果和检测灵敏度。 二级标题3：质谱法 质谱法是一种基于气相色谱-质谱联用（GC-MS）或液相色谱-质谱联用（LC-MS）的氨基酸检测方法。质谱法具有高灵敏度、高分辨率和高特异性等优点，广泛应用于生物医学研究和临床诊断。 三级标题3.1：气质联用 气质联用是质谱法中常用的检测方法之一，通过气相色谱分离氨基酸，并通过质谱进行定性和定量分析。 三级标题3.2：液质联用 液质联用结合液相色谱和质谱技术，对氨基酸进行分离和鉴定。相比于气质联用，液质联用在氨基酸分析中更为常用。 二级标题4：其他氨基酸检测方法 除了HPLC、毛细管电泳和质谱法，还存在其他一些氨基酸检测方法，如紫外光谱法、荧光法等。这些方法使用简便，但在分离和检测灵敏度上相对较低。 结论 氨基酸检测方法是生物化学和医学研究中不可或缺的手段。本文分析了常用的HPLC、毛细管电泳和质谱法以及其他氨基酸检测方法的原理和应用。每种方法都有其优缺点，根据具体需求和实验条件选择合适的方法可以得到准确、快速且可重复的氨基酸检测结果。未来，随着技术的不断发展和创新，我们可以期待更多高效、高通量的氨基酸检测方法的出现。
体内药物分析是药物分析的重要分支，是一门研究生物机体中药物及其代谢物和内源性物质的质与量变化规律的分析方法学。它是通过分析人或动物体液及各组织器官中药物及其代谢物浓度，了解药物在体内数量和质量的变化，获得药物代谢动力学的各种参数和转变，以及代谢的方式、途径等信息，从而有助于药物的研究、临床合理应用等。体内药物分析特点是样品成分复杂，被测组分含量低，因此，测定前要对样品进行处理，适当处理之后进行测定。 1 体内药物分析中的样品预处理 在体内药物分析中，生物样品成分复杂，除被测组分外，往往含有大量内源性物质、代谢产物及共存药物等干扰物质，且被测组分的含量很低，要准确地测定生物样品中的药物浓度，必须除去妨碍测定的杂质，对样品进行预处理。生物样品中的药物必须经过分离、纯化、富集，必要时还需对待测组分进行化学改性处理。根据生物样品的种类、所用的测定手段、被测药物的种类及浓度等不同，预处理方法各异。传统的生物样品处理方法有沉淀蛋白、离心和过滤、液液萃取等，这些方法虽还在广泛使用，但它们不利于在线处理、实现自动化，或需要消耗大量有毒试剂，不利于环保和操作人员的身体健康。近年来，随着固相萃取技术(SPE)、固相微萃取技术(SPME)、微透析取样技术(MD)、柱切换(column switching，cs)等多种新技术新方法的采用，使得生物样品的处理技术向着低污染、低用量、高选择、高通量、自动化、在线化方向发展。 1.1固相萃取技术(SPE) 固相萃取技术自上世纪70年代诞生以来，以其高效、高选择性、高度自动化的特点，被广泛应用于各种生物样品的分离和纯化。固相萃取技术以选择性吸附与选择性洗脱的液相色谱分离原理，对样品进行分离和纯化。按照所采用固相萃取剂的种类，可将固相萃取法分为3类：正相、反相和离子交换固相萃取。固相萃取一般有4个步骤：活化、上样、淋洗和洗脱。新一代的聚合物吸附剂，如Waters的0asis HLB，不需活化，也不怕溶剂流干，简化了样品制备过程，而且有很宽的pH范围，能萃取亲水、疏水、酸性、碱性或中性组分，特别适用于血浆、尿液等生物样品的制备。 1.2固相微萃取技术(SPME) 固相微萃取(solid-phase microextraction，SPME)是以固相萃取(solid phase extraction，SPE)为基础发展起来的一种新型前处理方法，其利用了SPE吸附的几何效应，同时克服了SPE需要柱填充物和使用有机
HPLC分离样品样品前处理方法 因为需要在仪器、柱子、溶剂和人力等方面做很大的投入，HPLC分离是一项成本很高的分离技术。而样品前处理结果的好坏对分离过程有非常明显的影响，有时会直接关系到分离的成败；如果能遵循适当的原则，做好样品的前处理，往往既提高了分离的成功率和效率，也大大降低了成本。目前分离成本是按进样针数分摊到每个项目组的，所以合成同事送分离样品前处理的好坏直接关系到所属项目的成本。样品前处理的技术比较复杂，并且跟合成反应的关联非常紧密，下面的方法是分离组根据经验总结出来的，并不完全，也希望合成同事提供更多的建议。另外，考虑到目标组分含量过低的样品会大量增加分离的难度和成本，分离组以后原则上不再接收含量低于10%的样品。 以反应中的添加剂，催化剂来分类： 1反应中使用高反应活性的物质，如三氯氧磷，二氯亚砜，NaH，LiAlH4等，反应后一定要淬灭。这一点合成同事都是了解的。但是后面的一点容易被忽视，就是要做好中和。比如三氯氧磷用水淬灭后产生磷酸和盐酸，要用弱碱中和至近中性。（近中性只是一个粗略的概念，如果可以知道样品用什么体系分离合适，最好能将样品溶液的pH调整为与该分离体系的流动相pH一致，酸性流动相pH～2,中性pH=6.8~7.5,碱性pH～10）,否则对制备柱会造成损坏. 2有些物质反应活性虽然不是很强，如多聚甲醛，但如果不淬灭，在样品溶液中，可能会继续反应，导致目标物纯度发生变化。曾经有一个样品，使用多聚甲醛，还原胺化反应实现N甲基化。本来粗品纯度很好，但是在分离过程中发现目标物纯度越来越低，原来样品结构中还有一个反应活性较弱的N，由于多聚甲醛未淬灭，这个反应活性较弱的N原子也被甲酰化，导致目标物纯度降低，这个样品分离失败。所以，反应后淬灭，中和是样品送分离前的必修课，不可偷懒。如果不按照此原则操作，样品送到分离组导致样品分离失败，或者严重的导致色谱柱损坏等，所增加的成本将会被分摊到相应的合成项目组。 3偶联反应类型中可能用到的金属催化剂，如Pd(dppf)Cl2, Pd-118, Pd2(dba)3等均相的Pd催化剂，CuI，Chan-Lam反应中会用到的Cu(Ac)2，其他还有TiCl4，钛酸四异丙酯，Fe(acac)2等。分别详细说明一下。 3.1Pd催化剂如果是非均相的，则过滤即可去除。如果使用了Pd(PPh3)4，则由 于该试剂不稳定，反应后会出现黑色Pd的沉淀，过滤也可以去除干净。如果使用过Pd(dffp)Cl2等均相的Pd催化剂，由于该试剂可以溶解于常用有机溶剂中，所以不能通过过滤去除。而如果不处理干净，Pd试剂在与流动相混合后析出，堵塞筛板，并与硅胶结合，导致反相色谱柱柱头变黑，柱压剧烈升高，色谱柱柱效严重下降，常常会出现白天摸好方法的样品，在晚上多次进样后峰型变差，纯度降低，不能满足交货要求，更严重的，色谱柱柱效的严重降低，会影响后续样品的分离，导致多个样品分离失败。所以，这类
液相色谱的样品前处理部分和液相色谱使用注意事项 刘鹏1233351 环境工程 一、样品的前处理 1.液体样品的前处理技术 （1）液液萃取法：利用溶液中各组分在所选用的萃取剂中的溶解度差异，用液相萃取剂从溶液中提取出某种组分。 （2）顶空法（静态顶空，吹扫捕集法）：利用待测物的易挥发性，静态顶空法直接抽取样品顶空气体进行色谱分析，吹捕法利用载气尽量吹出样品中待测物后，用冷冻捕集或吸附剂捕集的方法来收集待测物。 （3）超临界流体萃取法：利用超临界流体密度高、黏度小、对压力变化敏感的特性，在超临界状态下萃取待测样品，通过减压、降温或吸附收集后分析。 （4）膜萃取：膜对待测物的吸附作用，先由高分子膜萃取样品中的待测物，再用气体或液体萃取高分子膜中的待测物。 （5）固相萃取：先用固相吸附剂吸附待测物，再用溶剂洗脱待测物。 （6）固相微萃取技术：利用待测物在样品及萃取涂层之间的分配平衡，将萃取纤维暴露在样品或其顶空真中萃取。 （7）液相微萃取法：包括大体积的水溶液及小体积的不溶于水的有机液液萃取，将疏水性的目标有机物转移到一滴有机溶剂中。 2.气体样品的前处理技术 （1）样品衍生化：将样品制成衍生物，不仅可以提高从样品基体中萃取和预分离待测化合物的能力，而且可以通过降低样品的极性或改变样品组分的选择性来改善液相色谱分离，还可以改变样品中不同化合物的相对检测器响应，因而可在有谱带重叠的情况下，检测和定量待测组分中的某些组分。分为紫外衍生化、荧光衍生化、电化学衍生化、柱后或柱前衍生化。 （2）固相萃取：先用固相吸附剂吸附待测物，再用溶剂洗脱待测物。 （3）膜萃取：膜对待测物的吸附作用，先由高分子膜萃取样品中的待测物，再用气体或液体萃取高分子膜中的待测物。 （4）液相微萃取法：包括大体积的水溶液及小体积的不溶于水的有机液液萃取，将疏水性的目标有机物转移到一滴有机溶剂中。 （5）液液萃取法：利用气体样品中各组分在所选用的萃取剂中的溶解度差异，用液相萃取剂从溶液中提取出某种组分。 （6）超临界流体萃取法：利用超临界流体密度高、黏度小、对压力变化敏感的特性，在超临界状态下萃取待测样品，通过减压、降温或吸附收集后分析。 3.固体样品的前处理技术 （1）索氏提取法：利用溶剂回流及虹吸原理，使固体样品中目标物连续不断地被纯溶剂萃取，既节约溶剂，又提高萃取效率。萃取前先将固体物质研碎（100-200目），以增加固液接触的面积。然后将固体样品放在滤纸套内，置于提取器中，提取器的下端与盛有提取溶剂的圆底烧瓶相连，上面接回流冷凝管。加热圆底烧瓶，使溶剂沸腾，蒸汽通过提取器的支管上升，被冷凝后滴入提取器中，溶剂和固体接触进行萃取，当溶剂液面超过虹吸管的最高处时，含有萃取物的溶剂虹吸回烧瓶，因而萃取出一部分物质，如此重复，使固体样品中目标物质不断为纯的溶剂所萃取，将萃取出的物质富集在烧瓶中。
液相色谱中样品前处理技术综述 在复杂基体中低浓度甚至是痕量的有机化合物的分离和测定是分析化学所面临的一个挑战。在样品前处理方面,现代色谱分析样品制备技术的发展趋势是使处理样品的过程要简单、处理速度快、使用装置小、引进的误差小,对欲测组分的选择性和回收率高。 目前国际上液相色谱通常采用的样品处理技术有:固相萃取(MXPD)、超临界萃取(SFE)、固相微萃取技术。而我国目前主要采用传统的溶剂萃取,液液分配、柱层析净化,前处理方法自动化程度低,提取净化的效率不高,速度慢,环境污染严重。新开发的前处理技术其目的和结果就是要实现快速、有效、简单和自动化的完成分析样品制备过程。 下以就简单介绍几个主要的样品处理技术: 1.溶剂萃取 在色谱分析样品制备中,溶剂萃取方法主要有液-液萃取、液-固萃取和液-气萃取,它们都是属于两相间的传质过程,即物质从一相转入另一相的过程。 溶剂萃取技术在我们液相色谱分析的样品制备过程中,是用到最为广泛的一种技术。关于其原理和方法,在此不再赘述。 在液-液萃取中非常重要的操作是急速的振动样品,这样可以确保两相的完全接触,有助于质量传递。由于物质剧烈的振动,使得乳化现象经常发生,特别是那些含有表面活性剂和脂肪的样品。为了防止乳化形成,常采用加热或加盐的方法破乳。通过改变K D值,改变溶剂或化学平衡作用的添加剂,如使用缓冲剂调节PH,盐调节离子强度等。 常用于破乳的技术有:
(1)加盐; (2)使用加热-冷却萃取容器; (3)通过玻璃棉塞过滤乳化液样品; (4)通过相过滤纸过滤乳化液样品 (5)通过离心作用; (6)加少量的不同的有机溶剂。 溶剂萃取的方式在现代水产品检测技中应用十分广泛,因其实验器材简便,经济,容易操作。在鱼体的孔雀石绿,环丙沙星等药物残留的检测中,都有用到溶剂萃取的方式。在孔雀石绿残留的检测中,为了防止乳化现象的产生,也用到了二甘醇这进行破乳。 2.固相萃取(solid phase extraction SPE) 1 固相萃取(SPE)是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附,与样品的基体和干扰化合物分离。然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附,达到分离和富集目标化合物的目的。 与液液萃取相比固相萃取有很多优点:固相萃取不需要大量互不相深的溶剂,处理过程中不会产生乳化现象,它采用高效、高选择性的吸附剂(固定相),能显著减少溶剂的用量,简化样品的预处理过程,同时所需费用也有所减少。一般来说固相萃取,费用为液液萃取的五分之一,但其缺点是目标化合物的回收率和精密度要略低于液液萃取。
高效液相色谱分析样品处理技术进展 摘要：高效液相色谱分析法的样品处理关系测定结果的准确性和分析时长。 样品处理的目的包括：去除复杂基质或其它干扰物的影响，将待测成分尽可能多 的提取出来；浓缩痕量被测组分，提高方法的灵敏度，降低检测限；利用衍生化 或其它反应，使被测物转化成为检测灵敏度更高的物质或转化为能够与样本中干 扰组分分离的物质，提高方法的灵敏度和选择性；去除杂质，纯化样品，保护分 析仪器以及测试系统等。 关键词：高效液相色谱；样品处理 1 液–液萃取技术 1.1 原理 液–液萃取(Liquid-Liquid extraction，LLE)是利用被测样品中目标成分 在两种互不相溶的溶剂中溶解度不同，把目标物从原来的溶剂体系中抽提至新的 溶剂体系中的过程。液–液萃取可以实现对目标化合物进行分离、纯化、去除杂 质的目的，一般在常温常压下开展，条件温和，可以保持目标物理化性质的稳定，处理能力强，回收率高，应用相当广泛。目前随着样品处理技术的发展，液–液 萃取技术的理论不断创新，研究范围不断扩大，包括常规液–液萃取、分散液– 液微萃取技术(DLLME)、双水相萃取技术(ATPE)等。其中，分散液–液微萃取技 术是一种新型萃取技术，基于液–液萃取的技术基础，萃取液用量小，通过在萃 取体系中添加分散剂，增加萃取剂与目标物的接触面，使目标物在样品溶液和小 体积萃取剂间的分配达到平衡而完成萃取。 1.2 特点 液–液萃取可从干扰物中分离目标成分，达到除杂、净化、分离的目的，一 般是将目标成分从水溶液中抽提至有机相中，含有目标成分的有机相经溶剂挥发 容易富集浓缩，有利于被测物中低含量目标化合物的检测。液–液微萃取中萃取
高效液相样品前处理的注意事项 以下为正文： 1、样品预处理方法 样品预处理应包括进样前的一切操作。除了称重、溶解、稀 释等步骤外,样品需要: ①过滤; ②萃取; ③衍生化(柱前衍生) ; ④液相色谱(低压柱层析) 。这些操作可以是手工进行或实行自 动化操作。样品预处理的目的是除去干扰物、增加检测器灵敏度(富集) 、保护色谱柱等。样品预处理同时也是为了避免色谱分 离故障,其中样品萃取是关键的一步,要从大量的干扰物中萃取出 微量组分难度极大。 有些样品经预处理后还不能作进样分析,需进行衍生化处理,使一 些无紫外吸收或无荧光的组分,经过衍生化后能用紫外和荧光检 测器检测,这样既提高了灵敏度,又改善了分离度(质量变化) 。 样品预处理的同时也会带来一些问题,如样品损失、样品被污 染、衍生化反映不完全或多种反应物生成等。衍生反应常会影响 试验的精确度,或者在整个样品预处理过程中带来误差。 用于液相色谱分析的样品溶液必须均匀而无颗粒,有颗粒会损坏 进样器并阻塞柱头。处理好的样品在准备上柱前应对准光线摇动,
检查样品溶液中有无颗粒。只要看到颗粒、混浊或乳化,就应过滤一下,过滤膜要能截留住015μm 以上的颗粒,样品过滤的过程中可能引起:样品被污染,因过滤吸附降低样品组分的含量,样品溶剂挥发引起误差。萃取的目的是从共溶的样品介质中分离出被分析的组分,或者减少损坏柱的物质(如蛋白质等)和干扰物。一般采用有机溶剂萃取,要求萃取用的溶剂毒性低、挥发性好、杂质少、对待测样品有良好的溶解度且又与水不相混溶。常用的有乙醚、醋酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯或者两种以上的混合溶剂。萃取后一般可直接进样,有时需要浓缩或吹干浓缩,再用定体积的液体或流动相溶解进样。这样增加了样品浓度,提高了灵敏度,同时避免了溶剂峰对样品峰的干扰。在萃取是要考虑样品分子的溶解能力。除了脂溶性和水溶性组分外,还有用脂溶性的组分制成水溶性的盐。萃取方法如下: 1.1水溶性样品 (1) 酸性组分及生成的盐萃取方法:有机溶剂萃取杂质后调成酸性,再加有机溶剂萃取或进样,或在N2 流下吹干,用适当的溶剂解后进样。 (2) 碱性组分及生成的盐萃取方法:有机溶剂萃取杂质后调成碱性,再加有机溶剂萃取或进样,或在N2 流下吹干,用适当的溶剂溶解后进样。 (3) 中性组分萃取方法:有机溶剂萃取杂质后,直接用反相色谱法分析。 1.2脂溶性组分萃取方法:
高效液相色谱法分析中的常见问题与解决方 案 高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种现 代化的分析方法，广泛应用于药物、食品、环境等领域。然而，在实际应用过程中，常常会遇到一些问题。本文将探讨高效液相色谱法分析中的常见问题，并提供解决方案。 1. 色谱峰分离不良 在进行高效液相色谱分析时，首要问题就是色谱峰的分离不良。造成这个问题 的原因可能是样品组分过于复杂，或是色谱柱选择不当。解决的方法包括：（1）优化样品前处理方法，如提取、净化等，以减少样品的复杂性； （2）调整流动相的组成和流速，或试用其他类型的色谱柱，以提高色谱峰的 分离度。 2. 流动相持续泵出问题 在HPLC分析过程中，流动相持续泵出是关键步骤之一。当出现流量不稳定或 持续泵出不工作的情况时，可以尝试以下解决方法： （1）检查管路是否有漏气现象，尤其是连接件的密封性； （2）清洗或更换柱子和过滤器，以防止堵塞； （3）检查、更换流量检测器，并校正流量计。 3. 柱寿命较短
柱寿命的短暂是高效液相色谱法分析中常见的问题之一，主要原因是样品残留 物的堆积、色谱柱废液的积累、和流动相的不合适。针对这个问题可以采取以下措施： （1）对样品进行预处理，减少残留物的堆积； （2）定期清洗和维护色谱柱，保持柱的表面状况； （3）使用适当的流动相，避免酸性或碱性物质损害色谱柱。 4. 波峰畸变问题 波峰畸变是指在色谱图上观察到的峰形呈现为不对称的情况，这可能是由于柱 床不均匀、流量不稳定或是组分浓度过高引起。解决这个问题的方法包括：（1）更换新的色谱柱，确保柱床的均匀性； （2）检查各部分的流量是否稳定，尤其是溶液的泵出和进样流速的稳定性； （3）适当稀释样品，以降低组分浓度。 5. 某些组分无法检测到 当分析物无法检测到时，可以考虑以下解决方法： （1）确认所使用的检测器是否适用于分析物的检测，并检查检测器的灵敏度； （2）尝试使用其他检测器或改变检测器条件，如波长或电流； （3）检查样品制备方法是否完整，是否包含了分析物。 总结起来，高效液相色谱法在分析中常常遇到色谱峰分离不良、流动相持续泵 出问题、柱寿命较短、波峰畸变以及某些组分无法检测到等常见问题。通过优化样品前处理、调整流动相的组成和流速、检查和清洁柱子等方法，可以有效解决这些问题，提高高效液相色谱法的分析准确性和效率。
For personal use only in study and research; not for commercial use 高效液相色谱使用操作步骤 一、泵操作面板 PUM P：运行键START ：梯度运行键PURGE：快冲键 RESET ： 复位键HOLD ：程序暂停键STOP ：泵停止键TIME：程序开启键FLOW ：流速：RSVR ：A B C PROG：程序DEL ：删除程序PMAX ：最大压力PMIN：最小压力ENTER ：确定 TIME0FLOW ENTER（设置流速）TIME0RSVR ABC ENTER（设置溶剂）TIME0PROG ENTER（设置程序）TIME0% A 30 ENTER（设置比例）TIME0% B 30 ENTER（设置比例）TIME0% C 40 ENTER（设置比例） DEL PROG 1ENTER（删除程序） 1. 对于梯度泵设定举例如下：（人参皂苷的梯度） TIME0PROG1ENTER TIME0%A81ENTER TIME15%A81ENTER TIME60%A65ENTER TIME65%A0ENTER
TIME80%A0ENTER TIME81%A81ENTER TIME100%A81ENTER 因为A+B 之和始终是100%，所以B 相就不用设了 7．对于对照品在这种条件下只要对照品的峰全部出完后按下RESET 键等20 分钟即可进第二针进完针后按START 键运行梯度程序。但是对样品来说一定要等峰出完后再按下RESET 键等基线基走直才可进下一针。 二、检测器操作面板 RESET：复位键A/Z ：调零键WL ：调波长ENTER：确定 三、实验前的准备工作 1、实验前流动相提前配好过滤脱气。 2、置换流动相时把泵的滤头从原来的流动相中换到新的流动相中滤头 要轻拿轻放。 3、液路排气顺序：首先打开排气阀—按PURGE键进行排气 结束后—按STOP键停止—再拧紧排气阀—按PUM P 键让泵运行。 4、打开检测器首先观察右上角氘灯指示灯确认氘灯是否点亮，按WL 键调好实验波长后按A/Z 键调零。 5、打开电脑打开在线工站选择对应的通道，输入实验信息、方法、包括采样控制，积分和仪器条件，积分面积外标法测绝对含量归一法相对含量内标法测绝对含量；后点数据采集，将电压调到-20~20，时间调
样品前处理技巧大全总结 样品前处理对分析检测实验员来说是至关重要的一环，其占据整个分析过程的60%以上的时间，主要的分析误差也是来自样品前处理环节。 首先必须讲解的是微量样品前处理技术，毕竟微量样品前处理更需要技巧。（主要是固相萃取技术哦！） 针头过滤器、超速离心是除去固体颗粒的微量样品前处理技术，而固相萃取（Solid-phaseextraction，SPE）和固相微萃取（Solid-phasemicro extraction，SPME）是两种从各类复杂样品中提取净化微量待测组分的新技术，它们具有分离速度快、操作简单、萃取效率高、无乳化等特点，在环境分析、药物分析、形态分析等方面有广泛应用，尤其适用色谱分析样品前处理。 分析样品制备技术：将采集样品转化为适合（色谱）分析测定的形态 （1）固相萃取（张海霞、朱彭龄，分析化学2000，28（9）：1172） 它的优点是： 节省时间，交叉污染机会小，重现性好，回收率高，特别适用于微量试液处理。 固相萃取的关键是根据样品的性质正确选择固相萃取小柱及洗脱条件。 （2）固相微萃取 固相微萃取集“采样、萃取、浓缩、进样”于一体，能够与气相色谱或高效液相色谱仪联用样品前处理技术。 ※与SPE 相比SPME具有以下优点： (1)不使用有机溶剂萃取，降低了成本，避免了二次污染； (2)操作时间短，从萃取进样到分析结束不足1h； (3)样品用量少，几mL～几十mL； (4)操作简便，可减少待测组分的挥发损失； (5)检测限达μg/L～ng/L水平； (6)适于挥发性有机物、半挥发性有机物及不具挥发性的有机物。 ※固相微萃取的使用：关键在于“纤维头的选择”，这种情况类似于色谱柱的选择，主要根据分析对象的分子量和极性。固相微处理技术适用于气体、水样、生物样品（如，血、尿、体液等）的萃取提取。
分散液液微萃取 分散液液微萃取是一种基于高效液相色谱技术的样品前处理方法，它可以有效地提高样品的纯度和灵敏度，同时减少了样品处理的时间和成本。本文将介绍分散液液微萃取的原理、优点和应用。 一、原理 分散液液微萃取的原理基于液液萃取的基础上，它采用微量的有机溶剂形成的微小液滴，与样品中的目标分子相互作用，实现目标分子的富集和分离。相对于传统的液液萃取方法，分散液液微萃取具有以下优点： 1. 可以使用微量的有机溶剂，减少了有机溶剂的消耗和环境污染。 2. 分散液液微萃取的液滴大小可以控制，从而可以实现高效的富集和分离。 3. 分散液液微萃取的速度快，可以在短时间内完成富集和分离过程。 4. 分散液液微萃取的富集效率高，可以实现对少量样品的富集和分离。 二、优点 分散液液微萃取具有以下优点： 1. 高效性：分散液液微萃取可以实现对少量目标分子的高效富集和分离，从而提高了样品的灵敏度和纯度。 2. 选择性：分散液液微萃取可以通过选择不同的有机溶剂和条
件，实现对不同目标分子的选择性富集和分离。 3. 简便性：分散液液微萃取可以在短时间内完成富集和分离过程，从而节省了样品处理的时间和成本。 4. 环保性：分散液液微萃取可以使用微量的有机溶剂，减少了有机溶剂的消耗和环境污染。 5. 适用性：分散液液微萃取适用于多种样品的前处理，包括环境样品、食品样品、生物样品等。 三、应用 分散液液微萃取在环境、食品和生物领域中有广泛的应用。 1. 环境领域：分散液液微萃取可以用于环境样品中有机污染物的富集和分离，如水中的有机物、土壤中的农药等。 2. 食品领域：分散液液微萃取可以用于食品中的残留物的富集和分离，如农药、重金属、食品添加剂等。 3. 生物领域：分散液液微萃取可以用于生物样品的前处理，如血液、尿液、唾液中的生物分子的富集和分离。 四、总结 分散液液微萃取是一种高效、简便、环保的样品前处理方法，它可以实现对少量目标分子的高效富集和分离。在环境、食品和生物领域中有广泛的应用。随着技术的不断发展，分散液液微萃取将会在更多的领域中得到应用。
化学检测样品前处理技术 化学检测样品前处理技术是一种将样品经过一系列的处理步骤，使其符合分析要求， 并提高分析结果的准确性和可靠性的方法。前处理技术在化学分析领域具有重要的地位和 作用，可以用于分离、浓缩、净化和转化样品中的目标物质，从而提高分析的灵敏度和特 异性。 一、样品前处理的目的 样品前处理的目的是为了消除样品中的干扰物质，提高样品的纯度和浓度，从而得到 准确的分析结果。主要包括以下几个方面的工作： 1.样品的收集和保存：样品的收集和保存要注意避免样品中的污染和挥发物的损失， 采用适当的方法和容器进行样品的收集和保存。 2.样品的分离和提取：样品中目标物质与其他成分之间的分离是前处理的重要步骤之一。可以通过溶剂的萃取、蒸馏、析出等方法进行样品的分离和提取。 3.样品的净化和去除杂质：样品中常常存在着许多与目标物质相关的杂质或干扰物质，这些杂质或干扰物质可能对分析结果造成偏差或影响分析仪器的运行。在进行分析之前需 要对样品进行净化和去除杂质的处理。 4.样品的浓缩和体积调整：对于高稀释度的样品，需要对其进行浓缩处理，以提高分 析的灵敏度。反之，对于高浓度的样品，需要进行适当的稀释，以避免分析中的过量导致 结果失真。 5.样品的转化和改性：有些样品在分析之前需要进行一定的转化或改性处理，以提高 目标物质的检出率或改善分析结果的精确度。对于有机物的分析，可以先进行酸碱处理或 化学反应，使其转化为易于检测的形式。 1.固相萃取技术：固相萃取是一种基于固相吸附原理的样品前处理技术，通过在固相 吸附剂上对样品进行提取，实现对目标物质的富集和净化。固相萃取技术具有简便、快速、高效、灵敏度高的特点，广泛应用于环境、食品、生物、药物等领域的分析研究。 2.溶剂萃取技术：溶剂萃取是一种常用的样品前处理技术，通过选择合适的溶剂，使 样品中的目标物质在物理或化学特性上与其他组分发生差异，从而实现分离和富集的目的。溶剂萃取技术具有操作简单、选择性强、适用范围广的优点，适用于不同类型的样品。 3.蒸馏技术：蒸馏是一种通过溶液的不同挥发性将目标物质从样品中分离的技术，常 用于液体样品的净化和浓缩。蒸馏技术可以分为传统蒸馏、气相蒸馏、熔点蒸馏等不同形式，根据不同的样品和需要选择合适的蒸馏方法。
远兴生物能源有限公司 安捷伦高效液相色谱仪操作说明 一、校枪及样品处理 1. 校枪 仪器:两个小烧杯、分析天平、移液枪1000μL、100μL 步骤:打开分析天平预热,一只烧杯放到称量盘上调零,一只装入纯水。将移液枪1000μL、100μL调至950μL、50μL,分别吸取纯水称质量,如偏大或偏小,调节移液枪直至准确到0.001g。(如枪使用过久或气密性不好,可以准备一个小烧杯装入纯水,每次先轻轻沾湿枪口,甩掉水或在用卫生纸吸取口上的水,再插上枪头使用。)注意慢吸慢放,不要挂珠。2. 样品处理:用1.5mL离心管取0.5mL发酵液,取出样品后,首现在离心机上离心(13000rap/min 3min)。然后将样品稀释20倍,取950μL纯水、50μL发酵液于离心管中。混匀后在离心机上离心(13000rap/min 3min)。准备自动进样瓶(瓶中放上内衬管),取200μL待测液盖紧盖子。按顺序放到自动进样盘中。 二、开机 1、仪器各组件 将在线脱气器、泵:四元、进样器:自动进样器(六通阀)、柱温箱、检测器:示差折光检测器开关打开。 打开计算机,进入Windows XP 画面,并运行CAC Server程序,打开色谱仪各组件电源,待显示已联上各组件的信息及各模块自检完成后,双击Instrument 1 Online ,图标打开工作站。化学工作站自动与1200LC通讯。
流动相:将流动相(一般不主张使用偏酸、偏碱的流动相)放入溶剂瓶中,打开冲洗阀,设流速为2ml/min,单击确定,再依次单击泵→控制,选中启动,单击确定,则系统开始冲洗,至管路无气泡为止,切换管路反复操作至所需管路均无气泡。在“控制”选项中选“关闭”,关闭泵,关闭冲洗阀。单击泵下面瓶图标,输入溶剂的实际体积和瓶体积。 每次四元泵开始前,要打开冲洗阀阀门以5ml/min的流速冲洗10分钟,使脱气机与泵之间的流动相从冲洗阀流出,以免隔夜的流动相损伤色谱柱。 每次进样检测前,要用流动相冲洗色谱柱30分钟,达到柱温前20min流速设为 0.2ml/min,达柱温后再改为0.6ml/min。待1—1.5h检测器的基线稳定方可进行进样检测;检测结束后,色谱柱要先用水冲洗20分钟,然后用甲醇或乙腈冲洗至少20分钟,以延长色谱柱的使用寿命。绝对禁止偏酸、偏碱的流动相以及缓冲液在色谱柱中过夜。 三、编辑分析方法 新方法建立:程序菜单显示绿色,即可进行参数设置及操作 泵参数设定:设定流速、比例、运行时间、平衡时间、泵辅助设定(梯度)等。 点击确定进入下一画面 自动进样器参数设定:设定进样量(5μL)、抽取位置(调节针高度3.0mm)、进样方式等。“序列”→序列参数→子目录(日期:年月日时间) “序列表”:插入/批量输入向导→“追加”、“插入”→“样品位置”、“开始位置”、“增量”、“插入行数” 标准进样:只能输入进样体积,此方式无洗针功能。
高效液相色谱仪工作流程 高效液相色谱仪（High-Performance Liquid Chromatography, HPLC）是现代色谱分 析技术中的关键仪器之一，广泛应用于生命科学、医学、制药和环境监测等领域。HPLC不仅可以分离复杂混合物，还能测定化合物的纯度、分子量和化学反应动力学参数等。本文 将详细介绍HPLC的工作流程及其各个环节的具体内容。 一、概述 HPLC分离方法是在特定的操作条件下，利用样品中化合物在流动相与固定相交互作用不同而分离纯化目标化合物的一种仪器分离方法。常用固定相材料包括硅胶、活性炭、十 八烷基硅胶和氨基硅胶等，而流动相则是要经过调节才能使各化合物分离，例如改变溶剂 配比，改变温度等。HPLC一般由液相泵、样品进样器、柱子、检测器和数据处理系统组成。下面，我们将详细介绍每个环节的作用和工作流程。 二、液相泵 液相泵是指在HPLC中负责将流动相（移动相）通过固定相（柱子）的系统中流动的一种泵。通俗来讲，其功能是向上抬升活塞推动流动相流经柱子，使样品能与固定在柱子上 的固定相发生相互作用从而分离出纯度更高的化合物。液相泵可以提供稳定的流速和压力，是HPLC系统中关键的组成部分。液相泵在HPLC系统中的具体工作流程如下： 1. 设置流速，输入溶剂参数：首先需要在仪器控制软件上设置流速；还需要输入流 动相的一些参数，如溶剂的种类、浓度和缩写等。 2. 启动液相泵：通过点击控制软件“启动”按钮将提供压力的泵浦启动。 3. 压力监控：液相泵将持续加压，直到达到预设的压力值。在加压过程中，成分浓 度的变化会导致压力的变化，这时可以通过压力监控系统及时调整流速来保持压力的稳 定。 4. 柱前压力平衡：为确保柱子中样品能够顺利分离，开始运行HPLC之前首先需要在 柱子中填充流动相，进行柱前压力平衡。 三、样品进样器 样品进样器是HPLC系统中负责将待分析的化合物样品进给进HPLC柱中的一个系统， 它的主要作用是将待测试的样品转化成具有高性能液相色谱分析所需的样品状态。样品进 样器的具体工作流程如下： 1. 样品输入：将待测试的样品加入到样品进样器中，通常是通过微量注射器输入到 进样器的样品室中。