第十一章血清学试验
第四节补体结合试验
补体结合试验（complement fixation test）是应用可溶性抗原，如蛋白质、多糖、类脂、病毒等，与相应抗体结合后，其抗原-抗体复合物可以结合补体，但这一反应肉眼不能察觉，如再加入致敏红细胞（溶血系统或称指示系统），既可根据是否出现溶血反应，判定反应系统中是否存在相应的抗原和抗体。参与补体结合反应的抗体称为补体结合抗体。补体结合抗体主要为IgG和IgM，IgE和IgA 通常不能结合补体。通常是利用已知抗原检测未知抗体。
一、基本原理
本试验包括两个系统共五种成分：一为检测系统（溶菌系统），即已知的抗原（或抗体）、被检的抗体(或抗原)和补体；另一为指示系统（溶血系统），包括绵羊红细胞、溶血素和补体。抗原与血清混合后，如果两者是对应的，则发生特异性结合，成为抗原-抗体复合物，这时如果加入补体，由于补体能与各种抗原-抗体复合物结合（但不能单独和抗原或抗体结合）而被固定，不再游离存在。如果抗原-抗体不对应或没有抗体存在，则不能形成抗原-抗体复合物，加入补体后，补体不被固定，依然游离存在。
由于许多抗原是非细胞性的，而且抗原、抗体和补体都是用缓冲液稀释的比较透明的液体，补体是否与抗原-抗体复合物结合，肉眼看不到，所以还要加入溶血系统。如果不发生溶血现象，就说明补体不游离存在，表示溶菌系统中的抗原和抗体是对应的，它们所组成的复合物把补体结合了。如果发生了溶血现象，则表明补体依然游离存在，也就表示溶菌系统中的抗原和抗体不相对应，或者两者缺一，不能结合补体（图11-7）。
二、补体结合试验的基本过程及应用
试验分两步进行。第一步为反应系统作用阶段，由倍比稀释的待检血清加最适浓度的抗原和补体。混合后37℃水浴作用30～90min或4℃冰箱过夜。第二步是溶血系统作用阶段，在上述管中加入致敏红细胞，置37℃水浴作用30～60min，观察是否有溶血现象。若最终表现是不溶血，说明待检的抗体与相应的抗原结合了，反应结果是阳性；若最终表现是溶血，则说明待检的抗体不存在或与抗原不相对应，反应结果是阴性。
补体结合反应操作繁杂，且需十分细致，参与反应的各个因子的量必须有恰当的比例。特别是补体和溶血素的用量。补体的用量必须恰如其分，例如，抗原抗体呈特异性结合，吸附补体，不应溶血，但因补体过多，多余部分转向溶血系统，发生溶血现象。又如抗原抗体为非特异性，抗原抗体不结合，不吸附补体，补体转向溶血系统，应完全溶血，但由于补体过少，不能全溶，影响结果判定。此外，溶血素的量也有一定影响，例如阴性血清应完全溶血，但溶血素量少，溶血不全，可被误以为弱阳性。而且这些因子的量又与其活性有关：活性强，用量少；活性弱，用量多。故在正式试验前，必须准确测定溶血素效价、溶血系统补体价、溶菌系统补体价等，测定活性以确定其用量。
补体结合试验具有高度的特异性和一定的敏感性，是诊断人畜传染病常用的血清学诊断方法之一。不仅可用于诊断传染病，如结核、副结核、鼻疽、牛肺疫、马传染性贫血、乙型脑炎、布氏杆菌病、钩端螺旋体病、锥虫病等。也可用于鉴定病原体，如对流行性乙型脑炎病毒的鉴定和口蹄疫病毒的定型等。
补体实验报告 篇一：补体结合实验 第二节补体结合实验 补体结合实验（complementfixationtest，cft）是用免疫溶血机制做指示系统，来检测另一反映系统抗原或抗体的实验。早在1906年wasermann就将其应用于梅毒的诊断，即著名的华氏反映。这一传统的实验经不断改良，除用于传染病诊断和流行病学调查之外，在一些自身抗体、肿瘤相关以原和hla的检测和分析中也有应用。 一、类型及原理 自身免疫性溶血，若是有补体参与时，补体通过一系列的激活，最后形成膜解决复合物（membrane attack complex），它可以直接解决红细胞膜，致使红细胞破裂，这就是所谓“血管内溶血”。而没有补体参与的免疫性溶血，抗体与红细胞膜上抗原结合后，没有直接把红细胞破坏，而是把红细胞“致敏”，致敏RBC在通过脾脏等网状内皮系统时，被吞噬细胞“吃掉”，这就是所谓“血管外溶血”。 该实验中有5种成份参与反映，分属于3个系统：①反映系统，即已知的抗原（或抗体）与待测的抗体（或抗原）； ②补体系统；③指示系统，即srbc与相应溶血素，实验时常将其预先结合在一路，形成致敏红细胞。反映系统与指示系统争夺补体系统，先加入反映系统给其以优先结合补体的
机缘。 若是反映系统中存在待测的抗体（或抗原），则抗原抗体发生反映后可结合补体；再加入指示系统时，由于反映液中已没有游离的补体而不出现溶血，是为补体结合实验阳性。若是反映系统中不存在的待检的抗体（或抗原），则在液体中仍有游离的补体存在，当加入指示系统时会出现溶血，是为补体结合实验阴性（图14-2）。因此补体结合实验可用已知抗原来检测相应抗体，或用已知抗体来检测相应抗原。 图14-2补体结合实验示用意 二、实验方式 补体结合实验的改良方式较多，较常常利用的有全量法(3ml)、半量法(1.5ml)、小量法(0.6ml)和微量法（塑板法）等。目前以后两种方式应用较为普遍，因为可以节省抗原，血清标本用量较少，特异性也 较好。以下叙述以小量法为例，即抗原、抗体、溶血素、羊红细胞各加0.1ml，补体加0.2ml，总量为0.6ml。 （一）试剂 1．抗原实验顶用于检测抗体的抗原应适当提纯，纯度愈高，特异性愈强。如利用粗制抗原时，须经一样处置的正常组织作抗原对照，以识别待检血清中可能存在的、对正常组织成份的非特异性反映。 2．抗原和抗本的滴定补体结合实验中，抗原与抗体按
补体结合试验的原理及应用 1. 原理介绍 补体结合试验是一种常见的实验方法，用于检测血清或体液中的溶菌酶的活性。其原理基于抗原-抗体反应和补体激活的过程。在一个完整的补体结合试验中，通 常需要包括三个基本步骤：补体激活、免疫复合物的形成和补体结合。 1.1 补体激活 补体是一组血浆蛋白，在机体的免疫防御机制中起着关键的作用。当体内存在 抗原时，抗原与特异性抗体结合形成免疫复合物。这些免疫复合物可以激活补体系统。补体分为经典途径和替代途径，其中经典途径是由免疫复合物激活补体的主要途径之一。 1.2 免疫复合物的形成 免疫复合物是由抗原与抗体结合形成的复合物。当抗原与抗体结合形成免疫复 合物后，免疫复合物会引起补体激活。 1.3 补体结合 补体结合是指补体成分与免疫复合物结合的过程。当补体的C1q成分与免疫复合物结合后，C1q会激活补体的经典途径，进而引发连续的级联反应，最终形成一个膜攻击复合物（MAC），导致细胞膜的破坏。 2. 应用领域 补体结合试验在医学检验、疾病诊断等领域具有广泛的应用价值。以下是一些 补体结合试验的应用领域： 2.1 免疫疾病的诊断 补体结合试验可用于检测自身免疫性疾病和某些免疫缺陷病的诊断。例如，系 统性红斑狼疮患者血清中的补体结合活性通常较低。 2.2 感染性疾病的诊断 补体结合试验可用于检测某些感染性疾病的诊断，如流行性感冒、风疹、百日 咳等。在感染过程中，补体会参与抗体介导的免疫反应，通过补体结合试验可以检测到相关抗体和免疫复合物的形成。
2.3 肿瘤标志物的检测 补体结合试验对某些肿瘤标志物的检测也具有一定的应用价值。例如，前列腺 特异性抗原（PSA）是早期发现前列腺癌的一个重要指标，通过补体结合试验可以 检测血清中的PSA水平。 2.4 药物敏感性的评估 补体结合试验可以用于评估药物的敏感性。例如，某些抗肿瘤药物的疗效可能 与补体结合试验的结果相关，通过补体结合试验可以评估药物对免疫复合物的效应。 3. 结语 补体结合试验作为一种重要的实验方法，可以应用于医学检验、疾病诊断等多 个领域。其原理基于抗原-抗体反应和补体激活的过程。通过补体结合试验，可以 对免疫疾病、感染性疾病、肿瘤标志物和药物敏感性等进行诊断和评估，具有广泛的应用前景。在未来的临床实践中，补体结合试验将继续发挥重要作用，为疾病的早期诊断和治疗提供有力的支持。 以上是补体结合试验的原理及应用的简要介绍，希望对您有所帮助。如果您还 有其他相关问题或需进一步了解，请随时与我们联系。
实验一补体结合实验 实验原理：补体无特异性，可与任何抗体抗原复合物结合而被激活，但不能与单独的抗体或抗体结合。 补体结合试验是一种有补体参与，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应体系。绵羊红细胞与溶血素结合后可激活补体，导致红细胞破坏，出现溶血现象。参与补体结合反应的五种成分可分为两个系统：(1)待测系统，已知抗原（或抗体）、待测抗体（或抗原）；（2）指示系统，SRBC、溶血素。待检测系统与补体作用后，加入指示系统，若不出现溶血，表示待测系统中的抗原抗体相对应；两者特异性结合形成抗原抗体复合物结合并消耗了补体，无游离的补体与指示系统结合，故不溶血，为补体结合试验阳性。反之，若出现溶血，则为补体结合试验阴性。 实验方法： 1.取五支试管，依次做好标记，放在试管架中。 2.按照下表加样。 实验结果： 结果分析：试管1、5没有发生溶血现象，为补体结合试验阳性，说明其中的抗体抗原发生了特异性结合，消耗了补体；试管2、3、4发生溶血现象，为补体结合试验阴性，说明抗体抗原不对应，没有消耗补体。 1.羊血用前轻轻摇匀，避免剧烈正当引起溶血。 2.各种试剂的吸管不要混用。 3.补体的性质较不稳定，低温保存，加样时再从冰箱里取出。 4.水浴时避免水滴滴进试管。 5.本实验影响因素很多，对照组的反应情况是否正常是判断实验可信度的参照。 实验二人外周血单个核细胞分离 实验原理：常用来分离人外周血单个核细胞的分离液是由聚蔗糖和泛影葡胺按一定比例混合制成。它分子量大又无化学活性，20摄氏度时比重约为1.077kg/L，淋巴细胞和单核细胞比重略小于分层液，为1.070kg/L左右。而粒细胞和红细胞比重大，为1.092 kg/L左右。通过离心，使一定比重的细胞按相应密度梯度分布，淋巴细胞和单核细胞位于分离液的上层，而粒细胞和红细胞沉于离心管的管底，从而将淋巴细胞和单核细胞等单个核细胞分离出来。实验方法： 1.抽取1.5ml静脉血至肝素抗凝管，加入1.5ml Hank’s液 2.混匀后取3ml稀释液，沿试管壁缓慢加入到2ml分离液中。2000rpm,离心20min。 3.小心吸取淋巴细胞层，加入2ml Hank’s液，2000rpm,离心10min。 4.弃上清，加入2ml Hank’s液。2000rpm,离心10min。 5. 弃上清，加入2ml Hank’s液，细胞计数。 实验结果：经淋巴细胞分离液梯度离心后试管中可见明显血细胞分层。由上至下依次为：血浆层、淋巴细胞单核细胞层、分离层、红细胞粒细胞层。镜下观察淋巴细胞，但并未观察到明显细胞。 结果分析：我们最后没有观察到应有的实验现象，实验失败。原因为我们在向分离液中加稀
补体结合试验原理 补体结合试验是一种常用的实验方法，用于检测抗原与抗体之间的相互作用。它基于补体系统的活化和补体蛋白与抗原-抗体复合物的结合反应。本文将介绍补体结合试验的原理及其在科学研究和临床诊断中的应用。 一、补体系统的概述 补体系统是机体免疫系统的重要组成部分，由多种血清蛋白组成。补体系统能够通过一系列酶促反应产生溶菌酶、炎症介质等，参与机体的免疫防御和炎症反应。补体系统的活化途径主要有经典途径、替代途径和凝集素途径。在这些途径中，C3和C4是常用的检测指标，其水平变化反映了补体系统的活性。 二、补体结合试验的原理 补体结合试验是一种体外实验，用于检测抗原与抗体结合的程度。其基本原理是：当抗原与抗体结合后，会形成抗原-抗体复合物。在补体结合试验中，将待测抗原与已知抗体混合，然后加入补体蛋白。如果抗原与抗体结合，复合物将激活补体系统，导致C3和C4的降解和活化。通过检测C3和C4的变化，可以确定抗原与抗体是否结合。 三、补体结合试验的应用 1. 免疫学研究：补体结合试验可以用于研究抗原与抗体之间的相互
作用，探索免疫应答的机制。例如，可以利用该方法鉴定特定抗原的抗体水平，评估免疫反应的强度和效果。 2. 诊断传染病：补体结合试验在传染病的诊断中具有重要意义。例如，肝炎、风疹、风湿热等疾病的诊断可以通过检测相应病原体的抗体水平来完成。 3. 自身免疫性疾病：补体结合试验还可以用于自身免疫性疾病的诊断。例如，系统性红斑狼疮的诊断可以通过检测抗核抗体的结合情况来确定。 4. 药物研发：补体结合试验在药物研发中也有广泛应用。例如，可以用该方法评估新药对特定抗原的结合能力，筛选具有抗体结合活性的药物候选物。 四、补体结合试验的优缺点 补体结合试验具有一定的优点和缺点。其优点包括：实验简单、操作方便、结果可靠。同时，补体结合试验也存在一些缺点，如需要大量的血清样本、结果受其他因素影响较大等。 补体结合试验是一种常用的实验方法，通过检测补体系统的活化来评估抗原与抗体结合的程度。它在免疫学研究和临床诊断中具有重要应用，可以帮助科学家深入了解免疫反应的机制，提高传染病的诊断准确性，促进药物研发的进展。然而，补体结合试验也存在一些局限性，需要进一步的研究和改进。希望未来能够通过不断的探索和创新，提高补体结合试验的敏感性和特异性，为免疫学和临床
补体结合试验的原理及应用 补体结合试验（Complement fixation test，CFT）是一种常用的免疫学试验，广泛应用于临床、动物卫生、微生物学和生化学等领域。本文将介绍补体结合试验的原理、方法和应用。 一、原理 CFT是通过检测抗原-抗体结合后是否影响补体作用来确定是否存在特定抗体的一种免疫学试验。抗原与特异性抗体结合后，形成免疫复合物，该复合物可以与补体结合并激活补体，从而引发一系列补体反应。 而在CFT中，引入两种补体成分：被偶联的抗原与补体激活剂（即受体），以及补体底物（即被激活的补体）。被测血清中如有特异性抗体，可与被偶联的抗原发生结合，使得补体激活剂发生变化，无法与补体底物相结合。因此，测得补体底物与补体激活剂之间无结合，即补体未被激活，则可证明血清中存在特定抗体。 二、方法 1. 试剂与设备 （1）被测血清：取血后离心获取血清； （2）受体：把抗原与抗体偶联在羊红细胞表面，用0.1M苏打缓冲液洗涤去除未偶联的抗原和抗体；
（3）抗原与特异性抗体：比如，细菌、病毒、药物等； （4）补体：常见的有裂解法（Lysed Sheep Erythrocytes，LSE）和搅拌法（Z牛补体）； （5）试管/小瓶/平板：供反应使用； （6）显微镜、离心机等。 2. 步骤 （1）制备试剂：适量的抗原和抗体分别和受体在适宜条件下以一定比例混合，制成一定浓度的大量受体；另需要制备几重稀有度的抗原和抗体梯度稀释物； （2）标准样品制备：以已知抗体滴定值的血清为标准样品，依据其相对滴定值制成浓度为10U的配制液； （3）加样：将待检血清、标准样品及对照血清加到小瓶中，每组加4支小瓶； （4）加试剂：加入适量偶联抗原及补体； （5）反应：置平板中，在37℃恒温箱内孵育数小时，待反应结束； （6）结果判定：利用显微镜观察血清和补体底物与补体激活剂是否结合，判断血清中抗体是否存在。 三、应用 CFT可以测定某一种特定抗体的存在与否，具有特异性、敏感性和准确性等优点。广泛应用于微生物检查、病
第十一章血清学试验 第四节补体结合试验 补体结合试验（complement fixation test）是应用可溶性抗原，如蛋白质、多糖、类脂、病毒等，与相应抗体结合后，其抗原-抗体复合物可以结合补体，但这一反应肉眼不能察觉，如再加入致敏红细胞（溶血系统或称指示系统），既可根据是否出现溶血反应，判定反应系统中是否存在相应的抗原和抗体。参与补体结合反应的抗体称为补体结合抗体。补体结合抗体主要为IgG和IgM，IgE和IgA 通常不能结合补体。通常是利用已知抗原检测未知抗体。 一、基本原理 本试验包括两个系统共五种成分：一为检测系统（溶菌系统），即已知的抗原（或抗体）、被检的抗体(或抗原)和补体；另一为指示系统（溶血系统），包括绵羊红细胞、溶血素和补体。抗原与血清混合后，如果两者是对应的，则发生特异性结合，成为抗原-抗体复合物，这时如果加入补体，由于补体能与各种抗原-抗体复合物结合（但不能单独和抗原或抗体结合）而被固定，不再游离存在。如果抗原-抗体不对应或没有抗体存在，则不能形成抗原-抗体复合物，加入补体后，补体不被固定，依然游离存在。 由于许多抗原是非细胞性的，而且抗原、抗体和补体都是用缓冲液稀释的比较透明的液体，补体是否与抗原-抗体复合物结合，肉眼看不到，所以还要加入溶血系统。如果不发生溶血现象，就说明补体不游离存在，表示溶菌系统中的抗原和抗体是对应的，它们所组成的复合物把补体结合了。如果发生了溶血现象，则表明补体依然游离存在，也就表示溶菌系统中的抗原和抗体不相对应，或者两者缺一，不能结合补体（图11-7）。 二、补体结合试验的基本过程及应用 试验分两步进行。第一步为反应系统作用阶段，由倍比稀释的待检血清加最适浓度的抗原和补体。混合后37℃水浴作用30～90min或4℃冰箱过夜。第二步是溶血系统作用阶段，在上述管中加入致敏红细胞，置37℃水浴作用30～60min，观察是否有溶血现象。若最终表现是不溶血，说明待检的抗体与相应的抗原结合了，反应结果是阳性；若最终表现是溶血，则说明待检的抗体不存在或与抗原不相对应，反应结果是阴性。 补体结合反应操作繁杂，且需十分细致，参与反应的各个因子的量必须有恰当的比例。特别是补体和溶血素的用量。补体的用量必须恰如其分，例如，抗原抗体呈特异性结合，吸附补体，不应溶血，但因补体过多，多余部分转向溶血系统，发生溶血现象。又如抗原抗体为非特异性，抗原抗体不结合，不吸附补体，补体转向溶血系统，应完全溶血，但由于补体过少，不能全溶，影响结果判定。此外，溶血素的量也有一定影响，例如阴性血清应完全溶血，但溶血素量少，溶血不全，可被误以为弱阳性。而且这些因子的量又与其活性有关：活性强，用量少；活性弱，用量多。故在正式试验前，必须准确测定溶血素效价、溶血系统补体价、溶菌系统补体价等，测定活性以确定其用量。
第二节补体结合试验 补体结合试验（complementfixationtest，cft）是用免疫溶血机制做指示系统，来检测另一反应系统抗原或抗体的试验。早在1906年wasermann就将其应用于梅毒的诊断，即著名的华氏反应。这一传统的试验经不断改进，除了用于传染病诊断和流行病学调查以外，在一些自身抗体、肿瘤相关以原以及hla的检测和分析中也有应用。 一、类型及原理 该试验中有5种成分参与反应，分属于3个系统：①反应系统，即已知的抗原（或抗体）与待测的抗体（或抗原）；②补体系统；③指示系统，即srbc与相应溶血素，试验时常将其预先结合在一起，形成致敏红细胞。反应系统与指示系统争夺补体系统，先加入反应系统给其以优先结合补体的机会。如果反应系统中存在待测的抗体（或抗原），则抗原抗体发生反应后可结合补体；再加入指示系统时，由于反应液中已没有游离的补体而不出现溶血，是为补体结合试验阳性。如果反应系统中不存在的待检的抗体（或抗原），则在液体中仍有游离的补体存在，当加入指示系统时会出现溶血，是为补体结合试验阴性（图14-2）。因此补体结合试验可用已知抗原来检测相应抗体，或用已知抗体来检测相应抗原。
图14-2补体结合试验示意图 二、试验方法 补体结合试验的改良方法较多，较常用的有全量法(3ml)、半量法(1.5ml)、小量法(0.6ml)和微量法（塑板法）等。目前以后两种方法应用较为广泛，因为可以节省抗原，血清标本用量较少，特异性也较好。以下叙述以小量法为例，即抗原、抗体、溶血素、羊红细胞各加0.1ml，补体加0.2ml，总量为0.6ml。 （一）试剂 1．抗原试验中用于检测抗体的抗原应适当提纯，纯度愈高，特异性愈强。如使用粗制抗原时，须经同样处理的正常组织作抗原对照，以识别待检血清中可能存在的、对正常组织成分的非特异性反应。2．抗原和抗本的滴定补体结合试验中，抗原与抗体按一定比例结合，因而应通过试验选择适宜的浓
免疫学检验备考版 辛酸/硫酸铵法提纯IgG 在酸性条件下( pH4.5)，血清或腹水中非IgG的蛋白成份(包括白蛋白，部分Ig)，能被辛酸等短链脂肪酸沉淀，上清中剩余的蛋白主要为IgG，再用硫酸铵沉淀上清，即可获得纯度较高的IgG。辛酸/硫酸铵法比硫酸铵法能够获得更高纯度的IgG。 50%溶血试验（CH50）测定补体实验 绵羊红细胞（SRBC），与相应抗体（溶血素）结合后，可激活待检血清中的补体而导致SRBC 溶血。其溶血程度与血清中补体的含量和功能有关。由于补体含量与溶血程度之间呈正相关，但不是直线关系，而呈S曲线关系，故通常取反应曲线中间部位即50％溶血（CH50）为判定终点。由于抗原抗体复合物激活的是补体的经典途径，C1～9任何一种成分缺陷都可使CH50降低，所以此实验反映了总补体的活性。 补体结合试验的基本原理 抗原抗体复合物可以结合补体，这是补体结合试验的依据。绵羊红细胞和其相应抗体（溶血素）的复合物结合补体后出现溶血现象。因此，绵羊红细胞和溶血素被作为补体结合试验中判断待测系统中有无抗原抗体反应的复合物系统。如待测系统产生抗原抗体复合物，则可结合一定量补体，此时加入溶血系统则不出现溶血。如待测系统中只有抗原或抗体，不能结合补体，加入溶血系统则与游离补体结合而发生溶血，这就是补体结合试验的基本原理。 补体结合试验中有5种成分参与反应，分属于3个系统：①反应系统，即已知的抗原（或 抗体）与待测的抗体（或抗原）；②补体系统；③指示系统，即SRBC与相应溶血素， 试验时常将其预先结合在一起，形成致敏红细胞。反应系统与指示系统争夺补体系统， 先加入反应系统给其以优先结合补体的机会。 如果反应系统中存在待测的抗体（或抗原），则抗原抗体发生反应后可结合补体；再加 入指示系统时，由于反应液中已没有游离的补体而不出现溶血，是为补体结合试验阳性。 如果反应系统中不存在的待检的抗体（或抗原），则在液体中仍有游离的补体存在，当 加入指示系统时会出现溶血，是为补体结合试验阴性。因此补体结合试验可用已知抗原 来检测相应抗体，或用已知抗体来检测相应抗原。 单向免疫扩散实验 (1)原理：待测抗原从局部含有定量抗体的凝胶内自由向周围扩散，抗原抗体特异性结合，在两者比例合适的部位，形成白色沉淀环，沉淀环的大小与抗原的浓度呈正相关。 (2)技术要点：将抗体和热融化琼脂(约50%)混合，倾注成平板。待凝固后在琼脂板上打孔，孔中加入已稀释的抗原液，和不同浓度的抗原标准品，置37～12℃温箱，24～48h后观察孔周围沉淀环。量取沉淀环直径，通过抗原标准品，计算待测抗原的浓度。
补体结合试验操作规程 试剂：稀释液（0.85%生理盐水）、补体、溶血素、抗原（由生物制品厂或所提供）、阴阳性血清、2.5%绵羊红细胞悬液、受检血清。（共七种） 材料准备： 1、稀释液（0.85%生理盐水）的配制：8.5g氯化钠加蒸馏水至1000ml。 2、绵羊红细胞悬液的配制：由健康成年公绵羊颈静脉采血，流入灭菌含 玻璃珠的玻璃瓶内，混摇15—20分钟，脱除纤维，使其失去凝固 性。将脱纤血移入离心沉淀管中，加2-3倍量的生理盐水混匀， 以每分2000转的速度离心沉淀10分钟，使红血球下沉，吸弃上 清液，再加生理盐水用玻棒搅匀再离心沉淀，反复三次，直至上 清液透明为止，最后吸弃上清液，所剩沉淀即为红细胞。 按每2.5毫升的沉淀红血球加入到97.5毫升生理盐水中的比例制备，便为2.5%绵羊红细胞悬液。此液配制后在5—100C下，24小时内 可应用。若发现有溶血时，需重新配制。经常做补体结合试验， 就迫切需要能将红血球保存。方法是：将无菌的脱纤维蛋白的绵 羊血与无菌的等量的改良的阿尔塞维尔氏液混合于三角瓶中（用 三角瓶有利于扩大血球与空气的接触面积），置冰箱中冷藏可保存 达两个月。需用时将血球离心洗涤后即可应用。 改良的阿尔塞维尔氏液配法：葡萄糖24.60克，氯化钠5.04克，柠檬酸
钠（含2分子的结晶水）9.6克，蒸馏水1200毫升，10磅10-15 分钟高压消毒后保存。 抗原、标准阳性血清、阴性血清、溶血素、补体、由制标单位提供，按说明书使用。 受检血清的收集和处理：以常规方法采血和分离血清，若发现血清混浊或有血细胞混在时，离心沉淀，每分1000转后将上清液分离出来， 然后用稀释液将血清作1∶10稀释，按下表规定的水浴灭能。 操作方法：1.将1∶10稀释经灭能的受检血清加入2支三分管内，每管 0.5ml。 2.其中一管加工作量抗原0.5ml，另一管加稀释液0.5ml。 3.上述2管均加工作量补体，每管0.5ml，震荡摇匀。 4.置37℃~38℃水浴20分钟，取出放于室温（22℃~25℃）。 5.每管各加2单位的溶血素0.5ml，和2.5%红细胞悬液0.5ml， 充分震荡摇匀。 6.再置37℃~38℃水浴20分钟，之后取出立即进行第一次判定。
补体实验报告 篇一：补体结合试验 第二节补体结合试验 补体结合试验（complementfixationtest，cft）是用免疫溶血机制做指示系统，来检测另一反应系统抗原或抗体的试验。早在1906年wasermann就将其应用于梅毒的诊断，即著名的华氏反应。这一传统的试验经不断改进，除了用于传染病诊断和流行病学调查以外，在一些自身抗体、肿瘤相关以原以及hla的检测和分析中也有应用。 一、类型及原理 自身免疫性溶血，如果有补体参与时，补体通过一系列的激活，最后形成膜攻击复合物（membrane attack complex），它可以直接攻击红细胞膜，导致红细胞破裂，这就是所谓“血管内溶血”。而没有补体参与的免疫性溶血，抗体与红细胞膜上抗原结合后，没有直接把红细胞破坏，而是把红细胞“致敏”，致敏RBC在通过脾脏等网状内皮系统时，被吞噬细胞“吃掉”，这就是所谓“血管外溶血”。 该试验中有5种成分参与反应，分属于3个系统：①反应系统，即已知的抗原（或抗体）与待测的抗体（或抗原）； ②补体系统；③指示系统，即srbc与相应溶血素，试验时常将其预先结合在一起，形成致敏红细胞。反应系统与指示系统争夺补体系统，先加入反应系统给其以优先结合补体的
机会。 如果反应系统中存在待测的抗体（或抗原），则抗原抗体发生反应后可结合补体；再加入指示系统时，由于反应液中已没有游离的补体而不出现溶血，是为补体结合试验阳性。如果反应系统中不存在的待检的抗体（或抗原），则在液体中仍有游离的补体存在，当加入指示系统时会出现溶血，是为补体结合试验阴性（图14-2）。因此补体结合试验可用已知抗原来检测相应抗体，或用已知抗体来检测相应抗原。 图14-2补体结合试验示意图 二、试验方法 补体结合试验的改良方法较多，较常用的有全量法(3ml)、半量法(1.5ml)、小量法(0.6ml)和微量法（塑板法）等。目前以后两种方法应用较为广泛，因为可以节省抗原，血清标本用量较少，特异性也 较好。以下叙述以小量法为例，即抗原、抗体、溶血素、羊红细胞各加0.1ml，补体加0.2ml，总量为0.6ml。 （一）试剂 1．抗原试验中用于检测抗体的抗原应适当提纯，纯度愈高，特异性愈强。如使用粗制抗原时，须经同样处理的正常组织作抗原对照，以识别待检血清中可能存在的、对正常组织成分的非特异性反应。 2．抗原和抗本的滴定补体结合试验中，抗原与抗体按
补体结合试验实验结果分析 补体结合试验是一种有效的抗体识别、鉴定和检测方法，它可以帮助人们快速、准确地鉴定抗原，诊断疾病，提高治疗效率。近年来，补体结合试验技术在生物医学方面得到了广泛应用，它已经发展成为一个重要的生物分析技术。本文将就补体结合试验实验做一个综合分析。 第一，补体结合试验中抗原的检测原理是对比吸附试验，也就是免疫吸附试验。它的基本原理是，抗原和补体发生结合反应，利用补体结合后形成的复合物添加抗体，使补体结合试验的检测抗原达到最大效果。在具体实验中，可以采用不同的血清进行结合，或者用磷酸二铵结合。 第二，补体结合试验的实验内容包括抗原基因组、补体添加量和补体结合试验测量三个部分。在实验前，先选择抗原基因组，然后添加补体以及测量补体结合试验。其中，补体添加量要和抗原基因组相结合，以保证补体结合试验的准确性和可靠性。最后，对抗原补体结合试验测量结果进行分析，以了解试验的结果，同时研究不同的补体添加量对结果的影响。 第三，补体结合试验的实验结果分析需要考虑几个因素，如抗原基因组、补体添加量、抗原补体结合试验测量结果等。同时，实验结果分析中还需要注意实验条件和数据分析方法的选择。如果实验条件不合适或者数据分析方法不当，实验结果的有效性会大大降低。因此，实验结果分析应考虑条件选择和数据分析方法的科学性。
本文综合分析了补体结合试验的技术原理、实验内容和结果分析，为检测抗原提供了重要参考。补体结合试验具有准确性高、灵敏度高、实验简便、成本低等优点，是一种重要的生物分析技术。但是，补体结合试验实验过程中仍有一些需要注意的因素，如实验条件的选择、抗原检测的准确性以及结果分析的科学性问题。因此，在进行补体结合试验时，应该针对这些问题进行综合管理，以保证试验的可靠性和有效性。 总之，随着生物医学技术的进步，补体结合试验将在生物抗原检测方面发挥重要作用。但是，实验结果分析中需要考虑实验条件和数据分析方法的选择等因素，以保证试验的可靠性和结果的有效性。只有把补体结合试验作为一项重要的生物分析技术进行深入研究，才能有效地检测抗原，为诊断和治疗提供有效的技术支持。
补体结合试验 补体是一组正常血清蛋白成分，可被免疫复合物激活产生具有裂解细胞壁的因子。如果该过程发生在红细胞表面上则导致红细胞裂解而出现溶血。利用这种反应来检测血清中的抗体或(抗原)，称作补体结合试验(Complement Fixation Test，CFT)。CFT准确性高，容易判定，对抗原纯化要求不严格，因而普遍用于传染病的诊断。该试验的不足之处是操作繁锁，尤其是对所用试剂的准备和量化要求较严。 (一) 原理CFT包括两个系统，第一为反应系统，又称溶菌系统，即已知抗原(或抗体)，被检血清 (或抗原)和补体。第二系统为指示系统(亦称溶血系统)，即溶血素＋绵羊红细胞，溶血素即抗绵羊红细胞抗体。补体常用豚鼠血清，它对红细胞具有较强的裂解能力。补体只能与抗原－抗体复合物结合并被激活产生溶血作用。因此，如果试验系中的抗原和抗体是对应的，形成了免疫复合物，定量的补体就被结合，这时加入指示系统，由于缺乏游离补体，就不产生溶血，即为阳性反应。反之试验系中缺乏抗原或特异性抗体，不能形成免疫复合物，补体就游离于反应液中，被指示系统，即溶血素＋绵羊红细胞免疫复合物激活，而发生溶血，即阴性反应。为了测定阳性血清中抗体的效价，可将血清作系列稀释，其结果是由完全不溶血逐步达到完全溶血，发生50%溶血的血清最高稀释倍数为该血清的抗体效价。 在进行CFT主试验之前，抗原、补体、绵羊红细胞和溶血素必须经仔细测定。所加补体的量必须准确，补体少导致不完全溶血，出现假阳性结果；反之，超量的补体不能被反应系统的免疫复合物完全结合从而出现假阴性结果。超量的抗原影响补体的结合，抗原不足不能完全结合补体。 在CFT操作中，经常遇到的一个问题是被检血清存在“抗补体作用”。即被检血清在无抗原存在的情况下结合补体。这有多种可能的原因，主要原因是血清取自感染动物，在血清中存在免疫复合物；或者血清被细菌污染，通过其它途径激活了补体。 (二) 分类补体结合试验分直接法、间接法和固相法。 1.直接法如图2-9所示，该法为最常用的操作方法，在试管中加抗原、被检血清和补体，在一定温度下感作一定时间后，加溶血素和红细胞，再感作一定时间后判定结果。直接法又根据试剂量的差异分为常量法和微量法。常量法试剂总量一般为0.5ml。微量法一般为0.125ml。前者在试管内进行，后者在U形底的96孔微量反应板内进行。
溶血反应(hemolytic reaction)与补体结合试验（1） 一、溶血反应 免疫血清与其相应的抗原细胞（血球、细菌及其组织细胞）相遇，并在补体的参与下可出现溶细胞反应。依抗原、抗体的种类不同可有溶血反应、溶菌反应等。 溶菌反应只在某些细菌中出现（如霍乱弧菌）。应用溶血反应是补体结合反应中不可少的因素。溶血反应是由于抗原（红血球）和抗体（溶血素）进行特异性的结合，并吸着了补体，而使红血球在补体的作用下被溶解，于是产生了溶血现象。 1、材料 （1）抗原：2%绵羊红血球； （2）抗体：溶血素； （3）补体：取健康豚鼠血清作为补体； （4）小试管、生理盐水、水浴箱。 2、方法
（1）取小试管3只，按下表加入各物（容量单位为毫升）； （2）将上述3试管放在37℃水浴箱内15—30分钟观察有无凝血现象。 试管2%红血球溶血素（2单位）补体（2单位）生理盐水结果 1 0.5 0.5 0.5 0.5 2 0.4 0.5 —— 1.0 3 0.5 ——0.5 1.0 二、补体结合反应 当抗原与其对应的抗体结合时，所生成的抗原抗体复合物能从溶液中 将补体吸着此即谓补体结合。参与补体结合反应的抗原是透明的溶液，故补体结合现象不能被肉眼看出来，因此必须借助溶血系统（溶血素 及相对应的羊血球）作为指示剂，来判定媒质中有无游离的补体，近 而推定媒质中未知抗原（或抗体）和已知抗体（或抗原）是否进行了 特异性的结合。本反应具有很高的敏感性及特异性，因之常应用于传 染病的诊断，特别诊断病毒疾病和梅毒。 由于参与本反应的各种成分间有着一定量的关系，因此在作本试验之前，必须通过一系列的预备实验来确定各成分的使用量，故本反应的 实验方法较为复杂。 本次实验以伤寒杆菌免疫血清与其相对应的抗原补体结合试验为例。 1、材料： （1）抗原：伤寒的抽出液； （2）抗体：伤寒杆菌的免疫血清；
补体实验的实验原理及应用 补体是一种存在于血液中的分子，是人体免疫系统中的重要组成部分。补体由多种蛋 白质分子组成，包括C1至C9等成分，它们能够通过一系列的反应，产生一系列的效应， 发挥重要的生理功能。为了检测补体的活性和功能，在实验室中开展了一系列的补体实验，其原理和应用在医学、生物学等领域被广泛应用。 补体实验通常基于一系列的反应机制，这些反应机制包括补体级联反应、抗原/抗体 反应以及炎症过程等。在补体级联反应中，初始激活C1的补体酶产生C4b2a复合物，破坏血细胞膜表面的蛋白质和多糖，并吸引其他补体蛋白质的加入，形成复合体，从而导致细 胞破裂和溶解。在抗原抗体反应中，抗体能够结合特定的抗原，激活补体系统，形成补体 -抗原-抗体复合物，从而引发一系列的生化反应，诱导炎症和细胞毒性作用。 补体实验在医学、生物学等诸多领域中得到广泛运用。医学研究中，补体实验被用来 研究免疫反应、病毒感染、自身免疫性疾病、感染性疾病、肝功能等，帮助医生诊断和治 疗这些疾病。生物学研究中，补体实验被用来研究生物膜的破坏机制、免疫细胞的激活与 调节机制、表面抗原的识别与结合等，为疾病的治疗和药物研发提供了重要的科学参考。 补体实验涉及到多个标准实验方法和技术。例如，补体溶血实验是检测血清对外源红 细胞溶血作用的实验方法，可以测定补体的细胞溶解能力；补体结合实验是基于抗原抗体 反应中的补体结合作用，测定补体能否与特定的抗原-抗体复合物结合；补体凝集实验是 一种直观的图像化技术，测定补体是否能够串联反应形成凝集物等。 综上所述，补体实验时一种重要的实验技术，其原理和应用在医学、生物学等多个领 域中得到广泛应用。随着科技的不断发展，新的实验方法和技术也不断涌现，帮助科学家 们更加深入地研究补体和免疫系统，为疾病的治疗和预防提供了更为可靠的理论依据和实 验数据。
包虫病补体结合试验 包虫病补体结合试验介绍： 病原体是棘球绦虫。其幼虫即棘球蚴可寄生于人及其他偶蹄类动物(如羊、牛、猪等)的肺、肝、腹腔等处，引起包虫病。常用卡索尼皮内试验(Cason intraderma l test)进行诊断，亦可采用皮下试验、间接血凝抑制试验、补体结合试验、ELISA 等方法。 包虫病补体结合试验正常值： 阳性：包虫病(早期和晚期常为阴性。术后1年仍为阳性则示复发，若为阴性则示治愈)。 包虫病补体结合试验临床意义： 异常结果： (一)流行病学资料本病见于畜牧区患者大多与狗、羊等有密切接触史。 (二)临床征象上述患者如有缓起的腹部无痛性肿块(坚韧光滑、囊样)或咳嗽、咯血等症状应疑及本病并进一步作X线、超声检查、CT和放射核素等检查以且确立 诊断 (三)实验室检查皮内试验的灵敏性强而特异性差血清学检查中免疫电泳、酶 联免疫吸附试验具较高的灵敏性和特异性，但各种免疫诊断的特异性和敏感性除其本身特征外更受到所有抗原、操作方法、阳性反应标准皮内试验对血清反应的影响，以及患者包虫囊肿所在位置、感染期限与手术后时间和个体免疫应答性等因素的影响。 需要检查的人群：人感染主要与环境卫生以及不良卫生习惯有关患者以农民与牧民为多，兄弟民族远较汉族为多。因包虫囊生长缓慢一般在儿童期感染，至青壮年期才出现明显症状。男女发病率无明显差别 包虫病补体结合试验注意事项： 不适宜人群：身体不适的患者。
检查前要求：体温检测。 检查时要求：告诉医生病史及体征。因为早期临床表现不明显，往往不易发觉。疾病与居住地和是否有与狗接触有关。 包虫病补体结合试验检查过程： (一)血象嗜酸粒细胞增多见于半数病例。一般不超过10%偶可达70%。包虫囊 肿破裂或手术后，血中嗜酸粒细胞每有显著增高现象。 (二)皮内试验以囊液抗原0.1ml注射前臂内侧，15～20分钟后观察反应。阳性者局部出现红色丘疹，可有伪足(即刻反应)。2～21/2小时后始消退。约12～2 4小时继以红肿和硬结(延迟反应)。当患者血液内有足量抗体存在时。延迟反 应常不出现在单纯性病例，即刻反应和延迟反应均呈阳性。在穿刺、手术或感染后即刻反应仍为阳性。但延迟反应被抑制。皮内试验阳性率在80%～90%之间。但可出现假阳性。其他寄生虫，特别是带绦虫病等有较高的非特异性反应。交叉反应还可见于恶性肿瘤、腹腔结核。 (三)血清试验血清免疫学试验用以检测病人血清抗体。试验方法多种， 但以间接血凝试验和酶联吸附最为常用。阳性率约90%左右，亦可出现假阴性或假 阳性反应。肺囊型包虫病血清免疫学试验阳性率低于肝囊型包虫病。补体结合试验阳性率为80%。约5%呈假阳性反应(本病与吸虫病和囊虫病之间有交叉免疫现象)。 其它尚有乳胶凝集、免疫荧光试验。可视具体情况选用。 (四)影象诊断包括X线检查、超声检查、CT和放射核素扫描检查等。上述检查虽均为诊断包虫病的重要手段。但在判断结果时，应相互结合并进行全面分析才有助于诊断。如胸片有助于肺包虫病的定位。肝包虫病者在肝CT上显示大小不等的圆形或椭圆形低密度影。囊肿内或囊壁可出现钙化，低密度影边缘部分显示大小不等的车轮状圆形囊肿影。提示囊内存在着多个子囊，B型超声检查有助于流行 区人群包虫病的普及。手术前包虫囊肿的定位以及手术后的动态观察。
第十九章补体检测及应用 补体是一组存在于人和脊椎动物血清、组织液或某些细胞膜上的具有酶样活性、不耐热的糖蛋白。补体不是单一成分，其在功能效应上是以连续反应的程序进行的，故又称补体系统。补体系统广泛参与机体的抗感染防御反应及免疫调节，也可介导免疫病理的损伤性反应，是体内具有重要生物学作用的效应放大系统。补体的存在与抗原性异物的刺激无关，在正常人血清中，其含量相对稳定，但在某些疾病发生时，补体的含量及其活性可发生改变。因此，补体含量与活性的检测，对机体免疫状态的评价和疾病的诊断具有重要意义。 第一节概述 一、补体成分的含量与理化特性 （一）补体成分的含量：补体大多为糖蛋白，属于β球蛋白，C1q、C8等为γ球蛋白，C1s、C9为α球蛋白。C3含量最高。 （二）补体的理化特性：补体的性质不稳定，易受各种理化因素的影响，加热、紫外线照射、机械振荡、酸碱和酒精等因素均可破坏补体。在-10℃活性保持3～4天，冷冻干燥可较长时间保持其活性，加热56℃30分钟灭活（灭能），故补体活性检测应尽快进行。标本保存应置于-20℃以下。 二、补体的活化途径 补体蛋白通常以活化蛋白前体存在于体液中，在不同激活物的作用下，补体各成分可循不同的途径依次被活化，形成一系列级联反应，表现出生物活性，最终导致溶细胞效应。 1.经典途径：以抗原-抗体复合物结合C1q启动激活，是抗体介导的体液免疫应答的主要效应方式。 2.MBL途径：是甘露聚糖结合凝集素（MBL）结合至细菌启动的途径。其诱导物或激活剂是机体的炎症反应急性期时相性蛋白产生的MBL和C反应蛋白等，后者与病原体结合而启动绕过C1的MBL途径。 3.旁路途径：是通过微生物表面等膜性物质，从C3开始，由B因子、D因子参与激活过程，也称第二途径、旁路途径。这种激活方式不依赖于特异性抗体的形成，在感染早期可为机体提供有效的防御机制。 在机体抗感染过程中，首先活化和发挥作用的补体途径，是不依赖抗体的旁路途径和MBL途径。而在特异性抗体产生时，经典途径方可发挥作用。 第二节补体总活性测定 血清补体总活性的测定，是对激活后补体最终效应的检测方法，可借此反映补体的整体功能。以红细胞的溶解为指示，以50%溶血为判断终点，故称CH50。包括：基于经典途径的CP-CH50和应用于C3旁路检测的AP-CH50。CP-CH50是临床常规进行的补体总活性检测项目。通常述及的CH50系指CP-CH50。 一、CH50测定法的原理 补体最主要的活性是溶细胞作用。特异性抗体与红细胞结合后可激活补体，导致红细胞表面形成跨膜小孔，使胞外水分渗入，引起红细胞肿胀导致溶血。补体溶血程度与补体的活性相关，但非直线关系。溶血反应对补体的剂量依赖呈一特殊的S形曲线。以溶血百分率为纵坐标，相应血清量为横坐标。S形曲线在30%～70%之间几乎呈直线，即曲线此阶段对补体量的变化非常敏感。因此，实验常以50%溶血作为终点指标，它比100%溶血更为敏感，这一方法称为补体50%溶血实验，即CH50。 二、CH50测定方法 1.红细胞浓度的调整