The determination of antibiotic and pesticide residues in foods： sample
preparation for LC-MS analysis
Abstract: In this article, we will discuss SPE strategies prior to tandem LC/MS analysis for sub-ppb determination of chloramphenicol, nitrofuran antibiotic metabolites, and other related substances in animal tissues and in honey. Sample preparation for LC-MS analysis to determinate of antibiotic and pesticide residues in foods is reviewed and prospected .
Key words: antibiotic and pesticide residues , food , sample preparation , LC-MS
食品中抗生素和农药残留分析：用于LC－MS分析的SPE样品前处理方法
Waters公司赵维国
摘要：本文将讨论LC-MS分析之前，动物组织和蜂蜜中残留物质的样品前处理策略，其中包括ppb级氯霉素、喹诺酮类、硝基呋喃代谢产物和其它相关物质的固相提取（SPE）方法。对食品中抗生素和农药残留的LC－MS分析的SPE样品前处理方法进行综述和展望。
关键词：抗生素和农药残留，食品，样品前处理，LC-MS
食品中抗生素和其它兽药残留目前正在全球范围内受到广泛的重视。对于农药和兽药残留的分析而言，所需达到的要求通常取决于毒理学评估的结果，而所期望达到的定量限(LOQ)与合法注册的农业化学品的最大允许残留限量相关。近年来更加令人担心的是畜牧业和渔业生产中违规非法使用的某些抗生素残留。这些抗生素没有允许的残留限量，任何被禁用抗生素的存在皆可作为犯罪活动的证据。本文将讨论串联LC-MS分析之前动物组织和蜂蜜中残留物质的SPE样品前处理策略，其中包括ppb级氯霉素、氟喹诺酮类、硝基呋喃代谢产物和其它相关物质的SPE提取方法。对食品中抗生素和农药残留的LC－MS分析的SPE样品前处理方法进行了综述和展望。
1固相提取方法
SPE的优势
SPE是样品前处理的重要手段。与液液萃取相比，SPE方法简单、快速、重现性好且比较容易实现自动化，是近年来应用非常广泛的样品前处理技术之一。SPE技术能够有效地净化和浓缩样品，不仅提高检测灵敏度，延长色谱柱寿命，而且能够延长LC-MS系统珍贵的开机时间。
SPE吸附剂：Oasis吸附剂的选择
Oasis吸附剂是Waters公司1996年起推出的SPE产品，是Waters继其在业界首推Sep-Pak固相提取产品后，又一个划时代的SPE品牌。Oasis吸附剂目前有反相机理(HLB)、阳离子交换与反相混合机理(MCX)、阴离子交换与反相混合机理(MAX)、弱阳离子交换与反相混合机理(WCX)、弱阴离子交换与反相混合机理
(WCX)五种类型，分别适合于多种未知有机物及碱性、酸性物质的提取 (参见图1：Oasis 吸附剂选择图)。
图1 Oasis 吸附剂选择图
2 用于LC-MS 分析的SPE 方法开发示例
2.1 牛肉中氟喹诺酮类(Fluoroquinolone)药物的SPE 方法开发
氟喹诺酮类药物主要用于预防和治疗动物疾病[1，2]，少量使用对动物生长有一定的促进作用。但是过量使用或使用不当会造成这类药物在畜产品中的长期残留。而这类残留的药物对人的中枢神经系统会造成不良影响[3]，因此，欧盟、北美等国家规定：氟喹诺酮类药物在动物源性食品中的最高限量不得超过10~400µg/kg 。
表1 喹诺酮类药物的最大残留限量(MRL) [7]
下面以恩诺沙星为例，介绍如何根据化合物的结构特点，选择样品前处理所用的SPE 小柱和优化提取方法。
图2 恩诺沙星的结构式
恩诺沙星是一个两性化合物，同时具有酸性和碱性特征：酸性官能团的pKa ≈ 5，碱性官能团的pKa ≈ 8-9。恩诺沙星在水中溶解度也与pH 有关：中性条件下微
残留标记物
动物种类 目标组织 MRL(µg/kg) 达诺沙星（Danofloxacin ）
牛（Bovine ） 猪（Porcine ） 鸡（Chicken ） 肉（Muscle ） 肝脏（Liver ） 肾脏（Kidney ） 200 400 环丙沙星（Ciprofloxacin ） 恩诺沙星（Enrofloxacin ）
牛（Bovine ）
肉（Muscle ） 肾脏（Kidney ）
30
200
溶，在酸性或碱性条件下溶解度较好。因此，可以选用离子交换吸附剂提取。当pH>6 时，使用阴离子交换填料提取，pH<6 时，使用阳离子交换填料提取。目前Waters开发了的单柱和双柱串联两种净化法用于氟喹诺酮类药物的SPE样品前处理。
单柱净化法：使用Waters公司的Oasis MAX（6cc/500mg, 186000865）固相提取小柱。首先称取2g牛肾脏，用30mL 50 mM 磷酸盐缓冲液(pH 7.4)提取，再以10000 rpm速度离心10分钟，取上清液，进行SPE净化。
SPE净化操作步骤如下：
1）活化、平衡SPE小柱：1 mL 甲醇, 1 mL 5 M NaOH和1 mL 水
2）上样：5 mL的离心上清液
3）第一步清洗：1 mL 5 % 氨水
4）第二步清洗：1 mL 甲醇
5) 洗脱：3 mL 4 % 甲酸甲醇溶液
6) 挥干溶剂，用0.4mL 流动相重新定容
氟喹诺酮类药物的分析可以用LC/MS或LC/荧光检测方法，本次实验中使用Waters /Micromass Quattro micro API™ (MS/MS)系统，最低检测限（LOQ）可低于20 µg/kg[4]。
LC分离条件
等度分离：LC-UV, LC－荧光
色谱柱：Atlantis™ dC18，5 μm，4.6 x 150 mm
流动相：75% NFPA(0.2%) 水溶液，3% 甲醇，22% 乙腈流速： 1.2 mL/min
温度： 30 °C
进样体积：30-80 μL 梯度分离：LC-APCI MS
色谱柱：Atlantis™ dC18，5 μm，4.6 x 150 mm 流动相：A: 0.2% NFPA*水溶液 B: 甲醇
梯度：线性, 在10分钟内 40% B到80% B
流速： 0.8 mL/min
温度：30 °C
进样： 30-80 μL
*NFPA 为C4F9-COOH
图3 牛肾脏中9种加标氟诺酮类药物SPE提取后的LC/MS/MS 分析
此方法已用于合法注册的允许使用抗生素的残留分析。可以看到，经过单柱SPE 净化、提取，可以得到较好的分析结果。
此外，Waters 还开发了能够去除更多干扰物质，得到更干净本底的双柱串联SPE 净化法。同样是根据被测物的两性特性，样品先通过Oasis MAX 小柱（6cc 150 mg ，186000370），选择性地保留两性的目标化合物，清洗去除碱性和中性干扰物质。然后，将从第一根SPE 小柱得到的洗脱液，经过Oasis MCX 小柱（1cc 30 mg ，186000254），再次选择性地保留目标化合物，清洗去除弱酸性干扰物，流程见图4。
加标浓度（ng/g ） 洛美沙星Lomefloxacin 达诺沙星Donofloxacin 氧氟沙星Ofloxation 氟甲喹Flumaquine 诺氟沙星 Norfloxacin 10 76.9[6.5] 75.5[7.7] 85.3[6.2] 75.0[13.5] 70.2[8.2] 100 87.8[5.3] 77.5[7.3] 91.9[7.7] 68.0[6.8] 75.7[5.9]
加标浓度（ng/g ） 依诺沙星Enoxacin 环丙沙星Ciprofloxacin 恩诺沙星Enrofloxaxin 沙拉沙星Sarafloxcin 10 69.4[11.0] 70.2[11.3] 73.3[21.3] 71.9[10.9] 100
78.7[7.6]
80.5[4.7]
108.4[5.6]
82.0[5.5]
图4 牛肾脏中氟喹诺酮类药物的双柱串联SPE 提取流程
图5 牛肾脏中氟喹诺酮类药物的SPE 提取结果对比
表2 9种氟喹诺酮类药物的回收率及相对标准偏差结果（n=5）
从图5可以看到双柱串联SPE法净化的样品本底更加干净，只是回收率略有降低。可见，选择性各异的SPE小柱和优化的SPE方法为样品前处理提供了更多的选择。
2.2虾中氯霉素(Chloramphenicol)的检测[5]
氯霉素的过度使用会使细菌逐渐产生抗药性。动物性食品中的氯霉素主要来源于带有抗生素的饲料或治疗时使用的抗生素。目前，美国、加拿大、英国等国已经明令禁止在食用动物中使用氯霉素，食品中发现任何氯霉素残留即为违法。氯霉素的最低定量限小于或等于100 ng/kg (0.1 ppb)。
氯霉素微溶于水（2.5 mg/mL），易溶于甲醇，乙酸乙酯，乙醇和丙酮，不溶于 (正)己烷，其结构如下：
图6 氯霉素结构式
美国FDA2003年的提取方法：1）乙酸乙酯（含2%氨水）提取组织中的氯霉素；2）挥干溶剂，并用0.05%醋酸溶解残留物；3）正己烷多次液液萃取；4）SPE C18小柱进行净化，甲醇洗脱，挥干。用水溶解，过滤。该方法的缺点是：用正己烷进行多次的液液萃取。
Waters 公司充分利用Oasis® HLB 小柱独特的富集和净化能力，避免液液萃取繁琐复杂的操作以及正己烷的使用，开发出适合LC/MS分析的操作简单、回收率高、步骤少的净化方法，而且该方法更容易标准化，具体操作如下：1）用乙酸乙酯（10+5ml）提取虾组织（5g），挥干溶剂
2）用1mL 50：50 甲醇/水溶解残留物
3）用20mL水稀释上述溶液，振荡或超声后，离心。
4）取上清液，通过Oasis® HLB 小柱（6cc ，200mg ，WAT106202），30%甲醇水溶液清洗，80%甲醇水溶液洗脱
5）挥干洗脱溶剂，用流动相重新定容，过滤，待测。
2．3 蜂蜜中硝基呋喃类药物代谢产物(Nitrofuran metabolites)[6]
硝基呋喃类药物是欧盟国家禁止使用的一类兽药，包括呋喃它酮、呋喃唑酮、呋喃西林和呋喃妥因等。由于硝基呋喃类药物在动物体内容易代谢，因而在其生理基质中很少发现该类药物的原药，检测的目标化合物通常为它们与组织中蛋白结合的代谢产物：5-甲基吗啡-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ)，3-氨基-2-唑烷基酮(AOZ)，氨基脲(SEM) ，1-氨基-乙内酰脲(AHD)。硝基呋喃类化合物结构特点以呋喃它酮（Furaltadone ）为例。
图7 呋喃它酮结构式
蜂蜜样品中，4种代谢产物会与蜂蜜中的糖结合，给样品前处理造成一定难度，而且目标检测物1-氨基-乙内酰脲为酸性化合物，其提取容易受蜂蜜中的酸性多酚类化合物的干扰。因此，采用双柱串联SPE 法净化和提取蜂蜜中硝基呋喃代谢产物，操作步骤参见图8。
由上面流程图可见，首先用5 mL 0.12 M HCl 溶液稀释2g 蜂蜜样品，然后上样至第一根Oasis HLB 小柱（3cc/60mg ，WAT094226
），保留的物质为多酚类组
图8 双柱串联净化蜂蜜中硝基呋喃代谢产物的流程图
分、蜂蜡(waxes)以及有机污染物，而未衍生的呋喃它酮代谢产物和糖不在小柱上保留。因此，定量收集第一根SPE小柱上的上样溶液和清洗液。之后，向其中加入300 µL50 mM邻硝基苯甲醛的DMSO衍生溶液，在37°C下水解和衍生18小时，再用6 mL 0.1 M K2HPO4将样品调节至pH 7后，上样至第二根Oasis HLB小柱（3cc/60mg，WAT094226），去除其它极性干扰物质，以便得到更干净的蜂蜜样品用于LC-MS分析。
值得一提的是，本方法是在衍生前将样品通过第一根Oasis®HLB小柱将多酚类物质吸附在小柱上，硝基呋喃类化合物的代谢产物被洗脱下来。在第二根Oasis®HLB小柱上衍生后的代谢产物进行富集和净化。从第一根Oasis®HLB上的得到的洗脱液为有效去除多酚类干扰物的蜂蜜样品，不仅有助于下一步衍生反应结果的一致性，而且使用的衍生剂更少。
LC条件：
系统：Waters Alliance™ 2695 分离单元
色谱柱：XTerra MSC18, 3.5 µm, 2.1 x 100 mm
流动相：70% 20 mM 甲酸铵 pH 4.0，30 % 乙腈
流速：0.2 mL/min
温度：30°C
进样体积：20 µL
加标浓度： 400 ng/kg
MS/MS条件：
质谱检测器：Waters Micromass Quattro Micro™
表3 硝基呋喃代谢物的LC-MS分析条件
待测物MRM 锥孔电压/V 碰撞电压/V
AOZ 236→134 28 12
AMOZ 335→291 28 12
249→178
SEM 209→192 25 10
图9 蜂蜜样品中硝基呋喃类代谢物经SPE提取后的LC-MS谱图
表4 不同蜂蜜样品SPE净化后的相对标准偏差（RSD）结果比较
（加标浓度为500 ng/kg）
待测物蜂蜜样品1 RSD(%) 蜂蜜样品2 RSD(%) LOQ(ng/kg)
SEM-HCl 9.8 9.7 200
AOZ 13.9 9.6 200
AMOZ 3.8 2.9 200
AHD-HCl 14.0 3.8 300
从表4可见加标浓度为500ng/kg的蜂蜜样品经过双柱串联Oasis SPE小柱净化后具有良好的重现性。
2．4百草枯(Paraquat)和敌草快(Diquat)的研究进展
百草枯和敌草快是使用率非常高的农药，据USGS1997年的估算，除草剂百草枯的使用量超过3,000,000磅，敌草快的使用量超过200,000磅。因为它们强阳离子交换需要高盐来洗脱，这些季铵盐类的化合物对于传统的SPE和LC/MS分析具有挑战性。Waters公司新开发的Oasis WCX和Atlantis HILIC是这类化合物SPE和LC/MS 分析的理想工具。本实验将两者结合，实现ppt级的LC/MS分析。
图10 百草枯和敌草快的结构式
Oasis WCX对河水中百草枯和敌草快的样品前处理步骤[7]
1）分别用1mL甲醇和1mL水活化和平衡Oasis® WCX 固相提取小柱(3cc/60mg Oasis® WCX，186002497)
2) 将20mL经过处理的河水样品上样至小柱
3）分别用1mL 1M pH7的磷酸盐缓冲液，1mL水和1mL甲醇清洗小柱
4）用1.5 mL乙腈∶水∶三氟乙酸( 84:14:2)混合溶液洗脱目标组分
5) 用流动相定容至0.5mL，待用
LC分离条件
色谱柱: Waters Atlantis™ H ILIC, 2.1 x 150 mm
流速: 0.4 mL/min
流动相: 40% 乙腈，60% 缓冲液水溶液 pH 3.7(250mM 甲酸铵)
柱温: 30 o C
样品温度: 30 o C
进样体积: 10 µL
MS条件：
表5 百草枯和敌草快的质谱分析条件
化合物分子量MRM 锥孔电压碰撞能量
百草枯261 171>77 40 35
171>155 40 35
敌草快319 183>157 40 30
183>168 40 35
图11 河水中的百草枯和敌草快SPE提取后的LC-MS分析结果
在本试验中，以pH=7上样，目标样品吸附在固定相上，分别洗去碱性和中性杂质，然后在酸性条件下，将目标样品洗出来。
3 问题与展望
随着各国对食品安全的重视和高灵敏度分析仪器的开发和使用，尤其是高灵敏度的LC-MS的出现，对于食品安全分析中样品前处理技术中关于速度、灵敏度和回收率的要求也越来越高。相对传统前处理方法，固相萃取技术显然是目前最符合这一要求的方法，而且不断开发的固相吸附剂和扩展的分离机理，为这一技术的普及应用无疑会起到推动作用。很多人认为固相萃取的成本较传统方法高。但如果我们考虑操作时间和前处理技术对后续分析仪器的影响，固相提取技术则有更好的性价比。同时SPE提供更好的方法稳定性(robustness)，更有利于方法的标准化。
目前超高效液相色谱系统（Ultra Performance LC System –ACQUITY UPLC™）已经商品化，其技术的主要特点是以更小颗粒度填料的色谱柱来提高分离速度和分离效率。相信随着UPLC技术的不断应用，配合高效、快速的前处理方法，残留分析的灵敏度、分离度及效率将提升到一个前所未有的新水平。
根据本文讨论的串联LC-MS分析之前的动物组织和蜂蜜中残留物质的SPE样品前处理策略，其中包括次ppb级氯霉素、氟喹诺酮类、硝基呋喃代谢产物和其它相关物质的SPE提取方法。我们可以展望在未来的一段时间里将现有的SPE技术更广泛的应用于食品开发，将是科研工作者的主要工作。同时开发出更广泛用途的SPE产品，也将是各仪器厂家的开发方向。
参考文献
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兽药残留判定标准 一、介绍 兽药残留是指兽药在畜禽体内或养殖环境中残留的量。兽药在畜禽养殖过程中的使用是为了预防、控制和治疗动物疾病，提高畜禽的生产效益。然而，过量或不当使用兽药会导致兽药残留，可能对人体健康造成潜在风险。 为了规范兽药残留的管理和监测，许多国家和地区制定了兽药残留判定标准。本文将深入探讨兽药残留判定标准的相关内容，包括标准的制定原则、判定方法和应用。 二、制定原则 制定兽药残留判定标准的主要原则如下： 1.安全性原则 兽药残留判定标准应保证食品中的兽药残留量不会对人体健康造成危害。标准的制定应参考有关药物和毒理学研究的最新成果，确保判定标准的科学性和可信度。 2.风险评估原则 兽药残留判定标准的制定应基于科学的风险评估结果。风险评估需要考虑兽药的用途、使用模式、暴露途径和暴露水平等因素，以确定合理的残留量。 3.可行性原则 兽药残留判定标准应考虑监测和检验技术的可行性。标准应具备可操作性和有效性，以便于畜禽养殖者和监管机构进行监测和检测工作。 4.国际合作原则 兽药残留标准的制定应依据国际规范和国际最佳实践。国际合作可以促进标准的统一和交流，有利于保障食品安全和促进贸易。
三、判定方法 兽药残留的判定方法主要包括理论计算和实验测定两种途径。 1.理论计算方法 理论计算方法基于疾病病原学、药物代谢学和毒理学知识，通过建立数学模型预测兽药在动物体内的残留量。这种方法需要充分考虑兽药的药代动力学、代谢途径和排泄机理等因素，并结合兽药的剂量、频次和持续时间等使用信息。 2.实验测定方法 实验测定方法是通过实际检测样品中的兽药残留量进行判定。该方法包括样品制备、提取、纯化和定量等步骤。常用的实验测定方法包括高效液相色谱法、气相色谱法和质谱法等。 四、应用 兽药残留判定标准的应用主要涉及兽药管理、食品安全和贸易等方面。 1.兽药管理 兽药残留判定标准是指导兽药使用和管理的重要依据。通过执行标准，可以限制兽药的滥用和过量使用，保护动物健康和人体安全。 2.食品安全 兽药残留标准的执行有助于保障食品安全。合理控制兽药残留量可以减少人体对兽药的暴露和风险，确保食品不含有害物质。 3.贸易 兽药残留标准对于贸易也具有重要意义。许多国家和地区对进口食品的兽药残留量有限制要求，执行标准可以提高出口食品的合规性，促进国际贸易。
海参兽药残留检测方案 概述 海参是一种珍贵的海产品，因其营养丰富而备受青睐。然而，为了增加收益，一些不法分子可能会在养殖和加工过程中滥用兽药，导致海参中残留药物超标。为了确保消费者的食品安全，海参兽药残留检测成为保障品质的关键环节。本文档将介绍一种海参兽药残留检测方案，以帮助相关部门和企业进行有效的检测工作。 检测目标 海参兽药残留检测方案的主要目标是检测海参中可能存在的兽药残留物，并判断其是否超过卫生标准限值。常见的兽药残留物包括抗生素、激素、抗寄生虫药物等。通过建立科学、准确的检测方法，可以及时发现并防止兽药残留对人体健康带来的风险。 检测方法 海参兽药残留检测可以采用多种方法，包括物理检测、化学检测和生物学检测等。以下是一种常用的检测方法流程： 1.样品提取：将海参样品制备成适合检测的形式，包括打碎、研磨、溶 解等步骤。 2.样品预处理：根据目标兽药残留物的特点，选择合适的预处理方法， 如固相萃取、液液萃取等，以提高检测灵敏度和准确性。 3.检测方法选择：根据兽药残留物的特性和检测要求，选择合适的检测 方法，如高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）、质谱法（MS）等。 4.样品分析：使用选定的检测方法对样品进行分析，获得兽药残留物的 含量数据。 5.数据处理与结果判定：对分析结果进行统计和处理，判断兽药残留物 是否超过卫生标准限值，给出合格或不合格的判定结果。 质量控制 为了确保海参兽药残留检测结果的准确性和可靠性，需要进行严格的质量控制措施。常见的质控方法包括：
1.样品空白：在每批样品中加入一定量的空白样品，用于检测分析过程 中可能引入的背景干扰物。 2.标准曲线：使用已知浓度的标准物质制备标准曲线，以进行定量分析， 并评估分析方法的准确性和线性范围。 3.内标法：引入一个内标物质，用于定量分析过程中的校正和校准。 4.质控样品：在每批样品中加入确定浓度的质控样品，用于监控分析质 量和仪器性能。 结论 海参兽药残留检测是确保海参产品安全的重要环节。通过建立科学、准确的检 测方案，并严格执行质量控制措施，可以有效预防兽药残留问题，并保护消费者的健康。本文介绍的海参兽药残留检测方案提供了一种可行的检测方法流程，并强调了质量控制的重要性。希望该方案能够为海参行业相关部门和企业提供参考，提高海参产品的质量和安全水平。
食品中兽药残留的检测技术（常 用版） (可以直接使用，可编辑完整版资料，欢迎下载） 一、
食品中兽药残留的检测技术 我国食品安全检测主要应用技术的研究及现状 食品工业科技VOL24，（12），2003张志洁林清玉 现状分析 随着集约化畜牧业的发展，兽药的作用范围也在扩大，有的药物如抗生素、磺胺药、激素等已广泛用于促进畜禽的生长、减少发病率和提高饲料利用率、促进同期发情。在饲料添加剂中，抗生素用量占有相当大的比重。兽药的广泛应用使畜牧业在增产的同时，也带来了兽药残留的问题。八十年代，欧美等国已开始建立了兽药残留检测体系，并制定了较为完善的兽药用量、休药期及有关法律法规。我国兽药残留检测体系尚不够完备，时常发生因畜产品中药物残留超标而被外国拒绝进口的事件，给我国农产品出口造成很大的经济损失。 “十五”期间，我国将重点加强兽药监察体系和兽药残留检测体系的建设。农业部每年投入1755 万元用于兽药残留监控，发展了近75 种单个兽药在饲料监控和动物源食品中残留的测定方法。国家质检总局每年也投入大量资金，针对出口和欧盟监控的需要，建立一些兽药残留的检测方法。但对于某些禁用兽药（主要是")兴奋剂和激素），其分析方法的灵敏度尚不能满足需要，或大量监控的成本难以承受。 克伦特罗（瘦肉精）的检测方法 欧盟和美国FDA立法禁止克伦特罗在肉用畜禽中的使用;规定牛和马肝中的最大残留限量必须小于0.5µg/kg。我国2001年也实施了鲜冻禽产品不准检出克伦特罗的标准。对于克伦特罗，农业部已经颁布了采用高效液相色谱筛选和气)质联机验证的饲料测定方法（NY428-2001），但未使用国际认可的确证方法（稳定性同位素稀释技术）。卫生部组织了肉中克伦特罗中毒控制方法的探索研究，营养与食品安全所和北京市疾病控制中心分别建立了HPLC-紫外与电化学检测方法和GC-MS 方法，正在探索HPLC-MS/MS串联检测方法。营养与食品安全所、南京农大、华中农大和河南农科院均进行了ELISA试剂盒国产化的研究。但是，用HPLC或GC-MS 检测克伦特罗处理步骤复杂，费用昂贵，制约了其大量推广使用。在国内，河南农业科学院生物技术研究所与河南百奥生物工程应用单克隆抗体，研制出具有自主知识产权的盐酸克伦特罗快速检测试剂盒和试纸条，已在全国推广应用。上海赛群生物科技、上海复博软件科技均有克伦特罗酶免疫检测试剂盒出售。国内流通的进口产品有德国拜发公司的 R-BIOPHARM 及英国RANDOX公司的ELISA检测试剂盒。 氯霉素的检测方法 测定氯霉素可以用生化方法，但这些方法的灵敏度偏低0.5-1µg/kg），大多情况下主要采用GC和HPLC及色质联用的方法，也有薄层色谱法的报道，但过程繁琐，显色复杂。美国食品药物管理局FDA最近通报了美方现行的氯霉素检测方法：用CHARM-II方法筛选，用LC-MS 方法进行确认，检测限量由原来的5µg/kg降为现在的1µg/kg，再降为0.3µg/kg，且FDA正在研究应用更敏感的方法，可使检测限达到0.1µg/kg。国内正在加紧对氯霉素快速检测的研究开发，如华中农大的石德时等建立了氯霉素的间接竞争ELISA 法，湖南长沙的福科特生物化学已经在出售氯霉素免疫检测试剂盒。 兽药残留引起的食品污染不仅与公众的健康密切相关,而且直接影响产业界的经济利益和国际贸易,已成为公认的农业和环境问题。20 世纪70 年代以来,畜牧业生产中抗生素、抗菌素、生长促进剂的广泛使用,食品中药残的问题已经相当普遍。尽管残留的水平通常很低,发生急性中毒的可能性极小,但这种长期、低水平的接触方式产生的各种慢性、蓄积毒性,如
兽药残留实验设计方案 兽药残留实验设计方案 一、实验目的： 研究不同兽药残留对动物体内的影响，评估其对畜禽产品质量与安全的影响。 二、实验设计： 1. 实验动物选择：选择健康的实验动物，如小白鼠、家兔等。 2. 兽药选择：选择常用的兽药，如抗生素、抗寄生虫药物等。 3. 实验组设计：分为不同剂量组和不同时间点组。 a. 剂量组设计：将实验动物随机分为低剂量组、中剂量组和 高剂量组，分别注射相应剂量的兽药。 b. 时间点组设计：将同一剂量组的实验动物分别在给药后的 不同时间点（如1小时、3小时、6小时等）进行取样。 4. 对照组设计：同时设置空白对照组，不给予兽药注射。 5. 取样方法：给药后的相应时间点，采用无菌穿刺器具取样，如采血或采集组织样品。 6. 样品处理：采集的样品进行相应的处理，如血液样品进行离心分离血浆或血清，组织样品进行切割或均质处理。 7. 兽药残留检测：使用相关的兽药残留检测方法，如高效液相色谱法（HPLC）、液相质谱法（LC-MS）等。 8. 数据分析：将样品检测结果进行记录和分析，比较不同组别和时间点之间的差异。 三、实验步骤： 1. 动物饲养：提前将实验动物进行适应饲养，确保其健康状态。
2. 兽药准备：根据实验设计，准备相应兽药和药剂，按照剂量组和时间点组进行标记。 3. 给药操作：按照实验设计，分组给药，记录给药时间和剂量。 4. 取样操作：按照实验设计，选择相应时间点进行样品采集，采用无菌操作。 5. 样品处理：将采集的样品进行标注并进行相应处理，如离心、切割或均质等。 6. 兽药残留检测：采用相应的检测方法，对样品中的兽药残留进行检测。 7. 数据记录和分析：将检测结果进行记录，并进行数据分析，比较不同组别和时间点之间的差异。 四、实验安全： 1. 实验操作：实验过程中需严格遵守实验室操作规范，使用相关防护手套和眼镜等个人防护装备，避免药物直接接触皮肤或口腔。 2. 剂量控制：兽药剂量选择合适的剂量，避免给予过高浓度的兽药产生严重的毒副作用。 3. 剂量调整：如实验动物出现异常情况，需根据情况调整剂量或停止给药，确保动物的生命安全。 五、实验预期结果： 通过实验可以获得不同兽药残留浓度和时间对实验动物体内的影响情况，从而评估兽药残留对畜禽产品质量与安全的影响程度。这对合理使用兽药、确保畜禽产品安全具有重要参考价值。
食品中的兽药残留及其监测方法食品安全是人们关注的重要问题之一，其中兽药残留在食品中的存 在引起了广泛关注。兽药残留是指在养殖和养育过程中，为了防治动 物疾病，使用兽药后残留在食品中的化学物质。本文将探讨食品中的 兽药残留问题，并介绍一些常用的监测方法。 一、兽药残留对食品安全的影响 食品中的兽药残留可能对人体健康产生严重影响。兽药残留可能对 人体的免疫系统、内分泌系统、神经系统等产生不良影响。长期摄入 兽药残留的食品可能引发慢性疾病，并对特定人群如孕妇、婴幼儿等 造成更严重影响。因此，监测和控制食品中的兽药残留非常重要。 二、食品中兽药残留的来源 食品中的兽药残留主要来源于两个方面：兽药的滥用和滞后的兽药 清除期。一些养殖和养育业者可能滥用兽药，超出合理使用剂量，或 者在动物接近屠宰时仍在使用兽药，导致残留在食品中。另一方面， 一些兽药在动物体内清除的时间较长，因此在屠宰时可能仍有残留。 三、食品中兽药残留的监测方法 为了保证食品中兽药残留的控制和管理，科学的监测方法非常重要。以下是一些常用的兽药残留监测方法： 1. 全残留方法：全残留方法是最常用和有效的监测方法之一。它通 过对兽药残留样品进行提取和分离，然后使用液相或气相色谱等技术
进行分析和测定。全残留方法可以同时检测多种兽药残留，具有高灵敏度和高准确性。 2. 标记物方法：标记物方法是一种使用在兽药中添加的标记物质进行监测的方法。标记物方法可以通过标记物的检测来推断兽药的使用情况和残留程度。这种方法对于那些没有明确残留标准或难以检测的兽药非常有用。 3. 组合方法：组合方法是指使用多种监测技术和方法进行食品中兽药残留的监测。通过结合不同的分析技术和方法，可以提高监测的准确性和灵敏度。 四、食品安全管理中的问题和挑战 尽管有各种监测方法和技术可供使用，但在食品安全管理中仍存在一些问题和挑战。首先，食品中的兽药种类繁多，且使用方法复杂，导致监测难度较大。其次，兽药的滥用和滞后的清除期依然存在，需要加强监管力度和教育宣传。此外，食品加工和贸易的国际化也增加了食品安全管理的难度。 五、结论 食品中的兽药残留是一项严重的食品安全问题，必须采取行动加以解决。通过使用科学的兽药残留监测方法，并加强监管和教育宣传，可以更好地保障食品安全。同时，进一步研究和发展新的监测技术和方法，也是解决兽药残留问题的重要途径。只有全面加强兽药残留监测和管理，才能保障食品安全，保护人民的生命健康。
兽药残留总结 引言 兽药是动物养殖中必不可少的一种药物，用于预防和治疗动物的疾病。然而， 随着兽药的使用，兽药残留问题也越来越严重。本文将对兽药残留的相关问题进行总结，并探讨对策。 兽药残留的危害 兽药残留对人类健康和环境造成了严重的危害。首先，兽药残留可能会通过动 物产品进入人类体内，影响人体健康。一些兽药残留物具有毒性，长期摄入可能导致慢性中毒甚至致癌。其次，兽药残留还会对环境产生不良影响，如污染水源和土壤，破坏生态平衡。 兽药残留的来源 兽药残留主要来自以下几个方面： 1.治疗兽药的使用：农民在动物患病时会使用兽药进行治疗，但可能存 在用药过量或滥用药物的情况。 2.饲料添加剂：一些饲料添加剂中含有兽药成分，动物长期摄入会导致 兽药残留。 3.兽药残留物的降解不完全：某些兽药残留物在动物体内降解速度较慢， 导致残留物在动物产品中仍然存在。 兽药残留监测方法 为了解决兽药残留问题，需要对动物产品进行监测。目前常用的兽药残留监测 方法主要包括以下几种： 1.高效液相色谱法：该方法可以快速准确地检测动物产品中的兽药残留 物，具有灵敏度高、选择性好的优点。 2.气相色谱法：该方法适用于挥发性和半挥发性兽药的检测，可以检测 到更低浓度的兽药残留物。 3.酶联免疫法：该方法基于免疫学原理，可以对兽药残留物进行定性和 定量分析，但灵敏度略低于色谱法。 兽药残留的监管措施 为了保护人类健康和环境，各国都加强了对兽药残留的监管。目前，常见的监 管措施主要包括以下几点：
1.制定兽药使用标准：各国制定了兽药使用标准，规定了使用兽药的剂 量和疗程，以避免滥用药物导致兽药残留。 2.加强兽药注册管理：加强兽药的注册管理，确保兽药的安全性和有效 性。 3.加强兽药残留监测：加强对动物产品中兽药残留的监测，及时发现和 处理兽药残留问题。 4.加强法律法规的制定和执行：加强相关的法律法规的制定和执行，对 违规行为进行处罚。 兽药残留问题的解决对策 针对兽药残留问题，我们可以采取以下几种对策： 1.加强宣传教育：加强对兽药残留问题的宣传教育，提高养殖户和消费 者的兽药安全意识。 2.推广绿色兽药：推广绿色兽药的使用，降低兽药残留问题。 3.完善监管体系：加强监管部门的力量和能力，完善兽药残留的监管体 系，确保兽药的安全使用和合理监管。 4.加强国际合作：加强与其他国家的合作，共同研究和解决兽药残留问 题。 结论 兽药残留是一个严重的问题，对人类健康和环境造成了巨大的威胁。通过加强宣传教育、推广绿色兽药和完善监管体系等对策，可以有效地解决兽药残留问题，保障人类健康和环境安全。各国应加强国际合作，共同应对兽药残留问题，实现可持续发展。
兽药残留的测定 概述 一、兽药残留的测定意义 （一）毒性作用 急性中毒、慢性中毒、“三致”（致癌、致畸、致突变） 耐药性:动物体内耐药性菌株通过食品传递给人，给治疗带来困难。 激素作用:潜在致癌、儿童性早熟等，还会造成菌群失衡。 （二）兽药分类 1.抗生素类药物 这类药物多为天然发酵产物，是临床应用最多的一类抗菌药物，如青霉素类、四环素类、螺旋霉素、链霉素、土霉素、金霉素等。青霉素类最容易引发过敏反应，四环素类、链霉素有时也能引起过敏反应。 2.磺胺类药物 主要用于抗菌消炎，如磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶等。超标后果：长期摄入含磺胺类药物残留的动物性食品后，药物可不断在体内蓄积，造成泌尿系统损伤，引起结晶尿、血尿、管型尿。 3.硝基呋喃类药物 主要用于抗菌消炎，如呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等。超标主要引起胃肠反应和过敏反应。剂量过大或肾功能不全者，可引起严重毒性反应。 4.抗寄生虫类药物 主要用于驱虫或杀虫，如苯并咪唑、左旋咪唑、克球酚、吡喹酮等。超标容易引起致畸和致突变，对于妊娠期的孕妇有可能发生胎儿畸形。 5.激素类药物 主要用于提高动物的繁殖和加快生长发育速度，使用于动物的激素有性激素和皮质激素，超标的话，可能会影响消费者的正常生理机能，并具有一定的致癌性。 二、检测方法及原理 （一）常用的方法 有气相色谱法、高效液相色法、酶联免疫法、仪器联用法。 （二）检测原理 样品经提取，微孔滤膜过滤后直接进样，用反相色谱分离，紫外检测器检测，以保留时间定性，标准曲线法定量，也可以用标准加入法定量。 配制氟喹诺酮类药物的混合标准溶液，绘制标准曲线，根据标准曲线计算样品中各残留药物的含量。 三、兽药残留的国标解读
用色谱分析法建立兽药残留分析方法的 基本步骤 云南农业大学动物营养重点实验室 摘要：从分析兽药残留的现状引出色谱分析应用的普遍性，着重介绍了以色谱分析法建立兽药残留分析方法的基本步骤，供从事兽药残留分析的色谱工作者参考。 关键词：兽药残留；高效液相色谱法；色谱法 近20年来，兽药（包括药物添加剂）在畜牧业中的应用日益广泛，但是兽药的使用无疑会导致动物体内药物的滞留或蓄积，并以残留的方式进入人体及生态系统。兽药残留对人类及环境的危害主要是慢性、远期和累积性的，如致癌、发育毒性、体内蓄积、免疫抑制、致敏和诱导耐药菌株等。动物性食品中的兽药残留已成为公认的农业和环境问题，因此对残留的监测与控制已经是目前国内外兽药研究、开发、使用和管理中的重要内容。 随着兽医学和兽药科学的迅速发展，经过十几年的积累，基于分析化学、药物化学、临床药理与毒理学以及管理科学之上的兽药残留分析已成为一门新兴学科，其中心任务是为动物和动物性食品中的兽药残留监控提供分析手段，内容包括食品残留（药物原形及代谢产物）的含量测定与结构鉴定（静态残留分析）以及组织分布与代谢（动态残留分析）。残留分析不仅是兽药残留研究和监控的重要基础，而且是兽药代谢、临床药理和生物药剂学等兽药理论及应用研究的必要手段。与药品分析不同，残留分析的特殊性和复杂性在于痕量、动态的待测物存在于复杂的生物样品中，在于将分析手段与兽药的理化性质、体内过程、存在状态以及药理毒理相结合，在于样品基质和待测组分的不确定性，所以分离和检测是残留分析的两个基本方面，高分辨率和高灵敏度是其发展的两大精髓。现代色谱和光谱技术，特别是20世纪80年代以来高效液相色谱、毛细管区域电泳、质谱、免疫分析及联用技术在残留分析方面的研究与应用取得了长足进展，利用这些技术可以测定ppb(10-9)～ppt(10-12)水平的残留组分。人们在努力改进残留分析效能的同时更注重提高分析效率、降低分析成本和减少环境污染。 色谱法是近代分析化学中发展最快、应用最广的分离分析技术，在化学、生物学等领域发挥着越来越重要的作用，并正发展成为一门新兴学科。现代色谱分析将分离和连续测定结合，也可以浓缩、分离、测定联用，对复杂体系中组分、价态、化学性质相近的元素和化合物进行分析。色谱分析仍是残留分析技术发展的主流。下面以色谱分析法为例说明残留分析方法建立的基本步骤。 1 文献检索 残留分析过程十分复杂，所用的操作方法、试剂和仪器较多，方法设计带有较多经验成分，所以无论是移植、改进或设计新的分析方法都具有较高难度。残留分析中极少存在可供直接移植使用的“标准方法”。文献检索通常仅能显示最适宜的分析方法，并提供样品处理、分离和检测方面的粗略信息。通过查阅文献
兽药残留种类及检测方法 作者：林志达黄晶蔡杰陈轩沙才华吴洁姗 来源：《中国动物保健》2022年第01期 摘要近年来，畜产品质量安全问题的频频发生，引发了社会各界的高度关注，严重威胁消费者健康及社会和谐稳定发展。在此情形下，认真做好畜产品兽药残留检测工作具有重要的现实意义。本文并分析了兽药残留种类，并探讨了兽药残留检测方法。 关键词兽药残留检测;种类;方法;研究 现阶段，随着人们生活条件的不断改善，对于畜产品质量安全提出了更高的要求。兽药残留检测，是一项和民生息息相关的工作，保证检测方法的科学合理应用，是保证兽药残留检测工作效率和质量的关键。 1 兽药残留种类分析 1.1 抗菌类兽药 抗菌类兽药，指的是能够起到抑菌、杀菌作用的药物，如：大环内酯类、抗生素类等，上述药物适应症广且价格实惠，因而被广泛应用于畜禽动物疾病治疗中。但是，部分养殖场规范用药意识淡薄，在使用抗菌类兽药时存在滥用、违法添加的行为。尤其是抗生素类药物的滥用，极易造成药物残留超标，当人食用抗生素残留超标的畜产品后，极易引发溶血性贫血、血小板减少症等疾病，同时免疫力明显下降，严重的甚至会导致基因突变。 1.2 抗病毒类兽药 畜禽养殖中，禽流感、新城疫等病毒性疾病有着较高的发病率，会对畜禽动康生长造成极大的影响，抗病毒类兽药的使用，能够有效抑制病毒复制，甚至能够将病毒消灭，进而使得畜禽恢复健康。目前，畜禽常用的抗病毒药物较多，包括现已禁用的利巴韦林、金刚烷胺等，如长期使用抗病毒类兽药，则会导致病毒抑制、变异。当前，部分养殖場户无视国家规定，违法违规使用金刚烷胺、利巴韦林类抗病毒兽药，上述药物具有遗传毒性、致癌性，同时会引发精神类疾病[1]。 1.3 抗寄生虫类兽药 抗寄生虫类兽药指的是能够驱杀畜禽体内外寄生虫的药物，目前，临床上抗寄生虫类兽药主要包括抗原虫药、抗蠕虫药、杀虫药等，但是，如抗寄生虫类兽药应用不合理，导致兽药残留，极易造成妊娠早期胎儿畸形。
兽药残留检测项目 本项目全面考察学生对高效液相色谱法检测禽畜肉中抗生素残留项目的实施过程中所涉及的样品预处理、样品检测（送至第三方检测机构进行，不作为考核点，但选手制备样品的回收率和RSD值将根据检测机构检测数据计分）、数据处理（提供统一打印图谱，考核选手根据图谱计算检测结果的能力）和离线色谱工作站操作4个环节的基本操作与过程的整体把握和运用能力以及在整个实验过程中的操作文明和操作安全意识。 本项目预处理现场操作要求每个参赛队员在2.5个小时内完成。色谱工作站操作和数据处理分别要求在45分钟和60分钟内完成。 赛项为个人赛，包括农药残留检测、兽药残留检测、重金属污染检测共3个分项，每名选手分别选择其中一个项目进行比赛。每位参赛选手可以有一名指导教师，参赛选手须为2016年新疆在籍同校高职学生。以学校为单位组成参赛队，安排领队1名。 农残、兽残检测竞赛项目的试样前处理过程将由参赛人员现场操作完成（过程评分）。试液的上机测定由赛项专家组安排第三方检测机构专家按规定统一进行（仪器操作不作为选手考核点）。选手制备样品的回收率和RSD值将直接根据检测机构检测数据计分（结果评分）。为了考核参赛选手图谱解读及数据处理能力，将提供统一的打印图谱，考核选手根据图谱计算回收率和RSD值等数据处理及正确填写检测记录单的能力（结果评分）。此外，开展离线色谱工作站软件使用操作考核（色谱工作站软件由赛项专家组指定）（结果评分）。 重金属检测竞赛项目考察选手试样预处理（样品消解液由组委会提前准备好，样品消解不作为考核点）（过程评分）、上机测量（过程评分）、数据处理（结果评分）等全部过程。 竞赛流程 （一）竞赛日程
汇总｜兽药残留检测前处理类型 由于兽药残留种类繁多、在样品中残留水平低、基质复 杂、干扰物质多等，使样品前处理技术，即分离纯化技术成为兽药残留分析的重点和难点。目前，兽药残留的 样品前处理方法主要有液液萃取、固相萃取、固相微萃 取、免疫亲和色谱、分子印迹、超临界流体萃取、基质 固相分散技术、微波辅助萃取、凝胶渗透色谱和超声波 辅助提取等。 液液萃取 液液萃取(liquid-liquid extraction， LLE)是利用待测物在两种互不相溶(或微溶)的溶剂中分配系数的不同而达到分离纯化的目的，是兽药残留分析中一种常用的前处理技术。有国外学者将肉类样品用乙腈除蛋白，正己烷脱脂后，加乙酸乙脂液液萃取，利用超高效液相色谱串联质谱技术对肉中的24 种磺胺类药物残留进行了测定。也有学者等运用液液萃取结合低温纯化技术作为前处理技术，测定了牛奶中大环内酯类抗生素，得到了良好的回收率。液液萃取对实验条件和仪器要求不高，但操作繁琐、有机溶剂消耗大，污染严重，逐渐被一些新的前处理方法所取代。 固相萃取 固相萃取(solid phase extraction， SPE)是目前兽药残留检测中最为常用的一种样品前处理技术。它是利用固体吸附剂将
样品中目标化合物吸附，使其与样品基质及干扰化合物分离，再用洗脱液洗脱下来从而达到分离和富集的目的。固相萃取技术由于具有操作简单快速、消耗有机溶剂少、样品回收率高、易于自动化等优点，在样品前处理中得到广泛应用。目前，固相萃取技术已可用在磺胺类、四环素类、阿维菌素类、氯霉素类、喹诺酮类、激素类、β -受体激动剂等多类兽药残留的定量分析中。有学者采用固相萃取结合液相色谱方法测定了鸡肉组织中的喹诺酮类药物。对比了Oasis HLB，Oasis MAX， SDB-RPS 三种不同填料固相萃取柱的萃取效率，最终得出SDB-RPS 填料的固相萃取柱的萃取效果最好。 固相微萃取 固相微萃取(solid phase microextraction， SPME)技术是20 世纪90 年代兴起的一项新颖的样品净化富集技术，属于非溶剂型选择性萃取法。它基于目标化合物在基体与石英纤维固定相涂层间的非均相平衡，实现对目标化合物的有效萃取和富集。固相微萃取技术与液液萃取和固相萃取相比，具有融取样、萃取、浓缩和进样为一体，操作简便，选择性好，不需有机溶剂等优点，得到了迅速的发展，在兽药残留分析领域也得到了广泛的应用。国内有学者等利用固相微萃取和液相色谱质谱联用技术对肉中8 种磺胺类药物进行了测定。也有学者发展了一种利用聚合物整体柱固相微萃取结合液相色谱/四极杆-飞行时间质谱(QTOF)快速定量测定和确证动物性食品中7 种喹诺酮类药物的方法。 基质固相分散 基质固相分散(matrix solid-phase dispersion， MSPD)是Barker 等于1989 年提出的一种快速样品处理技术，它能直接用于从固态、半固态和粘稠基质样品中提取待测化合物。其基本操作是将固相萃取材料与样品一起研磨，制成半固态填料装柱，然后用不同的溶剂进行淋洗和洗脱。MSPD 处理样品耗时短、步骤少、溶剂和样品用量少，使其迅速在兽药残留分析领域得到广泛应用和发展。国外有学者用MSPD 结合液相色谱法分析了羊奶样品中7 种大环内酯类抗生素。他
第一章 1、兽药残留：给动物使用药物后蓄积或贮存在细胞、组织或器官内的药物原形、代谢产物和药物杂质。 2、最高残留限量：指允许在食品中药物或其他化学物质残留的最高量。 3、残留分析：复杂基质中痕量分析技术 4、无作用剂量：在一定染毒期内对机体未产生可觉察的有害作用的最高剂量。 5、休药期：从停止给药到允许动物屠宰或其产品上市的间隔时间。 6、药残分析方法的特点：a待测物浓度低，浓度波动范围大， b 样品基质复杂，干扰物质多， c 以各种仪器分析方法为主。 7、残留分析原理：采样与样品制备（样品预处理）—提取—净化—浓缩—衍生化—分辨—检测。{ 提取、净化、浓缩、衍生化为样品处理，提取、净化、浓缩、衍生化、分辨为分离，分辨、检测为测定} 8、检测方法：高效液相色谱法、紫外|可见分光光度法、气相色谱法、荧光分光光度法、比色法、微生物测定法 9、精密度：用某种方法重复测定同一均质样品所得测定值的彼此接近程度。 10、准确度：指测定值与真实值的接近程度。 11、检测限：分析方法能从样品的背景信号中检测出待测物存在时所需的最低浓度。 12、定量限：分析方法能够对样品中待测物进行定量定量测定的最低浓度。 13、线性范围：待测物浓度与仪器的响应信号呈线性关系并能满足定量要求的浓度范围。 14、选择性：样品基质中有其他组分共存时，该分析法对待测物的分辨能力。第 二章 1、色谱仪的基本单元：色谱柱、检测器、泵、数据处理装置。 2、色谱定性方法：a、保留值定性法（保留时间、保留体积、相对保留体积、 保留指数）b、MS 定性（GC\MS 法、LC\MS 法）c、FTIR 定性d、选择性检测性定性。 定量方法：①色谱峰的测量②计算方法：a化归法b外标法 c 内标法 d 内加法 外标法：可用于测定复杂混合物中的某几个组分，保证在预期的浓度范围内被测定组分的响应是线性的且必须首先绘制标准曲线。 内标法：在要测定的样品中加入已知量的已知化合物作为测定的比较标准，用待测的峰面积和内标物的峰面积比值求待测组分浓度。 内加法：先将样品注入色谱仪，得到相应的色谱图，然后在样品中加入一定量的待测组分，再次进样得另一色谱图，对比两张色谱图峰面积求待测组分浓度。 3、气相色谱检测器:火焰离子化检测器、热离子化检测器、电子俘获检测器、火焰光度检测器。 4、HPLC 检测器：紫外-可见检测器、荧光检测器、示差折光检测器、电化学检测器。 5、正相色谱：固定相极性大于流动相的极性，反之为反相色谱。 6、TLC 固定相：硅胶、氧化铝、纤维素、聚酰胺、硅镁吸附剂等。 7、免疫半抗原设计的基本原则是免疫半抗原与载体连接后在结合原中能最大程度保持和突出待测物的特征结构，特别是立体结构。 免疫半抗原组成：待测物特征结构、用于连接特征结构和载体的间隔分子，末端的活性基团。 8、间隔臂设计原则：①远离待测物的特征结构部分和官能团，与载体连接后最好能突出这些结构，如—NH2,--COOH,--NO2 等，②一般应为非极性，且不应含有其他高免疫活性的结构，③一般未饱和链烃，以4-6 个碳为准，④末端一般应连有--COOH 或--NH2 ，否则需要衍生化。 9、常用的蛋白质载体为：牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白、兔血清白蛋白、人血清白蛋白。
动物性产品中兽药残留的快速检测方法 ——ELISA & CharmⅡ 一、前言： 1、现状 目前兽医用药几乎占据了所有抗微生物药物的50%，因此食品病原菌、条件致病菌和共生菌不可避免的成了耐药菌。在过去的50年中大约有100万吨的抗生素被释放到生物圈中。欧洲动物卫生联盟（European Federation of Animal Health ，FEDESA）对欧盟和瑞士抗生素使用统计数据表明，仅1997年用于人类健康的抗生素达5460吨，用于动物健康的抗生素达3465吨，用于动物生长促进剂的抗生素达1575吨，并有逐年增加的趋势。 在我国，由于兽医用药制度的不完善及一些养殖厂受经济利益的驱使及相应的检测监督体系不健全，药物的滥用现象更为严重，动物产品中兽药的污染时有发生。其潜在的致癌、致畸作用引起了社会的普遍关注，由于水产品中氯霉素含量过高，欧盟委员会于今年1月作出禁止中国动物源食品进口的协议，使得我国水产品对欧盟出口严重受挫，虽然现在部分产品开始解禁，但形式依然不容乐观；美国、日本等国也开始高度关注我国水产品的质量，并出台一系列相关政策，对我国出口动物性产品进行限制。在现代文明的世界，健康第一的贸易法则将是关税、价格、质量所不可比拟的，政治上的友好往来无法替代经济贸易中的游戏规则。 2、食品中兽药残留对人类的危害 2.1耐药菌株的产生 抗生素使用和细菌耐药性永远是互相依存、互相制约的矛盾的两个方面，细菌耐药非正常增加，往往是抗生素的非正常使用的结果。早在1920-30年青霉素问世时，Dr Fleming就提出了青霉素的耐药性问题。随着时代的发展和各种新药的出现，耐药性菌株也接踵而至（即包括药物选择压力的结果也包括细菌自身的进化）。抗生素的副作用以及耐药菌株的存在将严重威胁着人类的健康，而且临床亚治疗水平的抗生素更容易促使抗性基因的转移，比如对动物进行低水平四环素治疗，其粪肠菌群由对四环素敏感逐渐变成抗四环素最后发展成对其它药物也产生抗性。在长期的生活中，恰恰是人类和动物肠道的正常菌群成了耐药基因的储存库，并不断的将耐药基因转移给致病菌，并在人和动物中交叉传播，尤其是释放到环境中耐药菌的危害更为严重，可造成耐药基因的迅速转移。 2.2抗生素的毒副作用 残留在动物性食品中的抗生素被人们食用后，除了加速人体内耐药菌株的进化之外，抗生素本身的毒副作用往往威胁人类尤其是孕妇和婴儿的健康，这一点在过去往往很容易被忽视。 2.2.1氯霉素
液相色谱检测前处理方法
织 取10g草莓样品于 50mLPPTE离心管中，加入 10mL乙腈，振荡器上以 200rpm的转速振荡30min 后, 加入3g氯化钠和5g无水硫 酸镁，剧烈手摇30s。然后将 盛装样品的离心管在离心机离 心5mi n（离心力 RCF=1006g），取1.5mL 上 清液转入含有50mg PSA+50mgC i8+150mgMg SO4的2mL离心管。充分振 荡混匀后将混合液离心3mi n （离心力RCF=7155g ）， 吸取上清液0.5mL过0.22卩 m有机滤膜后进UPLC- MS/MS 检测。 ［QuEChERS-超咼效液相 色谱-串联质谱法同时测定 草莓中85种农药残留］ 2、加速溶剂萃取技确称取均质后的样品 2.50g于50mL塑料离心 管中，加入3 mL水涡旋 混合1min，再加入 5 mL 5 %（v/v ）甲酸乙腈 涡旋混合1 min，超声提 取10min。加入 Won dapokQuEChERS 多兽残专用提取包4 g，剧烈振摇1 min，于 10 C 以 8000r/mi n 下离心10 min。取1 mL上清液转 移至 Won dapokQuEChERS 多兽残专用净化包中， 涡旋混合 1 min ,12000 r/min下离心5min。取上 清液，过0.22呵微孔滤 膜，取滤液进行 LC-MS/MS 分析。［分 散固相萃取-液相色 谱—串联质谱法测定常 见动物源性食品中 42种兽药残留］ 称取5.00 g样品于 50 mL玻璃离心管中， 力廿20 mL乙酸乙酯， 涡旋，超声提取 15 min，5000 r / min 离心5 min，移岀上清 液至100 mL旋转蒸发 瓶中，剩余残渣再加入 20 mL乙酸乙酯，重复 提取1次，合并上清 液，旋转蒸发至近干。 加入1 mL 甲醇水溶液 （80: 20，V / V），涡 旋30 s，过Captiva ND Lipids 小柱净化，收集 液体，上机检测。［超 高效液相色谱一四极 杆/静电场轨道阱高分 辨质谱筛查水产品中 21种环境激素］ 术（ASE ）:①样品经匀浆，于4C避光保存备用。加速溶剂萃取操作如下：在33 m L 萃取池底部附上一层垫片（直径16.2 mm），然后装入0.5 g 硅藻土防止萃取杂质进入到收集瓶，准确称取10 g 样品和5 g硅藻土，混匀后装入33 mL的萃取池中，上层覆盖0.5 g硅藻土。丙酮/甲醇（1:4, v/v,盐酸调 pH=3.0）为萃取溶剂，温度70 C，压强为 10.3 MPa，淋洗体积为40%，静态萃取5 min，循环2次。氮气吹扫收集全部提取液，室温下以10000 r min - 1的速度离心10 min，得到上清液，将上清液转移到50 mL梨系:①提取液的配制：称取4. 3g的草酸和 3.7 gEDTA，用500 mL 水溶解，氨水调pH至3. 0; 100mmol/L ②草酸缓冲液的配制：称 取0. 9 g草酸，用90mL 水溶解，氨水调pH至 5. 0，加水至100 mL。 ③称取5. 00 g样品，加入5 mL提取液和15 mL乙腈，振荡5 min，4500 r /min 下离心5 min;取岀上清液，加入1g硫酸铵，振荡5 min,4500 r /min 下离 心
鸡蛋中兽药残留的检测方法及其防治措施 近年来，随着养殖业的快速发展，鸡蛋成为人们日常生活中不可或缺的食品之一。一 些不法商人为了追求利益最大化，可能会在鸡蛋中添加兽药，以促进鸡的生长或防止疾病 的发生。这样一来，就会导致鸡蛋中出现兽药残留的问题，给人们的健康带来潜在风险。 对鸡蛋中兽药残留的检测方法及其防治措施的研究显得尤为重要。 鸡蛋中兽药残留的检测方法主要有以下几种：物理检测法，化学检测法，免疫学检测 法和分子生物学检测法。 物理检测法主要是通过显微镜观察或用机械手段分离兽药残留物质。这种方法简单易行，但是只能对部分大颗粒的兽药残留进行检测。 化学检测法是通过对鸡蛋中兽药残留物质的化学特性进行分析，比如利用高效液相色谱、气相色谱和质谱等技术分析兽药的种类和残留量。这种方法的优点是准确性高，但是 需要专业的仪器设备和化学知识。 免疫学检测法是利用抗体与兽药残留物质结合，通过观察或测量抗体与兽药的结合程 度来判断是否存在兽药残留。这种方法检测速度快，可靠性高，但对抗体的选择和制备较 为困难。 分子生物学检测法是通过提取鸡蛋中的DNA或RNA，利用聚合酶链反应（PCR）或其他核酸检测技术，检测鸡蛋中是否存在兽药的遗传物质。这种方法具有高度的特异性和灵敏度，但是对于小剂量的兽药残留可能检测不到。 针对鸡蛋中兽药残留的防治措施，可以从源头上加强管理措施，严格禁止添加兽药； 加强养殖场的监管，定期对鸡蛋进行抽检；加强消费者的宣传教育，提高其食品安全意识；加强兽药残留监测中心的建设，提高检测方法和技术的准确性和敏感性。 鸡蛋生产企业可以加强自我监管，建立严格的质量控制体系，规范兽药使用的程序和 剂量，确保生产出无兽药残留的优质鸡蛋。政府部门也应加强宣传和培训工作，引导养殖 场科学合理地使用兽药，避免滥用和误用兽药导致鸡蛋中兽药残留的问题。 对于鸡蛋中兽药残留的检测方法及其防治措施的研究对保障人们饮食安全至关重要。 我们应加强监管力度，提高兽药残留的检测能力，加强宣传和教育，增强人们的食品安全 意识，共同营造一个安全可靠的食品环境。